本發(fā)明屬于天然藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種火龍果果皮總黃酮的提取方法。

背景技術(shù)：

火龍果(hylocereusundatus)，為仙人掌科(cactaceae)植物，又名紅龍果、仙蜜果、芝麻果、青龍果等，其英文名pitaya、pitahaya、reddragonfruit，是熱帶、亞熱帶的名優(yōu)水果之一?；瘕埞墓麑?shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，富含糖、有機(jī)酸、膳食纖維；果皮中富含總酚和總黃酮。由于火龍果具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和食用價(jià)值等特點(diǎn)，市場(chǎng)發(fā)展前景極為廣闊。其花、果均是傳統(tǒng)的食物來(lái)源和重要的經(jīng)濟(jì)作物，然而，目前火龍果主要以生食果肉為主，忽視了資源十分豐富的火龍果果皮的應(yīng)用，大量果皮被丟棄，造成資源浪費(fèi)。

有報(bào)道稱(chēng)，采用大孔樹(shù)脂可以從火龍果果莖中分離純化出黃酮。黃酮是廣泛存在于植物的葉、花、果中的天然色素，是植物次級(jí)代謝產(chǎn)物。黃酮是一種藥用成分，具有抗氧化、調(diào)節(jié)血糖、抗腫瘤等功效，對(duì)心血管病等有顯著療效?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)黃酮類(lèi)化合物具有廣泛的生物學(xué)功能，包括抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、預(yù)防心血管疾病、防癌抗癌、調(diào)節(jié)免疫及中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制劑等諸多藥理作用及功效。本發(fā)明將通過(guò)從火龍果果皮提取總黃酮，利用深加工技術(shù)，將果皮變廢為寶，轉(zhuǎn)化為具有高附加值的產(chǎn)品，降低廢棄物對(duì)生態(tài)環(huán)境的污染，提高農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)，實(shí)現(xiàn)火龍果的綜合加工利用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒以此，本發(fā)明的目的在于提供一種火龍果果皮總黃酮的提取方法。

為了達(dá)到上述的目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種火龍果果皮總黃酮的提取方法，包括以下步驟：

s1：原料預(yù)處理：將火龍果果皮清洗干凈，冷凍干燥，粉碎過(guò)篩；

s2：浸提：將步驟s1粉碎后的果皮與去離子水按1:40～100的比例，攪拌均勻，倒入亞臨界反應(yīng)釜中；

s3：亞臨界萃?。好芊夥磻?yīng)釜，萃取溫度為180～220℃，萃取時(shí)間為10～15min，后將反應(yīng)釜取出，冷水冷卻，獲得萃取液；

s4：將萃取液真空抽濾，使固液分離，得到含有黃酮的濾液；

s5：提純：使用過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾濾液，然后加熱蒸發(fā)除去去離子水，得到黃酮顆粒。

進(jìn)一步的，所述步驟s1的處理過(guò)程為：將火龍果果皮清洗干凈，-60～-80℃條件下冷凍干燥48～60h，粉碎過(guò)60～120目篩；

進(jìn)一步的，所述步驟s2的處理過(guò)程中：果皮與去離子的比例為1:80。

進(jìn)一步的，所述步驟s3的處理過(guò)程中：萃取溫度為200℃，萃取時(shí)間為10min。

進(jìn)一步的，所述步驟s5的處理過(guò)程中：使用100-200目過(guò)濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明提出使用亞臨界水法提取火龍果總黃酮的方法，本方法首先通過(guò)冷凍干燥進(jìn)行原料預(yù)處理，使用蒸餾水代替有機(jī)溶劑，采用亞臨界水法提取火龍果總黃酮，最后經(jīng)過(guò)提純得到高純度的總黃酮。獲得的火龍果果皮總黃酮提取率和純度均較高。本發(fā)明方法具有工藝簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)單，不使用任何化學(xué)試劑，反應(yīng)時(shí)間短，能耗少等優(yōu)點(diǎn)。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。

