專利名稱：：一種治療潰瘍性結腸炎的藥物組合物及其制備方法一種治療潰瘍性結腸炎的藥物組合物及其制備方法
技術領域：
I木發(fā)明涉及一種治療潰瘍性結腸炎的藥物組合物，以及該藥物組合物的制備方法，屬于中藥領域。[
背景技術：
潰瘍性結腸炎(ulcerativecolitis,UC)又叫慢性非特異性結腸炎(簡稱潰結)，本病常常遷延不愈，反復發(fā)作，難以根除，是世界公認的難治性疾病，現(xiàn)已被世界衛(wèi)生組織列為疑難病之一。本病在全球范圍內均有發(fā)生，現(xiàn)有研究資料表明其流行病學特征受地域、種族、年齡等影響較大，北歐、西歐、北美的發(fā)病率高于世界其他地區(qū)，其發(fā)病率在5/10萬一12/10萬之間，另一份來自以色列的研究報告指出其發(fā)病率高達167/10萬人，任何年齡均可發(fā)病，多見于20—40歲，約占70%,男女發(fā)病率無明顯差別。我國雖發(fā)病率較歐美低，但己有研究報道指出，隨著人們生活環(huán)境和生活方式的改變，近年來UC發(fā)病率已有增加的趨勢，在過去的10年里，我國部分地區(qū)炎癥性腸病的發(fā)病率增加了4倍，其中尤以UC的增加更為明顯，因此，進行潰瘍性結腸炎藥物的研究具有實際的意義。潰瘍性結腸炎(ulcerativecolitis，UC)是一種主要累及直腸、結腸粘膜的慢性非特異性炎癥。病程遷延不愈，長達十幾年甚至幾十年。一般認為本病約80%為周期性發(fā)作，10—15%的患者呈慢性過程，5_10%表現(xiàn)為急性發(fā)作，須行緊急的外科手術治療。病情反復發(fā)作，雖然許多患者可以長期完全緩解，但大宗的病例研究表明，在本病發(fā)病后18年里，只有1%的患者無復發(fā)，累及保持2年不復發(fā)的可能性只有20%，10年不復發(fā)的不到5%。而且病程越長，惡變的危險性越高，病程大于20年則惡變率可達30%。該病屬于中醫(yī)"泄瀉"、"下痢"等范疇，急重癥者則為中醫(yī)的"腸風下血"、"腸擗臟毒"。臨床以腹痛、腹瀉、粘液血便、里急后重為主要表現(xiàn)，中型和重型患者可出現(xiàn)發(fā)熱、消痩、低蛋白血癥、貧血等表現(xiàn)。常常引起大量便血、中毒性巨結腸、腸穿孔、息肉、癌變、腸狹窄、直腸及肛周病變、肝臟病變、關節(jié)炎、皮膚損害、眼病、血栓栓塞性并發(fā)癥、牛長遲滯、小腸炎等多種并發(fā)癥。UC的其病因和發(fā)病機制尚不清楚，可能是環(huán)境因素、免疫、遺傳、感染等多種因素相互作用，某種抗原的持續(xù)刺激，啟動了腸道免疫和炎癥過程，最終導致免疫反應過度亢進和難于自限，近年來氧自由基損傷、某些細胞因子如腫瘤壞死因子(TNF-a)、白介素等在UC發(fā)病中的作用受到重視。目前，西醫(yī)治療UC的主要藥物為氨基酸水楊酸類、皮質類固醇、免疫抑制劑等，這些藥物的初期效果尚可，長期使用存在較多副作用?，F(xiàn)代中醫(yī)對UC的病因病機、治則治法與辨證論治研究較多，積累了豐富的經(jīng)，取得了許多西藥所無法取得的效果，正日益受到國內外學者的高度重視。潰瘍性結腸炎的中成藥研制、開發(fā)近幾年取得了較快發(fā)展，上市的品種主要有復方黃連素片、補脾益腸丸、結腸炎丸、加味香連丸、腸炎寧膠囊、固本益腸片、清腸栓、止瀉靈沖劑、瀉痢固腸丸、胃腸安丸、健脾理腸片、止灣定膠囊等二十余種，雖然這些品種在改善UC癥狀、減少復發(fā)等方面有一定的治療作用，但要達到療效明確、控制復發(fā)、改善預后的目的，仍需進行不斷的探索與研制新藥。[
