本發(fā)明涉及一種艾迪制劑的新應(yīng)用,具體是涉及一種艾迪制劑在制備治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù):
:神經(jīng)母細(xì)胞腫瘤(neuroblastoma,nb)起源于交感神經(jīng)系統(tǒng)的原始神經(jīng)嵴細(xì)胞的胚胎性腫瘤,交感神經(jīng)鏈、腎上腺髓質(zhì)是最常見的原發(fā)部位。nb是兒童最常見的實(shí)體腫瘤之一,占所有兒童腫瘤的8%~10%,占嬰兒總癌癥發(fā)病率的28%,為嬰兒發(fā)病率最高的惡性腫瘤。nb病死率高,占所有小兒惡性腫瘤死亡病死率的15%,其發(fā)病多為5歲以下,大約有1%家族史。我國(guó)每年新發(fā)病3000例左右,有將近一半的神經(jīng)母細(xì)胞瘤發(fā)生在2歲以內(nèi)的嬰幼兒。神經(jīng)母細(xì)胞瘤屬于神經(jīng)內(nèi)分泌性腫瘤,可以起源于交感神經(jīng)系統(tǒng)的任意神經(jīng)脊部位,其主要轉(zhuǎn)移途徑為淋巴及血行。在局限性病變病人中約35%有局部淋巴結(jié)浸潤(rùn),血行轉(zhuǎn)移主要發(fā)生于骨髓、骨、肝和皮膚,終末期或復(fù)發(fā)時(shí)可有腦和肺轉(zhuǎn)移。神經(jīng)母細(xì)胞瘤臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣,惡性程度高,病情進(jìn)展迅速,早期易發(fā)生轉(zhuǎn)移,多數(shù)患兒(大于50%)診斷之后處于晚期高危狀態(tài),預(yù)后較差,長(zhǎng)期存活率低。艾迪制劑是以斑蝥、人參、黃芪及刺五加為主要原料,提取其具有藥用價(jià)值的提取物作為有效成分而制成的制劑。有清熱解毒、消瘀散結(jié)的作用,其中艾迪注射液收載于衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)20冊(cè)。專利cn03117114.1、名稱為“治療腫瘤的中藥注射制劑及其制作方法”的發(fā)明專利和專利cn200510003151.3、名稱為“一種治療腫瘤的中藥制劑的制備方法”公開了以斑蝥、人參、黃芪及刺五加為處方的艾迪制劑以及其制備方法?,F(xiàn)有技術(shù)表明,艾迪制劑對(duì)惡性腫瘤具有良好的治療效果。目前研究中報(bào)到出艾迪制劑對(duì)原發(fā)性肝癌、肺癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科惡性腫瘤的治療有很好療效,但是沒有對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤的相關(guān)報(bào)道。神經(jīng)母細(xì)胞瘤就診時(shí)常屬晚期,治療難度較大。傳統(tǒng)手術(shù)、化療、放療為神經(jīng)母細(xì)胞瘤治療的三大主要手段,一般對(duì)局限性腫瘤主張先手術(shù)切除,再化療。手術(shù)不能切除者在確診后采用先化療、后手術(shù)、再化療或加放療的策略。但是目前治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤的藥物效果不佳,不良反應(yīng)嚴(yán)重,預(yù)后較差。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:發(fā)明的目的是提供一種艾迪制劑在制備治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的艾迪制劑由從斑蝥、人參、黃芪和刺五加組成。主要是含有從斑蝥、人參、黃芪和刺五加中提取出的具有藥用價(jià)值的提取物作為有效成分。按照重量份計(jì)算,本發(fā)明所述艾迪制劑按重量份配比:是由中藥原料斑蝥0.5-5份、人參25-100份、黃芪50-200份和刺五加100-200份經(jīng)提取制備而成。優(yōu)選的配比為:斑蝥1-2份、人參30-70份、黃芪75-125份、刺五加125-175份。最優(yōu)選的配比為:斑蝥1.5份、人參50份、黃芪100份、刺五加150份。在應(yīng)用時(shí),本發(fā)明的藥物可以根據(jù)需要加入一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體,如稀釋劑、填充劑、粘合劑、賦形劑、崩解劑、表面活性劑、吸收促進(jìn)劑和潤(rùn)滑劑等,制成各種艾迪制劑。