用于治療代謝綜合征的新的洋薊(Cynara Scolymus)、咖啡屬(Coffea spp.)和油橄欖 ...的制作方法
【專利說明】用于治療代謝綜合征的新的洋莉（GynaraScolymus)、咖啡 屬（Coffeaspp.)和油橄欖（OleaEuropaea)的提取物
[0001] 發(fā)明簡述
[0002] 本發(fā)明涉及洋薊（CynaraScolymus)、油撤欖（OleaEuropaea)和咖卩非（Coffea spp.)提取物的新組合，其可用于預(yù)防和治療血脂異常、高血糖、炎癥和高血圧，所述參數(shù)是 代謝綜合征和2型糖尿病兩者的特征。所述參數(shù)的正?；餐ㄟ^激素調(diào)整的間接機制而影 響了伴隨所述綜合征的體重増加，從而降低了心血管風險，所述間接機制與酶系統(tǒng)相互作 用的生物化學有關(guān)。
[0003] 關(guān)于脂質(zhì)方面，已證實這些提取物的組合顯著増加具有低于平均的參數(shù)值的患者 的HDL膽固醇值，有利地改變LDL/HDL比，特別是在處于具有不同病因?qū)W的血脂異常的心臟 病發(fā)作的風險中的患者。
[0004] 還已經(jīng)證實了通過油橄欖（OleaEuropaea)提取物中的多酚進行的與促進促炎細 胞因子釋放的脂肪組織的生物化學機制的相互作用。所述分子被認為是通過改變血管內(nèi)皮 來促使動脈粥樣硬化斑塊形成的過程的引發(fā)劑。所述活性是除了減少影響cLDL水平的氧 化過程以外的額外活性。 現(xiàn)有技術(shù)
[0005] 如從文獻中已知的那樣，已知朝鮮薊（artichoke)(洋薊，Cynarascolymus)提取 物具有促膽汁分泌、利膽、降血糖、抗消化不良和溫和的降膽固醇作用；許多臨床試驗中報 道的膽固醇降低是適度的，從未超過10%，由子方案質(zhì)量和所用提取物的組成而在各研究 之間有變化。根據(jù)文獻，活性成分的種類有咖啡?；崴?，其執(zhí)行促膽汁分泌、降血糖和 護肝作用；類黃酮，其執(zhí)行與膽固醇合成有關(guān)的降脂質(zhì)作用；和菜薊苦素，其由于與核因子 NFkB和TNF-a相互作用而執(zhí)行抗炎作用。
[0006] 橄欖油一直被認為是地中海飲食的基本成分，還已知其是預(yù)防代謝綜合征的最天 然形式?？茖W研究的不斷進展已經(jīng)證實：屬于多酚化學種類的一系列微量營養(yǎng)素（存在 于特級初搾油中，甚至超過脂肪酸中的組成）通過抗氧化活性和調(diào)節(jié)多種酶活性而協(xié)同作 用，以保護動脈血管內(nèi)皮。代謝綜合征（其在西方國家歸因于不正確的營養(yǎng)和久坐的生活 方式）經(jīng)常導(dǎo)致血脂異常和肥胖，對于心臟循環(huán)器官具有明顯不利的后果。生長的脂肪組 織被釋放促炎細胞因子和炎癥介質(zhì)如C0X-2和iNOS的巨噬細胞、白細胞所浸潤；另外，循環(huán) 脂肪酸通過TLR-4受體充當脂肪細胞的信使，TLR-4受體通過活化NF-kB或JNK而誘導(dǎo)炎 癥介質(zhì)的表達。該事件級聯(lián)產(chǎn)生了稱為"靜態(tài)炎癥（silentinflammation)"的狀態(tài)，其對 血管內(nèi)皮的侵襲作用引起作為動脈粥樣斑塊侵襲的部位的損傷，動脈粥樣斑塊主要引起構(gòu) 成心血管疾病的基礎(chǔ)的動脈粥樣硬化和血栓形成癥狀。
[0007] 在20世紀90年代早期，已經(jīng)鑒定出植物的次級代謝產(chǎn)物多酚化學種類具有抗氧 化能力，并且已經(jīng)觀察到富含這些化合物的飲食與心血管疾病的低發(fā)病率和組織衰老有 關(guān)。特別地，在油橄欖（Oleaeuropaea)果實的水溶性部分中存在的兩種多酚--毛蕊花 糖苷和羥基酪醇一一不僅在體外試驗中被證實有效，而且在臨床試驗中也給出了令人鼓舞 的結(jié)果。羥基酪醇已經(jīng)獲得來自EFSA的有利觀點作為LDL氧化抑制劑用于適應(yīng)癥，LDL氧 化是引起動脈粥樣斑塊形成的繼發(fā)現(xiàn)象之一。所述兩種多酚以不同的量和比例存在于各種 橄欖載培品種中，使它們或多或少地適于產(chǎn)生富集的提取物。
[0008] 獲得長久以來在傳統(tǒng)和對抗療法醫(yī)學中已知的洋薊（Cynarascolymus)和油橄欖 (Oleaeuropaea)的提取物所需的方法主要存在可重現(xiàn)性和活性成分含量（其結(jié)果是臨床 數(shù)據(jù)游走）的問題和當與目前藥物相比時治療有用性低的問題。
