專利名稱：：包含酶的牙科用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及牙科用組合物。此外，本發(fā)明涉及一種制備該牙科用組合物的方法。本發(fā)明還涉及利用此類牙科用組合物生產(chǎn)處理劑以去除齲齒。
背景技術(shù)：
：齲齒也被稱為蛀牙，是最常見的人體疾病之一。齲齒是細(xì)菌造成的牙齒損傷，其甚至可能造成牙齒脫落。牙齒在外部被硬質(zhì)的牙釉質(zhì)覆蓋層所保護(hù)，所述牙釉質(zhì)覆蓋層包封較軟的牙質(zhì)，而牙質(zhì)繼而包封所謂的牙髓。牙釉質(zhì)自身由約95%的無(wú)機(jī)化合物(尤其是羥基磷灰石)和約5%的有機(jī)化合物和水組成。牙質(zhì)比牙釉質(zhì)柔軟，并且是由約65%的無(wú)機(jī)化合物(主要是羥基磷灰石)、約20%的有機(jī)化合物(主要是膠原和多糖)和約15%的水組成。齲齒通過(guò)細(xì)菌對(duì)碳水化合物的發(fā)酵作用，具體地講通過(guò)細(xì)菌將糖發(fā)酵成酸而分階段逐步形成。由所述細(xì)菌發(fā)酵作用產(chǎn)生的酸首先溶解硬質(zhì)的牙釉質(zhì)，而細(xì)菌則主要攻擊有機(jī)組分，如殘留在牙齒上的食物顆粒。如果牙釉質(zhì)因細(xì)菌引起的酸作用而變得多孔且松軟，則細(xì)菌可到達(dá)牙釉質(zhì)下的牙質(zhì)層，并且使其感染上齲病。將牙釉質(zhì)或牙釉質(zhì)以及牙質(zhì)被溶解最嚴(yán)重的區(qū)域稱為齲損或蛀洞。薄淺的蛀洞通常會(huì)持續(xù)擴(kuò)張，并且造成牙齒深層部分的感染。這些所謂的深度齲齒狀況顯示大面積的感染齲齒的牙質(zhì)，存在使齲病發(fā)展成牙質(zhì)下的牙髓炎的危險(xiǎn)。牙髓炎是極其痛苦的，并且如果不盡快處理，可能會(huì)對(duì)患者的健康造成嚴(yán)重的危險(xiǎn)。通過(guò)牙髓處理除去發(fā)炎的牙髓包括對(duì)牙根管進(jìn)行消毒，從所述牙根管中除去牙髓。如果沒有正確實(shí)施這種消毒，則感染可能繼續(xù)存在，并且甚至可能導(dǎo)致齒槽骨的感染。因此，齲損的處理是除去被感染的組織和壞死的牙質(zhì)。眾所周知，目前齲齒挖空方法無(wú)法從齲齒中除去所有的細(xì)菌(Kidd等人，2003,Fejerskov&Kidd，"DentalCaries"，BlackwellMunksgaard，第17章)。因此，通常推薦使用齲齒消毒劑治療深度齲損以預(yù)防牙髓感染。(Br紐nstr6m等人，1980，CariesRes14:276-284)。預(yù)防牙髓感染也是在蓋髓之前需要消毒或者研發(fā)具有抗菌特性的蓋髓產(chǎn)品的原因。此外，消毒是牙髓處理的不可或缺的一部分，這在聲明"endodonticsisprimarilyamicrobiologicalandthenananatomicalandtechnicalproblem!"(牙髓病學(xué)主要是一門微生物的、然后是解剖學(xué)的和技術(shù)的學(xué)科)(Endodontie，Heinemann(編輯)，Urban&Fischer2001，第82頁(yè))中得到了反映。尤其成問(wèn)題的是牙髓玷污層，所述牙髓玷污層在牙髓處理期間產(chǎn)生，并且阻礙抗菌物質(zhì)到達(dá)坫污層和牙根管壁微管中的細(xì)菌?，F(xiàn)今，牙髓治療通常不能成功地殺滅玷污層和微管中的細(xì)菌，這可致使出現(xiàn)再擴(kuò)散(Endodontie,Heinemann(編輯)，Urban&Fischer2001，第89頁(yè))。此外，當(dāng)前的牙髓沖洗液可能會(huì)破壞牙髓密封劑和修復(fù)劑(Sevcigan等人，IADR2005,poster#2982)。