前述的艾迪制劑優(yōu)選以注射劑、片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、乳劑、溶液或懸浮劑的形式使用,更優(yōu)選為注射劑。上述劑型均可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。前述的艾迪制劑的給藥途徑為口服、經(jīng)皮、靜脈或肌肉注射。本發(fā)明艾迪制劑的制備方法中,其有效成分提取物可以按照專利號(hào)為cn03117114.1的方法進(jìn)行提取,也可以按照專利號(hào)為cn200510003151.3中的的方法進(jìn)行提取,還可以用常規(guī)的方法進(jìn)行提取。本發(fā)明所述的艾迪制劑,其有效成分斑蝥為芫青科昆蟲南方大斑蝥mylabrisphaleratapallas或黃黑小斑蝥mylabriscichoriilinnaeus的干燥體,性辛、熱,有大毒,具有破血消瘦、攻毒蝕瘡的作用;人參為五加科植物人參panaxginsengc.a.mey.的干燥根,味甘、微苦,微溫,具有大補(bǔ)元?dú)?,補(bǔ)脾益肺,生津益血,安神增智的功效;黃芪為豆科植物蒙古黃芪astragalusmembranaceus(fisch.)bge.var.mongholocus(bge.)或膜莢黃芪的干燥根,具有補(bǔ)氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌的功效;刺五加為五加科植物刺五加acanthopanaxsenticosus(rupr.etmaxim.)harms的干燥根及根莖或莖, 具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神的作用。四者合用具有清熱解毒、消瘀散結(jié)的作用。艾迪制劑的活性成分為斑蝥、人參、黃芪和刺五加,斑蝥可用于積年頑癬、癓瘕腫塊、惡瘡死肌等;人參可用于元?dú)馓撁撟C、肺脾心腎氣虛證、熱病氣虛津傷口渴及消渴證;黃芪可用于氣虛乏力、食少便溏、中氣下陷、表虛自汗;刺五加可用于脾腎陽虛、體虛乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多夢(mèng)等。上述四種藥物具有補(bǔ)中益氣、生津養(yǎng)血的功效,可以促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng),有抗氧化、增強(qiáng)免疫的作用。因此,艾迪制劑對(duì)治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤瘤具有顯著的療效,其副作用小,臨床用藥更為安全。本申請(qǐng)人進(jìn)一步的試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),艾迪制劑確可用于制備治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤的藥物。為了使本領(lǐng)域普通技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明,以下通過實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明艾迪制劑的組成及制備方法,以及艾迪制劑在治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤藥物中的實(shí)驗(yàn)研究。需要說明的是:以下實(shí)施例僅為闡釋本發(fā)明,而不是限制本發(fā)明。試驗(yàn)例試驗(yàn)例1:艾迪制劑抗體外神經(jīng)細(xì)胞瘤的活性研究1.1材料及試劑1.1.1藥物名稱和來源:艾迪注射液,取自實(shí)施例1-7由不同處方配比制得的艾迪注射液。注射用硫酸長(zhǎng)春新堿,山西振東泰盛制藥有限公司;順鉑,長(zhǎng)春瑞濱為江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司。配制方法:以上藥物均用無血清培養(yǎng)基配成相應(yīng)濃度。1.1.2細(xì)胞株神經(jīng)母細(xì)胞瘤sh-sy5y細(xì)胞、神經(jīng)母細(xì)胞瘤sk-n-sh細(xì)胞,購(gòu)自美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)生物品收藏中心(atcc),神經(jīng)母細(xì)胞瘤n2a細(xì)胞,購(gòu)于中科院上海生命科學(xué)院細(xì)胞資源中心,按照所提供的說明書培養(yǎng)。