IgE肽疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供能夠用于預(yù)防或治療人或犬等除小鼠以外的動(dòng)物的變態(tài)反應(yīng)性疾病的IgE肽疫苗。肽，該肽包含下述的氨基酸序列(i)或(ii)：(i)SEQIDNO:28所表示的氨基酸序列、(ii)包含SEQIDNO:28所表示的氨基酸序列中的連續(xù)的至少10個(gè)氨基酸的氨基酸序列，對動(dòng)物給予該肽時(shí)，該肽與該動(dòng)物的IgE抗體的CH3區(qū)特異性結(jié)合，能夠阻止上述IgE抗體與IgE受體結(jié)合。
【專利說明】IgE化疫苗

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及能夠用于預(yù)防或治療變態(tài)反應(yīng)性疾病的小鼠 I班的部分膚和含有該 部分膚的I班膚疫苗。

【背景技術(shù)】
[0002] 膚疫苗療法是指，通過將腫瘤等的抗原或其表位部分和佐劑一同給藥，誘導(dǎo)針對 上述腫瘤等的抗原的細(xì)胞性免疫和體液性免疫該兩種免疫，其臨床應(yīng)用正在推進(jìn)。
[0003] I班參與變態(tài)反應(yīng)、特別是I型變態(tài)反應(yīng)。近年來，在作為寵物來飼養(yǎng)的犬中，和人 一樣變態(tài)反應(yīng)性疾病在增加。
[0004] 作為I型變態(tài)反應(yīng)的治療方法，考慮使用與血清中的I班結(jié)合、并抑制I班與服大 細(xì)胞的結(jié)合的化合物，作為該樣的化合物，暗示能夠使用與I班的化區(qū)結(jié)合的抗體（參照 專利文獻(xiàn)1)。
[0005] 為了治療變態(tài)反應(yīng)而采用上述的膚疫苗療法，并使用由I班的C冊區(qū)誘導(dǎo)的抗原 性膚作為膚疫苗，已有關(guān)于該方面的報(bào)道（參照專利文獻(xiàn)2)。但是，為了治療犬的變態(tài)反應(yīng) 而誘導(dǎo)抗犬I班的抗體，為此使用同種來源的I班的抗原性膚作為疫苗。
[0006] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)1 ;日本特開2006-151880號公報(bào)； 專利文獻(xiàn)2 ;日本特開2005-102701號公報(bào)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 發(fā)明所要解決的課題 本發(fā)明W提供能夠用于預(yù)防或治療人或犬等除小鼠 W外的動(dòng)物的變態(tài)反應(yīng)性疾病的 I班膚疫苗為目的。
[0008] 用于解決課題的手段 本發(fā)明人等對犬的變態(tài)反應(yīng)的治療方法進(jìn)行了研究，最初制作了大鼠抗犬I班單克隆 抗體，發(fā)現(xiàn)存在識(shí)別犬I班、小鼠 I班和貓I班的單克隆抗體。該暗示識(shí)別例如小鼠 I班的 特定表位的抗體也能夠識(shí)別其他動(dòng)物種的I班。根據(jù)該認(rèn)知，本發(fā)明人考慮能否將小鼠 I班 的部分膚用于誘導(dǎo)抗其他動(dòng)物種的I班的抗體、即能否將其用作對其他動(dòng)物種進(jìn)行給藥的 變態(tài)反應(yīng)治療用膚疫苗，進(jìn)行了深入研究。
[0009] 其結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了對犬給予與犬的序列同源性未必高的部分膚時(shí)，在犬體內(nèi)誘導(dǎo)出 抗該部分膚的抗體，該抗體不僅識(shí)別膚還識(shí)別I班，而且與犬自身的I班的化區(qū)結(jié)合，阻止 了 I班與服大細(xì)胞的結(jié)合。
