專利名稱：口用組合物及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于制備如牙膏、洗口藥水或牙科漱劑之類的口用組合物的含類黃酮組合物。特別涉及一種包含抗菌的生物類黃酮原液的口用組合物及其制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)：
人們已知某些包含類黃酮的組合物，該類黃酮具有抗微生物活性，特別是抗細(xì)菌活性，尤其是抗病毒活性。然而，術(shù)語“類黃酮”涵蓋了大量的各種不同化合物，這些化合物可從各種自然來源提取而制得。根據(jù)提取的來源和性質(zhì)或方法的不同，所得類黃酮混合物的總的化學(xué)成分可能相差甚大。就毒性和抗微生物如抗病毒和抗細(xì)菌的效力而言，各種類黃酮的生物活性可能有很大不同(或無活性)。因此，組合起來，這樣的類黃酮在其生物活性上也可能各不相同。
人們發(fā)現(xiàn)，通過往所述類黃酮組合物中添加其他作用劑，可以與類黃酮的某些組合的生物活性起協(xié)同作用、或者增強(qiáng)或促進(jìn)類黃酮的某些組合的生物活性。因此，人們一直致力于尋找類黃酮的適當(dāng)組合，通過添加或不添加其他的作用劑，使之具有理想的抵抗某些微生物的效力，而又不會(huì)在應(yīng)用中伴隨中毒或其他不良影響發(fā)生。這種組合的一個(gè)實(shí)例可在一種橙提取物組合物中發(fā)現(xiàn)，這種橙提取物就是大家知道的生物類黃酮和如維生素C之類的天然果酸，其在氧禽業(yè)中用于殺滅跟食物有關(guān)的微生物，如大腸桿菌及沙門氏菌。
然而，直到本發(fā)明之前，都未見有人提出過將橙源性生物類黃酮/果酸組合物用于個(gè)人衛(wèi)生用，如口用制劑。特別是，這些已知的組合物對(duì)于口用來說會(huì)太酸。此外，雖然有人建議，將類黃酮用于諸如牙膏和洗口藥水這樣的組合物，但是，誰也沒有特別指明其類黃酮成分，和/或限定具體的類黃酮。例如，專利說明書WO 02/47615公開了一種口用組合物，包含感官上適合的載體和分散在載體中的類萜和/或類黃酮；DE19949575公開了一種用于治療牙病和預(yù)防齲齒的氟化物和類黃酮的組合物；以及JP62051613涉及一種牙膏組合物，含有0.001～0.1wt％的選自黃酮醇、白楊素、橙皮素和橙皮苷類黃酮化合物。沒有哪個(gè)在先技術(shù)的配方公開過一種生物類黃酮(其本身包含一種水溶性類黃酮的具體組合)與一種或多種水溶性果酸的組合物，該組合物在數(shù)量和形式上都適合以溶液口用、并具有抗菌活性。


發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明提供一種口用組合物，其pH范圍為3至8.5，以3.5至8為佳，4至7更佳，5至6.5還更佳，包含 (a)范圍為0.1％至＜10％w/w(基于口用組合物的總重量)的原液，所述原液包含生物類黃酮混合物和果酸或其鹽；和 (b)水；以及任選的 (c)制藥學(xué)上可接受的載體，其自身可包含在制藥學(xué)上或藥理學(xué)上可接受的適合于口用的另一或其它配料。
所述口用組合物，以包含范圍為0.1至5％w/w的原液為佳，0.1至2％w/w更佳，例如約為1％。所述口用組合物以包含范圍為20至80％w/w的水為佳，該范圍的低端適合于牙膏的情況，該范圍的高端適合于液體組合物，如洗/沖/噴口藥水的情況。例如，牙膏可以包含范圍為20至45％w/w的水，例如20至30％w/w，特別是在組分(c)中如果包含二氧化硅的情況下；液體配方可以包含范圍為60至80％w/w水(所有w/w，均基于口用組合物的總重量)。
特別首選的是當(dāng)所述原液可從水溶性生物類黃酮與果酸，如檸檬酸、蘋果酸和抗壞血酸組合來制備的時(shí)候。一種或多種酸，最好用合適的堿，如季銨堿來中和，例如膽堿，如膽堿碳酸鹽、膽堿碳酸氫鹽，或者，優(yōu)選為氫氧化物。當(dāng)檸檬酸、蘋果酸和抗壞血酸都用于制備所述組合物時(shí)還更好，尤其是當(dāng)它們被完全中和以形成檸檬酸鹽、蘋果酸鹽和/或抗壞血酸鹽的時(shí)候最好。特別首選的是膽堿抗壞血酸鹽。因此，首選的是所述原液基本沒有果酸，這就意味著其pH在中性范圍內(nèi)。作為示例，原液的pH范圍為3至8.5、3.5至8.5、3.5至8、4至8、4至7.5、4.5至7.5、4.5至7、5至7、5至6.5、5.5至6.5和5.5至6，例如，pH為約5、約5.5、約6、約6.5或約7。

具體實(shí)施例方式 本發(fā)明人不想受任何具體理論的約束，認(rèn)為，所述果酸既對(duì)硬水具有螯合效應(yīng)，還與活性劑的生物活性起協(xié)同作用，例如，生物類黃酮和膽堿抗壞血酸鹽。因此，優(yōu)選的原液包含水溶性生物類黃酮和膽堿抗壞血酸鹽(以膽堿(如氫氧化物)和抗壞血酸形式，或以其本身的鹽形式存在)。
優(yōu)選地，所述原液還包含無毒性溶劑，例如易與水混合的或親水的溶劑，且更優(yōu)選地，包含水和易與水混合的助溶劑，如甘油、多元醇等。所述溶劑尤以包含水/甘油混合物為佳，其混合比例以2∶1～1∶2(水助溶劑)為佳。更優(yōu)選地，組分(b)和(c)(余量包含水、一種或多種助溶劑和賦形劑和/或載體)是不含醇，具體地不含乙醇。