1.1.3試劑及儀器dmem/f12(1:1)培養(yǎng)基、胎牛血清(美國(guó)gibco公司)、青霉素(10萬u/l)、鏈霉素(100mg/l)、co2孵箱、elx800型酶標(biāo)儀(美國(guó)bio-tek公司)。1.2研究方法1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)以含10%胎牛血清、10萬u/l青霉素和100mg/l鏈霉素的dmem/f12(1:1)培養(yǎng)基,于37℃、5%co2培養(yǎng)箱中常規(guī)傳代培養(yǎng)sh-sy5y細(xì)胞、sk-n-sh細(xì)胞和n2a細(xì)胞。1.2.2細(xì)胞抑制率測(cè)定取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期sh-sy5y細(xì)胞、sk-n-sh細(xì)胞和n2a細(xì)胞,分別制成細(xì)胞懸液,以40000ml-1細(xì)胞密度接種于96孔板(邊緣孔用無菌磷酸鹽緩沖液(pbs)填充),于5%co2、37℃孵育5小時(shí),藥物分別設(shè)5-7個(gè)濃度,每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)復(fù)孔,連續(xù)作用36小時(shí)后,每孔加入0.5%mtt溶液20μl,繼續(xù)培養(yǎng)5小時(shí)。終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液,每孔加入150μl二甲基亞砜(dmso),置于搖床上低速振蕩10min,使結(jié)晶物充分溶解。以酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定光密度(od)。空白對(duì)照以新鮮無血清培養(yǎng)基替換。計(jì)算藥物抑 制率及半數(shù)抑制濃度(ic50):藥物抑制率(%)=(空白對(duì)照od-用藥od)/空白對(duì)照od×100%半數(shù)抑制濃度(ic50):指被抑制一半時(shí)抑制劑的濃度,即凋亡細(xì)胞與全部細(xì)胞數(shù)之比等于50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的濃度。誘導(dǎo)能力越強(qiáng),該數(shù)值越低。1.3試驗(yàn)結(jié)果長(zhǎng)春新堿、順鉑和不同組分的艾迪注射液均對(duì)體外神經(jīng)母細(xì)胞瘤sh-sy5y細(xì)胞、sk-n-sh細(xì)胞和n2a細(xì)胞有抑制作用,其中按實(shí)施例1和實(shí)施例7制得的艾迪注射液抑制作用弱于長(zhǎng)春新堿和順鉑;按實(shí)施例2-6制得的艾迪注射液抑制作用強(qiáng)于長(zhǎng)春新堿和順鉑;艾迪(實(shí)施例4)對(duì)體外神經(jīng)母細(xì)胞瘤sh-sy5y細(xì)胞、sk-n-sh細(xì)胞和n2a細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)。具體結(jié)果見表1:表1長(zhǎng)春新堿、順鉑和艾迪制劑體外神經(jīng)母細(xì)胞瘤sh-sy5y細(xì)胞、sk-n-sh細(xì)胞和n2a細(xì)胞抑制率(%)及半數(shù)抑制濃度(ic50)結(jié)果1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)論長(zhǎng)春新堿、順鉑和不同組分的艾迪注射液?jiǎn)斡镁鶎?duì)體外神經(jīng)母細(xì)胞瘤sh-sy5y細(xì)胞、sk-n-sh細(xì)胞和n2a細(xì)胞有抑制作用,其中艾迪(實(shí)施例1)藥物組分最低,其抑制作用低于長(zhǎng)春新堿和順鉑;艾迪(實(shí)施例7)藥物組分最高,其抑制作用反而低于長(zhǎng)春新堿和順鉑。