專利名稱：骨肽注射液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域技術(shù)，具體涉及一種骨肽注射液的制備方法。
背景技術(shù)：
骨肽注射液，曾用名骨寧注射液，系由健康豬或胎牛四肢骨中提取制成的無菌水 溶液，其主要成分為有機(jī)鈣、磷、無機(jī)鈣、無機(jī)鹽、微量元素、氨基酸等。本品具有調(diào)節(jié)骨代 謝，刺激成骨細(xì)胞增殖，促進(jìn)新骨形成，以及調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，防止骨質(zhì)疏松。目前，已公開了一些有關(guān)骨肽的制備工藝，是經(jīng)熱壓提取、酸堿沉淀去蛋白、離心 過濾、超濾、濃縮等過程。通常包括以下方法(1)將豬四肢骨破碎后加水熱壓提取；(2)酸 堿沉淀，離心去蛋白；(3)酒精沉淀，離心去蛋白；(4)離心液經(jīng)10000分子量左右的超濾膜 超濾得骨肽(5)根據(jù)骨肽含量加注射用水配制注射液制劑。上述的工藝方法未經(jīng)過活性炭除熱原，不能保證臨床使用安全性；再者未經(jīng)過多 級(jí)超濾去除大分子物質(zhì)，使制劑產(chǎn)品易引起過敏反應(yīng)；其次注射液制劑中未添加穩(wěn)定劑，注 射液中氨基酸、小肽類物質(zhì)易發(fā)生聚合為大分子物質(zhì)而析出致使制劑不穩(wěn)定，也易引起過 敏反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種骨肽注射液的制備方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明的技術(shù)方案為骨肽注射液的制備方法，它是將去除的脂肪的豬或胎牛的 四肢骨用水洗凈后破碎，加所述碎骨4倍重量的純化水加溫在115-121°C，保溫2小時(shí)，冷卻 至室溫的提取液；過濾提取液，得第一上清液，將第一上清液在0-5°C存放凈置，除去上層 脂肪得第二提取液；將第二提取液濃縮至原體積的1/3 1/5得濃縮液；將濃縮液按體積 比1 1比例加入-10 -20°C預(yù)冷的冷丙酮，在不高于-20°C 5°C的低溫環(huán)境下靜置， 分離，得第二上清液；第二上清液濃縮至無丙酮得第二濃縮液；調(diào)節(jié)第二濃縮液得PH值至 3. 0 4. 5，在90 130°C保溫后，冷卻至室溫后分離得第三上清液；調(diào)節(jié)第三上清液pH值 至8. 0 8. 5，90 130°C保溫后，冷卻至室溫后分離得第四上清液；調(diào)節(jié)第四上清液pH值 至7. 2 7. 5得第三提取液；在第三提取液中加入活性炭，在75 85°C攪拌后過濾脫碳； 過濾液先后通過50KD、10KD和5KD超濾膜超濾得骨肽溶液；在骨肽溶液中加入中加注射用 水調(diào)節(jié)至每毫升溶液中含骨肽不少于6mg ；加入穩(wěn)定劑，滅菌得骨肽注射液。加入穩(wěn)定劑吐溫-80至每毫升溶液中的穩(wěn)定劑重量含量為1-2%。。本發(fā)明法采用丙酮和酸堿沉淀去除雜蛋白，較傳統(tǒng)工藝能更有效去除各類雜蛋 白，特別是采用-10 -20°C預(yù)冷丙酮以及多級(jí)超濾，使得骨肽注射液中得高分子物質(zhì)少于 2. 1%，大大低于國家標(biāo)準(zhǔn)5.0%，更有效保證制劑的安全性；采用活性炭吸附工藝能有效 除熱原，進(jìn)一步保證了制劑臨床使用的安全性；先后通過50KD、10KD，5KD超濾膜多級(jí)超濾， 既能保證雜蛋白的徹底去除，又能有效地控制高分子量物質(zhì)，保證臨床安全性；制劑配料過 程中加入吐溫-80作穩(wěn)定劑，能有效得避免制劑在儲(chǔ)存過程中氨基酸、小肽類物質(zhì)等聚合為大分子物質(zhì)析出，影響制劑的澄明度，保證產(chǎn)品長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存過程的穩(wěn)定，同時(shí)降低過敏反
應(yīng)發(fā)生率。