在齲齒的處理期間，牙科從業(yè)者發(fā)現(xiàn)需要不同的處理方法去除較淺或較深蛀洞中壞死的牙質(zhì)并且對(duì)齲齒消毒。這種對(duì)齲齒的消毒尤其有利于其中需要預(yù)防牙髓感染的深度齲齒狀況。如果牙髓已經(jīng)被感染，則需要去除牙髓，并且需要對(duì)牙髓區(qū)域進(jìn)行消毒和沖洗以防止感染擴(kuò)散。WO2004/017988中所公開的制劑可去除被感染的牙質(zhì)。它們由至少一種生物活性蛋白酶和/或至少一種生物活性糖苷酶組成。WO2004/017988中的一個(gè)實(shí)施例包含水、酸、胃蛋白酶和流變添加劑。EP0884950Bl和WO00/27204描述了分別與陽(yáng)離子聚合物和N-羥基苯胺組合以殺滅細(xì)菌的酶。US2004/0071636和WO2004/000222描述了使用衍生自抗菌素的類似溶菌酶的酶來(lái)作為抗菌化合物。
發(fā)明內(nèi)容申請(qǐng)人認(rèn)識(shí)到，期望獲得這樣一種產(chǎn)品，所述產(chǎn)品專門用于去除被感染的牙質(zhì)并且包含試劑以預(yù)防細(xì)菌污染所述產(chǎn)品。通過(guò)包含酶的牙科用組合物可達(dá)到此目的，所述酶在酸性pH值下具有酶活性。所述組合物通常包含提供酸性pH值的緩沖劑和至少一種防腐劑，其中所述至少一種防腐劑在酸性pH值下具有活性。圖1為表示各種組合物成分在7分鐘后抗菌作用的坐標(biāo)圖。圖2為表示各種組合物成分在5分鐘后抗菌作用的坐標(biāo)圖。圖3為表示2種組合物抗菌作用隨時(shí)間變化的坐標(biāo)圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供了牙科用組合物，該組合物包含(i)在酸性pH值下具有酶活性的酶，(ii)提供酸性pH值的緩沖劑，和(iii)至少一種在酸性pH下具有活性的防腐劑。在由所述緩沖劑所提供的酸性pH值下，本發(fā)明中所用酶的酶活性通常不具有最佳的活性。然而，在此pH值下，其優(yōu)選具有至少lU/mL或更高的總酶活性。例如，根據(jù)本發(fā)明，所述組合物可具有每毫升組合物約1U至約1,000,000U的總酶活性。例如，酶活性范圍的下限可為約5或10U/mL，其中當(dāng)總酶活性范圍的下限為約20或約30或約50U/mL組合物時(shí)，本發(fā)明的功效通常得到了相當(dāng)大的改善?？偯富钚詢?yōu)選為約500至50，000U/mL組合物，或更優(yōu)選約1,000至約8,000U/mL組合物。例如，通過(guò)在其中胃蛋白酶為所述酶的情況下，每毫升組合物加入約0.5至約15mg(通?？缮藤?gòu)獲得的胃蛋白酶)的量來(lái)獲得所需的活性。酶的單位(縮寫為U)是在酶各自的標(biāo)準(zhǔn)條件下，每分鐘轉(zhuǎn)化1"mol相應(yīng)酶基質(zhì)所需的酶量。酶的單位以及標(biāo)準(zhǔn)條件在本領(lǐng)域中均是已知的。例如，在WO2004/017988中，公開了各種酶的標(biāo)準(zhǔn)條件，所述文獻(xiàn)以引用的方式并入本文。例如，在具體的胃蛋白酶情況下，！單位相當(dāng)于在37°C下每分鐘可從血紅蛋白中釋放出0.001A280的胃蛋白酶量，A280為三氯乙酸可溶性水解產(chǎn)物。在這種情況下，總酶活性[U/mL]涉及液態(tài)以及糊狀和固態(tài)產(chǎn)品，所述產(chǎn)品只由酶和可選地一種或多種同樣為固態(tài)的輔助劑的混合物組成。用于本發(fā)明中的酶通?？蓮闹参?、動(dòng)物或真菌以及細(xì)菌或酵母中分離出來(lái)。它們還可通過(guò)生物工程制得。