多肽構(gòu)建體及其用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了多肽構(gòu)建體,其包含連接至結(jié)合細(xì)胞表面相關(guān)抗原的抗體或其抗原結(jié)合部分的肽或多肽信號(hào)傳遞配體,其中所述配體包含降低其對(duì)缺少所述抗原表達(dá)的細(xì)胞的效力的至少一個(gè)氨基酸取代或缺失。
【專利說明】多肽構(gòu)建體及其用途
[0001] 相關(guān)申請(qǐng) 本申請(qǐng)要求在2011年10月28日提交的標(biāo)題為"多肽構(gòu)建體及其用途"的澳大利亞專 利申請(qǐng)2011904502的權(quán)益,其全部?jī)?nèi)容通過引用并入本文。
[0002] 發(fā)明領(lǐng)域 本申請(qǐng)涉及包含連接至抗體的突變的、弱化的多肽配體的多肽構(gòu)建體,其中所述抗體 將所述突變配體指向在其表面表達(dá)與所述抗體結(jié)合的抗原和所述配體的受體的細(xì)胞。本發(fā) 明進(jìn)一步涉及包括使用這些多肽構(gòu)建體的治療方法。
[0003] 發(fā)明背景 已描述多種肽和多肽配體通過與細(xì)胞表面上的受體相互作用而發(fā)揮功能,并且由此刺 激、抑制或另外調(diào)節(jié)生物應(yīng)答,通常涉及帶有所述受體的細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。這類配體 的實(shí)例包括肽和多肽激素、細(xì)胞因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子、凋亡誘導(dǎo)因子等。天然配體可以 是可溶的,或者可以連接到另一細(xì)胞的表面。
[0004] 由于這類配體的生物活性,一些具有作為治療劑的潛在用途。一些肽或多肽配 體已由管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)作為治療產(chǎn)品,包括例如,人生長(zhǎng)激素、胰島素、干擾素(IFN) - a 2b、 IFNa 2a、IFN0、紅細(xì)胞生成素、G-CSF和GM-CSF。很多這些和其他配體已展示了在治療 應(yīng)用中的潛能,但也顯示出在向人類患者施用時(shí)的毒性。毒性的一個(gè)原因是這些配體中的 大多數(shù)引發(fā)多種細(xì)胞上的受體,包括介導(dǎo)治療作用的那些細(xì)胞之外的細(xì)胞。例如,在使用 IFNa 2b治療多發(fā)性骨髓瘤時(shí),其效用至少部分地在于其結(jié)合于骨髓瘤細(xì)胞上的I型干擾 素受體,這進(jìn)而引發(fā)減少的增殖并因此限制疾病進(jìn)展。然而,遺憾的是,這種IFN還結(jié)合體 內(nèi)的多種其他正常細(xì)胞,引發(fā)多種其他細(xì)胞應(yīng)答,其中一些是有害的(例如,流感樣癥狀、 嗜中性白血球減少、抑郁)。配體的這種"脫靶(off target)"活性的結(jié)果是,很多配體不 適合作為藥物候選物。在本文中,"脫靶活性"是指對(duì)于配體的天然受體,但在介導(dǎo)治療有益 作用的那些細(xì)胞之外的細(xì)胞表面上的活性。
[0005] 即便一些配體,例如IFNa 2b,批準(zhǔn)用于治療醫(yī)學(xué)狀況,它們由于其"脫靶"生物活 性而耐受不良。脫靶活性和相關(guān)的不良耐受性還意味著,這些基于肽配體的藥物中的一些 不能以足夠高的劑量施用,以對(duì)介導(dǎo)治療作用的靶細(xì)胞產(chǎn)生最佳治療作用。
[0006] 類似地,自二十世紀(jì)80年代中期以來,已知干擾素,特別是IFNa,能夠提高凋亡 并且減少某些癌細(xì)胞的增殖。這些生物活性由癌細(xì)胞表面上的I型干擾素受體介導(dǎo),其在 受到刺激時(shí),啟動(dòng)各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,導(dǎo)致增殖降低和/或誘導(dǎo)終末分化或凋亡。IFNa已 由FDA批準(zhǔn)用于治療多種癌癥,包括黑素瘤、腎細(xì)胞癌、B細(xì)胞淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、慢性 骨髓性白血?。–ML)和毛細(xì)胞性白血病。IFNa對(duì)腫瘤細(xì)胞的"直接"作用由IFNa對(duì)這些 細(xì)胞上的I型IFN受體的直接結(jié)合介導(dǎo),并刺激凋亡、終末分化或降低的增殖。IFN a對(duì)非 癌細(xì)胞的"間接"作用是刺激免疫系統(tǒng),這可通過導(dǎo)致免疫系統(tǒng)排斥腫瘤而產(chǎn)生額外的抗癌 作用。