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種治療潰瘍性結腸炎的中藥新藥，以及它的制備方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種治療潰瘍性結腸炎的藥物組合物，其特征在于它主要由以下重量份的原料藥制成，黃連5-15份、蒼術5-15份。該藥物組合物的制備方法包括以下步驟a)按重量配比5-15:5-15分別稱取黃連、蒼術備用；b)黃連采用乙醇回流提取，形成浸膏粉，蒼術提取揮發(fā)油后，殘渣再水提，形成浸膏粉。c)將揮發(fā)油與浸膏粉混合，加入輔料，加工成形。潰瘍性結腸炎(ulcerativecolitis,UC)或慢性非特異性結腸炎(簡稱潰結)，是一種主要累及直腸、結腸粘膜的慢性非特異性炎癥。病程遷延不愈，長達十幾年甚至幾十年，亦有發(fā)生癌變的可能性。臨床以腹痛、腹瀉、粘液血便、里急后重為主要表現(xiàn)，中型和重型患者可出現(xiàn)發(fā)熱、消痩、低蛋白血癥、貧血等表現(xiàn)。木病歸屬于中醫(yī)"久泄"、"久痢""休息痢"等病癥范疇，雖病變機制復雜，但其主要機制與以下二點關系密切。1、以濕邪內盛為標《素問*陰陽應象大論》說"清氣在下，則生飧瀉……濕盛則濡瀉。"《難經(jīng)》亦指出"濕多成五泄"。《醫(yī)學心悟*泄瀉》中提到"書云，濕多成五瀉，瀉之屬濕也，明矣"。當濕之產(chǎn)牛，或因外感，內客于脾，或因飲食不節(jié)，脾胃受損，水反為濕；或情志失調，肝木乘脾，運化失常。濕性重濁黏滯，故發(fā)病多緩慢，病程長，反復難愈。濕為陰邪，其性趨下，故病位始于大腸。初病正氣較強，濕邪從陽化熱，或因嗜食肥甘，濕熱內生，以致形成大腸濕熱證，大腸者傳導之官，濕熱留戀腸府，氣機受阻，損傷腸絡，故見腹痛、下痢膿血、里急后重等癥。2、以脾氣虛弱為本脾有化生水谷精微、運化水濕、主升清等功能，是人體后天之木、氣血生化之源。喜燥惡濕是脾的特點，濕邪內盛，則易困阻脾氣；遷延不愈，使脾氣日漸虛損，導致脾運化水濕及氣血生化功能障礙、脾氣不升、清氣下瀉，出現(xiàn)久泄久痢、氣血虛弱之象?？傊疂裥皟仁?、從陽化熱、脾氣虛弱，虛實夾雜是潰瘍性結腸炎發(fā)生、發(fā)展的重要中醫(yī)病機特點，得到后世醫(yī)家的認同。本藥物組合物正是針對UC的上述病機特點，在清熱燥濕健脾、虛實兼顧的治法指導下組方用藥。藥味精簡，全方寒溫并用以協(xié)調陰陽、瀉補同行以兼顧虛實，有利于UC腸道郁積濕熱的清除、脾氣虛弱的恢復，方證相符。且現(xiàn)代藥理研究證實本藥物組合物各單味藥分別含有抗?jié)?、抗炎、抗菌等藥理活性成分。因此本方對于UC的治療既符合中醫(yī)理論指導，又具有現(xiàn)代藥理學的客觀依據(jù)。本發(fā)明(藥物組合物)由黃連、蒼術等藥組成。各藥配伍比例為5-15:5-15，上述藥物組合物按比例稱取后,黃連采用乙醇回流提取，形成浸膏粉；蒼術提取揮發(fā)油后，殘渣再水提，形成浸膏粉；將揮發(fā)油與浸膏粉混合，加入輔料，干燥后即得本發(fā)明(藥物組合物)粉末劑。