專利名稱：多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種已上市藥物的新的藥物作用，具體是多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途。
背景技術(shù)：
肥胖癥作為一種常見的慢性內(nèi)分泌代謝疾病，發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，已成為全球性的公共健康難題。肥胖的病因十分復(fù)雜，涉及到遺傳、環(huán)境、心理、行為等多種因素的相互作用。肥胖的發(fā)生是由于機(jī)體的能量攝入長期高于機(jī)體的能量消耗，多余的能量以脂肪形式貯存從而導(dǎo)致肥胖。肥胖癥通常采用綜合措施治療，包括飲食療法、運(yùn)動療法、行為療法、外科療法和藥物療法。藥物療法是前幾種療法效果不佳或復(fù)發(fā)率高時的常用選擇。減肥藥的種類很多，多數(shù)還處于臨床或臨床前研究階段。其中主要有四類:①作用于中樞的擬兒茶酚胺和擬5-輕色胺的食欲抑制劑。如西布曲明(Sibutramine);②增加能量消耗的藥物。如中樞興奮藥、β 3-腎上腺素受體激動劑和激素類藥物；③作用于外周胃腸脂酶和胰脂酶的抑制齊U，如賽尼可(Orlistat) 其他治療肥胖的藥物，包括胰島素增敏劑和瘦素(Ieptin)。這些藥物均因?yàn)椴煌潭鹊母弊饔枚y以在臨床上推廣使用，因此，尋找一種安全有效的減肥藥物是目前臨床治療所急需的。胰島素抵抗(Insulin Resistance, IR)是指胰島素作用的祀器官對胰島素作用的敏感性下降，即正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)。目前認(rèn)為，IR不僅是II型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，更是貫穿多種代謝相關(guān)疾病的主線，是這些疾病的共同病理生理基礎(chǔ)。大量流行病學(xué)資料顯示，胰島素抵抗在糖尿病及心血管疾病發(fā)病之前就可存在，常常與肥胖、高血壓、高脂血癥相伴隨。而肥胖是引起胰島素抵抗最常見的原因，換句話說肥胖癥者幾乎都存在胰島 素抵抗。目前將胰島素抵抗、中心性肥胖、糖耐量降低或糖尿病、高血壓、血脂代謝紊亂等多種疾病的組合，統(tǒng)稱為“代謝綜合征”或“胰島素抵抗綜合征”，并且認(rèn)為胰島素抵抗是促使糖尿病、高血壓、高血脂等疾病發(fā)生發(fā)展的最重要和最根本原因。而胰島素抵抗與葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(GLUT4)蛋白功能有關(guān)。GLUT4是一種膜蛋白，分子量約45-55ku，其基本結(jié)構(gòu)由12個跨膜片段(M1-M12)組成。GLUT4僅存在于胰島素敏感的骨骼肌、心肌和脂肪細(xì)胞中。在沒有胰島素刺激時主要位于細(xì)胞內(nèi)的儲存囊泡內(nèi)。當(dāng)胰島素與受體結(jié)合后，激發(fā)一系列級聯(lián)效應(yīng)，導(dǎo)致GLUT4向細(xì)胞外膜移動并發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，將葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)后恢復(fù)原來結(jié)構(gòu)。這一過程很容易被逆轉(zhuǎn)，當(dāng)循環(huán)胰島素水平下降時，GLUT4通過吞飲作用從細(xì)胞外清除并回到儲存囊泡中。因此胰島素敏感組織可迅速對循環(huán)胰島素水平做出反應(yīng)，保持血糖平衡。目前能夠降低胰島素抵抗的藥物主要有雙胍類藥物二甲雙胍、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、胰島素增敏劑等，但三者均存在不同程度的不良反應(yīng)。
本發(fā)明是在細(xì)胞分子水平對多烯磷脂酰膽堿進(jìn)行深入研究的結(jié)果，旨在提供一種治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途。發(fā)明人經(jīng)國內(nèi)外專利文獻(xiàn)檢索和公開發(fā)表的期刊論文檢索，未發(fā)現(xiàn)多烯磷脂酰膽堿用于肥胖和胰島素抵抗(代謝綜合征)的治療，也未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明相關(guān)的報道或文獻(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供常用保肝藥物(多烯磷脂酰膽堿)一種新的用途，即多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途，或者說提供了多烯磷脂酰膽堿一種新的治療適應(yīng)癥。肥胖是脂肪細(xì)胞數(shù)量增多和體積增大的結(jié)果。SW872脂肪細(xì)胞是從人的脂肪肉瘤細(xì)胞建立的一種新的脂肪細(xì)胞系，是體外研究糖、脂代謝和相關(guān)藥物作用機(jī)制的重要細(xì)胞模型。因此，選擇了 SW872細(xì)胞作為研究用細(xì)胞模型。本發(fā)明證實(shí)了多烯磷脂酰膽堿能顯著抑制脂肪細(xì)胞的增殖，因而可降低肥胖的程度。多烯磷脂酰膽堿使脂肪細(xì)胞G1/S期的比例顯著增加，S期細(xì)胞的比例顯著降低，顯示藥物多烯磷脂酰膽堿使脂肪細(xì)胞停止在Gl期，從而起到減肥的作用。胰島素抵抗與葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(GLUT4)蛋白功能有關(guān)。多烯磷脂酰膽堿作用于脂肪細(xì)胞，能使其細(xì)胞膜GLUT4蛋白表達(dá)顯著增加，且呈劑量相關(guān)性，證明了多烯磷脂酰膽堿能明顯改善胰島素抵抗，可以用于胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的治療。本發(fā)明首次提供了多烯磷脂酰膽堿用于肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)治療的新用途。本發(fā)明的目的是開發(fā)常用保肝藥物多烯磷脂酰膽堿用于治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的新用途。多烯磷脂酰膽堿具有價格適中、毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)。