[0007] 遺憾的是,I型干擾素受體也存在于大多數(shù)非癌細(xì)胞上。通過IFNa活化這些細(xì)胞 上的這種受體導(dǎo)致多種促炎細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá),導(dǎo)致毒性。這種毒性阻止了 IFNa 以對(duì)癌細(xì)胞發(fā)揮最大抗增殖和促凋亡活性的水平向個(gè)體給藥。
[0008] Ozzello 等人(Breast Cancer Research and Treatment 25:265-76,1993)描述 了將人IFNa與腫瘤靶向抗體共價(jià)連接,從而將IFNa的直接抑制活性定位到腫瘤,作為降 低腫瘤生長(zhǎng)速率的途徑,并且證實(shí)了這種綴合物在人癌癥的異種移植模型中具有抗腫瘤活 性。所觀察到的抗癌活性的機(jī)制歸因于IFNa對(duì)癌細(xì)胞的直接作用,因?yàn)樵谠囼?yàn)中使用的 人IFNa沒有可觀地與鼠 I型IFN受體相互作用,該相互作用可導(dǎo)致間接抗癌作用。然而, 由于人IFNa與鼠細(xì)胞的結(jié)合的這種缺失,該作者不能評(píng)估抗體-INF a綴合物相對(duì)于游離 IFNa的毒性。這些作者使用化學(xué)方法以將IFNa連接至抗體。
[0009] Alkan 等人,(Journal of Interferon Research, volume 4, number 3, p. 355-63,1984)證實(shí)了將人IFNa連接至結(jié)合E.B.病毒(EBV)膜抗原(MA)的抗體提高了 其針對(duì)表達(dá)EBV-MA抗原的細(xì)胞的抗增殖活性。這種提高的效力依賴于靶細(xì)胞的抗原表達(dá) 和抗體的結(jié)合特異性二者。所測(cè)試的細(xì)胞系是癌細(xì)胞系WMR-WIL,成髓細(xì)胞白血病。該作 者提出IFN a與抗體的連接可用作癌癥的治療,因?yàn)樗蓽p少腫瘤生長(zhǎng)。Alkan等人沒有解 決這些抗體-IFNa綴合物由于其與正常的抗原陰性細(xì)胞的相互作用而產(chǎn)生的潛在毒性。
[0010] 還已知抗體和IFNa之間的連接可通過制備融合蛋白構(gòu)建體完成。例如,IDEC (W001/97844)公開了人IFNa與靶向腫瘤抗原⑶20的IgG重鏈C-末端的直接融合。其 他小組已公開了在IgG重鏈C-末端和IFNa之間的各種接頭的用途。例如,US 7, 456, 257 公開了抗體重鏈恒定區(qū)的C-末端可通過序列(GGGGS)n (其中η可以是1、2或3)的插入 的富含絲氨酸-甘氨酸(S/G)接頭連接至IFNa,并且無論接頭長(zhǎng)度如何,融合蛋白構(gòu)建體 的IFNa活性沒有顯著差異。
[0011] Morrison 等人(US2011/0104112 A1 ;和 Xuan C,Steward KK, Timmerman JM, Morrison SL Targeted delivery of interferon-a via fusion to anti-CD20 results in potent antitumor activity against B-cell lymphoma. Blood 2010;115:2864 - 71) 也公開了連接至靶向癌癥的IgG抗體重鏈C-末端的IFNa,具有插入的S/G接頭,并且觀 察到IgG和接頭與IFNa的融合降低了 IFNa對(duì)于不在細(xì)胞表面上表達(dá)對(duì)應(yīng)抗原的細(xì)胞的 活性。與作用于人細(xì)胞的人非融合蛋白IFNa (游離IFNa )相比,這些融合蛋白構(gòu)建體的 降低的IFN活性是適度的,但鼠 IFNa對(duì)鼠細(xì)胞的作用看起來更為顯著。如Morrison等人 和US 7, 456, 257中觀察到的,由于融合至抗體的C-末端而導(dǎo)致的人IFNa活性降低是適 度的,并且通常認(rèn)為是不利的,因?yàn)檫@降低了配體的效力。例如,Rossi等人(Blood vol. 114,No. 18,pp3864-71)指出了這種缺陷,他們使用可選的策略將IFNa連接至腫瘤靶向 抗體,其連接方式導(dǎo)致觀察到?jīng)]有IFNa活性的損失。