方中黃連具有清熱燥濕，《本草正義》謂"黃連大苦大寒，苦燥濕，寒勝熱，能瀉降一切有余之濕火.....中以平肝胃之嘔吐，下以通腹痛之滯下，皆燥濕清熱之效也"?，F(xiàn)代藥理研究證實黃連及其主要有效成分小檗堿具有說廣譜抗菌、抗炎、抗腹瀉、抗?jié)兊茸饔?。方中蒼術性辛、溫，味苦，具有燥濕健脾之功，《珍珠囊》認為蒼術"能健胃安脾，諸濕腫非此不能除。"《木草綱目》謂"治脾濕下流，濁瀝帶下，滑瀉腸風。"現(xiàn)代藥理研究證實蒼術提取物能調節(jié)運動功能，有較強的抗?jié)?、增強胃腸道粘膜保護作用，同時具有一定程度的抗毒殺菌效應?？傊緩头剿幬镏悬S連、蒼術二藥相伍，寒熱并用以協(xié)調陰陽、瀉補同行以兼顧虛實，有利于潰瘍性結腸炎濕濁、郁熱之標實的清除、脾(胃)之木虛的恢復，方證相符。且現(xiàn)代藥理研究證實黃連、蒼術中均含有抗炎抗菌、止瀉抗?jié)兊乃幚砘钚猿煞?，因此，本方對于潰瘍性結腸炎的治療既符合中醫(yī)理論指導，又具有藥理客觀依據(jù)。潰瘍性結腸炎是一標實本虛之病，標實以濕濁郁熱為主，本虛突出的表現(xiàn)為脾氣虛弱。本發(fā)明藥物組合物具有清熱燥濕以治標、補益脾(胃)以治本的作用，本方組方精簡，寒溫同用、清補兼施。對慢性潰瘍性結腸炎療效突出。實施例l:本發(fā)明所述藥物組合物主要由以下重量份的原料藥制成，黃連5-15份、蒼術5-15份。a)按重量配比5-15:5-15分別稱取黃連、蒼術備用；b)黃連采用乙醇回流提取，形成浸膏粉；肉桂提取揮發(fā)油；蒼術提取揮發(fā)油后，再水提，形成浸膏粉；c)將揮發(fā)油與浸膏粉混合，加入輔料，加工成口服劑型。例如可加工成顆粒劑(沖服劑)、片劑(素片、包衣片、分散片、速崩片、泡騰片等)、膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊)、口服液體劑。實施例2:按重量配比10:15分別稱取黃連、蒼術，其余步驟同實施例l，制得本發(fā)明(藥物組合物)。實施例3:按重量配比10:IO分別稱取黃連、蒼術，其余步驟同實施例l，制得本發(fā)明(藥物組合物)。實施例4:按重量配比10:5分別稱取黃連、蒼術，其余步驟同實施例l,制得本發(fā)明(藥物組合物)。實施例5:按重量配比15:5分別稱取黃連、蒼術，其余步驟同實施例l，制得木發(fā)明(藥物組合物)。實施例6:按重量配比5:15分別稱取黃連、蒼術，其余步驟同實施例l，制得木發(fā)明(藥物組合物)。實施例7:按重量配比5:5分別稱取黃連、蒼術，其余步驟同實施例l，制得本發(fā)明(藥物組合物)。實施例8:按重量配比15:15分別稱取黃連、蒼術，其余步驟同實施例l，制得本發(fā)明(藥物組合物)。本發(fā)明(藥物組合物)對大鼠潰瘍性結腸炎效應觀察1材料與方法1.1藥品和試劑受試藥物本發(fā)明藥物組合物，浸膏粉，用蒸餾水溶解，即3.5g生藥/ml。市面對照藥物復方黃連素片(黃連、木香等)，四川省天基生物藥業(yè)有限公司，批號Z51021615，每片含鹽酸小檗堿30mg。溶媒對照氯化鈉注射液(生理鹽水)，由山東長富潔晶藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號07020821。