酶的代表性實(shí)例包括由動(dòng)物、細(xì)菌或酵母中分離出來(lái)的那些，如得自豬或雞的酶。此外，由細(xì)菌屬鏈霉菌、真菌屬青霉菌、細(xì)菌屬梭菌、或真菌屬曲霉菌或念球菌分離出來(lái)的那些酶也是適宜的。優(yōu)選的酶分離自灰色鏈霉菌、溶組織梭菌、脂環(huán)酸芽孢桿菌、構(gòu)巢曲霉菌、青霉菌或白色念球菌。在本發(fā)明上下文中，術(shù)語(yǔ)"蛋白酶"表示所有能夠水解肽鍵的酶。此外，該術(shù)語(yǔ)表示能夠水解二肽、寡肽、多肽和蛋白質(zhì)或其衍生物如糖基化衍生物的酶。蛋白酶可催化存在于齲損中的蛋白組分分解。對(duì)于此目的而言，通常任何蛋白酶均適合催化蛋白和肽降解。然而，在本發(fā)明上下文中，尤其優(yōu)選的蛋白酶能夠催化膠原纖維的分解，或能夠至少催化膠原纖維結(jié)構(gòu)的改變，以使得所述膠原纖維在蛋白酶作用后具有更好的溶解度特征。根據(jù)本發(fā)明，一類適宜的蛋白酶還可能涉及氨基酸或蛋白分解催化作用中所涉及的輔因子。因此，在本發(fā)明的情況下，通常可使用所有的蛋白酶類別，諸如絲氨酸蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、絲氨酸-羧基蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶。一般來(lái)講，在可使各自的蛋白酶催化存在于齲損中的蛋白組分降解的條件下使用蛋白酶。根據(jù)本發(fā)明的組合物可包含一種蛋白酶或兩種或更多種不同的蛋白酶。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述組合物包含例如一種蛋白酶。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施例，根據(jù)本發(fā)明的組合物包含約1至10種，優(yōu)選1至6種，更優(yōu)選1至4種，甚至更優(yōu)選2至3種，并且最優(yōu)選2種不同的蛋白酶。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施例，所述組合物僅包含一種蛋白酶，優(yōu)選天冬氨酸蛋白酶，其中優(yōu)選胃蛋白酶，并且具體地講是得自豬的胃蛋白酶。含有酶的組合物通常具有酸性范圍內(nèi)的pH值，即小于7.0的pH值。具有創(chuàng)造性的牙科用組合物的pH值優(yōu)選在約pH1至約pH4的范圍內(nèi)。在此方面，所述酶優(yōu)選在小于4.0的pH值或pH范圍內(nèi)具有酶活性。所述酶不必在此pH值下具有其最大的酶活性，但是在小于4.0的pH值下，它應(yīng)該具有其最大活性的至少10%。因此，緩沖劑應(yīng)向所述牙科用組合物提供小于4.0的pH值。在本發(fā)明的情況下，任何典型的緩沖劑均是適宜的，諸如例如磷酸鹽緩沖劑、碳酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、甲酸鹽緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、三羥甲基氨基甲烷緩沖劑、雙甘氨肽緩沖劑、甘氨酸緩沖劑、或它們的混合物。優(yōu)選磷酸鈉緩沖劑、磷酸氫鈉緩沖劑、磷酸二氫鈉緩沖劑、磷酸鉀緩沖劑、磷酸氫鉀緩沖劑、磷酸二氫鉀緩沖劑或焦磷酸鹽緩沖劑。適宜的緩沖劑還包括碳酸鈉緩沖劑、碳酸鉀緩沖劑、碳酸氫鈉緩沖劑或碳酸氫鉀緩沖劑。尤其優(yōu)選磷酸鹽緩沖劑以及它們的組分。尤其優(yōu)選的磷酸鹽緩沖劑是磷酸二氫鈉緩沖劑。所述緩沖劑的濃度優(yōu)選在約0.01至約2.0M的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明的所述組合物可另外包含防腐劑。