[0012] 現(xiàn)有技術(shù)通常教導(dǎo)使用有效的IFN并且將這種IFN靶向癌細(xì)胞。盡管這種方法導(dǎo) 致IFN對(duì)癌細(xì)胞的活性提高,但沒有解決IFN對(duì)正常的"脫靶"細(xì)胞的活性的問題。在上述 現(xiàn)有技術(shù)實(shí)例中,抗體-IFNa融合蛋白的人IFNa部分,在暴露于不在其細(xì)胞表面表達(dá)對(duì) 應(yīng)抗原的人細(xì)胞時(shí),保持高比例的天然IFNa活性。這種活性可導(dǎo)致由于融合蛋白的IFNa 部分活化非癌的正常("脫靶")細(xì)胞而產(chǎn)生的毒性。因此,存在降低基于配體的藥物的"脫 靶"活性,同時(shí)保持這些配體的"中靶(on-target)"治療作用的需求。保持目標(biāo)特異性配 體活性并且同時(shí)降低基于配體的治療劑的非目標(biāo)毒性,將對(duì)在治療上有用的配體產(chǎn)生更大 的治療濃度窗口。例如,使用以下形式的人IFNa將是期望的,所述形式可使其活性指向癌 細(xì)胞,同時(shí)使其對(duì)正常人細(xì)胞的作用最小化。理想地,將最大程度地刺激癌細(xì)胞上的I型干 擾素受體,同時(shí)非癌細(xì)胞上的相同受體將經(jīng)歷最小的刺激。需要以如下方式將人IFNa靶 向癌細(xì)胞,使其對(duì)于展示抗原的癌細(xì)胞比不展示抗原的正常細(xì)胞具有顯著更高的活性。相 同的邏輯適用于其他潛在的治療性配體,例如其他細(xì)胞因子、肽和多肽激素、趨化因子、生 長(zhǎng)因子、凋亡誘導(dǎo)因子等。
[0013] 發(fā)明概述 本發(fā)明已發(fā)現(xiàn)當(dāng)具有大幅降低配體對(duì)其受體的親和力的一個(gè)或多個(gè)突變的肽或多肽 信號(hào)傳遞配體連接到將所述突變配體靶向展示抗體的對(duì)應(yīng)抗原的靶細(xì)胞的抗體時(shí),保持了 所述配體對(duì)抗原陽性的祀細(xì)胞(target antigen-positive cells)的活性,同時(shí)大幅降低 了所述配體對(duì)抗原陰性的非祀細(xì)胞(non-target antigen-negative cells)的活性。最終 結(jié)果是如下的配體信號(hào)傳遞分子,其對(duì)抗原陽性靶細(xì)胞上的它的受體的活化的效力比對(duì)抗 原陰性非靶細(xì)胞強(qiáng)很多,這提供了降低由脫靶配體活性導(dǎo)致的毒性的方法。
[0014] 因此,本發(fā)明的第一方面提供了多肽構(gòu)建體,其包含連接到結(jié)合細(xì)胞表面相關(guān)抗 原的抗體或其抗原結(jié)合部分的肽或多肽信號(hào)傳遞配體,其中所述配體包含降低其對(duì)缺少所 述抗原表達(dá)的細(xì)胞的效力的至少一個(gè)氨基酸取代或缺失。
[0015] 在第二方面,本發(fā)明提供了治療個(gè)體的腫瘤的方法,包括向所述個(gè)體施用本發(fā)明 的多肽構(gòu)建體。
[0016] 在第三方面,本發(fā)明提供了本發(fā)明的多肽構(gòu)建體在癌癥治療中的用途。
[0017] 在第四方面,本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的多肽構(gòu)建體和藥學(xué)上可接受的載體或稀 釋劑的組合物。
[0018] 在第五方面,本發(fā)明提供了降低肽或多肽信號(hào)傳遞配體對(duì)帶有配體受體的抗原陰 性細(xì)胞的效力,同時(shí)保持所述配體對(duì)帶有配體受體的抗原陽性細(xì)胞的效力至與抗原陰性細(xì) 胞相比時(shí)更大程度的方法,所述方法包括修飾所述配體,以使所述配體包含使其對(duì)抗原陰 性細(xì)胞的效力降低的至少一個(gè)氨基酸取代或缺失,并將所述修飾的配體連接到抗體或其抗 原結(jié)合部分,其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分是對(duì)在抗原陽性細(xì)胞但不在抗原陰性細(xì)胞上 的細(xì)胞表面相關(guān)抗原特異性的。
[0019] 不同于未弱化的"天然"或"野生型"人配體與抗體或其抗原結(jié)合部分的連接(這 通常導(dǎo)致配體對(duì)抗原陽性細(xì)胞的效力比抗原陰性細(xì)胞高1-15倍),本發(fā)明證實(shí),將突變的 弱化形式的配體連接到相同的抗體,能夠?qū)乖栃约?xì)胞產(chǎn)生比對(duì)抗原陰性細(xì)胞更高的效 力。
[0020] 在一個(gè)實(shí)施方式中,所述信號(hào)傳遞配體是IFNa或IFNP,并且使用如本文所述的 "脫靶"測(cè)試和"中靶(ARP) "或"中靶(Daudi) "測(cè)試,與游離的野生型配體相比,所述多肽 構(gòu)建體顯示至少10,至少100,至少1000,至少10000,或至少100000倍的超過抗原陰性細(xì) 胞的對(duì)抗原陽性細(xì)胞的更大選擇性。
[0021] 本發(fā)明還提供了抗體-弱化配體融合蛋白,其中所述弱化配體是IFNa或IFN3, 并且其中所述融合蛋白構(gòu)建體,在注射到具有建立的人腫瘤的小鼠時(shí),能夠消除腫瘤。