因此，所述原液，最好從下表所列配料制備 *抗壞血酸和氫氧化膽堿(或其他膽堿)可用膽堿抗壞血酸鹽替代，并同時(shí)適當(dāng)增加甘油和水(或替代溶劑)的量。首選的是，溶劑包含大約等百分比的甘油和水兩者，如各5至25％，如15％的甘油和20％的水(當(dāng)膽堿是以氫氧化溶液存在時(shí))，或如25％的甘油和25％的水(當(dāng)膽堿和抗壞血酸以5％膽堿抗壞血酸鹽存在時(shí))。
因此，優(yōu)選地，本發(fā)明的口用組合物如以下所述制備(基于口用組合物的重量) (a)(i)范圍為0.0002～1.5％w/w的生物類黃酮[不包括生物質(zhì)，以另貢獻(xiàn)0.00024～1.83％w/w為宜]； (ii)范圍為0.001～2.0％w/w的檸檬酸； (iii)范圍為0.001～2.0％w/w的蘋果酸； (iv)范圍為0.001～2.0％w/w的抗壞血酸； (v)范圍為0.00045～2.03％w/w的膽堿；和 (b)和(c)余量，包含水、一種或多種助溶劑和賦形劑和/或載體。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的口用組合物按如下所述制備(基于口用組合物的重量) (a)(i)范圍為0.00045～0.9％w/w的生物類黃酮[不包括生物質(zhì)，以另貢獻(xiàn)0.00055～1.1％w/w為宜]； (ii)范圍為0.001～2.0％w/w的檸檬酸； (iii)范圍為0.001～2.0％w/w的蘋果酸； (iv)范圍為0.001～2.0％w/w的抗壞血酸； (v)范圍為0.00045～2.03％w/w的膽堿；和 (b)和(c)余量，包含水、一種或多種助溶劑和賦形劑和/或載體。
由于本發(fā)明的原液，更優(yōu)選地是按上述表格中給出的百分?jǐn)?shù)制備，所以更優(yōu)選地，本發(fā)明的口用組合物可按如下述制備 (a)(i)范圍為0.000675～0.675％w/w的生物類黃酮[不包括生物質(zhì)]； (ii)范圍為0.015～1.5％w/w的檸檬酸； (iii)范圍為0.015～1.5％w/w的蘋果酸； (iv)范圍為0.005～0.5％w/w的抗壞血酸； (v)范圍為0.015～0.9％w/w的膽堿；和 (b)和(c)余量，包含水、一種或多種助溶劑和賦形劑和/或載體。
由于本發(fā)明優(yōu)選的口用組合物，包含大約1％w/w的原液，在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明優(yōu)選的口用組合物可按如下所述制備 (a)(i)大約0.0675％w/w的生物類黃酮[不包括生物質(zhì)]； (ii)大約0.15％w/w的檸檬酸； (iii)大約0.15％w/w的蘋果酸； (iv)大約為0.05％w/w的抗壞血酸； (v)大約為0.09％w/w的膽堿；和 (b)和(c)余量，包含水、一種或多種助溶劑和賦形劑和/或載體。
在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明最佳的口用組合物可按如下所述制備 (a)(i)大約0.01485％w/w的生物類黃酮[不包括生物質(zhì)]； (ii)大約0.045％w/w的檸檬酸； (iii)大約0.045％w/w的蘋果酸； (iv)大約0.015％w/w的抗壞血酸；和 (b)和(c)余量，包含水、一種或多種助溶劑和賦形劑和/或載體。
在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明最佳的口用組合物可按如下所述制備 (a)(i)大約0.01485％w/w的生物類黃酮[不包括生物質(zhì)]； (ii)大約0.045％w/w的檸檬酸； (iii)大約0.045％w/w的蘋果酸； (iv)大約0.06％w/w膽堿抗壞血酸鹽；和 (b)和(c)余量，包含水、一種或多種助溶劑和賦形劑和/或載體。
所述原液是按本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的工藝制備的。較合適的是，所述助溶劑在常溫下與水混合，然后將中和過程涉及的酸，如抗壞血酸，在升溫的情況下與所述溶劑一起混合，該溫度保持在足以確保任何配料都不降解的低溫。對(duì)于抗壞血酸的情況，其熱降解溫度大約在55℃以上，上述升溫范圍保持在約25℃至55℃以下，最好在大約在50℃左右。較合適的是，所述中和反應(yīng)包括將氫氧化膽堿添加到混合物(初始pH＝1.2；最終pH＝5.5～6.0)的抗壞血酸中，或者添加膽堿抗壞血酸鹽(即，其中抗壞血酸已被中和)本身。
然后，加入剩余的酸(以檸檬酸和蘋果酸為佳)，接著加入生物類黃酮，以得到一種pH范圍為約2.0至6.5，通常在2.2至3.5，尤其是在2.3至3.0的溶液。其余未中和的酸也例如用氫氧化膽堿基本上中和，以得到一種基本上中和的溶液，其pH范圍為例如5至8.5，其中以5.5至7為佳，以5.5至6.5更佳。