[0010] 其結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了小鼠 I班的部分膚能夠用作用于治療I班介導(dǎo)性的變態(tài)反應(yīng)的疫 苗，從而完成了本發(fā)明。
[0011] 不僅是對于犬、對于包括人在內(nèi)的除小鼠或與小鼠類緣的曬齒類W外的動(dòng)物，該 膚也可被用作膚疫苗。
[0012] 即使不使用佐劑，只將該膚進(jìn)行皮下給藥，即可作為疫苗來使用。
[0013] 目P，本發(fā)明如下。
[0014] [1]膚，該膚包含下述的氨基酸序列： (i) SEQ ID NO: 28所表示的氨基酸序列、或 (ii) 包含SEQ ID NO: 28所表示的氨基酸序列中的連續(xù)的至少10個(gè)氨基酸的氨基酸 序列， 對動(dòng)物給予該膚時(shí)，其與該動(dòng)物的I班抗體的C冊區(qū)特異性結(jié)合，能夠阻止上述I班抗 體與I班受體結(jié)合。
[0015] [2] [1]所述的膚，該膚包含下述的氨基酸序列： (i) SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列、或 (ii) 包含SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列中的連續(xù)的至少10個(gè)氨基酸的氨基酸 序列， 對動(dòng)物給予該膚時(shí)，其與該動(dòng)物的I班抗體的C冊區(qū)特異性結(jié)合，能夠阻止上述I班抗 體與I班受體結(jié)合。
[0016] [3] [1]所述的膚，該膚包含選自SEQ ID NO: 22、23、24、25和26的氨基酸序列。
[0017] [4] [2]所述的膚，該膚包含選自SEQ ID NO: 29?92的氨基酸序列。
[0018] [5] [4]所述的膚，該膚包含選自 SEQ ID NO: 29、31、：34、38、43、49、56、64、72、82、 30、33、37、42、48、55、63、71、81 和 92 的氨基酸序列。
[001引 [6][句所述的化該膚包含SEQ ID NO: 45所表示的氨基酸序列。
[0020] [7]化該膚包含山?[6]中任一項(xiàng)所述的膚的氨基酸序列中有1?3個(gè)氨基酸 被缺失、取代、添加而獲得的氨基酸序列，對動(dòng)物給予該膚時(shí)，其與該動(dòng)物的I班抗體的CH3 區(qū)特異性結(jié)合，能夠阻止上述I班抗體與I班受體結(jié)合。
[002。 閒I班介導(dǎo)性疾病用疫苗或治療藥，其中包含山?[7]中任一項(xiàng)所述的膚。 [002引[9]閒所述的疫苗或治療藥，其中，I班介導(dǎo)性疾病選自特應(yīng)性皮炎、花粉病、食 物過敏、過敏性鼻炎、支氣管哮喘、過敏性結(jié)膜炎、峨過敏性疾病、専麻疹、過敏性休克和肺 嗜酸性粒細(xì)胞浸潤（pulmonary infiltration with eosinophilia, PIE〇 綜合征。
[0023] [10]預(yù)防或治療I班介導(dǎo)性疾病的方法，該方法包括；對非人動(dòng)物給予包含 [1]?[7]中任一項(xiàng)所述的膚的I班介導(dǎo)性疾病用疫苗或治療藥。
[0024] [山[10]所述的預(yù)防或治療I班介導(dǎo)性疾病的方法，其中，I班介導(dǎo)性疾病選自 特應(yīng)性皮炎、花粉病、食物過敏、過敏性鼻炎、支氣管哮喘、過敏性結(jié)膜炎、峨過敏性疾病、専 麻疹、過敏性休克和PIE (肺嗜酸性粒細(xì)胞浸潤）綜合征。
[00巧]本說明書包含作為本申請的優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)的日本國專利申請2012-136944號的說 明書和/或附圖中記載的內(nèi)容。