具體實(shí)施例方式取新鮮的豬(或胎牛)四肢骨，剝離其附著的脂肪，用飲用水和純化水先后分別清 洗三次，然后將其破碎。將破碎的豬(或胎牛)四肢骨與其4倍重量的純化水加入反應(yīng)罐中，在121°C，保 溫2小時(shí)，然后冷卻至室溫。將提取液用紗布過濾棄沉渣，上清液置0-5°C存放12小時(shí)以上，除去上層脂肪。將去脂后的提取液減壓真空(溫度70-80°C ；真空度-0. 03 _0. OSMPa)濃縮至 原體積的1/4。將濃縮液按體積比1 1比例加入-10 _20°C預(yù)冷的冷丙酮，在不高于5°C的低 溫環(huán)境下靜置1-2小時(shí)后，迅速離心，棄沉渣取上清液。上清液減壓減壓真空(溫度50-60°C ；真空度-0. 03 -0. 08MPa)濃縮至無丙酮， 同時(shí)回收丙酮。濃縮液在不斷攪拌下用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4.0，100°C保溫45分鐘，冷卻至室 溫后離心，棄沉渣取上清液。上清液再用50%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值8. 5，100°C保溫45分鐘，冷卻至室溫后 離心，棄沉渣取上清液。上清液在不斷攪拌下用10%的稀鹽酸調(diào)pH值7. 2，然后加入溶液總體積0. 5%的 活性炭，開啟夾層蒸汽升溫到80°C，攪拌30分鐘后用蔡氏濾器過濾脫碳。然后用50KD、10KD超濾膜逐級(jí)超濾澄清后得澄清液。澄清液再用5KD超濾膜超濾得骨肽溶液。制劑將骨肽按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定多肽含量，加注射用水調(diào)節(jié)至每毫升含骨肽不 少于6mg，同時(shí)加入穩(wěn)定劑吐溫-80至每毫升含量為1-2%。，然后灌裝、滅菌后即得骨肽注射 液。產(chǎn)品檢測(cè)對(duì)上述制備的產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果如下表1檢測(cè)結(jié)果表1
權(quán)利要求
一種骨肽注射液的制備方法，它是將去除的脂肪的豬或胎牛的四肢骨用水洗凈后破碎，加所述碎骨4倍重量的純化水加溫在115 121℃，保溫2小時(shí)，冷卻至室溫的提取液；過濾提取液，得第一上清液，將第一上清液在0 5℃存放凈置，除去上層脂肪得第二提取液；將第二提取液濃縮至原體積的1/3～1/5得濃縮液；將濃縮液按體積比1∶1比例加入 10～ 20℃預(yù)冷的冷丙酮，在不高于 20℃～5℃的低溫環(huán)境下靜置，分離，得第二上清液；第二上清液濃縮至無丙酮得第二濃縮液；調(diào)節(jié)第二濃縮液得PH值至3.0～4.5，在90～130℃保溫后，冷卻至室溫后分離得第三上清液；調(diào)節(jié)第三上清液pH值至8.0～8.5，90～130℃保溫后，冷卻至室溫后分離得第四上清液；調(diào)節(jié)第四上清液pH值至7.2～7.5得第三提取液；在第三提取液中加入活性炭，在75～85℃攪拌后過濾脫碳；過濾液先后通過50KD、10KD和5KD超濾膜超濾得骨肽溶液；在骨肽溶液中加入中加注射用水調(diào)節(jié)至每毫升溶液中含骨肽不少于6mg；加入穩(wěn)定劑，滅菌得骨肽注射液。
2.如權(quán)利要求1所述骨肽注射液的制備方法，其特征是加入穩(wěn)定劑吐溫-80至每毫升 溶液中的穩(wěn)定劑重量含量為1-2%。。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種骨肽注射液的制備方法。它采用冷的丙酮和酸堿沉淀去除雜蛋白，并通過50KD、10KD，5KD超濾膜多級(jí)超濾，既能保證雜蛋白的徹底去除，又能有效地控制高分子量物質(zhì)，使得骨肽注射液中得高分子物質(zhì)少于2.1％，大大低于國家標(biāo)準(zhǔn)更有效保證制劑的安全性。
文檔編號(hào)A61K9/08GK101933944SQ20101029169
公開日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2010年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月26日
發(fā)明者呂家燕 申請(qǐng)人:武漢華龍生物制藥有限公司