包含生物類黃酮的在先技術(shù)配方的所述抗菌作用依賴于生物類黃酮對(duì)微生物細(xì)胞質(zhì)膜中必需氨基酸攝取的抑制，例如通過抑制病毒神經(jīng)酰胺酶(neuroamidase)。然而，本發(fā)明的配方被認(rèn)為是有效的，因?yàn)樗x擇的可溶的生物類黃酮與膽堿抗壞血酸鹽的組合物，會(huì)引起微生物的包裹，二氫黃酮和葡糖苷成分分解成獨(dú)立的片段，以及隨后由二氫黃酮片段和膽堿抗壞血鹽導(dǎo)致的微生物失活。
較好的是，所述生物類黃酮混合物包含由萃取工藝產(chǎn)生的與生物質(zhì)結(jié)合的水溶性生物類黃酮；因此，所述生物類黃酮混合物，可能與高達(dá)40～60％w/w，最好是約55％w/w的生物質(zhì)(基于該生物類黃酮混合物的重量)結(jié)合。所述生物類黃酮以葡糖苷為佳，尤以選自異克奧索姆(isocriocirm)、異柚皮苷、柚皮苷(narangin)、橙皮苷(hesperidin)、新橙皮苷(neohesperidin)、新地奧明(neodiomin)、柚皮素(naringenin)、枸橘苷(poncirin)和野漆樹苷(rhiofolen)為佳，而且以上述各種以混合物形態(tài)存在為更佳。特別首選的是，生物類黃酮混合物的主要部分包含柚皮苷和新橙皮苷，例如超過75％的生物類黃酮組分(不包含生物質(zhì))由它們組成。合適的是，所述生物類黃酮混合物中基本不存在其他生物類黃酮(如黃酮醇、白楊素，橙皮苷)，因此所述生物類黃酮組分基本上就由上文所列的水溶性生物類黃酮組成，盡管也可能存在痕量的其他生物類黃酮。特別合適的是，水溶性的生物類黃酮包含以下百分比(按總生物類黃酮組分中的生物類黃酮重量計(jì)) 這種水溶性生物類黃酮混合物的合適來源在此稱作“HPLC45”，其中(HPLC45的總組分的)約45％為所述生物類黃酮，余量(約55％)包含生物質(zhì)，如果膠、糖和少量有機(jī)酸。如前所述，特別合適的是，生物類黃酮混合物主要部分包含柚皮苷和新橙皮苷，例如，它們作為生物類黃酮組分在帶有生物質(zhì)的混合物中占到超過35％。因此，按HPLC45總組分重量計(jì)算，最好有下面的生物類黃酮 作為柑橘屬生物類黃酮復(fù)合物(Citrus Bioflavonoid Complex)45％HPLC，HPLC45可從Exquim(Grupo Ferrer的食品分支機(jī)構(gòu))獲得。它源自于包含未長熟苦(血/紅)橙中果皮的起始原料，例如塞維利亞柑橘，這種柑橘被歸類為“不適于食用的”，其果核、果肉和油性皮已基本去除或仍未充分發(fā)育。該起始原料在親水的離子性溶劑中壓榨，例如在水/醇混合物中，最好是比例約為1∶10～20(溶劑起始原料)的水/乙醇中。由此得到的混合物經(jīng)過濾分離水溶性生物質(zhì)(被保留)和不溶性生物質(zhì)(廢棄)。然后對(duì)水溶性生物質(zhì)作進(jìn)一步精過濾，再經(jīng)閃蒸而留下一種棕色的吸濕性粉末(HPLC45)。
較好的是，用于本發(fā)明口用組合物的生物類黃酮混合物包含水溶性葡糖苷，這有別于從包含水不溶性類黃酮的柚子或其他柑橘類水果或其他植物來源得到的混合物；還更好的是，它還有別于從那些含有大量籽、果肉和/或鮮果，具體是包含水不溶性成分的起始原料得到的混合物；此外，在先技術(shù)的發(fā)育更全/成熟的起始原料，更可能經(jīng)受過殺蟲劑和/或合成肥料，因此，其來源不如本發(fā)明溶液的生物類黃酮混合物來得“有機(jī)”或純凈。
較好的是，所述原液包含1～20％w/w的HPLC45，其中以2至15％為佳，以3至15％更佳，例如3、4、或15，最佳是3.3％。因此，所述原液包含0.45～9％的生物類黃酮混合物，其中以0.9至6.75％為佳，以1.35至6.75％更佳，例如1.35、1.8、或6.75，最佳是1.485％。
較好的是，所述口用組合物，特別是除了水沒有其他配料的情況下，以及所述原液具有3至約8.5的pH，其中以約3至8.5％為佳，以約4至7.5％更佳，例如約5至7；尤其好的是pH在約5.5至6.5。因此，最好的是，所述口用組合物基本沒有氫離子，例如沒有果酸的氫離子；因此，最好如上所述，通過往原液中添加堿的方法，來中和用于制備原液和/或口用組合物的所述果酸。另一方面，當(dāng)口用組合物還包含緩沖劑的情況下，假設(shè)緩沖劑的存在量能有效地使口用組合物的pH在這些范圍內(nèi)，那么該原液的pH可以變動(dòng)超過這些范圍。
因此，本發(fā)明的所述口用組合物的組分(c)，可以包含一種調(diào)節(jié)或調(diào)整最后組合物的pH的緩沖劑，例如堿金屬氫氧化物或氫氧化銨，或一元、二元或三元磷酸鹽，如三(堿金屬)磷酸鹽。由于氫氧化物的量，比二元磷酸鹽難以測(cè)定，所以最好使用一元磷酸鹽和二元磷酸鹽。另一供選方法，是使用正磷酸和二元或三元磷酸鹽，如三(堿金屬)磷酸鹽的組合物。所述磷酸鹽以鈉鹽、鉀鹽或銨鹽的形式為佳；尤以采用鈉鹽更佳。然而，當(dāng)擔(dān)心鈉離子對(duì)高血壓影響的情況下，可采用單鉀和二鉀磷酸鹽。當(dāng)緩沖劑是磷酸二鈉的時(shí)候，例如，它在口用組合物中可以高達(dá)約5％w/w，尤以在0至0.5％，例如在約0.05％w/w為佳。
另一可選配料，組分(c)，可以包含氟化物源，例如氟化鈉和單氟磷酸鈉，其含量可高達(dá)口用組合物的大約0.5％w/w。氟化物源以在0至0.15％的范圍為佳，例如在液體組合物的情況下，約為0.05％w/w，但在牙膏的情況下，要更高些，其在0至0.3％之間，例如約為0.24％w/w，或者在0至1500ppm(以氟離子計(jì))的范圍之內(nèi)為佳。