按實(shí)施例2-6制得的艾迪注射液抑制作用強(qiáng)于長(zhǎng)春新堿和順鉑,在此范圍內(nèi)的艾迪注射液處方配比都具有顯著的抗體外神經(jīng)母細(xì)胞瘤sh-sy5y細(xì)胞、sk-n-sh細(xì)胞和n2a細(xì)胞增殖作用;艾迪(實(shí)施例4)對(duì)體外神經(jīng)母細(xì)胞瘤sh-sy5y細(xì)胞、sk-n-sh細(xì)胞和n2a細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng),此為最優(yōu)選的艾迪注射液處方配比。試驗(yàn)例2:艾迪制劑對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤的體內(nèi)療效研究2.1材料和試劑:2.1.1藥物名稱和來源:艾迪注射液,取自實(shí)施例1-7由不同處方配比制得的艾迪注射液;注射用硫酸長(zhǎng)春新堿,山西振東泰盛制藥有 限公司;順鉑,長(zhǎng)春瑞濱為江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司。2.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞清潔級(jí)balb/c小鼠,由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;神經(jīng)母細(xì)胞瘤n2a細(xì)胞,購(gòu)于中科院上海生命科學(xué)院細(xì)胞資源中心。2.1.3試劑及儀器dmem/f12(1:1)培養(yǎng)基、胎牛血清(美國(guó)gibco公司)、青霉素(10萬u/l)、鏈霉素(100mg/l)、倒置顯微鏡、co2孵箱、移液管、吸耳球、酒精燈。2.2試驗(yàn)方法2.2.1細(xì)胞培養(yǎng)n2a細(xì)胞接種于含10%胎牛血清、100u/ml鏈霉素和100u/ml青霉素的dmem培養(yǎng)液中,在37℃、飽和濕度的5%co2孵箱中傳代培養(yǎng)。2.2.2注射用細(xì)胞懸液的制備選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,經(jīng)消化、吹打、加培養(yǎng)液等制成單細(xì)胞懸液。2.2.3模型建立及給藥balb/c小鼠腹腔注射n2a細(xì)胞株,待瘤體積生長(zhǎng)至100~200mm3之間后,將動(dòng)物隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組(ns組)、長(zhǎng)春新堿組、順鉑組和艾迪組。每組10只,長(zhǎng)春新堿組每日腹腔注射注射用硫酸長(zhǎng)春新堿0.025mg/kg,2次/周,連續(xù)兩周。順鉑組每日腹腔注射順鉑5mg/kg,1次/周,連續(xù)兩周。艾迪組每日同一時(shí)間腹腔注射艾迪注射 液50ml(以0.9%氯化鈉或5~10%葡萄糖注射液400~450ml稀釋后使用),連續(xù)兩周。對(duì)照組每日同一時(shí)間腹腔注射ns2ml。每周測(cè)2-3次瘤體積,稱鼠重,記錄數(shù)據(jù)。計(jì)算腫瘤體積(v)、相對(duì)腫瘤體積(rtv)和抑瘤率(ir)。腫瘤體積(v)=1/2×a(長(zhǎng)徑)×b2(寬徑)對(duì)腫瘤體積(rtv)=vt/v0(式中v0為分組給藥時(shí)測(cè)得的腫瘤體積,vt為每次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積)抑瘤率(ir)%=(1-長(zhǎng)春新堿組或艾迪組或順鉑組平均瘤重/ns組平均瘤重)×100%2.2.4試驗(yàn)結(jié)果長(zhǎng)春新堿和艾迪對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤都有一定的治療效果,能明顯抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤的生長(zhǎng)。其中,按實(shí)施例1和實(shí)施例7制得的艾迪注射液對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤的治療效果弱于長(zhǎng)春新堿和順鉑;按實(shí)施例2-6制得的艾迪注射液治療效果比長(zhǎng)春新堿和順鉑更加顯著;艾迪(實(shí)施例4)對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤的治療效果最好;艾迪(實(shí)施例6-7)由于藥物組分最高,毒性最大,導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)精神不振和嘔吐癥狀;此外,順鉑給藥后導(dǎo)致一只小鼠出現(xiàn)藥物相關(guān)性死亡。