[0022] 本發(fā)明還提供了抗體-弱化配體融合蛋白,其中所述弱化配體是IFNa或IFN3, 并且其中所述融合蛋白構(gòu)建體,在注射到具有體積大于500立方毫米的建立的人腫瘤的小 鼠時(shí),能夠消除腫瘤。
[0023] 本發(fā)明還提供了抗體-弱化配體融合蛋白,其中所述弱化配體是IFNa或IFN3, 并且其中所述融合蛋白構(gòu)建體,在作為單個(gè)一次性治療注射到具有建立的人腫瘤的小鼠 時(shí),能夠消除腫瘤。
[0024] 抗體-弱化配體融合蛋白,其中所述弱化配體是IFNa或IFNi3,并且其中所述融 合蛋白構(gòu)建體能夠消除小鼠中的建立的骨髓瘤腫瘤和建立的淋巴瘤腫瘤二者。
[0025] 在這些情況的每一種中,優(yōu)選所述細(xì)胞表面相關(guān)抗原是⑶38。
[0026] 在一個(gè)實(shí)施方式中,所述包含至少一個(gè)氨基酸取代或缺失的信號(hào)傳遞配體的氨基 酸序列與野生型配體氨基酸序列具有大于90%或大于95%、或大于96%,或大于97%,或大于 98%或大于99%的序列同一性。
[0027] 在一個(gè)實(shí)施方式中,所述構(gòu)建體是融合蛋白。
[0028] 在某些實(shí)施方式中,所述信號(hào)傳遞配體連接到抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈的 C-末端。在某些實(shí)施方式中,所述信號(hào)傳遞配體連接到抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈的 C-末端。在這些實(shí)施方式的任一個(gè)中,所述配體可直接連接到抗體或其抗原結(jié)合部分的重 鏈或輕鏈的C-末端(即,沒有插入的額外接頭)。
[0029] 在一個(gè)實(shí)施方式中,所述細(xì)胞表面相關(guān)抗原選自I型MHC或Η)-1。
[0030] 在某些實(shí)施方式中,所述細(xì)胞表面相關(guān)抗原是骨髓瘤相關(guān)抗原,其選自CD38、 HM1. 24、CD56、CSl、CD138、CD74、IL-6R、Blys (BAFF)、BCMA、HLA-SR、激肽原、β 2 微球蛋白、 FGFR3、ICAM-1、蛋白裂解酶(matriptase)、CD52、EGFR、GM2、α 4-整聯(lián)蛋白、IFG-1R 和 KIR, 且配體是IFN α。
[0031] 在一個(gè)實(shí)施方式中,所述信號(hào)傳遞配體選自IFNa 2b、IFN0、IL-4或IL-6中的任 一個(gè)。
[0032] 在所述信號(hào)傳遞配體是IFNa的某些實(shí)施方式中,氨基酸取代或缺失可以是在氨 基酸位置R33、R144或A145中的任何一個(gè)或多個(gè)。在某些實(shí)施方式中,所述信號(hào)傳遞配體 是 IFN a ,且所述取代選自 R144A iSE〇 ID NO:30i. FU44S ISEQ Η) NO:40)· RI44TiSEQl【)N(+):4l>.Rl44Y(SEQ!DXO:41.>,R】44〖<SEQIDNO:mRI44L(SriQ ID A1451) (SiiQ ID NO;44). A14511 ISI;Q ID NO;47). A I45Y ISBQ II) ^0:58). A145K CSEQ ID NO:49>. R33A+YNS (SEQ ID NO:65>. R33A <SEQ ID NO: t6> fil R144A+YXS <SE〇 ID NO:68)。
[0033] 在所述信號(hào)傳遞配體是IFNa且細(xì)胞表面相關(guān)抗原是CD38的某些實(shí)施方式中,所 述抗體是選自G003. G005. G024. MOR03077. MORO3079, MORO3080. MORO3100. 38SBI3. 38SBI8. 38SB19. 38SB30,3SSB3J, 38SB39, ΟΚ1?Ο, X355/02, X910/12. X355/07, X913/15, R5D1, R5E8, R10A2中的任一種或其抗原結(jié)合部分,或與ROT1、R5E8或R10A2具有大于95%,大于 96%,大于97%,大于98%或大于99%氨基酸序列同一性的抗體。
[0034] 在細(xì)胞表面相關(guān)抗原是CD38的某些實(shí)施方式中,所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配 體是IFN a,且所述治療是用于個(gè)體中選自多發(fā)性骨髓瘤、白血病或淋巴瘤的癌癥。在具體 實(shí)施方式中,還使用類視黃醇,例如全反式視黃酸治療所述個(gè)體。在細(xì)胞表面相關(guān)抗原是 CD38的某些實(shí)施方式中,所述腫瘤或癌癥可選自多發(fā)性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、慢性骨 髓性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病或急性骨髓性白血病。