一般來(lái)講，可使用抑制微生物生長(zhǎng)并且為人體所容的任何類型的防腐劑。然而已發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)的對(duì)羥基苯甲酸酯類防腐劑為優(yōu)選的。尤其優(yōu)選名稱為對(duì)羥基苯甲酸甲酯(對(duì)羥基苯甲酸甲酯)和對(duì)羥基苯甲酸丙酯(對(duì)羥基苯甲酸丙酯)的防腐劑。每一種命名的防腐劑均可作為唯一的防腐劑使用。然而，還可能使用上述防腐劑的組合。以所述組合物的重量為基準(zhǔn)，所述防腐劑的用量大致為約0.001%至約1%重量。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，以所述組合物的重量為基準(zhǔn)，防腐劑的用量為約0.01%至約0.25%重量。除了任選的防腐劑以外，根據(jù)本發(fā)明的所述組合物還需要至少一種在酸性pH值下具有活性，并且優(yōu)選在低于4.0的pH值下具有活性的防腐劑。例如，所述防腐劑可以是有機(jī)酸。在酸性pH值下具有活性的代表性防腐劑可選自由下列物質(zhì)組成的組二氯芐醇、苯乙醇、亞硫酸酰、山梨酸、脫氫乙酸二溴己二腈、丙酸、水楊酸、甲酸、乙酸、乳酸、戊二醛。優(yōu)選地，所述防腐劑為苯甲酸或苯甲酸的衍生物，或可釋放出苯甲酸的物質(zhì)，包括苯甲酸的鹽。最優(yōu)選地，所述防腐劑為苯甲酸。通過(guò)在酸性pH值下向所述牙科用組合物中加入防腐劑，可獲得某些防腐效果。因此，所述組合物顯示出抗細(xì)菌特性并且可預(yù)防細(xì)菌污染。除了這種防腐功效以外，本發(fā)明組合物還達(dá)到了令人驚奇的協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)。如本領(lǐng)域中的技術(shù)人員所知，所述牙科用組合物根據(jù)成分可用于除去感染和/或壞死的牙質(zhì)和/或被感染的牙髓。它還可以抗細(xì)菌污染。在對(duì)牙科用組合物減少細(xì)菌的能力進(jìn)行測(cè)試后發(fā)現(xiàn)，根據(jù)協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)，本發(fā)明的組合物可在極短的處理時(shí)間內(nèi)使生齲齒細(xì)菌減少51og1Q量級(jí)以上。因此，此組合物不僅可用作高度有效地去除齲齒或牙髓處理后去除牙根管中牙髓、牙髓殘留物、壞死組織和/或牙髓玷污層的牙科用組合物。它還表現(xiàn)出防止細(xì)菌污染的保護(hù)作用。另外，由于其令人驚奇的有效抗菌特性，牙科從業(yè)者還可使用它以在齲齒去除后對(duì)已處理過(guò)的牙腔進(jìn)行消毒，和/或?qū)χ瞥傻难例X或基臺(tái)進(jìn)行清潔和/或消毒。根據(jù)其生物相容性，本發(fā)明的組合物顯示出超越本領(lǐng)域已知用于齲齒去除或齲齒消毒的組合物的優(yōu)勢(shì)。還可能將根據(jù)本發(fā)明的所述牙科用組合物用作牙髓區(qū)域或牙髓處理的沖洗液，和/或在去除牙髓后，用于對(duì)牙根管和/或牙根管壁微管進(jìn)行消毒。于是，可用一種組合物或在一個(gè)步驟中，將牙髓玷污層除去并且對(duì)牙髓區(qū)域進(jìn)行消毒。尤其有利的是，本發(fā)明組合物可用于上文所說(shuō)明的兩個(gè)步驟中。從而，可僅由一種組合物來(lái)去除壞死組織、齲齒組織和被感染牙質(zhì)、以及牙髓處理后牙根管中牙髓、牙髓殘留物和/或牙髓玷污層，并且提供對(duì)所處理區(qū)域的消毒作用。這些處理可僅在一個(gè)步驟中進(jìn)行，與用本領(lǐng)域已知的組合物所進(jìn)行的處理相比這是省時(shí)的。