圖1為亞臨界水反應(yīng)裝置；

圖2為亞臨界水法提取火龍果果皮黃酮的工藝示意圖。

圖中，1為控溫儀、2為溫度探頭、3為壓力表、4為高壓閥門(mén)、5為反應(yīng)釜、6為加熱套。

具體實(shí)施方式

參見(jiàn)圖1和圖2，本發(fā)明提出的一種火龍果果皮總黃酮的提取方法，其工藝流程包括以下步驟：

s1：原料預(yù)處理：將火龍果果皮清洗干凈，冷凍干燥，粉碎過(guò)篩；經(jīng)過(guò)冷凍干燥預(yù)處理的果皮可使得總黃酮等活性物質(zhì)在后續(xù)處理過(guò)程中減少損失和防止被破壞，提高總黃酮的提取效率。

s2：浸提：將步驟s1粉碎后的果皮與去離子水按1:40～100的比例，攪拌均勻，倒入亞臨界反應(yīng)釜中；該范圍的料液比使得在采用亞臨界條件萃取時(shí)，亞臨界水發(fā)揮最佳的分子間作用力，提高萃取效率。

s3：亞臨界萃取：密封反應(yīng)釜，萃取溫度為180～220℃，萃取時(shí)間為10～15min，后將反應(yīng)釜取出，冷水冷卻，獲得萃取液；

s4：將萃取液真空抽濾，使固液分離，得到含有黃酮的濾液；

s5：提純：使用過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾濾液，然后加熱蒸發(fā)除去去離子水，得到黃酮顆粒。

以下所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1

一種火龍果果皮總黃酮的提取方法，其工藝流程包括以下步驟：

s1：原料預(yù)處理：將1kg火龍果果皮清洗干凈，-80℃冷凍干燥48小時(shí)，粉碎過(guò)60目篩；

s2：浸提：將步驟s1粉碎后的果皮與去離子水按1:80的比例，攪拌均勻，倒入亞臨界反應(yīng)釜中；

s3：亞臨界萃?。好芊夥磻?yīng)釜，當(dāng)加熱套預(yù)熱到200℃時(shí)，將反應(yīng)釜放入加熱套中，反應(yīng)釜溫度達(dá)到200℃時(shí)，計(jì)時(shí)10min后將反應(yīng)釜取出，冷水冷卻，獲得萃取液；

s4：將萃取液真空抽濾，使固液分離，得到含有黃酮的濾液；

s5：提純：使用100～200目過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾濾液，然后加熱蒸發(fā)除去去離子水，得到112.96g黃酮顆粒。

實(shí)施例2

一種火龍果果皮總黃酮的提取方法，其工藝流程包括以下步驟：

s1：原料預(yù)處理：將1kg火龍果果皮清洗干凈，-70℃冷凍干燥54小時(shí)，粉碎過(guò)80目篩；

s2：浸提：將步驟s1粉碎后的果皮與去離子水按1:60的比例，攪拌均勻，倒入亞臨界反應(yīng)釜中；

s3：亞臨界萃?。好芊夥磻?yīng)釜，當(dāng)加熱套預(yù)熱到180℃時(shí)，將反應(yīng)釜放入加熱套中，反應(yīng)釜溫度達(dá)到180℃時(shí)，計(jì)時(shí)15min后將反應(yīng)釜取出，冷水冷卻，獲得萃取液；

s4：將萃取液真空抽濾，使固液分離，得到含有黃酮的濾液；

s5：提純：使用100～200目過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾濾液，然后加熱蒸發(fā)除去去離子水，得到103.56g黃酮顆粒。

實(shí)施例3

一種火龍果果皮總黃酮的提取方法，其工藝流程包括以下步驟：

s1：原料預(yù)處理：將1kg火龍果果皮清洗干凈，-60℃冷凍干燥60小時(shí)，粉碎過(guò)120目篩；

s2：浸提：將步驟s1粉碎后的果皮與去離子水按1:40的比例，攪拌均勻，倒入亞臨界反應(yīng)釜中；

s3：亞臨界萃?。好芊夥磻?yīng)釜，當(dāng)加熱套預(yù)熱到220℃時(shí)，將反應(yīng)釜放入加熱套中，反應(yīng)釜溫度達(dá)到220℃時(shí)，計(jì)時(shí)10min后將反應(yīng)釜取出，冷水冷卻，獲得萃取液；

s4：將萃取液真空抽濾，使固液分離，得到含有黃酮的濾液；

s5：提純：使用100～200目過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾濾液，然后加熱蒸發(fā)除去去離子水，得到93.12g黃酮顆粒。

