專利名稱：小檗堿脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及小檗堿脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明還涉及小檗堿脂質(zhì)體的用途。
背景技術(shù)：
小檗堿屬異喹啉類生物堿，近年來研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿及其衍生物在治療腫瘤、 糖尿病、心血管疾病(小檗堿對心血管疾病具有很好的治療作用，申請?zhí)?00810113680. 2 )、高血脂、炎癥、細(xì)菌和病毒感染、腦缺血性損傷、精神疾病、阿爾茨海默病(Alzheimer disease)、骨質(zhì)疏松等多方面具有藥理作用。小檗堿可同時抑制Topo I和Topo II的活性，即雙效抑制劑，有效地干擾腫瘤細(xì)胞DNA復(fù)制而發(fā)揮抗腫瘤效果[Pharm Pharmacol, 2001, 53: 763 - 768 ]；可直接嵌入DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，破壞DNA雙鏈，抑制腫瘤細(xì)胞的DNA和蛋白質(zhì)合成[J Pharm Pharmacol, 2006，58: 263 - 270.]；可通過減少細(xì)胞周期蛋白Bl和增加Weel的表達(dá)， 誘導(dǎo)細(xì)胞生長周期中G2 /M階段的停止，使腫瘤細(xì)胞停止在Gl期與G2期(Anticancer Res, 2006, 26: 1097 -1104.);對小鼠黑色素瘤細(xì)胞有抑制作用(J Pharmacol Exp Ther, 2007，323: 636 - 649.),通過降低細(xì)胞內(nèi)Ca2 +濃度抑制C0X-2 mRNA表達(dá)以及C0X-2 對花生四烯酸的催化活性，從而抑制PGH2的生成，發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用(中國藥理學(xué)通報，2005, 21: 950 - 953. ； J Ethnopharmacol, 1999,66: 227 - 233.)； 小檗堿可通過抑制激活蛋白-I(AP-I)的活性，阻斷腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號通路；還可通過蛋白質(zhì)水解和賴氨酸乙酰化途徑減少血管內(nèi)皮生長因子，并可直接抑制臍靜脈上皮細(xì)胞的形成和移動。也可通過減少尿激酶纖維蛋白溶酶原激活劑和基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生而抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移?？梢酝ㄟ^抑制L-6 mRNA的表達(dá)改善因L-6合成分泌過多而導(dǎo)致的惡液質(zhì)病癥，增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力，從整體提高機(jī)體抗腫瘤轉(zhuǎn)移的能力。也可通過抑制病變細(xì)胞 Bcl22 (一種原癌基因)、mtP53基因的異常表達(dá)，促進(jìn)wt P53基因的表達(dá)，使細(xì)胞凋亡趨于正常，阻止、逆轉(zhuǎn)癌前病變[中國中西醫(yī)結(jié)合脾胃雜志)，2005，13: 81 - 84.]。20世紀(jì)三四十年代提出端粒的概念，它是染色體末端的一種特殊結(jié)椅，能防止染色體DNA降解、末端融合、缺失及非正常重組，維持染色體的完整和穩(wěn)定。近年來研究發(fā)現(xiàn)人類惡性腫瘤的端粒行為異常，端粒酶在大多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，已經(jīng)成為腫瘤治療的一個新靶點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿(45μπι01· - 1 )可降低端粒酶活性、誘導(dǎo)HU60 細(xì)胞凋亡[Int J Cancer, 1999，81: 923 - 929 ]；抑制鼻咽癌CNE-2細(xì)胞端粒酶活性， 作為鼻咽癌的輔助治療可能提高療效.