[0035] 在所述配體連接到抗體的實(shí)施方式中,所述抗體可以是IgG4。在【具體實(shí)施方式】中, IgG4包含S228P氨基酸取代。
[0036] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是IFNa的某些實(shí)施方式中,抗體或其抗原結(jié) 合部分可結(jié)合至病毒感染細(xì)胞上的細(xì)胞表面相關(guān)抗原。在這些實(shí)施方式中,細(xì)胞表面相關(guān) 抗原可選自病毒編碼的蛋白、磷脂酰絲氨酸或磷脂酰絲氨酸結(jié)合蛋白。在細(xì)胞表面相關(guān)抗 原是磷脂酰絲氨酸或磷脂酰絲氨酸結(jié)合蛋白的實(shí)施方式中,所述構(gòu)建體可用于治療丙型肝 炎。
[0037] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是IFNa或IFN0的某些實(shí)施方式中,細(xì)胞表 面相關(guān)抗原選自⑶20、⑶38、⑶138或CS1。在配體是IFN a或IFN0的某些實(shí)施方式中, 所述腫瘤或癌癥可選自多發(fā)性骨髓瘤、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、慢性骨髓性白血病或毛細(xì)胞性 白血病。
[0038] 在【具體實(shí)施方式】中,所述構(gòu)建體是G005-HC-L0_IFNa (A14OT) IgG4。
[0039] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是IFNi3的某些實(shí)施方式中,所述細(xì)胞表面相 關(guān)抗原是T細(xì)胞、骨髓細(xì)胞或抗原呈遞細(xì)胞的細(xì)胞表面相關(guān)蛋白。
[0040] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是IFNi3的某些實(shí)施方式中,所述細(xì)胞表面相 關(guān)抗原可選自(:丨)玉 CD4·(:丨+成OM4 CD71, m,A-OR. PD-I. 〖COS. CD3i α)1丨5, CDI Ic:· CD丨4, C:D52和PD-1。在這些實(shí)施方式中,所述構(gòu)建體可 用于治療以過度炎癥表征的疾病,例如自身免疫性疾病。
[0041] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是IFN0的某些實(shí)施方式中,所述至少一個(gè)氨 基酸取代或缺失選自 R35A. R35T. E42K, M62I, CH8S, AMI Y. A142T, E〗《K, R I52H。在這 些實(shí)施方式中,IFN0也可具有C17S或C17A取代。
[0042] 在某些實(shí)施方式中,所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是IFNY。在這些實(shí)施方式 中,所述細(xì)胞表面相關(guān)抗原可以是腫瘤相關(guān)抗原。在其他實(shí)施方式中,所述細(xì)胞表面相關(guān)抗 原可選自⑶14、?3?1、?4?、1^6?1^和1^6?1^。在這些實(shí)施方式中,所述構(gòu)建體可用于治 療以過度纖維化表征的疾病。
[0043] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是IFNY的某些實(shí)施方式中,所述至少一個(gè)氨 基酸取代或缺失選自殘基A23和D24的缺失,S20I取代、A23V取代、D21K取代和D24A取 代。
[0044] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是IL-4的某些實(shí)施方式中,所述細(xì)胞表面 相關(guān)抗原選自 cna CD4, CD24, CD38, rD44 CB69XD7 丨 XD%. PD- UCOSXD52 和 PD-1。
[0045] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是IL-6的某些實(shí)施方式中,所述細(xì)胞表面 相關(guān)抗原選自 CD3XD4. CD24, CD38, C.D44, CD69· CD71, CD%· Η)-1 · ICOS, CD52 和 PD-1。