本發(fā)明的口用組合物中，可以存在其他添加劑，例如調(diào)味劑、甜味劑或著色劑，或防腐劑。例如取自椒薄荷(peppermint)或荷蘭薄荷(spearmint)的薄荷、桂皮(cinnamon)、桉樹(eucalyptus)，柑橘(citrus)、肉桂(cassia)、茴香(anise)、薄荷腦(menthol)等，都是合適的調(diào)味劑的實(shí)施例。調(diào)味劑在所述口用組合物中的存在量在0至3％的范圍之內(nèi)為佳；以高至2％為佳，例如高至0.5％，在液體組合物情況下，以0.2％左右為佳；對(duì)于牙膏的情況，可任選地多些，以0.5至2％為佳，在1％w/w左右更佳。甜味劑包含人工甜味劑或天然甜味劑，例如糖精鈉，其存在量的范圍可在0至2％，以高至1％w/w為佳，例如為口用組合物的0.05至0.3％w/w。著色劑是適宜的天然或合成色素，如二氧化鈦或CI42090，或其混合物。在所述口用組合物中最好存在著色劑，其范圍為0至3％之間；以高至0.1％為佳，例如高至0.05％，在液體組合物的情況下，以在0.005～0.0005％左右為佳；但對(duì)于牙膏的情況，可任選地多些，以高至1％為佳，在約0.5％w/w左右更佳。常用的防腐劑中，苯甲酸鈉的濃度，以不足以達(dá)到改變所述口用組合物pH的大小為宜，否則，需要調(diào)節(jié)緩沖劑的用量，以到達(dá)所希望的pH。
組分(c)的其他可選配料，可以包含其他的活性作用劑，如抗菌斑劑和/或抗微生物劑。合適的作用劑包括季銨鹽化合物，如度米芬(Domiphenbromide)、氯化十六烷基吡啶(CPC)、酚類化合物、乙醇以及上述的防腐劑。這些活性作用劑的存在量的濃度范圍為0至4％w/w之間，但對(duì)于乙醇的情況，可高達(dá)70％，例如高達(dá)30％。例如，尤其是在本發(fā)明的液體口用組合物中，氯化十六烷基吡啶(CPC)等以高至2％為佳，例如約0.05％w/w左右。在本發(fā)明的液體組合物中，乙醇可含多達(dá)70％，以0至30％w/w為佳，如在噴口藥水中約為15％w/w，但本發(fā)明口用組合物最好基本不存在乙醇或任何其他的醇。
組分(c)的其他可選配料，可以包含保濕劑、表面活性劑(非離子、陽離子或兩性)、增稠劑、膠體和粘結(jié)劑。合適的保濕劑包括甘油、木糖醇、丙三醇和二醇，如丙二醇，其存在量各可高達(dá)50％w/w，但所述口用組合物的總保濕劑最好不超過約60～80％w/w。例如，液體口用組合物可包含多達(dá)約30％的甘油，外加高達(dá)約5％，最好是約2％w/w的木糖醇。表面活性劑最好不是陰離子性的，并且還可包括聚山梨醇酯20或可可酰胺甜菜堿(cocoamidobetaine)等，其含量高至為所述口用組合物的約6％，尤以約1.5至3％w/w為佳。
當(dāng)本發(fā)明的口用組合物未噴口水形式時(shí)，所述口用組合物最好包括高至3％w/w左右的成薄膜劑，例如在0至0.1％的范圍內(nèi)，尤以約0.001至0.01％為佳，例如為所述口用組合物的約0.005％w/w。適合的成膜劑包括透明質(zhì)酸鈉和以Gantrez商標(biāo)出售的那些成膜劑。
當(dāng)本發(fā)明的所述口用組合物是以牙膏形式存在時(shí)，最好包括膠體、粘結(jié)劑和/或增稠劑，如膠體二氧化硅、卡拉膠和纖維素衍生物，如羧甲基纖維素鈉。這些配料在所述口用組合物的含量可高至3％w/w左右，如高至約2％，尤以約0.5至1％w/w為佳。
本發(fā)明的牙膏組合物還可包含研磨劑，如水合二氧化硅、磷酸氫鈣、或水不溶性堿金屬偏磷酸鹽，其在所述口用組合物可高至約25％w/w，尤以約10至15％w/w左右為佳。
本發(fā)明的所述口用組合物可以采用本技術(shù)領(lǐng)域中已知的用于制備類似組合物(如牙膏、洗口藥水或沖口藥水、噴口藥水等)的任何方法制備。所有這些方法，都包括將組分(a)和(b)，如果存在的話，還有(c)，均勻地物理混合在一起。
所述組合物最好采用合適的包裝，如帶有使用說明書的、具有或沒有噴頭或其他敷抹裝置的塑料管或金屬管，塑料或玻璃的透明瓶、半透明或不透明的瓶子，罐或分配器。這種包裝本身還可以進(jìn)一步包裝到一個(gè)硬紙板箱或其他合適的容器中，相同的或進(jìn)一步的使用說明書可附在其內(nèi)或?qū)懺谄渖?；這種說明書寫在附帶的小紙盒或散頁上也很合適。包裝上最好列出組合物的活性成分、主要成份或全部成分。該說明書可包含口用組合物領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的內(nèi)容，特別是有關(guān)抗菌使用的內(nèi)容。于是，他們可建議按規(guī)定的時(shí)間間隔，每天2～3次，將豌豆大小的牙膏施用于牙齒；每天至少一次，最好是在飯后，用滿口的洗口藥水或沖口藥水沖洗口腔周圍；等等。