(羅彪.等，小檗堿對人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞端粒酶活性的影響陜西醫(yī)學(xué)雜志 2007 36(10))。為了解決小檗堿的體內(nèi)吸收問題及肝臟代謝損失問題，提高其治療效果， 有專利(硫酸銨梯度法-薄膜蒸發(fā)法制備鹽酸小檗堿長循環(huán)脂質(zhì)體的方法申請?zhí)?200710025536.9申請日2007-08-03 )采用硫酸銨梯度法-薄膜蒸發(fā)法將其制備成長循環(huán)脂質(zhì)體，具體操作方法如下1)將蛋黃卵磷脂、1/3蛋黃卵磷脂質(zhì)量的膽固醇及1/20-1/5蛋黃卵磷脂質(zhì)量的聚乙二醇2000溶于乙醇中.，2~)減壓回收乙醇在容器壁形成膜；注入硫酸銨溶液使膜材溶解；水化IH 2H;幻以蒸餾水為透析介質(zhì)透析15 20H，制造硫酸銨梯度，得空白脂質(zhì)體；4)在空白脂質(zhì)體中加入鹽酸小檗堿溶液力)在30°C 60°C孵化10 60分鐘；6)取孵化后的溶液，以蒸餾水為透析外液于不同溫度下透析12H，到外液無色透明；透析液轉(zhuǎn)移、定容，即得，但處方工藝制備的脂質(zhì)體其包封率小于40%。另一專利描述了超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體方法(超臨界二氧化碳法制備納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的方法申請?zhí)?0081020(^46.6申請日2008-09-26 )，問題是包封率也很低。 徐麗君等報道所制備的鹽酸小檗堿脂質(zhì)體粒徑范圍為2. 4 4. 6 um,包封率為39. 77% (鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備方法及質(zhì)量研究中國醫(yī)院藥學(xué)雜志2004年06期)；張芬等以膽固醇與卵磷脂為膜材，薄膜蒸發(fā)法制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體(鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備工藝研究南京師大學(xué)報(自然科學(xué)版)2006,29 (1):56 58);譚麗蓉等采用均勻設(shè)計法優(yōu)選鹽酸小檗堿脂質(zhì)體，所制備脂質(zhì)體粒徑范圍為2. 2 μ m 3. 8 μ m (均勻設(shè)計法優(yōu)選鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的處方實(shí)用醫(yī)技雜志2007年11期)，不適合注射給藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種小檗堿脂質(zhì)體及其制備方法和用途。本發(fā)明的小檗堿脂質(zhì)體制劑中，，其處方組成中含有PEG脂質(zhì)衍生物，包封率大于 80%，粒徑小于200nm。經(jīng)典的pH梯度是以檸檬酸緩沖液水化脂質(zhì)膜材，制備脂質(zhì)體，然后在脂質(zhì)體混懸液中加入堿性物質(zhì)，調(diào)節(jié)外水相PH值進(jìn)行載藥。如上市產(chǎn)品阿霉素脂質(zhì)體(商品名 Myocet)，正在進(jìn)行臨床的長春新堿脂質(zhì)體(Marqibo)等，其中Myocet由“空白脂質(zhì)體(EPC 142.6 mg/ml、CH57. 4 mg/ml、檸檬酸緩沖液 57. 6mg/ml)”、“碳酸鈉溶液(54. 6 mg/ml 3. 1 ml)”與“阿霉素(50mg)”組成，即檸檬酸緩沖液為水化介質(zhì)、碳酸鈉為pH調(diào)節(jié)劑；而 Marqibo的pH調(diào)節(jié)劑為磷酸鈉溶液。