[0046] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是HGF的某些實(shí)施方式中,所述細(xì)胞表面相關(guān) 抗原選自 ASGR1、ASGR2、FSP1、RTI140/Ti_a、HTI56 和 VEGF 受體。
[0047] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是TGFi3的某些實(shí)施方式中,所述細(xì)胞表面相 g C'D3, CD4. CDS. CD24, CD3S. CD44. CD69. CD7 i. CD83. €D86, CD96, HLA-DR. PD-1. ICOiLCDH Ct)! 15XD I! c, CD 14XD52 和 PD-1。
[0048] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是紅細(xì)胞生成素的某些實(shí)施方式中,所 述細(xì)胞表面相關(guān)抗原選自⑶241(RCHE基因的產(chǎn)物)、⑶117 (c-kit)、⑶71 (轉(zhuǎn)鐵蛋 白受體)、CD36 (血小板反應(yīng)蛋白受體)、〇).從CD45RΑ, ΓΟI B, CD I邡, CD35· C7TO36. CD237. CTC3S· CD2.W和 CD240。
[0049] 在所述多肽構(gòu)建體的信號(hào)傳遞配體是白細(xì)胞介素-10的某些實(shí)施方式中,所述細(xì) 胞表面相關(guān)抗原選自 CDllc、CD33 或 CD115、CD14、FSPl、FAP*PDGFR(a*e)。
[0050] 在第六方面,提供了具有可變區(qū)域的抗-CD38抗體,命名為 X9I0/12, X9LVI5· X355/02· X355/〇7· R5DI, R5ES或 R10A2,具有如下所述的序列:
【權(quán)利要求】
1. 多肽構(gòu)建體,其包含連接至結(jié)合細(xì)胞表面相關(guān)抗原的抗體或其抗原結(jié)合部分的肽或 多肽信號(hào)傳遞配體,其中所述配體包含降低其對(duì)缺少所述抗原表達(dá)的細(xì)胞的效力的至少一 個(gè)氨基酸取代或缺失。
2. 權(quán)利要求1所述的多肽構(gòu)建體,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體經(jīng)肽鍵連接至所述 抗體或其抗原結(jié)合部分。
3. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的多肽構(gòu)建體,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體直接 或經(jīng)長(zhǎng)度為1-20個(gè)氨基酸的接頭連接至所述抗體或其抗原結(jié)合部分。
4. 權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體連接至 所述抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈或重鏈恒定區(qū)的C-末端。
5. 權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體選自 IFN、IL-4 和 IL-6。
6. 權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體選自 IFN a、IFN β 和 IFN γ。
7. 權(quán)利要求6所述的多肽構(gòu)建體,其中所述IFNa的氨基酸序列選自SEQ ID NOs 1-3、 80-90、434和435,并且其中所述IFN a包含降低其對(duì)缺少所述抗原表達(dá)的細(xì)胞的效力的至 少一個(gè)氨基酸取代或缺失。
8. 權(quán)利要求7所述的多肽構(gòu)建體,其中所述IFNa的氨基酸序列包含選自以下的至少 一個(gè)氨基酸取代:RH4A 〖SEQ !D NO:30h RI44S <SEQ ID NO:40}, RI44T (SIi〇 ID N〇;4!), R144Y ($E〇 ID N〇:43), R144! i$fi〇 ID m-J5k R144L (SEQ ID NO:37). A 145D iSEQ ID NO;44). A145H (SEQ ID KO;4?l A145Y {SEQ ID Ν?:58κ A145K iSEQ ID NO:49l R33A+YNS ISEQ ID ΝΟ:6?33Α ?[沿 ID NO:l6l 顧 R !44A+YNS (SEQ ID N(M8)。