圖1:多烯磷脂酰膽堿的分子結(jié)構(gòu)圖。圖2:不同濃度多烯磷脂酰膽堿對脂肪細(xì)胞的抑制率圖3:多烯磷脂酰膽堿對脂肪細(xì)胞生長周期的影響圖4:多烯磷脂酰膽堿對脂肪細(xì)胞細(xì)胞膜Glut4蛋白表達(dá)量的影響
具體實(shí)施方式
:下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，應(yīng)理解，這些實(shí)施方式僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講述的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例1:多烯磷脂酰膽堿顯著抑制脂肪細(xì)胞的增殖。采用MTT法，將脂肪細(xì)胞按1X 104個細(xì)胞/孔接種于96孔，用DMEM+10%胎牛血清培養(yǎng)，隔日換液，待細(xì)胞達(dá)60-70 %匯合，加不同濃度的多烯磷脂酰膽堿，使其終濃度為
0.54mmol/L,2.70mmol/L, 13.50mmol/L,同時設(shè)空白對照組，作用 12，24，48，72 小時(每組12復(fù)孔)后，與5g/L的MTT共孵育4h，吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加150ul 二甲基亞砜，置搖床上震搖20min使沉淀完全溶解，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上570nm處測得各孔的吸光度值。通過對吸光度值的分析統(tǒng)計可得出不同濃度的藥物多烯磷脂酰膽堿在不同時間段對細(xì)胞增殖的抑制率(圖2)，可以看到多烯磷脂酰膽堿顯著抑制脂肪細(xì)胞的增殖，因此可降低肥胖的程度，可用于肥胖的治療。實(shí)施例2:多烯磷脂酰膽堿使脂肪細(xì)胞的生長停止在Gl期，從而抑制其增殖。脂肪細(xì)胞按I X IO4個細(xì)胞/孔接種于6孔板，用DMEM+10%胎牛血清培養(yǎng)培養(yǎng)，隔日換液，待細(xì)胞達(dá)60-70 %匯合，加不同濃度的多烯磷脂酰膽堿，使其終濃度為0.54mmol/L,2.70mmol/L, 13.50mmol/L,同時設(shè)空白對照組，作用24小時后，PBS沖洗，0.25%胰酶消化，4°C IOOOrpm離心5min后收集，細(xì)胞沉淀用70 %乙醇4°C固定24小時，PBS洗2次，重懸于含有50g/L的RNase A和50mg/L碘化吡啶的PBS中，懸液在37°C孵育30min，200 μ m尼龍過濾網(wǎng)濾過后，流式細(xì)胞儀分析。可以看到多烯磷脂酰膽堿使脂肪細(xì)胞G1/S期的比例顯著增加，S期的細(xì)胞比例顯著降低，使脂肪細(xì)胞的生長停止在Gl期，從而抑制其增殖(圖3)。實(shí)施例3:多烯磷脂酰膽堿使脂肪細(xì)胞細(xì)胞膜GLUT4蛋白表達(dá)顯著增加，且呈劑量相關(guān)性。脂肪細(xì)胞按IXlO4個細(xì)胞/孔接種于24孔板(預(yù)先放置無菌小玻片)，用DMEM+10%胎牛血清培養(yǎng)培養(yǎng)，隔日換液，待細(xì)胞達(dá)60-70%匯合，加不同濃度的多烯磷脂酰膽堿，使其終濃度為0.54mmol/L,2.70mmol/L, 13.50mmol/L,同時設(shè)空白對照組，作用24小時；0.25胰酶消化細(xì)胞，PBS洗滌離心，加入GLUT4抗體，室溫避光孵育30分鐘，PBS洗滌細(xì)胞，加入FITC標(biāo)記的GLUT4 二抗，室溫避光孵育30分鐘，洗滌細(xì)胞2次，將細(xì)胞重懸于PBS液中，混勻，上流式細(xì)胞儀測 定，以不加GLUT4 —抗作為陰性對照?？梢钥吹蕉嘞┝字Ｄ憠A能使脂肪細(xì)胞細(xì)胞膜GLUT4蛋白表達(dá)顯著增加，且呈劑量相關(guān)性(圖4)，說明多烯磷脂酰膽堿通過增加脂肪細(xì)胞細(xì)胞膜GLUT4蛋白表達(dá)從而提高基礎(chǔ)狀態(tài)糖轉(zhuǎn)運(yùn)，改善胰島素抵抗，可以用于胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的治療。
權(quán)利要求
1.多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物用途，其特征在于:多烯磷脂酰膽堿具有治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種多烯磷脂酰膽堿治療肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的藥物新用途。采用臨床上常用的保肝藥多烯磷脂酰膽堿作為治療肥胖、胰島素抵抗(代謝綜合征)的新藥物。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，多烯磷脂酰膽堿使脂肪細(xì)胞G1/S期的比例顯著增加，S期細(xì)胞的比例顯著降低，使脂肪細(xì)胞的生長停止在G1期，從而抑制其增殖，因此可降低肥胖的程度，可用于肥胖的治療。同時，多烯磷脂酰膽堿使脂肪細(xì)胞細(xì)胞膜GLUT4表達(dá)增加，從而起到改善胰島素抵抗的作用，可以用于胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的治療。多烯磷脂酰膽堿是一種價格適中、副作用小、安全可靠的藥物，可用于肥胖和胰島素抵抗綜合征(代謝綜合征)的治療。
文檔編號A61P3/04GK103202849SQ20121000800
公開日2013年7月17日 申請日期2012年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月12日
發(fā)明者周巧霞, 張經(jīng)碩 申請人:蘇州九龍醫(yī)院有限公司