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一種缺血性腦卒中靶向的紅細(xì)胞膜仿生智能藥物載體及其制備方法與流程

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技術(shù)特征:

1.一種缺血性腦卒中靶向的紅細(xì)胞膜仿生智能藥物載體,其特征在于由作為內(nèi)核包封NR2B9C的納米囊泡、外層的紅細(xì)胞膜以及細(xì)胞膜表面修飾腦缺血?dú)w巢肽SHp構(gòu)成,所述內(nèi)核的納米囊泡和外層的紅細(xì)胞膜通過(guò)超聲融合技術(shù)實(shí)現(xiàn)包裹融合。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的缺血性腦卒中靶向的紅細(xì)胞膜仿生智能藥物載體,其特征在于:所述納米囊泡為以疏水性硼酸酯接枝于親水葡聚糖骨架形成的兩親性嵌段共聚物(PHB-Dextran)為載體材料制備的納米囊泡,該納米囊泡用于包載神經(jīng)保護(hù)劑NR2B9C;所述神經(jīng)保護(hù)劑NR2B9C的氨基酸序列為KLSSIESDV。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的缺血性腦卒中靶向的紅細(xì)胞膜仿生智能藥物載體,其特征在于:所述紅細(xì)胞膜為健康雄性SD大鼠全血,經(jīng)低滲提取法破膜釋放內(nèi)含物,得到空白紅細(xì)胞膜,再超聲處理得到的均勻的納米級(jí)紅細(xì)胞膜載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的缺血性腦卒中靶向的紅細(xì)胞膜仿生智能藥物載體,其特征在于:所述SHp肽為SHp、聚乙二醇-磷脂復(fù)合物兩部分通過(guò)共價(jià)連接而成的線性嵌段共聚物,其摩爾比為1:1~5:1;

所述的SHp的氨基酸序列為CLEVSRKNC;

所述聚乙二醇-磷脂復(fù)合物使用的聚乙二醇為甲氧基聚乙二醇,其重均分子量為400~5000,磷脂復(fù)合物為馬來(lái)酰亞胺-甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺;

所述磷脂酰乙醇胺為二硬脂?;字R掖及贰⒍貦磅;字R掖及?、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二芥酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻?;字R掖及?、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、1-棕櫚?;?2-油?;字R掖及分械囊环N或多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的缺血性腦卒中靶向的紅細(xì)胞膜仿生智能藥物載體,其特征在于:所述納米囊泡的制備方法包括以下步驟:以疏水性硼酸酯接枝于親水葡聚糖骨架形成的兩親性嵌段共聚物PHB-Dextran為載體材料制備,將一定量PHB-Dextran溶于甲酰胺與甲醇的混合溶劑作為有機(jī)相,將適量NR2B9C溶于0.2M Tris-HCl緩沖液,加入到上述有機(jī)相后分散到0.5%泊洛沙姆188水溶液中,繼續(xù)攪拌1-2h,然后透析除去有機(jī)溶劑,最后過(guò)0.45μm的微孔濾膜即得納米囊泡。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述細(xì)胞膜表面修飾腦缺血?dú)w巢肽SHp,其特征在于:所述細(xì)胞膜表面修飾腦缺血?dú)w巢肽SHp包括以下步驟:將SHp-PEG2000-DSPE與紅細(xì)胞膜室溫孵育1h,然后等滲PBS(pH7.4)離心洗滌除去未修飾上的SHp-PEG2000-DSPE。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米囊泡內(nèi)核和外層紅細(xì)胞膜的超聲融合,其特征在于:所述納米囊泡和紅細(xì)胞膜的超聲融合包括以下步驟:先將提取的紅細(xì)胞膜(RBC Membrane)經(jīng)超聲波細(xì)胞破碎儀冰浴超聲,經(jīng)0.45μm,0.22μm微孔濾膜反復(fù)過(guò)濾即得納米級(jí)紅細(xì)胞膜載體;然后納米囊泡與紅細(xì)胞膜載體按照1:1~1:5的比例混合,水浴超聲,高速離心除去多余的紅細(xì)胞膜載體,去離子水重新分散,再經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾即得。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述紅細(xì)胞膜低滲提取法,其特征在于:所述紅細(xì)胞膜低滲提取法包括以下步驟:取新鮮血液于3000rpm離心,得到紅細(xì)胞,等滲PBS(pH7.4)洗滌,離心后,棄上清,重復(fù)三次;然后加低滲Tric-HCl(pH7.4)緩沖液與紅細(xì)胞混合,4℃靜置1-2h;再離心洗滌,棄上清(重復(fù)3~5次)至無(wú)肉眼可見的紅細(xì)胞為止。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述SHp和聚乙二醇-磷脂復(fù)合物兩部分的共價(jià)連接,其特征在于:所述SHp與聚乙二醇-磷脂復(fù)合物的共價(jià)連接包括以下步驟:取一定量Mal-PEG2000-DSPE(馬來(lái)酰亞胺-聚乙二醇(分子量2000)-磷脂復(fù)合物),溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺),另取適量SHp(CLEVSRKNC),溶于磷酸鹽緩沖液(pH7.0)中;將兩者按順序逐滴加入到10ml磷酸鹽緩沖液(pH 7.0),氮?dú)獗Wo(hù),磁力攪拌過(guò)夜,得初產(chǎn)物,繼而將通過(guò)透析除去過(guò)量的SHp;冷凍干燥后,得SHp-PEG2000-DSPE;所述SHp肽為SHp、馬來(lái)酰亞胺-聚乙二醇-磷脂復(fù)合物兩部分通過(guò)共價(jià)連接而成的線性嵌段共聚物,兩部分的摩爾比為1:1~5:1。

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