9. 權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體,其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分結(jié)合其 中其細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域具有小于240kD分子量的抗原。
10. 權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體,其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分結(jié)合 這樣的抗原,其中所述抗原以大于每個(gè)細(xì)胞12, 600個(gè)拷貝或大于每個(gè)細(xì)胞15, 000個(gè)拷貝 的密度存在于所述細(xì)胞上。
11. 權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體,其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分以從 50 nM、從25 nM、從10 nM、或從5 nM至ΙρΜ的親和力結(jié)合所述細(xì)胞表面相關(guān)抗原。
12. 權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體,其中所述細(xì)胞表面相關(guān)抗原選自 CD38、HM1. 24、CD56、CS1、CD20、CD74、IL-6R、Blys (BAFF)、BCMA、HLA-SR、激肽原、β 2 微球 蛋白、卩0卩1?3、1〇八厘-1、蛋白裂解酶、0)5236卩1?、6厘2、〇4-整聯(lián)蛋白、正6-11?、1(11?、0)3、0)4、 CD8、CD24、CD44、CD69、CD71、CD83、CD86、CD96、HLA-DR、PD-1、ICOS、CD33、CD115、CDllc、 CD14、CD52、CD14、FSPl、FAP、PDGFRa、PDGFRP、ASGR1、ASGR2、FSP1、RTI140/Ti_a、HTI56、 VEGF受體、RCHE基因的產(chǎn)物CD241、CD117 (c-kit)、CD71 (轉(zhuǎn)鐵蛋白受體)、CD36 (血小板 反應(yīng)蛋白受體)、CD34、CD45R0、CD45RA、CD115、CD168、CD235、CD236、CD237、CD238、CD239 和 CD240。
13. 權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體,其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分是抗 體或Fab片段。
14. 權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體,其中所述構(gòu)建體具有大于50的抗 原-特異性指數(shù)。
15. 權(quán)利要求14所述的多肽構(gòu)建體,其中所述構(gòu)建體具有大于100的抗原-特異性指 數(shù)。
16. 權(quán)利要求15所述的多肽構(gòu)建體,其中所述構(gòu)建體具有大于1000的抗原-特異性指 數(shù)。
17. 權(quán)利要求6所述的多肽構(gòu)建體,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體是IFNi3且所述氨 基酸取代是R35A。
18. 組合物,其包含權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體和藥學(xué)上可接受的載體 或稀釋劑。
19. 治療個(gè)體中的腫瘤的方法,其包括向所述個(gè)體施用權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的 多肽構(gòu)建體或權(quán)利要求17所述的組合物。
20. 權(quán)利要求18的治療個(gè)體中的腫瘤的方法,其中所述腫瘤選自多發(fā)性骨髓瘤或非霍 奇金淋巴瘤。
21. 權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體在癌癥治療中的用途。
22. 權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的多肽構(gòu)建體在癌癥治療中的用途,其中所述癌癥是 多發(fā)性骨髓瘤或非霍奇金淋巴瘤。