三硝基苯磺酸，為SIGMA產(chǎn)品。SOD和MDA檢測試劑盒，為南京建成生物工程公司產(chǎn)品，生產(chǎn)批號分別為20071207和20071216。TNF-a和IL-6檢測試劑盒為深圳晶美生物工程有限公司口廣叩o1.2儀器MP120-1電子天平，為上海第二天平儀器廠產(chǎn)品；LDZ5-2離心機，為北京醫(yī)用離心機廠產(chǎn)品。1.3實驗動物清潔級SD大鼠，體重160-200g，合格證號2006A064;由中山大學實驗動物中心提供。1.4造模方法取體重160g190g健康大鼠60只，隨機分為觀察組低(1.5g牛藥/kg)、中(3g牛藥/kg)、高(6g牛藥/kg)組，市面對照藥復方黃連素(0.14g/kg)組，正常對照組(給予牛理鹽水)和模型對照組(給予牛理鹽水)，每組10只。大鼠禁食24h后，用大鼠灌胃管從肛門插入至腸內8cm，除正常對照組大鼠灌牛理鹽水外，其余各組大鼠均注入50%乙醇配制的三硝基苯磺酸組成的混合藥液0.5ml/只(100mg/kg)，倒置鼠30s，使藥液達全結腸，然后放回籠內飼養(yǎng)。造模第2天開始給藥，連續(xù)給藥14天。造模第14天，以3%戊巴比妥鈉麻醉，從腹腔靜脈抽血，分離血清。1.5藥物劑量劑量設定按每人每天20g生藥算，折算成大鼠劑量約為3g/kg，此劑量為實驗中劑量，取上下2倍劑量分別為高劑量和低劑量，則大鼠給藥低、中、高劑量每天分別為1.5g生藥/kg、3g生藥/kg、6g生藥/kg。陽性對照藥物復方黃連素片，O.lg/片，按成人每天口服0.9g算,折算成大鼠劑量約為每天0.14g/kg。藥物稀釋方法、給藥途徑及體積取同一批號的各實驗所用藥品，用蒸餾水配成所需濃度的藥液。給藥途徑灌胃給藥。大鼠給藥容積為1.0ml/100g。1.6檢測指標1.6.1癥狀觀察分別在造模第l、4、7、10、14d觀察大鼠糞便，并利用糞便潛血試紙對每只大鼠糞便進行隱血檢測，記錄大鼠發(fā)生腹瀉、血便的例數(shù)。并于造模前以及造模后7d、14d對各組大鼠進行體重稱量并記錄。1.6.2結腸黏膜組織損傷評分將距肛門10cm長末端結腸取出，沿腸系膜縱行切開，用冰生理鹽水沖洗。將黏膜向上展開，觀察黏膜損傷并參照文獻方法及標準評價CMDI，評分標準為0為無損傷；l為輕度充血,水腫，表面光滑，無糜爛或潰瘍；2為充血水腫，黏膜粗糙呈顆粒狀，有糜爛或腸黏連；3為高度充血水腫，黏膜表面有壞死及潰瘍形成，漬瘍最大縱徑〈1cm，腸壁增厚或表面有壞死及炎癥；4為在3分基礎上潰瘍最大縱徑Mcm，或全腸壁壞死。1.6.3病理組織切片觀察取肛門以上6cm處腸段，置10。/。中性甲酸中固定，石蠟包埋，行4um厚連續(xù)切片，作HE染色，進行光鏡下觀察。1.6.4檢測血清和結腸組織中超氧化物岐化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量8SOD活性采用微量快速測定法，取血清或組織勻漿液1OOu1加入盛有5ml生理鹽水刻度離心管中，2000r/min離心10min，棄盡上清液，加預冷雙蒸水O.2ml95%乙醇O.lml、三氯甲脘O.lml,振搖片刻，3000r/min離心10min，取上清液，再按試劑盒要求檢測；MDA含量按改良八木國夫法測定。1.7統(tǒng)計學處理所有實驗數(shù)據(jù)均以；±逮示。