因此，本發(fā)明的所述口用組合物，可用于治療、預(yù)防或改善口腔中的微生物尤其是細(xì)菌性感染或其他牙周疾病的影響；清潔口腔，消毒口腔或從口腔清除碎渣；清爽、清新、消除或改善口氣或口味；以及常規(guī)護(hù)理口腔的衛(wèi)生、外觀和感覺。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種包含生物類黃酮混合物(如上文所述的混合物)和果酸的原液，該原液用于制備治療口腔中微生物尤其是細(xì)菌感染的藥劑；特別地，所述藥物包含0.1％至10％w/w(基于所述口用組合物的總重量)的原液。較好的是，本發(fā)明提供(a)包含生物類黃酮和果酸混合物的原液，以及(c)其他制藥學(xué)或藥理學(xué)上可接受的適合口用的配料(如上文所述)，用于制備微生物尤其是細(xì)菌性口腔感染的治療的藥劑；特別地，其中所述藥物包含0.1％至10％w/w(基于所述口用組合物的總重量)的原液。
本發(fā)明的所述口用組合物，對(duì)治療或預(yù)防由下列細(xì)菌引起的感染、疾病或病征是有用的 齲齒放線菌(Actinomyces odontolyticus)、粘性放線菌(Actinomycesviscosus)、牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)、中間普雷沃菌(Prevotella intermedia)、頰普雷沃菌(Prevotella buccae)、牙普雷沃菌(Prevotella dentalis)、格登鏈球菌(Streptococcus gordonii)、血鏈球菌(Streptococcus sanguinis)、口腔鏈球菌(S oralis)、遠(yuǎn)緣鏈球菌(S sobrinus)、變形鏈球菌(S mutans)、中間鏈球菌(S intermedius)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、纏結(jié)優(yōu)桿菌(Eubacterium nodatum)、衣氏放線菌(Actinomyces israelii)、奈斯隆迪放線菌(Actinomyces naeslundii)、白假絲酵母(C albicans)和熱帶假絲酵母(C tropicalis)。在生物試驗(yàn)中，用于制備本發(fā)明的所述口用組合物的原液(參見實(shí)施例1)稀釋成1/10時(shí)可抑制上述所有細(xì)菌，且稀釋成1/100時(shí)也可抑制上述鏈球菌屬細(xì)菌。其他生物學(xué)數(shù)據(jù)在本文下述實(shí)施例中給出?，F(xiàn)將通過下面的非限制性實(shí)施例闡明本發(fā)明。
實(shí)施例1原液的制備 (a)HPLC45的制備 起始原料包含未長熟的苦(血/紅)橙，例如塞維利亞柑橘的中果皮，這種柑橘被歸類為“不適于食用”，并其果核、果肉和油性皮已被基本去除。起始原料被碾碎后以1∶10～20的比例(溶劑起始原料)在水/乙醇中壓榨到。所得混合物經(jīng)過濾，保留水溶性生物質(zhì)，丟棄不溶性的生物質(zhì)。然后進(jìn)一步精濾水溶性生物質(zhì)，在經(jīng)閃蒸后，得到棕色的吸濕性粉末(HPLC45)?；蛘撸蓮腅xquim(Grupo Ferrer)獲得HPLC45。
(b)HPLC45的生物類黃酮組合物 對(duì)在步驟(a)所得HPLC45的分析表明，HPLC45總成分的45％為生物類黃酮，其余量(55％)包含果膠、糖和低級(jí)有機(jī)酸。下列生物類黃酮所占的百分比(以HPLC45中的生物類黃酮重量計(jì))為 因此，以HPLC45總成分的重量計(jì)，存在下列生物類黃酮 (c)原液的制備 水、甘油和抗壞血酸是在常溫下混合在一起的，然后升溫至50℃。加入氫氧化膽堿，以中和抗壞血酸(開始pH＝1.2；最終pH＝5.5～6.0)。
[*抗壞血酸和氫氧化膽堿可用5％的膽堿抗壞血酸鹽替代，而甘油和水的量各提高至25％] 然后，加入剩余的酸(檸檬酸和蘋果酸)，隨后加入HPLC45，得到原液，其pH為6.2至7.2，并包含6.75％(原液的w/w)的生物類黃酮。
實(shí)施例2噴口藥水 A.實(shí)驗(yàn)室樣品一種基于本發(fā)明的噴口藥水，使用上述配料按如下方法制備在容器(A)中，邊攪拌邊將透明質(zhì)酸鈉分散在水中，得到?jīng)]有結(jié)塊的溶液。添加糖精鈉、氯化十六烷基吡啶、磷酸氫二鈉、木糖醇和原液，攪拌至所有配料完全溶解。添加甘油，混合均勻。在另一容器(B)中，使聚山梨醇酯20、調(diào)味劑和乙醇混合?；旌现琳{(diào)味劑完全分散。將容器(B)的內(nèi)容物加至容器(A)，攪拌得到均質(zhì)液體。
B.替代(生產(chǎn))方法一種基于本發(fā)明的噴口藥水，使用上述配料按如下方法制備在容器(A)中，將透明質(zhì)酸鈉分散在甘油中。攪拌并加水得到?jīng)]有結(jié)塊的溶液。添加木糖醇、原液、糖精鈉、氯化十六烷基吡啶和磷酸氫二鈉，攪拌至所有配料完全溶解。在另一容器(B)中，使聚山梨醇酯20、調(diào)味劑和乙醇混合?；旌现琳{(diào)味劑完全分散。將容器(B)的內(nèi)容物加至容器(A)，攪拌得到均質(zhì)液體。