23. 降低肽或多肽信號(hào)傳遞配體對(duì)具有配體受體的抗原陰性細(xì)胞的效力,同時(shí)保持所 述配體對(duì)具有配體受體的抗原陽性細(xì)胞的效力至與所述抗原陰性細(xì)胞相比時(shí)更大程度的 方法,所述方法包括修飾所述配體,以使所述配體包含降低其對(duì)所述抗原陰性細(xì)胞的效力 的至少一個(gè)氨基酸取代或缺失,并將所述經(jīng)修飾的配體連接至抗體或其抗原結(jié)合部分,其 中所述抗體或其抗原結(jié)合部分對(duì)在所述抗原陽性細(xì)胞上但不在所述抗原陰性細(xì)胞上的細(xì) 胞表面相關(guān)抗原是特異性的。
24. 權(quán)利要求23所述的方法,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體經(jīng)肽鍵連接至所述抗體 或其抗原結(jié)合部分。
25. 權(quán)利要求23或權(quán)利要求24所述的方法,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體直接或經(jīng) 長(zhǎng)度為1-20個(gè)氨基酸的接頭連接至所述抗體或其抗原結(jié)合部分。
26. 權(quán)利要求23-25中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體選自IFN、 IL_4 和 IL_6。
27. 權(quán)利要求23-26中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述肽或多肽信號(hào)傳遞配體選自 IFN a、IFN β 和 IFN γ。
28. 權(quán)利要求27所述的方法,其中在修飾前所述IFNa的氨基酸序列選自SEQ ID NOs 1-3、80-90、434 和 435。
29. 權(quán)利要求28所述的方法,其中所述修飾包含選自以下的至少一個(gè)氨基酸取代: R144A (SEQ ID NO:3C)l. R144S <SE〇 ID NO:4〇), R144T (SEQ ID NO;4I >, R144Y (SEQ ID NOi43). RI441 (SEQ ID NO:35). R144L <SEQ IE) NO;3?i. AI45D ISEQ ID N〇:44), A145H (SE〇 ID MO:47>, AI45Y cSE〇 ID NO:58), A145K iSEQ ID N0;4{)?. R33A+YNS (SI5〇 ID ^0:65). R.1.1A (SEQ ID Nr0:l6} $1 RI44A+YNS (SEQ ID NO:68> 0
30. 權(quán)利要求23-29中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分以從50 nM、從25 nM、從10 nM、或從5 nM至ΙρΜ的親和力結(jié)合所述細(xì)胞表面相關(guān)抗原。
31. 權(quán)利要求23-30中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述細(xì)胞表面相關(guān)抗原選自CD38、 HM1. 24、CD56、CS1、CD20、CD74、IL-6R、Blys (BAFF)、BCMA、HLA-SR、激肽原、β 2 微球蛋白、 FGFR3、ICAM-1、蛋白裂解酶、CD52、EGFR、GM2、α 4-整聯(lián)蛋白、IFG-1R、KIR、CD3、CD4、CD8、 CD24、CD44、CD69、CD71、CD83、CD86、CD96、HLA-DR、PD-1、ICOS、CD33、CD115、CDllc、CD14、 CD52、CD14、FSPl、FAP、PDGFRa、PDGFRP、ASGR1、ASGR2、FSP1、RTI140/Ti_a、HTI56、VEGF 受體、RCHE基因的產(chǎn)物⑶241、⑶117 (c-kit)、⑶71 (轉(zhuǎn)鐵蛋白受體)、⑶36 (血小板反 應(yīng)蛋白受體)、CD34、CD45R0、CD45RA、CD115、CD168、CD235、CD236、CD237、CD238、CD239 和 CD240。
32. 權(quán)利要求23-31中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分是抗體或 Fab片段。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK104203982SQ201280064672
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2012年10月29日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月28日
【發(fā)明者】D.S.小威爾遜, S.L.波古伊, G.E.米科塞爾, T.陶拉, W.科維, A.G.多伊勒, A.克拉克, M.波拉德, S.特蘭, J.T-C.林 申請(qǐng)人:特瓦制藥澳大利亞私人有限公司