如果以經(jīng)典的pH梯度裝載小檗堿，雖然包封率可以達(dá)到70%以上，但數(shù)據(jù)不穩(wěn)定，并且受脂質(zhì)體膜材料組成與粒徑、混合方式等影響(主動載藥法制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體中國藥學(xué)雜志2004年01期)，當(dāng)用離子交換樹脂(纖維)、超濾、透析、分子篩等方法除去空白脂質(zhì)體外水相的檸檬酸緩沖液，同時結(jié)合加入堿性物質(zhì)，如碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸鈉， 調(diào)節(jié)pH至6. 5 9. 5，即采用檸檬酸梯度與pH梯度聯(lián)合方法裝載小檗堿，可以獲得大于 80%的包封率，甚至達(dá)到100%包封率，且工藝重現(xiàn)性好，制劑穩(wěn)定，不受脂質(zhì)體膜材料與脂質(zhì)體粒徑影響，并且載藥時間也可縮短至5 lOmin。另外，正常血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的間隙通常約為2nm，而腫瘤由于快速生長的原因，其血管間隙可以達(dá)到100-780nm，這為靶向性遞藥奠定了基礎(chǔ)。我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)小檗堿脂質(zhì)體中加入PEG-DSPE，且粒度控制在小于 200nm，具有良好的抗腫瘤效果。一般而言，脂質(zhì)體由磷脂、膽固醇為膜材，其中磷脂可選自下列的至少一種天然磷脂、半合成磷脂、合成磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、磷脂酰甘油、EPG、磷脂酸、心肌磷脂、鞘磷脂、磷脂酸絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷月旨、二硬脂酰磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二癸酰磷脂酰膽堿、二辛酰磷脂酰膽堿、二己酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油及其鹽，二棕櫚酰磷脂酰甘油及其鹽，L-α-二肉豆蔻酰磷脂酰甘油及其鹽，二月桂酰磷脂酰甘油、二癸酰磷脂酰甘油、二辛酰磷脂酰甘油、二己酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺，二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、雙二硬脂酰磷脂酰甘油及其鹽、雙二棕櫚酰磷脂酰甘油及其鹽、雙二肉豆蔻酰磷脂酰甘油及其鹽、雙二月桂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二棕櫚酰磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二月桂酰磷脂酰肌醇、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿、棕櫚酰亞油酰磷脂酰膽堿、硬脂酰亞油酰磷脂酰膽堿、硬脂酰油酰磷脂酰膽堿、硬脂酰花生四烯酰磷脂酰膽堿。本發(fā)明曾較為系統(tǒng)地研究/考察過不同膜材料組成，雖然普通脂質(zhì)體，如采用大豆卵磷脂與膽固醇組成的普通脂質(zhì)體，包封率也能夠得到 80%以上，甚至達(dá)到100% (這是現(xiàn)有的所有小檗堿脂質(zhì)體處方工藝所不能達(dá)到的)，但在體內(nèi)抗腫瘤治療應(yīng)用方面存在問題，即循環(huán)時間短的問題?；诖?，我們在脂質(zhì)體膜材料中加入親水性物質(zhì)，特別是HLB大于8的表面活性物質(zhì)，如用親水性聚合物脂類物質(zhì)，包括聚 DSPE-PEG (乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺)、DPPE-PEG (乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺)、DMPE-PEG (乙二醇-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺)、DLPE-PEG (乙二醇-二月桂酰磷脂酰乙醇胺)，DSPG-PEG (聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰甘油)，CHOL-PEG (聚乙二醇-膽固醇)， DSPE-PVP (聚維酮-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺)，DSPG-PVP (聚維酮-二硬脂酰磷脂酰甘油)、 CHOL-PVP (聚維酮-膽固醇)，其中優(yōu)選乙二醇-二磷脂酰乙醇胺衍生物；PEG的分子量為 100 100000，優(yōu)選1000 5000。