表1長(zhǎng)春新堿、順鉑和艾迪對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤n2a細(xì)胞生長(zhǎng)抑制療效注:d0:第一次給藥時(shí)間;dn:第一給藥后20天2.3試驗(yàn)結(jié)論長(zhǎng)春新堿、順鉑和艾迪單獨(dú)給藥時(shí)均對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤有顯著的治療效果,能明顯抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤的生長(zhǎng);其中,按實(shí)施例1制得的艾迪注射液藥物組分最低,對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤的治療效果弱于長(zhǎng)春新堿和順鉑;按實(shí)施例7制得的艾迪注射液藥物組分最高,毒副作用最大,對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤的治療效果反而弱于長(zhǎng)春新堿和順鉑;按實(shí)施例2-6制得的艾迪注射液治療效果比長(zhǎng)春新堿和順鉑更加顯著;艾迪(實(shí)施例4)對(duì)體外神經(jīng)母細(xì)胞瘤的治療效果最好。綜上所述,艾迪(實(shí)施例4)為最優(yōu)選處方配比,能達(dá)到最好治療效果。試驗(yàn)例3:艾迪制劑對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤的治療1、病例選擇:對(duì)于有典型癥狀的神經(jīng)母細(xì)胞瘤的兒童患者,通過活檢、骨髓穿刺和尿vma/hva確診,篩選出明確診斷為神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒18例。根據(jù)uicctnm分期,處于ⅲ期2例,ⅳ期16例。將18例患者隨機(jī)分為兩組,治療組10例,男5例,女5例,年齡18-59月,平均38月,處于ⅲ期1例,ⅳ期9例;對(duì)照組8例,男4例,女4例,年齡19-56月,平均36.6月,處于ⅲ期1例,ⅳ期7例。所以患者kps評(píng)分均小于60。兩組在年齡、性別、病程、病情方面均具有可比性。治療前根據(jù)入組時(shí)患者的具體病情,進(jìn)行x光、ct、mri、骨掃描、骨髓細(xì)胞學(xué)等檢查,準(zhǔn)確評(píng)估患者的腫瘤情況。做血常規(guī)、血液生化檢查、心電圖和(或)超聲心動(dòng)圖等檢查,評(píng)估患者基本狀況?;颊哳A(yù)計(jì)生存大于3個(gè)月。2、治療方法:對(duì)照組給予注射長(zhǎng)春新堿0.05mg/kg,靜脈滴注,d1、2,環(huán)磷酰胺20~80mg/kg,靜脈滴注d1、2各用1次;多柔比星15mg/(m2·次),靜脈滴注,d1、2各用1次;氟尿嘧啶10mg/kg,靜脈滴注,d3、8、9,阿糖胞苷3mg/kg,靜脈滴注,d3、8、9,每3~4周為1療程。治療組靜脈滴加艾迪注射液100ml(以0.9%氯化鈉或5~10%葡萄糖注射液400~450ml稀釋后使用)/日,療程15天,為一周期,2周期一療程。3、判定方法:療效按recist評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定:完全緩解(cr),部分緩解(pr),穩(wěn)定(sd),進(jìn)展(pd)和無變化(nc)。以cr+pr計(jì)算有效率(rr),以cr+pr+sd計(jì)算疾病控制率(dcr)。生活質(zhì)量評(píng)定以kps評(píng)分為標(biāo)準(zhǔn),治療后評(píng)分上升10分以上為提高,10分以內(nèi)為 穩(wěn)定,減少10分以上為降低。4、結(jié)果4.1近期療效:治療組10例中有效率(cr+pr)為70%,疾病控制率(cr+pr+sd)為90%;對(duì)照組有效率(cr+pr)為62.5%,疾病控制率(cr+pr+sd)為75%;治療組近期療效優(yōu)于對(duì)照組。兩組近期療效比較見表1。表1兩組患者近期療效比較4.2近期生活質(zhì)量:治療組中有7例(70%)患者生活質(zhì)量得到改善,對(duì)照組中生活質(zhì)量改善為4例(50%),治療組患者生活質(zhì)量?jī)?yōu)于對(duì)照組。