實(shí)施例4

一種火龍果果皮總黃酮的提取方法，其工藝流程包括以下步驟：

s1：原料預(yù)處理：將1kg火龍果果皮清洗干凈，-80℃冷凍干燥48小時(shí)，粉碎過(guò)100目篩；

s2：浸提：將步驟s1粉碎后的果皮與去離子水按1:100的比例，攪拌均勻，倒入亞臨界反應(yīng)釜中；

s3：亞臨界萃?。好芊夥磻?yīng)釜，當(dāng)加熱套預(yù)熱到200℃時(shí)，將反應(yīng)釜放入加熱套中，反應(yīng)釜溫度達(dá)到200℃時(shí)，計(jì)時(shí)15min后將反應(yīng)釜取出，冷水冷卻，獲得萃取液；

s4：將萃取液真空抽濾，使固液分離，得到含有黃酮的濾液；

s5：提純：使用100～200目過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾濾液，然后加熱蒸發(fā)除去去離子水，得到106.22g黃酮顆粒。

對(duì)比例1

一種火龍果果皮總黃酮的提取方法，其工藝流程包括以下步驟：

s1：原料預(yù)處理：將1kg火龍果果皮清洗干凈干燥，粉碎過(guò)60目篩；

s2：浸提：將步驟s1粉碎后的果皮與去離子水按1:80的比例，攪拌均勻，倒入亞臨界反應(yīng)釜中；

s3：亞臨界萃?。好芊夥磻?yīng)釜，當(dāng)加熱套預(yù)熱到200℃時(shí)，將反應(yīng)釜放入加熱套中，反應(yīng)釜溫度達(dá)到200℃時(shí)，計(jì)時(shí)10min后將反應(yīng)釜取出，冷水冷卻，獲得萃取液；

s4：將萃取液真空抽濾，使固液分離，得到含有黃酮的濾液；

s5：提純：使用100～200目過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾濾液，然后加熱蒸發(fā)除去去離子水，得到72.03g黃酮顆粒。

對(duì)比例2

一種火龍果果皮總黃酮的提取方法，其工藝流程包括以下步驟：

s1：原料預(yù)處理：將1kg火龍果果皮清洗干凈，-80℃冷凍干燥48小時(shí)，粉碎過(guò)60目篩；

s2：浸提：將步驟s1粉碎后的果皮與質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60～70％乙醇按1:80的比例混合，攪拌均勻，在45～50℃恒溫水浴溫度下萃取2小時(shí)，獲得萃取液；

s3：將萃取液真空抽濾，使固液分離，得到含有黃酮的濾液；

s4：提純：使用100～200目過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾濾液，然后加熱蒸發(fā)除去去離子水，得到40.72g黃酮顆粒。

黃酮類(lèi)化合物的含量測(cè)定的具體方法為：取適當(dāng)濃度的樣品0.5ml，加入15ml刻度試管中，用去離子水補(bǔ)充至4ml，加入0.3ml5％(w/v)的亞硝酸鈉水溶液搖勻，5min后加入3ml1％(w/v)氯化鋁水溶液搖勻，6min后加入2ml的1mol/l的氫氧化鈉水溶液，再加去離子水至10ml，10min后510nm處測(cè)定吸光值；空白對(duì)照以去離子水代替樣品進(jìn)行反應(yīng)；黃酮類(lèi)化合物的含量以蘆丁當(dāng)量(rutinequivalent，re/g干基)表示。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：精確稱(chēng)取蘆丁標(biāo)品0.075g，至于25ml的容量瓶中，用甲醇將其定容至刻度。然后用移液管分別移取5ml、4ml、3ml、2ml和1ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到濃度分別為1.5、1.2、0.9、0.6和0.3mg/ml的溶液，按照上述方法進(jìn)行測(cè)定，在510nm處有最大吸收，得到510nm處的吸光度值與蘆丁標(biāo)品的濃度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線。依據(jù)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得知萃取物中黃酮類(lèi)化合物的含量。

將上述實(shí)施例1至4以及對(duì)比例1和2進(jìn)行黃酮類(lèi)化合物的含量測(cè)定，提取物中黃酮類(lèi)化合物的含量測(cè)定結(jié)果為：

從上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，本發(fā)明從火龍果果皮中提取總黃酮的方法，通過(guò)冷凍干燥進(jìn)行原料預(yù)處理，使用蒸餾水代替有機(jī)溶劑，采用亞臨界水法提取火龍果總黃酮，最后經(jīng)過(guò)提純得到高純度的總黃酮；此外，從對(duì)比例1的結(jié)果可以看出本發(fā)明方法通過(guò)冷凍干燥進(jìn)行原料預(yù)處理，可以顯著提高其提取率和提取純度較高；相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中單一醇提而言，本發(fā)明方法獲得的黃酮類(lèi)化合物的提取效率大幅提高。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。