[0009] 由未烤制豆制備的咖卩非屬（Coffeaspp.)、優(yōu)選小果咖卩非（Coffeaarabica)提取 物存在與對洋薊（Cynarascolymus)所報道類似的問題，因為沒有提供藥物可重現(xiàn)性的標 準方法。提取物的可重現(xiàn)性低取決于多種因素，例如植物生物質(zhì)及其干燥條件的選擇。生 物質(zhì)的生產(chǎn)構(gòu)成了該方法的關(guān)鍵階段，因為對于保持活性成分含量而言關(guān)鍵的干燥條件取 決于植物的生長期。
[0010] 大量的藥理學和臨床文獻主張了朝鮮薊、橄欖和咖啡的多種有益健康的活性，但 是未充分地描述所用的提取物；實際上，朝鮮薊存在與ー些活性成分家族降解有關(guān)的組成 問題。
[0011] 橄欖提取物的組成受到使用的載培品種和不同的油副產(chǎn)物的影響，而在咖啡提取 物中是否存在咖啡因涉及與所述化合物的經(jīng)常是相矛盾的活性有關(guān)的問題。
[0012] 發(fā)明描述
[0013] 本發(fā)明涉及組合物，其含有：
[0014] a.菜薊屬（Cynara)提取物，具有30-45%重量的咖啡?；崴岷俊?-16%重 量的類黃酮含量和10-18%重量的菜薊苦素含量；
[0015] b.咖啡屬（Coffeaspp.)提取物，具有40% -80 %重量的咖啡?；崴岷浚?br>[0016]c?油橄欖（Oleaeuropaea)提取物，具有30%-40%的多酚含量，其中毛蕊花糖苷 含量超過5%和羥基酪醇含量超過1. 5%。
[0017] 菜薊屬（Cynarasp.)提取物優(yōu)選具有35±2%的咖啡酰基奎尼酸含量、12±2% 的類黃酮含量和13±2%的菜薊苦素含量。
[0018] 咖啡屬（Coffeaspp.)提取物優(yōu)選具有60 ±2 %重量的咖啡酰基奎尼酸含量。
[0019] 咖卩非屬（Coffeaspp.)提取物和菜薊屬（Cynarasp.)提取物的重量比為0?5至 2、優(yōu)選為1。菜薊屬（Cynara)提取物、小果咖卩非（Coffeaarabica)提取物和油橄欖（Olea europaea)提取物的量為100至300mg〇
[0020] 所選的朝鮮薊載培品種、優(yōu)選洋薊（Cynarascolymus)或刺菜薊（Cynara cardunculus)，更優(yōu)選洋薊（Cynarascolymus)用于制備本發(fā)明的提取物。WO2007/006391 和WO2008/107183報道了制備提取物的方法。
[0021] 富含毛蕊花糖苷和羥基酪醇的油橄欖（Oleaeuropea)提取物可以在提取油性基 質(zhì)后通過涉及水-醇提取、在樹脂上用水-醇洗脫階段和最終干燥階段的制備方法由橄欖 漿（US6358542)制備。制成品呈現(xiàn)出超過30%的最終多酚濃度，并且毛蕊花糖苷含量超過 5%和羥基酪醇含量超過1. 5%。Coratina載培品種的使用是優(yōu)選的。已經(jīng)在體外和在志愿 者中證實商品名為Oleaselect?的終產(chǎn)品具有優(yōu)良的活性，使組織損傷參數(shù)處于控制下， 尤其是在富含脂肪的餐食（其為主要危險因素）期間[CerlettiC?等人，SINUTCongress 2010，米蘭]。
[0022] 通過用脂族醇、優(yōu)選こ醇對壓碎的豆進行水-醇提取而制備了咖啡提取物，將其 在按照實施例中所述方法用こ酸こ酯反萃取除去咖啡因后在真空中濃縮至干。
[0023] 將小果咖啡（Coffeaarabica)豆用こ醇水溶液提取直到耗盡多酚，將部分提取 物合并并在真空中濃縮至水中；過濾除去不溶性物質(zhì)后，將水溶液用碳酸氫鈉堿化，并用こ 酸ZJ旨/己烷的9:1混合物反萃取以除去咖啡因。酸化至PH2后，將水溶液吸附在聚苯こ 烯吸附樹脂上，其中將其用こ醇洗脫。收集最終提取物，并在真空中濃縮至干。獲得含有 40-80%、通常為60%的咖啡?；崴岬奶崛∥铩Ｗ鳛槭褂盲炒甲鳛槿軇臉渲疵摽Х??；崴岬墓┻x方案，可以有利地使用在氮氣存在下的KOH在水中的ImM溶液直到完全 回收咖啡?；崴?；用陽離子樹脂將該弱堿性洗脫液中和至PH5,在真空中濃縮至干。
[0024]供選地，咖啡?；崴峥梢圆皇峭ㄟ^吸附樹脂分離，而是通過用穿過有機膜的 微孔過濾在酸性PH下進行反萃取和用穿過陶質(zhì)膜的納濾進行濃縮至預(yù)期濃度而分離，然 后在霧化器中干燥。
[0025]合并的提取物已經(jīng)證實對降低總膽固醇、LDL膽固醇和血糖具有相當大的活性。還 已經(jīng)出人意料地觀察到cHDL増加、炎癥參數(shù)調(diào)控和心血管危險因素減少。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選方面，將一部分朝鮮薊提取物與一部分咖啡提取物混合， 以在最終提取物中獲得綠原酸的所有異構(gòu)形式，綠原酸是多酚家族的主要化合物并且是二 咖啡?；苌铩ｎ慄S酮來源于木犀草素和菜薊苦素，其發(fā)揮顯著的降脂質(zhì)作用，還通