兩組患者近期生活質(zhì)量比較見表二。表2兩組患者近期生活質(zhì)量比較組別例數(shù)改善(%)穩(wěn)定(%)下降(%)治療組107(70%)2(20%)1(10%)對(duì)照組84(50%)2(25%)2(25%)4.3討論:從上述結(jié)果可知,治療組的療效和患者的生活質(zhì)量均優(yōu)于對(duì)照組,艾迪制劑作為質(zhì)量神經(jīng)母細(xì)胞瘤藥物優(yōu)于長(zhǎng)春新堿和環(huán)磷酰胺、多柔比星聯(lián)合用藥。艾迪制劑對(duì)惡性神經(jīng)母細(xì)胞瘤具有良好的 療效和潛在的治療價(jià)值。具體實(shí)施方式實(shí)施例1:艾迪注射液的制備(低組分)原料:斑蝥4g、人參200g、黃芪450g、刺五加900g制備方法:取斑蝥藥材,粉碎,用400ml100%乙醇加熱回流提取5次,提取時(shí)間分別為:2h、1h、0.5h、0.5h、0.5h,濾過,藥渣備用,提取液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,減壓回收乙醇,濾過,加水稀釋至1000ml,用12%鹽酸溶液調(diào)至ph6-7,靜置,冷藏,離心濾過,上清液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,備用;取人參切片,用480ml60%乙醇加熱回流提取3h,濾過,藥渣備用,提取液減壓回收乙醇,濃縮液加水至體積為150ml,上大孔吸附樹脂,加水洗脫5倍柱體積,再用80%乙醇5倍柱體積洗脫,收集洗脫液,回收乙醇,濃縮,濾過,備用;取黃芪、刺五加藥材,與人參、斑蝥藥渣合并,加24960ml水煎煮5次,提取時(shí)間分別為:3h、2h、1h、0.5h、0.5h,合并煎液,濾過,濃縮至體積為1560ml,過濾,上清液加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,用7%氫氧化鈉溶液調(diào)ph7,冷藏,過濾,上清液再加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,冷藏,過濾,回收乙醇,加水至1200ml,用12%鹽酸溶液調(diào)ph4~5,加入0.3%活性炭煮沸脫色40min,離心過濾;上清液與人參、斑蝥提取液合并,加注射用水至10000ml,調(diào)節(jié)藥液ph值為3,過濾,灌封、滅菌,即得艾迪注射制劑1000支,劑量為10ml/支,每支含斑蝥素(c10h12o4)為0.008~0.030mg。實(shí)施例2:艾迪注射液的制備原料:斑蝥5g、人參250g、黃芪500g、刺五加1000g制備方法:取斑蝥藥材,粉碎,用400ml100%乙醇加熱回流提取5次,提取時(shí)間分別為:2h、1h、0.5h、0.5h、0.5h,濾過,藥渣備用,提取液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,減壓回收乙醇,濾過,加水稀釋至1000ml,用12%鹽酸溶液調(diào)至ph6-7,靜置,冷藏,離心濾過,上清液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,備用;取人參切片,用480ml60%乙醇加熱回流提取3h,濾過,藥渣備用,提取液減壓回收乙醇,濃縮液加水至體積為150ml,上大孔吸附樹脂,加水洗脫5倍柱體積,再用80%乙醇5倍柱體積洗脫,收集洗脫液,回收乙醇,濃縮,濾過,備用;取黃芪、刺五加藥材,與人參、斑蝥藥渣合并,加24960ml水煎煮5次,提取時(shí)間分別為:3h、2h、1h、0.5h、0.5h,合并煎液,濾過,濃縮至體積為1560ml,過濾,上清液加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,用7%氫氧化鈉溶液調(diào)ph7,冷藏,過濾,上清液再加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,冷藏,過濾,回收乙醇,加水至1200ml,用12%鹽酸溶液調(diào)ph4~5,加入0.3%活性炭煮沸脫色40min,離心過濾;上清液與人參、斑蝥提取液合并,加注射用水至10000ml,調(diào)節(jié)藥液ph值為3,過濾,灌封、滅菌,即得艾迪注射制劑1000支,劑量為10ml/支,每支含斑蝥素(c10h12o4)為0.008~0.030mg。