一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的復(fù)合益生菌、藥物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種治療潰瘍性結(jié)腸炎的復(fù)合益生菌、藥物及其制備方法，即兩株益 生菌聯(lián)合使用的藥物，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerativecolitis,UC)是炎癥性腸?。╥nfIammatoiybowel disease,IBD)的一個(gè)主要類型，是一種原因不明的慢性非特異性腸道炎癥。資料顯示，每年 美國(guó)UC患病率為200/10萬人，治療UC的花費(fèi)在1至1. 5億美元左右，截止到2012年，UC 患者總數(shù)是2000年的2. 5倍，且復(fù)發(fā)率達(dá)72% ;近年來我國(guó)UC的患病人數(shù)呈明顯上升趨 勢(shì)。潰瘍性結(jié)腸炎病變主要位于結(jié)腸粘膜和粘膜下層；臨床表現(xiàn)為腹瀉，黏液脈血便，腹痛， 里急后重等，多呈反復(fù)發(fā)作的慢性病程。目前治療潰瘍性結(jié)腸炎的方法主要包括藥物治療、 營(yíng)養(yǎng)治療、屯、理治療及手術(shù)治療，其中藥物治療是最主要的方法。在臨床上用于治療UC的 藥物主要有氨基水楊酸類藥物、腎上腺糖皮質(zhì)激素類和免疫抑制劑類等。總體來說，上述藥 物治療見效快、療效好，可緩解UC患者燃眉之苦，但仍存在很多問題。首先，無法根治患者 UC，治標(biāo)不治本；其次，不良作用大，易引起患者頭疼、惡屯、，造成機(jī)體消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)異 常；然后，潛在的致毒致癌性；最后，抗生素類藥物（如應(yīng)用最廣的SAS巧易導(dǎo)致機(jī)體耐藥 抗藥性。
[0003] 益生菌可通過與有害菌競(jìng)爭(zhēng)位點(diǎn)來調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，而且部分植物乳桿菌可產(chǎn) 生細(xì)菌素，抑制有害菌的增殖；部分嗜酸乳桿菌具有很好的益生作用。而植物乳桿菌和嗜酸 乳桿菌的種類繁多，并不是所有的菌株均具有調(diào)節(jié)腸胃的功能，也不是所有的益生菌一起 使用均能發(fā)揮出各自的功效，更不是所有的益生菌聯(lián)合使用都能達(dá)到協(xié)同增效的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的之一是提供一種復(fù)合益生菌，可W有效的治療潰瘍性結(jié)腸炎。 陽〇化]另一個(gè)目的是利用復(fù)合益生菌治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物，通過采用對(duì)腸道效果較 好的嗜酸乳桿菌(Xactobacillusacidophilus)CGMCC10436和植物乳桿菌(Xactobacillus plantarum)CGMCC9961聯(lián)合使用，協(xié)同增效，可W有效的治療潰瘍性結(jié)腸炎，并且毒副作用 較小，不易產(chǎn)生抗性。
[0006] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種利用益生菌治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物的制備方 法。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0008] 治療潰瘍性結(jié)腸炎的復(fù)合益生菌，所述的復(fù)合益生菌包括嗜酸乳桿菌CGMCC10436 和植物乳桿菌CGMCC9961，所述的嗜酸乳桿菌CGMCC10436的菌體數(shù)量占復(fù)合益生菌菌體總 數(shù)量的10~90%。
[0009] 優(yōu)選地，上述治療潰瘍性結(jié)腸炎的復(fù)合益生菌中，所述嗜酸乳桿菌CGMCC10436和 植物乳桿菌CGMCC9961的菌體數(shù)量比為1: 1。
[0010] 所述的復(fù)合益生菌可W制成藥物制劑、飲料、酸奶、奶片等形式。 1] 本發(fā)明采用的嗜酸乳桿菌CGMCC10436的保藏編號(hào)為CGMCCNO. 10436,保藏日期 為2015年Ol月26號(hào)，所述植物乳桿菌CGMCC9961的保藏編號(hào)為CGMCCNO. 9961，保藏日 期為2014年11月13號(hào)，保藏單位均為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、 (CGMCC)，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。
[0012] 本發(fā)明還公開了一種利用上述復(fù)合益生菌治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物。