為了增加脂質(zhì)體的靶向性，脂質(zhì)體膜材料中尚可以加入特定抗體或配基脂質(zhì)衍生物，如各種單克隆抗體、轉(zhuǎn)鐵蛋白配體、乳鐵蛋白配體、葉酸配體、 半乳糖配體、葡萄糖配體、RGD、白蛋白，尚包括細(xì)胞膜穿透肽脂質(zhì)衍生物。本發(fā)明所用的空白脂質(zhì)體可以通過多種恰當(dāng)?shù)姆椒ㄖ苽?，包括例如薄膜分散法?去垢劑法、注入法、微射流分散法、均質(zhì)機(jī)處理法、超聲波分散法、冷凍干燥法、凍融法、單相溶液(如叔丁醇-水)法等。將所制備的空白脂質(zhì)體外水相物質(zhì)除去或者替換的方法包括超濾法、透析法、分子篩法、離子交換樹脂(纖維)方法等。綜合之，本發(fā)明的基本工藝為1)先以IOOmM IOOOmM的檸檬酸緩沖液(pH2 4)水化脂質(zhì)體膜材料，降低粒徑，制備空白脂質(zhì)體；2)除去或者替換外水相的物質(zhì)，建立梯度；3)加入堿性物質(zhì)，如碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸鈉，調(diào)節(jié)PH至6. 5 9. 5，并加入小檗堿或者小檗堿檸檬酸鹽、小檗堿硫酸鹽、小檗堿鹽酸鹽，40 70°C孵育5 30min。本發(fā)明的脂質(zhì)體藥物制劑中還可任選地包含制藥領(lǐng)域中所公知的其它物質(zhì)，包括等滲調(diào)節(jié)劑、防腐劑、抗氧劑等，其中的物質(zhì)如海藻糖、蔗糖、組氨酸、乳糖、甘露醇、木糖醇、 葡萄糖、氯化鈉、蛋白質(zhì)等，可以是一種，也可以是一種以上。脂質(zhì)體藥物制劑可通過常規(guī)技術(shù)測定藥物在脂質(zhì)體中的包封率。脂質(zhì)體包封率測定的方法有超濾法、透析法、柱層析法、微柱離心法等，這些方法均存在一定問題。我們采用離子交換樹脂(纖維)進(jìn)行包封率測定，具有耗時短、操作簡單、價格低廉、可重復(fù)使用、不需要昂貴的儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
不同膜材料組成的脂質(zhì)體包封率均大于80%，甚至達(dá)到100%，工藝穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例，更具體地說明本發(fā)明的內(nèi)容。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的實(shí)施并不局限于下面的實(shí)施例，對本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護(hù)范圍。對比試驗(yàn)
按照文獻(xiàn)(主動載藥法制備鹽酸小檗堿脂質(zhì)體中國藥學(xué)雜志2004年01期)進(jìn)行小檗堿脂質(zhì)體載藥，結(jié)果包封率較難重復(fù)，可能原因是磷脂成分、脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)等差異。繼續(xù)深入研究發(fā)現(xiàn)，包封率難以重復(fù)的問題，可以通過除去外水相檸檬酸鹽而解決。按照該文章方法制備同樣的脂質(zhì)體，以離子交換樹脂(D331型Cl—型陰離子)除去檸檬酸鹽，碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH至6. 8，包封率大于80%，而且可以重現(xiàn)，pH增大，包封率大于90%。實(shí)施例1
處方HSPC3g
CHIg
PEG-DSPE Ig