實(shí)施例3:艾迪注射液的制備原料:斑蝥10g、人參300g、黃芪750g、刺五加1250g制備方法:取斑蝥藥材,粉碎,用400ml100%乙醇加熱回流提取5次,提取時(shí)間分別為:2h、1h、0.5h、0.5h、0.5h,濾過,藥渣備用, 提取液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,減壓回收乙醇,濾過,加水稀釋至1000ml,用12%鹽酸溶液調(diào)至ph6-7,靜置,冷藏,離心濾過,上清液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,備用;取人參切片,用480ml60%乙醇加熱回流提取3h,濾過,藥渣備用,提取液減壓回收乙醇,濃縮液加水至體積為150ml,上大孔吸附樹脂,加水洗脫5倍柱體積,再用80%乙醇5倍柱體積洗脫,收集洗脫液,回收乙醇,濃縮,濾過,備用;取黃芪、刺五加藥材,與人參、斑蝥藥渣合并,加24960ml水煎煮5次,提取時(shí)間分別為:3h、2h、1h、0.5h、0.5h,合并煎液,濾過,濃縮至體積為1560ml,過濾,上清液加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,用7%氫氧化鈉溶液調(diào)ph7,冷藏,過濾,上清液再加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,冷藏,過濾,回收乙醇,加水至1200ml,用12%鹽酸溶液調(diào)ph4~5,加入0.3%活性炭煮沸脫色40min,離心過濾;上清液與人參、斑蝥提取液合并,加注射用水至10000ml,調(diào)節(jié)藥液ph值為3,過濾,灌封、滅菌,即得艾迪注射制劑1000支,劑量為10ml/支,每支含斑蝥素(c10h12o4)為0.008~0.030mg。實(shí)施例4:艾迪注射液的制備原料:斑蝥15g、人參500g、黃芪1000g、刺五加1500g制備方法:取斑蝥藥材,粉碎,用400ml100%乙醇加熱回流提取5次,提取時(shí)間分別為:2h、1h、0.5h、0.5h、0.5h,濾過,藥渣備用,提取液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,減壓回收乙醇,濾過,加水稀釋至1000ml,用12%鹽酸溶液調(diào)至ph6-7,靜置,冷藏,離心濾過,上清液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,備用;取人參切片,用 480ml60%乙醇加熱回流提取3h,濾過,藥渣備用,提取液減壓回收乙醇,濃縮液加水至體積為150ml,上大孔吸附樹脂,加水洗脫5倍柱體積,再用80%乙醇5倍柱體積洗脫,收集洗脫液,回收乙醇,濃縮,濾過,備用;取黃芪、刺五加藥材,與人參、斑蝥藥渣合并,加24960ml水煎煮5次,提取時(shí)間分別為:3h、2h、1h、0.5h、0.5h,合并煎液,濾過,濃縮至體積為1560ml,過濾,上清液加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,用7%氫氧化鈉溶液調(diào)ph7,冷藏,過濾,上清液再加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,冷藏,過濾,回收乙醇,加水至1200ml,用12%鹽酸溶液調(diào)ph4~5,加入0.3%活性炭煮沸脫色40min,離心過濾;上清液與人參、斑蝥提取液合并,加注射用水至10000ml,調(diào)節(jié)藥液ph值為3,過濾,灌封、滅菌,即得艾迪注射制劑1000支,劑量為10ml/支,每支含斑蝥素(c10h12o4)為0.008~0.030mg。實(shí)施例5:艾迪注射液的制備原料:斑蝥20g、人參700g、黃芪1250g、刺五加1750g制備方法:取斑蝥藥材,粉碎,用400ml100%乙醇加熱回流提取5次,提取時(shí)間分別為:2h、1h、0.5h、0.5h、0.5h,濾過,藥渣備用,提取液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,減壓回收乙醇,濾過,加水稀釋至1000ml,用12%鹽酸溶液調(diào)至ph6-7,靜置,冷藏,離心濾過,上清液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,備用;取人參切片,用480ml60%乙醇加熱回流提取3h,濾過,藥渣備用,提取液減壓回收乙醇,濃縮液加水至體積為150ml,上大孔吸附樹脂,加水洗脫5倍柱體積,再用80%乙醇5倍柱體積洗脫,收集洗脫液,回收乙醇,濃 