[0013] 優(yōu)選地，上述治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物中，所述嗜酸乳桿菌CGMCC10436和植物乳 桿菌CGMCC9961的總用量均為lXl〇iiCFU/kg，即每千克的動(dòng)物、人體等所用的藥物中嗜酸 乳桿菌CGMCC10436和植物乳桿菌CGMCC9961的總數(shù)量為1XIQiiCRJ，具體地，可W根據(jù)實(shí) 際情況進(jìn)行計(jì)算，比如，一個(gè)重量為20g的大鼠，其用藥中含有嗜酸乳桿菌CGMCC10436和植 物乳桿菌CGMCC9961的總數(shù)量為2X1〇9cFU;-個(gè)重量為50kg的人，其用藥中含有嗜酸乳桿 菌CGMCC10436和植物乳桿菌CGMCC9961的總數(shù)量為5X1〇i2CRJ。
[0014] 優(yōu)選地，所述的嗜酸乳桿菌CGMCC10436和植物乳桿菌CGMCC9961均為活菌菌體形 式，且所述的活菌菌體是由均處于穩(wěn)定初期的乳桿菌液體培養(yǎng)物分別離屯、收集的菌泥。
[0015] 本發(fā)明還公開了治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物的制備方法，包括如下步驟：
[0016] (1)分別將嗜酸乳桿菌CGMCC10436和植物乳桿菌CGMCC9961在MRS培養(yǎng)基培養(yǎng) 12 ~16h;
[0017] (2)分別取步驟（1)得到的嗜酸乳桿菌CGMCC10436菌液40~60份和植物乳桿 菌CGMCC9961菌液10~30份，離屯、取菌泥，然后分別將它們?nèi)苡?份無菌PBS中，得混合 困泥；
[0018] (3)將上述混合菌泥攬拌均勻，然后加入合適的輔料制成臨床可接受的劑型。
[0019] 優(yōu)選地，上述治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物的制備方法，包括如下步驟：
[0020] (1)分別將嗜酸乳桿菌CGMCC10436和植物乳桿菌CGMCC9961在MRS培養(yǎng)基培養(yǎng) 14h； W21 ] 0)分別取步驟（1)得到的嗜酸乳桿菌CGMCC10436菌液50份，植物乳桿菌 CGMCC9961菌液20份，離屯、取菌泥，然后分別將它們?nèi)苡?份無菌PBS中，得混合菌泥；
[0022] (3)將上述混合菌泥攬拌均勻，然后加入合適的輔料制成臨床可接受的劑型。
[0023] 更優(yōu)選地，步驟（2)所取的嗜酸乳桿菌CGMCC10436和植物乳桿菌CGMCC9961均處 于對(duì)數(shù)期末穩(wěn)定期初。
[0024] 所述的劑型包括注射液、膠囊劑、粉劑、顆粒劑等一切可W制成的劑型。
[00巧]本發(fā)明的有益效果：
[0026] 本發(fā)明選用的嗜酸乳桿菌CGMCC10436、植物乳桿菌CGMCC9961屬于發(fā)明人新發(fā)現(xiàn) 的菌株，經(jīng)過對(duì)其研究發(fā)現(xiàn)，兩者均具有較好的抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用，兩個(gè)聯(lián)合使用后，效 果顯著增加，具有明顯的協(xié)同增效作用，起到了預(yù)料不到的效果。具體表現(xiàn)在顯著改善潰瘍 性結(jié)腸炎小鼠的表觀狀態(tài)，增加小鼠病理學(xué)評(píng)分，并降低小鼠炎癥性反應(yīng)。
【附圖說明】
[0027]圖1為腸炎組小鼠表觀狀態(tài)圖； 陽02引圖2為腸炎組小鼠表觀狀態(tài)特寫；
[0029] 圖3為腸炎組小鼠肥染色圖；
[0030] 圖4為本發(fā)明藥物組小鼠表觀狀態(tài)圖；
[0031] 圖5為后續(xù)觀察本發(fā)明藥物組小鼠表觀狀態(tài)；
[0032] 圖6為不同組小鼠結(jié)腸組織宏觀病理學(xué)評(píng)分。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該 理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可W對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改 或替換，但運(yùn)些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。本發(fā)明所采用的各種材料、試劑或 用具如無特殊說明，均可W從市場(chǎng)中獲得。
[0034] 一、嗜酸乳桿菌CGMCC10436和植物乳桿菌CGMCC9961的分離
[0035] 從內(nèi)蒙古錫林郭勒盟、海拉爾市及鄂爾多斯市等地區(qū)的牧民家中采集傳統(tǒng)方法制 作的傳統(tǒng)稀奶油或酸化奶油，用于乳酸菌的篩選。具體如下：
[0036] (1)將25g樣品在無菌條件下剪碎，溶于225血無菌生理鹽水中，梯度稀釋后選擇 合適的稀釋度，取ImL稀釋液加入無菌平皿，傾注于20mLMRS固體培養(yǎng)基上，30°C培養(yǎng)72h。
[0037] (2)選取菌落數(shù)量在15~150的平板，隨機(jī)選取符合乳酸菌菌落形態(tài)特征的菌落， 從中挑取少量細(xì)菌，溶于于MRS液體培養(yǎng)基中，并進(jìn)行30°C培養(yǎng)4她。
[003引做將分離到的菌株在MRS固體培養(yǎng)基上反復(fù)劃線進(jìn)行純化。
[0039] (4)將純化好的菌株均進(jìn)行革蘭氏染色及過氧化氨酶實(shí)驗(yàn)。
[0040] (5)將所有革蘭氏陽性、過氧化氨酶陰性、不形成芽抱的菌株（初步判斷為乳酸 菌）選出來，在其培養(yǎng)液中加入甘油，使甘油的最終濃度為30% (v/v)，膽藏于-80°C待用。
[0041] (6)將上述分離到暫定為乳酸菌的菌株分別在MRS液體