計量數(shù)據(jù)采用Microsoftexcel進行方差分析及組間檢驗。2結果2.1—般狀態(tài)及腹瀉與便血情況正常對照組大鼠活動如常，反應機警，毛發(fā)有光澤，飲食正常，體重增長較多，無腹瀉及便血；造模組大鼠精神萎靡，毛發(fā)無光澤，飲食減少，均出現(xiàn)不同程度的腹瀉、便血，體重有所下降，無死亡出現(xiàn)。與模型組相比，觀察組各組以及復方黃連素組大鼠發(fā)生腹瀉、便血例數(shù)明顯減少，對體重無明顯影響，結果見表l-l和表l-2。表l-l各組大鼠發(fā)生腹瀉和便血的數(shù)量(n=10)組另ljId腹瀉例數(shù)(只)4d7d10d14dld便血例數(shù)(4d7d只)10d14d正常組0000000000模型組1010109910101099觀察組低108764108665觀察組中107642107532觀察組高106532106522復方黃連素107653106543表l-2對結腸炎大鼠體重的影響(；±s)_組別劑量N造模前體重造模7d體重造模14d體重<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與正常對照組比4交*為P<0.01;給藥各組與才莫型組比4交A為P<0.052.2結腸黏膜組織損傷評分將大鼠解剖后觀察結腸外觀及黏膜表面發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠的結腸有多例與相鄰臟器有輕度的粘連，結腸充血水腫，在距肛門8cm的腸段有較大的潰瘍病灶，病灶處結腸壁增厚，腸黏膜表面發(fā)生潰瘍糜爛成糊狀。給藥各組大鼠結腸充血水腫等炎性癥狀明顯改善，潰瘍面積減小，修復愈合較好。與模型組比較，觀察組各劑量均明顯改善修復(P〈0.01)。其中觀察組中、高劑量修復損傷效果明顯優(yōu)于復方黃連素組(P〈0.05)。具體結果見表1-3。表l-3對結腸炎大鼠肉眼結腸黏膜組織損傷評分(；±^)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與正常對照組比較并P〈0.01;與模型對照組比較*P<0.05**P<0.01;與復方黃連素組組比較，A為P〈0.052.3結腸組織病理學變化正常組大鼠結腸組織結構清晰，黏膜完整，腸腺豐富，排列緊密；模型組大鼠結腸組織黏膜壞死脫落，潰瘍形成，潰瘍面積較大，大量屮性粒細胞沒潤，腺體排列不齊或消失；與模型組比較，觀察組高劑量組大鼠結腸組織均表現(xiàn)腸黏膜上皮少數(shù)脫落缺損，潰瘍區(qū)域明顯減少，黏膜周圍上皮增牛修復，大部分覆蓋，炎細胞減少，肉芽組織增生顯著，腺體排列較整齊，表現(xiàn)出明顯的改善修復效果。觀察組中劑量大鼠腸黏膜上皮脫落缺損明顯減輕，潰瘍區(qū)域明顯減少，黏膜周圍上皮增生修復，大部分覆蓋，炎細胞減少，肉芽組織增生，腺體排列較整齊，表現(xiàn)出明顯的改善修復效果。觀察組低劑量大鼠腸黏膜上皮脫落缺損相對減輕，潰瘍區(qū)域減少，黏膜周圍上皮增生修復，部分覆蓋，炎細胞浸潤較明顯，肉芽組織增生，部分腺體排列不齊，有一定改善修復效果。復方黃連素片組大鼠腸黏膜上皮脫落缺損減輕，潰瘍區(qū)域減少，黏膜周圍上皮增生修復，部分覆蓋，肉芽組織增生，部分腺體排列不齊，少數(shù)粘膜上皮還有出血點，炎細胞浸潤明顯，多數(shù)有一定改善修復效果?？