縮,濾過,備用;取黃芪、刺五加藥材,與人參、斑蝥藥渣合并,加24960ml水煎煮5次,提取時(shí)間分別為:3h、2h、1h、0.5h、0.5h,合并煎液,濾過,濃縮至體積為1560ml,過濾,上清液加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,用7%氫氧化鈉溶液調(diào)ph7,冷藏,過濾,上清液再加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,冷藏,過濾,回收乙醇,加水至1200ml,用12%鹽酸溶液調(diào)ph4~5,加入0.3%活性炭煮沸脫色40min,離心過濾;上清液與人參、斑蝥提取液合并,加注射用水至10000ml,調(diào)節(jié)藥液ph值為3,過濾,灌封、滅菌,即得艾迪注射制劑1000支,劑量為10ml/支,每支含斑蝥素(c10h12o4)為0.008~0.030mg。實(shí)施例6:艾迪注射液的制備原料:斑蝥50g、人參1000g、黃芪2000g、刺五加2000g制備方法:取斑蝥藥材,粉碎,用400ml100%乙醇加熱回流提取5次,提取時(shí)間分別為:2h、1h、0.5h、0.5h、0.5h,濾過,藥渣備用,提取液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,減壓回收乙醇,濾過,加水稀釋至1000ml,用12%鹽酸溶液調(diào)至ph6-7,靜置,冷藏,離心濾過,上清液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,備用;取人參切片,用480ml60%乙醇加熱回流提取3h,濾過,藥渣備用,提取液減壓回收乙醇,濃縮液加水至體積為150ml,上大孔吸附樹脂,加水洗脫5倍柱體積,再用80%乙醇5倍柱體積洗脫,收集洗脫液,回收乙醇,濃縮,濾過,備用;取黃芪、刺五加藥材,與人參、斑蝥藥渣合并,加24960ml水煎煮5次,提取時(shí)間分別為:3h、2h、1h、0.5h、0.5h,合并煎液,濾過,濃縮至體積為1560ml,過濾,上清液加乙醇,使 含醇量達(dá)到60%,用7%氫氧化鈉溶液調(diào)ph7,冷藏,過濾,上清液再加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,冷藏,過濾,回收乙醇,加水至1200ml,用12%鹽酸溶液調(diào)ph4~5,加入0.3%活性炭煮沸脫色40min,離心過濾;上清液與人參、斑蝥提取液合并,加注射用水至10000ml,調(diào)節(jié)藥液ph值為3,過濾,灌封、滅菌,即得艾迪注射制劑1000支,劑量為10ml/支,每支含斑蝥素(c10h12o4)為0.008~0.030mg。實(shí)施例7:艾迪注射液的制備(高組分)原料:斑蝥60g、人參1100g、黃芪2100g、刺五加2100g制備方法:取斑蝥藥材,粉碎,用400ml100%乙醇加熱回流提取5次,提取時(shí)間分別為:2h、1h、0.5h、0.5h、0.5h,濾過,藥渣備用,提取液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,減壓回收乙醇,濾過,加水稀釋至1000ml,用12%鹽酸溶液調(diào)至ph6-7,靜置,冷藏,離心濾過,上清液用4%氫氧化鈉溶液調(diào)至ph8-9,備用;取人參切片,用480ml60%乙醇加熱回流提取3h,濾過,藥渣備用,提取液減壓回收乙醇,濃縮液加水至體積為150ml,上大孔吸附樹脂,加水洗脫5倍柱體積,再用80%乙醇5倍柱體積洗脫,收集洗脫液,回收乙醇,濃縮,濾過,備用;取黃芪、刺五加藥材,與人參、斑蝥藥渣合并,加24960ml水煎煮5次,提取時(shí)間分別為:3h、2h、1h、0.5h、0.5h,合并煎液,濾過,濃縮至體積為1560ml,過濾,上清液加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,用7%氫氧化鈉溶液調(diào)ph7,冷藏,過濾,上清液再加乙醇,使含醇量達(dá)到60%,冷藏,過濾,回收乙醇,加水至1200ml,用12%鹽酸溶液調(diào)ph4~5,加入0.3%活性炭煮沸脫色40min,離心 過濾;上清液與人參、斑蝥提取液合并,加注射用水至10000ml,調(diào)節(jié)藥液ph值為3,過濾,灌封、滅菌,即得艾迪注射制劑1000支,劑量為10ml/支,每支含斑蝥素(c10h12o4)為0.008~0.030mg。當(dāng)前第1頁12