水化介質(zhì)300mM枸櫞酸溶液(pH 4. 00) 100ml。制備空白脂質(zhì)體稱取處方量的HSPC (氫化大豆卵磷脂)、CH (膽固醇)、PEG-DSPE (PEG分子量為2000)，55 °C，用IOml乙醇溶解膜材，得脂質(zhì)相；將預(yù)熱至55°C的水化介質(zhì)注入脂質(zhì)相，孵育10 min，制得脂質(zhì)體初品，再經(jīng)20000psi高壓均質(zhì)處理，降低脂質(zhì)體粒徑至約為100匪，依次通過0.8、0.45、0.22 μ m的微孔濾膜，即得空白脂質(zhì)體。建立梯度脂質(zhì)體根據(jù)交換容量計算，1. 2ml (濕視體積)陰離子樹脂(0H_) (717型陰離子樹脂)即可以完全交換300mmol/L枸櫞酸溶液1ml。通過離子交換樹脂建立梯度，得到梯度空白脂質(zhì)體。主動載藥取梯度脂質(zhì)體10mL，加入碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至約8，加入IOmL鹽酸小檗堿溶液(2mg/ml)，60 °C保溫10 min，制得小檗堿脂質(zhì)體。粒徑為U6nm，包封率約為 96%。本實(shí)施例的處方工藝可以通過降低分散壓力獲得不同粒徑脂質(zhì)體。該脂質(zhì)體藥物制劑中還可任選地包含制藥領(lǐng)域中所公知的其它物質(zhì)，包括等滲調(diào)節(jié)劑、防腐劑、抗氧劑等，其中的物質(zhì)如海藻糖、蔗糖、組氨酸、乳糖、甘露醇、葡萄糖、木糖醇、氯化鈉、蛋白質(zhì)等，可以是一種，也可以是一種以上。該脂質(zhì)體膜材料中尚可以加入靶向性物質(zhì)脂質(zhì)衍生物，如靶向抗體、配體，包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、葉酸、半乳糖、葡萄糖、RGD等等。尚包括細(xì)胞膜穿透肽脂質(zhì)衍生物等。實(shí)施例2 處方
DSPC0.9g
CH0. 3g
生育酚0. Olg
PEG5000-DSPE0. 3g
取適量氯仿溶解DSPC (二硬脂酰磷脂酰膽堿)、CH (膽固醇)、生育酚、PEG5000-DSPE，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，制備脂質(zhì)膜。以50ml 300mM枸櫞酸緩沖液(pH2.5)為水化介質(zhì)，水化磷脂薄，制備大單室脂質(zhì)體。經(jīng)30000psi高壓均質(zhì)處理，降低脂質(zhì)體粒徑至約為60nm，依次通過0. 8,0. 45,0. 22 μ m的微孔濾膜，即得空白脂質(zhì)體。建立梯度脂質(zhì)體采用觀_2型Cl_型陰離子交換纖維除去外水相枸櫞酸緩沖物， 得到梯度空白脂質(zhì)體。主動載藥取梯度脂質(zhì)體10mL，加入碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH至約8. 5，加入5mL檸檬酸小檗堿溶液(10mg/ml)，60 °C保溫20 min，制得小檗堿脂質(zhì)體。粒徑為63nm，包封率約為 91%。該脂質(zhì)體膜材料中尚可以加入靶向性物質(zhì)脂質(zhì)衍生物，如靶向抗體、配體，包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、葉酸、半乳糖、葡萄糖、RGD等等。尚包括細(xì)胞膜穿透肽脂質(zhì)衍生物等。實(shí)施例3 處方
HEPCIg
CH0.4g
生育酚半琥珀酸酯0. 3g
PEG200-DSPE脂質(zhì)衍生物0. 3g
操作方法同“實(shí)施例1”。梯度建立方法為采用5%木糖醇溶液透析患者超濾交換外水相。本發(fā)明的脂質(zhì)體藥物制劑中還可任選地包含制藥領(lǐng)域中所公知的其它物質(zhì)，包括等滲調(diào)節(jié)劑、防腐劑、抗氧劑等，其中的物質(zhì)如海藻糖、蔗糖、組氨酸、乳糖、甘露醇、葡萄糖、 氯化鈉、蛋白質(zhì)等，可以是一種，也可以是一種以上。當(dāng)然，尚可以加入碳酸氫鈉、磷酸鈉、磷酸氫二鈉、氫氧化鈉、胺丁三醇、葡甲氨、堿性氨基酸等物質(zhì)調(diào)節(jié)外水相pH至6. 5 9. 5。該脂質(zhì)體膜材料中尚可以加入靶向性物質(zhì)脂質(zhì)衍生物，如靶向抗體、配體，包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、葉酸、半乳糖、葡萄糖、RGD等等。尚包括細(xì)胞膜穿透肽脂質(zhì)衍生物等。實(shí)施例4 處方