實(shí)施例3沖口藥水 A.實(shí)驗(yàn)室樣品一種基于本發(fā)明的沖口藥水，使用上述配料按如下方法制備在混合容器(A)中，將水、糖精鈉、氟化鈉、磷酸氫二鈉、色素、木糖醇和原液混合，并混合至所有配料完全溶解。加入甘油，并混合至均勻。在另一容器(B)中，使聚山梨醇酯20、調(diào)味劑混合?；旌现琳{(diào)味劑完全分散。將容器(B)的內(nèi)容物加至容器(A)，攪拌得到均質(zhì)液體。
B.替代(生產(chǎn))方法一種基于本發(fā)明的沖口藥水，使用上述配料按如下方法制備在混合容器(A)中，將水、保濕劑、原液、糖精鈉，氟化鈉、磷酸氫二鈉和色素混合?；旌现了信淞贤耆芙?。在另一容器(B)中，使聚山梨醇酯20、調(diào)味劑和乙醇混合。混合至調(diào)味劑完全分散。將容器(B)的內(nèi)容物加至容器(A)，攪拌得到均質(zhì)液體。
實(shí)施例4牙膏 A.實(shí)驗(yàn)室樣品一種基于本發(fā)明的牙膏，使用上述配料按如下所述制備在容器A中混合水和甘油。向其中加入糖精鈉，氟化鈉，原液和木糖醇，攪拌溶解。將容器(A)的內(nèi)容物，轉(zhuǎn)移至真空混合器(容器B)。將粉末(水合二氧化硅、黃原膠和二氧化鈦)在容器C內(nèi)進(jìn)行預(yù)混合，然后加入到真空攪拌器(B)的液相中。在真空狀態(tài)下混合均勻，以形成平滑的膏糊狀。
B.替代(生產(chǎn))方法一種基于本發(fā)明的牙膏，使用上述配料按如下所述制備在真空混合器中，在攪拌下將黃原膠分散到甘油中。往該分散體中添加水。并混合至黃原膠完全水化并成為無結(jié)塊的混合物。于真空攪器內(nèi)加入原液、水和保濕劑。往該液相中添加可溶性鹽類(即糖精鈉，氟化鈉)?；焖龇垠w(即二氧化硅和二氧化鈦)并加到混合器內(nèi)。攪拌形成均勻的分散體。添加所述表面活性劑和調(diào)味劑，并在真空狀態(tài)下混合，以形成平滑的膏體。
實(shí)施例5原液的制備 下述原液是按上述方法制備的 生物類黃酮混合物3.3％ 蘋果酸 4.5％ 檸檬酸 4.5％ 甘油7.5％ 抗壞血酸1.5％ 水 78.6％ 溶液的pH1.5～1.75 實(shí)施例6原液的制備 下述原液是按上述方法制備的 生物類黃酮混合物3.3％ 蘋果酸 4.5％ 檸檬酸 4.5％ 膽堿抗壞血酸 6.0％ LFG61烷基糖苷13.3％ 丙二醇 7.5％ 水 60.9％ 溶液pH 1.5～1.75 實(shí)施例7生物學(xué)數(shù)據(jù)-抗菌活性 就判斷本發(fā)明的口用組合物是否有抵抗一些與牙周病相關(guān)的各種厭氧菌和兼性細(xì)菌的活性，進(jìn)行了測(cè)試。
方法和材料 所述細(xì)菌采用了齲齒放線菌、粘性放線菌、牙齦卟啉單胞菌、中間普雷沃菌、頰普雷沃菌、牙普雷沃菌、格登鏈球菌和血鏈球菌。所有這些細(xì)菌都是ATCC菌株。
所有厭氧菌均在唐懷特利厭氧室(Don Whitely Anaerobic Chamber)(可從UK，Don Whitely，Yorkshire得到)內(nèi)，在嚴(yán)格厭氧培養(yǎng)基(FastidiousAnaerobic Broth(FAB))中，37℃下生長24小時(shí)。所述兼性細(xì)菌在營養(yǎng)培養(yǎng)基中，在10％(v/v)二氧化碳的條件下，于37℃生長24小時(shí)。起始培養(yǎng)物為1mL約106cfu/mL的過夜生長物。所述培養(yǎng)物用本發(fā)明的的原液(其濃度最低至1/10,000(0.001％))補(bǔ)充。所述稀釋液就是適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。其生長情況采用分光光度法以在650nm下的吸光度增加值進(jìn)行評(píng)價(jià)。
用5％(v/v)血瓊脂平板上的生長來評(píng)估牙膏和洗口藥水組合物。在瓊脂中切出直徑約0.5厘米的孔，并填充各組合物的稀釋液；該稀釋劑就是適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。所述皿用約0.2毫升106cfu/mL左右的培養(yǎng)液預(yù)先接種。未見生長抑制的孔濃度視作最低抑菌濃度。
生長試驗(yàn)結(jié)果 百分比是指各配方中的原液的百分比。
表1牙膏對(duì)培養(yǎng)物 表2洗口藥水對(duì)培養(yǎng)物 表3牙膏對(duì)孔擴(kuò)散 表4洗口藥水對(duì)孔擴(kuò)散 結(jié)論洗口藥水、牙膏和原液明顯同等地抗受試細(xì)菌。此外，在牙膏和洗口藥水的0.5％和1.0％原液的兩種情況下，未見在效果上有差異。
在使用原液進(jìn)行的類似試驗(yàn)(培養(yǎng))中，還發(fā)現(xiàn)在1/100稀釋比下可抑制口腔鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌、變形鏈球菌和中間鏈球菌；且在1/10稀釋比下對(duì)嗜酸乳桿菌、糾結(jié)優(yōu)桿菌、衣氏放線菌和奈斯隆迪放線菌有抑制作用；而在不稀釋情況下，對(duì)白假絲酵母和熱帶假絲酵母有抑制作用。