[002引發(fā)明效果 本發(fā)明的膚在犬、人等其他種哺乳類中可W誘導(dǎo)抗I班抗體（IgG)的形成，該抗I班抗 體與已誘導(dǎo)抗體的動(dòng)物種的I班結(jié)合，可W阻止I班與服大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞的I班受 體結(jié)合。因此，本發(fā)明的小鼠 I班的CH3區(qū)的部分膚可W用作引起抗I班的IgG抗體的、用 于預(yù)防或治療I班介導(dǎo)性的變態(tài)反應(yīng)性疾病等疾病的I班膚疫苗。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0027] 圖1-1是顯示犬I班C冊區(qū)合成膚地圖的圖。
[002引 圖1-2是顯示犬I班C冊區(qū)和小鼠 IgE C冊區(qū)氨基酸序列的比對的圖。
[0029] 圖2是顯示表位分析結(jié)果的圖。
[0030] 圖3-1是顯示血清中膚特異性IgG濃度的測定結(jié)果的圖。
[0031] 圖3-2是顯示血清中I班特異性IgG濃度的測定結(jié)果的圖。
[0032] 圖4是顯示血清中Der f 2特異性I巧濃度的測定結(jié)果的圖。
[0033] 圖5是顯示血清中I班濃度測定中的膚非給藥組和給藥組的化ISA反應(yīng)系統(tǒng)的反 應(yīng)方式的圖。
[0034] 圖6-1是顯示是否存在固相化抗原與檢測抗原的非特異反應(yīng)的圖。
[00巧]圖6-2是顯示抗原（I班膚和人I班）與抗犬IgG抗體的反應(yīng)性分析結(jié)果的圖。
[0036] 圖6-3是顯示抗原（I班膚、人I班和犬I班）與抗犬IgGl抗體的反應(yīng)性分析結(jié)果 的圖。
[0037] 圖6-4是顯示抗原（I班膚和人I班）與抗犬IgG2抗體的反應(yīng)性分析結(jié)果的圖。
[0038] 圖6-5是顯示給予膚后用Der f 2和Alum佐劑一同進(jìn)行免疫（人工致敏）后的 Der f 2特異性I班的反應(yīng)性分析結(jié)果的圖。
[0039] 圖6-6是顯示用Der f 2和Alum佐劑一同進(jìn)行免疫（人工致敏）后犬血清中的 人I班特異性犬IgG、IgGl和IgG2的值的圖。
[0040] 圖7是顯示Prausnitz-Kustner (P-K)試驗(yàn)中的血清的給藥方法的圖。圖中，帶 圓圈的數(shù)字的1?4分別顯示血清1?血清4。
[0041] 圖8是顯示Prausnitz-Kustner (P-K)試驗(yàn)中的抗原液W及陽性對照和陰性對照 的給藥方法的圖。圖中，帶圓圈的數(shù)字的1?4分別顯示血清1?血清4。
[0042] 圖9是顯示Prausnitz-Kustner (P-K)試驗(yàn)的結(jié)果之一例的圖。圖中，帶圓圈的 數(shù)字的1?4分別顯示血清1?血清4。
[0043] 圖10是顯示在Prausnitz-Kustner (P-K)試驗(yàn)中，在具有相同濃度的Der f 2特 異性I班的血清1和血清2中產(chǎn)生分?jǐn)?shù)差的理由的圖。
[0044] 圖11-1是顯示用膚進(jìn)行了免疫（人工致敏）的兔血清與犬I班的反應(yīng)性的圖。
[0045] 圖11-2是顯示用膚進(jìn)行了免疫（人工致敏）的兔血清與犬IgG的反應(yīng)性的圖。
[0046] 圖11-3是顯示用膚進(jìn)行了免疫（人工致敏）的兔血清與小鼠 I班的反應(yīng)性的圖。
[0047] 圖11-4是顯示用膚進(jìn)行了免疫（人工致敏）的兔血清與人I班的反應(yīng)性的圖。
[0048] 圖11-5是顯示用膚進(jìn)行了免疫（人工致敏）的兔血清與貓重組C冊的反應(yīng)性的 圖。
[0049] 圖12-1是顯示20種膚對大鼠的疫苗效果的圖。
[0050] 圖12-2是顯示20種膚中的膚No. 1?4對大鼠的疫苗效果的圖（將血清稀釋100 倍后測定）。
[0051] 圖12-3是顯示20種膚中的膚No. 5?8對大鼠的疫苗效果的圖（將血清稀釋100 倍后測定）。