DPPCIg
CH0.4g
PEG2000-DPPE 脂質(zhì)衍生物0. 3g
脂質(zhì)相取上述處方的各脂質(zhì)，加入5ml乙醇，于65 ！溶解得脂質(zhì)相。水相配制200mM的pH2. 8的檸檬酸緩沖液30mL，預(yù)熱至65 V即得?？瞻字|(zhì)體制備將水相加入至脂質(zhì)相中，攪拌分散，小型納米機(jī)處理 (20000psi),依次通過0.8 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m微孔濾膜，得空白脂質(zhì)體混懸液。梯度建立以超濾法除去脂質(zhì)體外水相檸檬酸緩沖液，得到具有跨膜梯度的空白脂質(zhì)體混懸液。載藥取上述梯度脂質(zhì)體1 mL，加入硫酸小檗堿溶液(3 mg/mL) 1 mL，碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6. 5，60 °C保溫10 min,制得小檗堿脂質(zhì)體。粒徑為U6nm，包封率82%。類似地，以碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7. 0,7. 5,8. 0,8. 5,9. 0,9. 5、10. 0，測定包封率， 分別為89%、87%、92%、92%、99%、95%、73%。由此可知，pH超過9. 5，包封率顯著降低，可能原因是磷脂降解，導(dǎo)致雙分子膜通透性增加。
該脂質(zhì)體膜材料中尚可以加入靶向性物質(zhì)脂質(zhì)衍生物，如靶向抗體、配體，包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、葉酸、半乳糖、葡萄糖、RGD等等。尚包括細(xì)胞膜穿透肽脂質(zhì)衍生物等。實(shí)施例5 脂質(zhì)體處方
DMPGIg
PEG400-CH0. 3g
操作方法同“實(shí)施例1”。包封率大于80%。該脂質(zhì)體膜材料中尚可以加入靶向性物質(zhì)脂質(zhì)衍生物，如靶向抗體、配體，包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、葉酸、半乳糖、葡萄糖、RGD等等。尚包括細(xì)胞膜穿透肽脂質(zhì)衍生物等。實(shí)施例6 脂質(zhì)體處方
DLPGIg
CH0.4
PEG2000-CH0. Ig
操作方法同“實(shí)施例1”。包封率大于90%。該脂質(zhì)體膜材料中尚可以加入靶向性物質(zhì)脂質(zhì)衍生物，如靶向抗體、配體，包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、葉酸、半乳糖、葡萄糖、RGD等等。尚包括細(xì)胞膜穿透肽脂質(zhì)衍生物等。實(shí)施例7抗腫瘤試驗(yàn)
將36只接種S180腫瘤的小鼠隨機(jī)分為6組，即生理鹽水對照組(NS)、鹽酸小檗堿溶液組、小檗堿脂質(zhì)體組(實(shí)施例1的不同粒徑脂質(zhì)體，包封率大于95%)、普通脂質(zhì)體組(由SPC 與CH組成，粒徑186nm)，每組6只動物。接種當(dāng)天按照第0天計算，接種后第4天開始分別于靜脈注射給藥(20mg/kg)，連續(xù)給藥7天。給藥后動物正常飼養(yǎng)，每日稱量小鼠體重，同時觀察小鼠的生長狀態(tài)。接種后第11天，處死動物，完整剝離皮下腫瘤，計算抑瘤率，結(jié)果見表1。表1不同粒徑脂質(zhì)體抑瘤結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種小檗堿脂質(zhì)體，其特征在于，包括膜材與小檗堿，所述的膜材為磷脂雙分子層， 由磷脂、膽固醇、聚乙二醇脂質(zhì)衍生物組成，脂質(zhì)體粒度為30 200nm，包封率大于80%。
2.如權(quán)利要求1所述的小檗堿脂質(zhì)體，其特征在于，所述的磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、神經(jīng)鞘磷脂、心磷脂，天然或合成的磷脂或其衍生物、及上述物質(zhì)通過常用方法氫化的物質(zhì)。