附加試驗(yàn) 試驗(yàn)了兩種配方實(shí)施例5和實(shí)施例6。使用血心浸液(Blood-HeartInfusion(BHI)或沙氏培養(yǎng)基(Sabouraud’s broth)作為稀釋劑，每種配方都制備了一系列兩倍稀釋液，它們的pH分別為1.75和2.0，得到具有一組濃度范圍(在8％～0.015625％v/v之間)的溶液。
獲得一些細(xì)菌和假絲酵母的菌株(見表1)，并在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)48h。在培養(yǎng)液(細(xì)菌用BHI，假絲酵母用沙氏培養(yǎng)基)中制備各種微生物的懸浮液，以達(dá)到約等于麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)3.0(MacFarland3.0)的濁度水平。
表1 本研究使用的微生物菌種 將100μL體積的各微生物懸浮液，加入到微量滴定板的孔中。再往每個(gè)孔添加同等體積的實(shí)施例5或?qū)嵤├?的溶液(含有匹配的培養(yǎng)液)，以得到最終4％～0.0078125％(v/v)的原液濃度。還制備不含原液和/或微生物的孔，作為對(duì)照。每個(gè)微量滴定板都置于適當(dāng)氣氛下，37℃下，培養(yǎng)24小時(shí)。在培養(yǎng)之后，通過使用分光光度計(jì)在波長544納米下吸光度讀數(shù)，測(cè)定每個(gè)孔中的濁度，以估計(jì)各種微生物種的相對(duì)量。吸光度讀數(shù)用不存在微生物的對(duì)照樣進(jìn)行背景扣除。
最小抑菌濃度(MIC)定義為與微生物是在無原液的情況下生長的對(duì)照樣相比，導(dǎo)致微生物量顯著下降(即下降＞50％)的的最低原液濃度。試驗(yàn)進(jìn)行3次，在存在各種微生物情況下確定實(shí)施例5和實(shí)施例6的配方的最小抑菌濃度。
結(jié)果 觀察所得到的實(shí)施例5和實(shí)施例6兩配方對(duì)13種微生物的MIC值歸納于表2。
所研究的每種微生物的生長，除光滑假絲酵母外，都受到實(shí)施例5和實(shí)施例6兩配方的抑制。該酵母菌的生長根本不受實(shí)施例6的抑制，甚至在本研究使用的最高濃度8％(v/v)下也存在生長。
對(duì)實(shí)施例5和實(shí)施例6的兩配方的MIC值進(jìn)行比較表明，在抑制微生物生長方面，實(shí)施例5比實(shí)施例6更為有效。除了對(duì)牙齦卟啉單胞菌兩種配方具有相同的MIC值1％之外，對(duì)每種微生物的MIC值，實(shí)施例5的都比實(shí)施例6的更低。此外，實(shí)施例5在濃度為1％(v/v)時(shí)，抑制每種微生物的生長，雖然生長的降低沒有完全大于50％(在本研究設(shè)定的用于定義MIC的標(biāo)準(zhǔn))。這就支持使用1％(v/v)的實(shí)施例5原液作為今后產(chǎn)品和研究中的首選工作濃度。
表2就實(shí)施例5和實(shí)施例6兩配方，本研究所觀察到的對(duì)每種微生物的MIC值
*即使在本研究所用最高濃度的情況下，也沒有明顯的生長抑制。
權(quán)利要求
1、一種口用組合物，其pH范圍為3至8.5，包含
(a)范圍為0.1％至＜10％w/w的原液(基于口用組合物的總重量)，所述原液包含生物類黃酮混合物和果酸或其鹽；和
(b)水；以及任選的
(c)制藥學(xué)上可接受的載體。
2、根據(jù)權(quán)利要求1的口用組合物，其中，所述生物類黃酮混合物源自于未長熟苦橙的中果皮。
3、根據(jù)權(quán)利要求1或2中口用組合物，其包含范圍為0.1至5％w/w的所述原液，例如0.5％或1％w/w的所述原液。
4、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，其中，所述生物類黃酮混合物是水溶性的。
5、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，其中，所述原液包含選自檸檬酸鹽、蘋果酸鹽和抗壞血酸鹽的果酸鹽。
6、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，其中，所述原液包含果酸與堿如季銨堿生成的鹽。
7、根據(jù)權(quán)利要求6的口用組合物，其中，所述堿是一種膽堿，如膽堿抗壞血酸鹽。
8、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，其基本上不含果酸。
9、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，其中，所述原液和/或所述口用組合物的pH范圍為3.5至8。
10、根據(jù)權(quán)利要求9的口用組合物，其中，所述原液和/或所述口用組合物的pH范圍為4至7。
11、根據(jù)權(quán)利要求10的口用組合物，其中，所述原液和/或所述口用組合物的pH范圍為5至6.5。
12、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，其中，所述生物類黃酮混合物與生物質(zhì)結(jié)合，例如，基于生物類黃酮混合物的重量，所述生物質(zhì)的范圍為40至60％w/w。