[0052] 圖12-4是顯示20種膚中的膚No. 9?12對大鼠的疫苗效果的圖（將血清稀釋 100倍后測定）。
[0053] 圖12-5是顯示20種膚中的膚No. 13?16對大鼠的疫苗效果的圖（將血清稀釋 100倍后測定）。
[0054] 圖12-6是顯示20種膚中的膚No. 17?20對大鼠的疫苗效果的圖（將血清稀釋 100倍后測定）。
[00巧]圖13是顯示使用大鼠的靜脈給藥試驗(yàn)方案的圖。
[0056] 圖14是顯示對大鼠靜脈給予膚時(shí)的抗I班抗體效價(jià)上升的圖。
[0057] 圖15是顯示使用大鼠的皮下給藥試驗(yàn)方案的圖。
[0058] 圖16是顯示預(yù)防實(shí)驗(yàn)方案的圖。
[0059] 圖17是顯示對大鼠皮下給予膚時(shí)的抗I班抗體效價(jià)的上升變化和最終的抗體效 價(jià)的圖。
[0060] 圖18是顯示對大鼠皮下給予膚時(shí)每一個(gè)體的抗I班抗體效價(jià)的上升的圖。
[0061] 圖19是顯示對大鼠皮下給予膚時(shí)Der f 2特異性I班測定結(jié)果的圖。
[0062] 圖20是顯示對大鼠皮下給予膚時(shí)每一個(gè)體的Der f 2特異性I班測定結(jié)果的圖。
[0063] 圖21是顯示使用犬的膚給藥試驗(yàn)（其一）方案的圖。
[0064] 圖22是顯示對犬皮下給予膚時(shí)抗I班抗體效價(jià)的上升的圖。
[0065] 圖23是顯示使用犬的膚給藥試驗(yàn)（其二）方案的圖。
[0066] 圖24是顯示對犬皮下給予膚時(shí)抗I班抗體效價(jià)的上升的圖。
[0067] 圖25是顯示使用粉塵峨（3十b 3。歹二）人工致敏犬的治療實(shí)驗(yàn)方案的圖。
[0068] 圖26是顯示對粉塵峨人工致敏犬皮下給予膚時(shí)抗I班抗體效價(jià)的上升的圖。
[0069] 圖27是顯示對粉塵峨人工致敏犬皮下給予膚時(shí)粉塵峨（3十b 3。b歹二）抗 原特異性I班的測定結(jié)果的圖。

【具體實(shí)施方式】
[0070] W下，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0071] 本發(fā)明的變態(tài)反應(yīng)性疾病的治療用膚疫苗中使用的膚是小鼠 I班的部分膚。具體 而言，是包含小鼠 I班膚的C冊(C e 3)區(qū)的NVTWN犯邸TSVSASQWYTKHHNNATTSI TSILPV (SEQ ID NO: 28)所表示的氨基酸序列的膚、或該膚的部分膚，所述部分膚包含至少6個(gè)、7個(gè)、8 個(gè)或9個(gè)、優(yōu)選至少10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)、18個(gè)、19個(gè)、20個(gè)、21 個(gè)、22個(gè)、23個(gè)或24個(gè)、進(jìn)一步優(yōu)選至少25個(gè)連續(xù)的氨基酸序列。作為該樣的部分膚，例如 可W列舉；包含SEQ ID NO: 22 (NVTWN犯邸TSVSA巧、SEQ ID NO: 23 (犯邸TSVSASQWYTK)、 沈Q ID NO: 24 (SVSASQWYTKHHNNA)、沈Q ID NO: 25 (QWYTKHHNNATTSIT)、SEQ ID NO: 26 (HHNNATTS口SILPV)和SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列的部分膚。其中，優(yōu)選包含 犯KKTSVSASQWYTKHHNNATTSIT (SEQ ID NO: 27)所表示的氨基酸序列的膚、或該膚的部分 膚，所述部分膚包含至少6個(gè)、優(yōu)選至少10個(gè)連續(xù)的氨基酸序列，作為該樣的部分膚，可W 列舉包含SEQ ID NO: 23、24和25所表示的氨基酸序列的部分膚。而且，還可W適當(dāng)?shù)厥褂?包含犯KKTSVSASQWYTKHHNNATTSIT (SEQ ID NO: 27)所表示的氨基酸序列的膚的部分膚， 該部分膚包含15?24個(gè)連續(xù)的氨基酸序列。作為身為包含犯KKTSVSASQWYTKHHNNATTSIT (SEQ ID NO: 27)所表示的氨基酸序列的膚的部分膚、且包含15?24個(gè)連續(xù)的氨基酸序列 的部分膚，可w列舉包含下述的氨基酸序列的膚。