3.如權(quán)利要求2所述的小檗堿脂質(zhì)體，其特征在于，所述的磷脂選自HSPC、HEPC、DSPC 、DPPC、DMPC、DSPG 、DPPG、DMPG。
4.如權(quán)利要求1所述的小檗堿脂質(zhì)體，其特征在于，所述膜材為一種或多種磷脂；聚乙二醇脂質(zhì)衍生物選自聚乙二醇修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇修飾的二硬脂酰磷脂酰甘油、聚乙二醇修飾的膽固醇，可單獨(dú)應(yīng)用或者組合應(yīng)用，優(yōu)選聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及费苌铮涣字?、膽固醇與聚乙二醇脂質(zhì)衍生物的質(zhì)量比為1 :0 0. 4 0. 01 0. 3 (w/w/w)。
5.如權(quán)利要求4所述的小檗堿脂質(zhì)體，其特征在于，所述聚乙二醇脂質(zhì)衍生物中聚乙二醇PEG的分子量為100-100000道爾頓。
6.如權(quán)利要求5所述的小檗堿脂質(zhì)體，其特征在于，所述聚乙二醇脂質(zhì)衍生物中聚乙二醇PEG的分子量為1000-5000道爾頓。
7.—種如權(quán)利要求1所述的小檗堿脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，采用檸檬酸梯度， 外水相加入堿性物質(zhì)調(diào)節(jié)PH的工藝將藥物裝載進(jìn)入脂質(zhì)體，其制備工藝為用有機(jī)溶媒溶解膜材料，除去/或者不除去有機(jī)溶媒；加入檸檬酸緩沖液水化膜材料，制備脂質(zhì)體粗品； 降低脂質(zhì)體粒徑，除去外水相檸檬酸鹽；加入堿性物質(zhì)調(diào)節(jié)PH，載藥即可。
8.如權(quán)利要求7所述的小檗堿脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，檸檬酸緩沖液的濃度為150mM 500mM ；所加入的堿性物質(zhì)選自碳酸鹽類、磷酸鹽類、氫氧化鈉、胺丁三醇、葡甲氨、堿性氨基酸，其中優(yōu)選碳酸氫鈉、磷酸鈉、磷酸氫二鈉；調(diào)節(jié)外水相pH至6. 5 9. 5，優(yōu)選pH7 9。
9.如權(quán)利要求1所述的小檗堿脂質(zhì)體，其特征在于，還可加入抗氧劑、等滲調(diào)節(jié)劑，包括生育酚及其衍生物、EDTA、蔗糖、木糖醇、海藻糖；在制劑中也允許10%以內(nèi)的乙醇。
10.如權(quán)利要求1所述的小檗堿脂質(zhì)體，其特征在于，在膜材料中加入靶向性物質(zhì)脂質(zhì)衍生物，如靶向抗體、配體，包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、葉酸、半乳糖、葡萄糖、RGD、白蛋白，尚包括細(xì)胞膜穿透肽脂質(zhì)衍生物。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及小檗堿脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明還涉及小檗堿脂質(zhì)體的用途。包括膜材與小檗堿，所述的膜材為磷脂雙分子層，由磷脂、膽固醇、聚乙二醇脂質(zhì)衍生物組成，脂質(zhì)體粒度為30～200nm，包封率大于80%。在膜材料中還可加入靶向性物質(zhì)脂質(zhì)衍生物，如靶向抗體、配體，包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、乳鐵蛋白、葉酸、半乳糖、葡萄糖、RGD、白蛋白，尚包括細(xì)胞膜穿透肽脂質(zhì)衍生物。本發(fā)明中，不同膜材料組成的脂質(zhì)體包封率均大于80%，甚至達(dá)到100%，工藝穩(wěn)定。
文檔編號A61P3/06GK102475682SQ20101056536
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月30日
發(fā)明者張小飛, 徐洋, 鄧意輝 申請人:沈陽藥科大學(xué)