13、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，其中，所述生物類黃酮選自異克奧索姆、異柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、新地奧明、柚皮素、枸橘苷和野漆樹苷，例如選自柚皮苷和新橙皮苷。
14、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，包含基于所述口用組合物的重量，范圍為20至80％w/w的水，例如，牙膏包含20至40％w/w水，或液體組合物包含60至80％w/w的水。
15、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，包含基于所述口用組合物重量，范圍為0至30％w/w的醇。
16、根據(jù)權(quán)利要求15的口用組合物，其中所述醇是乙醇。
17、根據(jù)權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)的口用組合物，其基本不含醇。
18、根據(jù)權(quán)利要求1的口用組合物，其pH范圍為5至6.5，包含
(a)范圍為0.1％至＜10％w/w的原液(基于口用組合物的總重量)，所述原液包含生物類黃酮混合物和果酸或其鹽；其中，所述生物類黃酮混合物包含至少75％的柚皮苷和新橙皮苷的混合物，且所述生物類黃酮源自于未長熟苦橙的中果皮；
(b)20至80％w/w的水和0至30％w/w的醇；和任選的
(c)制藥學(xué)上可接受的載體。
19、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，其中，所述組分(c)選自加氟劑、調(diào)味劑、甜味劑、色素和防腐劑；抗菌斑劑和抗微生物劑；保濕劑、表面活性劑、增稠劑、膠體、粘結(jié)劑和研磨劑；和成膜劑。
20、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，其呈膏體狀，如牙膏。
21、根據(jù)權(quán)利要求1至19中任一項(xiàng)的口用組合物，其呈液體狀，如噴口藥水、沖口藥水或洗口藥水。
22、根據(jù)前面任一項(xiàng)權(quán)利要求的口用組合物，適用于治療、預(yù)防或改善口腔中微生物如細(xì)菌感染，或其它牙周疾病的影響；清潔口腔、消毒口腔或從口腔去除碎渣；清爽、清新、消除或改善口腔中的口氣或口味；或護(hù)理口腔的衛(wèi)生、外觀和感覺。
23、如前面任一項(xiàng)權(quán)利要求所述口用組合物的制備方法，包括對(duì)組分(a)、(b)和/或(c)進(jìn)行均勻的物理混合。
24、如權(quán)利要求1至21中任一項(xiàng)限定的包含生物類黃酮混合物和果酸的原液在制備藥劑中的應(yīng)用，所述藥劑用于治療口腔中的微生物，特別是細(xì)菌感染；例如，其中所述藥劑包含范圍為0.1％至10％w/w的所述原液(基于所述口用組合物的總重量)。
25、根據(jù)權(quán)利要求24的應(yīng)用，其中，所述原液與組分(c)組合，所述組分(c)是制藥學(xué)上或藥理學(xué)上可接受的適合于口用的其它配料。
26、如權(quán)利要求22、24和25中任一項(xiàng)所述的口服組合物或應(yīng)用，其中，所述微生物感染選自齲齒放線菌(Actinomyces odontolyticus)、粘性放線菌(Actinomyces viscosus)、牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis)、中間普雷沃菌(Prevotella intermedia)、頰普雷沃菌(Prevotella buccae)、牙普雷沃菌(Prevotella dentalis)、格登鏈球菌(Streptococcus gordonii)、血鏈球菌(Streptococcus sanguinis)口腔鏈球菌(S oralis)、遠(yuǎn)緣鏈球菌(S sobrinus)、變形鏈球菌(S mutans)、中間鏈球菌(S intermedius)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、糾結(jié)優(yōu)桿菌(Eubacterium nodatum)、衣氏放線菌(Actinomyces israelii)、奈斯隆迪放線菌(Actinomyces naeslundii)、白假絲酵母(C albicans)和熱帶假絲酵母(C tropicalis)。
全文摘要
一種口用組合物，pH范圍為3至8.5，其包含(a)范圍為0.1％至＜10％w/w的原液(基于口用組合物的總重量)，所述原液包含生物類黃酮混合物和果酸或其鹽；和(b)水；以及任選的(c)制藥學(xué)上可接受的載體。
文檔編號(hào)A61K8/49GK101495090SQ200780027438
公開日2009年7月29日 申請(qǐng)日期2007年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月20日
發(fā)明者伊恩·里普萊, 霍華德·湯馬斯 申請(qǐng)人:奧雷登特有限公司