偟膩碚f，觀察組中、高劑量修復較佳，優(yōu)于復方黃連素組，復方黃連素組與觀察組低劑量組相近。2.4血清和結腸組織中SOD活性和MDA含量與正常對照組比較，模型組大鼠血清與結腸組織中SOD活力明顯下降(P〈0.01)，MDA含量顯著上升(P〈0.01)。觀察組各劑量組與復方黃連素組均能明顯抑制SOD的下降和MDA的上升((P〈0.05或P〈0.01).蒼術合劑中、高劑量組血清SOD水平明顯高于黃連素組(P〈0.05);觀察組中劑量組組織SOD水平明顯高于黃連素組(P〈0.05)。詳細如表1-4所示。表l-4對血清以及腸組織SOD和MDA的影響(；±s)_血清SOD血清MDA腸組織SOD腸組織MDA(u/ml)(umol/U(u/ml)(umol/U正常對照組一10106.7±19.35.41±1.7581.5±18.90.74±0.23模型對照組_1074.9±15,4#9.02±1.99#48.4±13.0#1.32±0.38#觀察組低1.51090.5±15.0*6.68±1.42**65,2±12.5**0.90±0.23**劑組別g/kg只觀察組中310100.4±13.5**A6.02士1.53林75.3±11.5**A0.84±0.18**H察纟且高610103.5±14.7**A6.03士1.44林70.1±10.0**0.78±0.19林復方黃連素0.141088.l土ll.3*7.10±1.59*62.9±13.5*0.86±0.24**注與正常對照組比較'P〈0.01;與模型對照組比較，*P<0.05**P<0.01;與復方黃連素組比4交，A為P〈0.05結論本藥物組合物具有明顯抗大鼠潰瘍性結腸炎的效應，其作用可能與抗氧化、抑制腸道氧化應激損傷密切相關。權利要求1、一種治療潰瘍性結腸炎的藥物組合物，其特征在于它主要由以下重量份的原料藥制成，黃連5-15份、蒼術5-15份。2、一種治療潰瘍性結腸炎的藥物組合物的制備方法，它包括以下步驟a)按重量配比5-15:5-15分別稱取黃連、蒼術備用；b)黃連采用乙醇回流提取，形成浸膏粉；蒼術提取揮發(fā)油后，殘渣再水提形成浸膏粉；c)將揮發(fā)油與浸膏粉混合，加入輔料，加工成形。3、根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于將黃連、蒼術提取加工成治療潰瘍性結腸炎的口服劑型、腸道給藥劑型，包括顆粒劑、片劑、膠囊劑、口服液體劑、腸道給藥液體劑、栓劑等。全文摘要本發(fā)明涉及一種治療潰瘍性結腸炎的藥物組合物及其制備方法。它主要由以下重量份的原料藥制成，黃連5-15份、蒼術5-15份。該藥物的制備方法包括a)按重量配比分別稱取黃連、蒼術備用；b)黃連采用乙醇回流提取，形成浸膏粉；蒼術提取揮發(fā)油后，殘渣再水提形成浸膏粉；c)將揮發(fā)油與浸膏粉混合，加入輔料，加工成口服劑型。本發(fā)明藥物具有清熱燥濕以治標、健脾補益以治本的作用，對慢性潰瘍性結腸炎療效突出。文檔編號A61P1/00GK101601743SQ20081002869公開日2009年12月16日申請日期2008年6月10日優(yōu)先權日2008年6月10日發(fā)明者劉培慶,劉慰華,寧海蓉,郭芬芬,陳鳳英,黃文革,黃河清申請人:中山大學