【權(quán)利要求】
1. 肽，該肽包含下述的氨基酸序列： (i) SEQ ID NO: 28所表示的氨基酸序列、或 (ii) 包含SEQ ID NO: 28所表示的氨基酸序列中的連續(xù)的至少10個(gè)氨基酸的氨基酸 序列， 對動(dòng)物給予該肽時(shí)，該肽與該動(dòng)物的IgE抗體的CH3區(qū)特異性結(jié)合，能夠阻止上述IgE 抗體與IgE受體結(jié)合。
2. 權(quán)利要求1所述的肽，該肽包含下述的氨基酸序列： (i) SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列、或 (ii) 包含SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列中的連續(xù)的至少10個(gè)氨基酸的氨基酸 序列， 對動(dòng)物給予該肽時(shí)，該肽與該動(dòng)物的IgE抗體的CH3區(qū)特異性結(jié)合，能夠阻止上述IgE 抗體與IgE受體結(jié)合。
3. 權(quán)利要求1所述的肽，該肽包含選自SEQ ID NO: 22、23、24、25和26的氨基酸序列。
4. 權(quán)利要求2所述的肽，該肽包含選自SEQ ID NO: 29?92的氨基酸序列。
5. 權(quán)利要求4所述的肽，該肽包含選自SEQ ID NO: 29、31、34、38、43、49、56、64、72、 82、30、33、37、42、48、55、63、71、81 和 92 的氨基酸序列。
6. 權(quán)利要求4所述的肽，該肽包含SEQ ID NO: 45所表示的氨基酸序列。
7. 肽，該肽包含權(quán)利要求1?6中任一項(xiàng)所述的肽的氨基酸序列中有1?3個(gè)氨基酸 被缺失、取代、添加而獲得的氨基酸序列，對動(dòng)物給予該肽時(shí)，該肽與該動(dòng)物的IgE抗體的 CH3區(qū)特異性結(jié)合，能夠阻止上述IgE抗體與IgE受體結(jié)合。 8. IgE介導(dǎo)性疾病用疫苗或治療藥，其中包含權(quán)利要求1?7中任一項(xiàng)所述的肽。
9. 權(quán)利要求8所述的疫苗或治療藥，其中，IgE介導(dǎo)性疾病選自特應(yīng)性皮炎、花粉病、食 物過敏、過敏性鼻炎、支氣管哮喘、過敏性結(jié)膜炎、螨過敏性疾病、蕁麻疹、過敏性休克和肺 嗜酸性粒細(xì)胞浸潤綜合征。
10. 預(yù)防或治療IgE介導(dǎo)性疾病的方法，該方法包括：對非人動(dòng)物給予包含權(quán)利要求 1?7中任一項(xiàng)所述的肽的IgE介導(dǎo)性疾病用疫苗或治療藥。
11. 權(quán)利要求10所述的預(yù)防或治療IgE介導(dǎo)性疾病的方法，其中，IgE介導(dǎo)性疾病選自 特應(yīng)性皮炎、花粉病、食物過敏、過敏性鼻炎、支氣管哮喘、過敏性結(jié)膜炎、螨過敏性疾病、蕁 麻疹、過敏性休克和肺嗜酸性粒細(xì)胞浸潤綜合征。
【文檔編號】A61P11/02GK104395337SQ201380032206
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2013年6月18日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月18日
【發(fā)明者】津久井利廣 申請人:日本全藥工業(yè)株式會(huì)社