根據(jù)本發(fā)明的所述組合物可包含流變添加劑。有機(jī)增稠劑可成功地用作流變添加劑。這些包括但不限于淀粉、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯垸酮、黃原膠、甘油、羥乙基丙基纖維素、羥丁基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素和羥甲基纖維素鈉。甚至無(wú)機(jī)增稠劑如硅膠或頁(yè)硅酸鹽也是可能的?？墒褂脙煞N或更多種所述增稠劑的混合物。當(dāng)包含根據(jù)本發(fā)明的組合物的蛋白酶包含多糖作為流變添加劑時(shí)，這是優(yōu)選的。適宜的多糖是例如淀粉、甘露聚糖、黃原膠、藻酸鹽、carragen,果膠、聚乙烯吡咯垸酮、聚乙烯醇、羥乙基丙基纖維素、羥丁基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素或羥甲基纖維素鈉、以及它們兩種或更多種的混合物。在本發(fā)明的牙科用組合物中可使用溶劑。一般來(lái)講，可使用能夠溶解酶和其它組分但不會(huì)使酶變性和/或不會(huì)影響組合物中其它組分的任何溶劑。例如，可使用不會(huì)削弱酶活性的任何水基溶劑和有機(jī)溶劑。適宜的溶劑包括例如水，具有2至約10個(gè)C原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的飽和或不飽和的一元醇，酮、酉旨、羧酸、以及兩種或更多種所述類型溶劑的混合物。優(yōu)選的溶劑包括水和水-醇混合物。還可用作溶劑的是二烷基酮、醇或具有低粘度的可聚合物質(zhì)如聚乙二醇(PEG)、甲基丙烯酸羥乙酯或(2,3-環(huán)氧丙基)甲基丙烯酸酯、以及它們的混合物。其它適宜的有機(jī)溶劑包括甘油、二甲基亞砜、四氫呋喃、丙酮、甲基乙基酮、環(huán)己醇、甲苯、二氯甲垸、氯仿、垸烴和乙酸烷基酯，具體地講是乙酸乙酯。所述組合物可包含附加輔助劑，例如WO2004/017988中所公開的那些，如絡(luò)合劑、酶基質(zhì)或酶效應(yīng)物。根據(jù)本發(fā)明，酶效應(yīng)物包括酶活化劑以及酶抑制劑。為增強(qiáng)所述組合物的可儲(chǔ)存特性，向本發(fā)明組合物提供提供兩種組分A和B可為有利的，其中組分A包含溶劑、在酸性pH值下具有酶活性的酶、和緩沖劑，所述緩沖劑可提供的pH值高于酶具有最大活性處的pH值。組分A可具有中等酸性至弱酸性的pH值。例如，可將組分A的pH值調(diào)節(jié)到4.5至6.5的范圍內(nèi)。優(yōu)選將其調(diào)節(jié)到約5.0至6.0的范圍內(nèi)。組分B包含溶劑、緩沖劑體系和防腐劑，所述緩沖劑體系可提供的pH值等于或小于當(dāng)酶具有最大活性時(shí)的pH值，所述防腐劑在所述pH值下具有活性。該組分B可具有強(qiáng)酸性的pH值。例如，可將組分B的pH值調(diào)節(jié)到1.0至4.0的范圍內(nèi)。優(yōu)選將其調(diào)節(jié)到約1.5至3.5的范圍內(nèi)。由于能夠使組分A和B選擇不同的pH值，因此可獲得一些優(yōu)點(diǎn)。酶的穩(wěn)定性可得到增加。還可能在不同的組分中，加入不同的防腐劑。此外，一些添加劑在某些pH值下顯示出更好的溶解度和/或功效。因此，它們可被加入到具有更適宜的pH值的組分A或B中。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，組分A優(yōu)選包含水、在酸性pH值下具有酶活性的酶、磷酸鈉和氫氧化鈉、以及防腐劑，所述磷酸鈉和氫氧化鈉可提供的pH值高于當(dāng)酶具有最大活性時(shí)的pH值。組分B包含水、磷酸鈉和磷酸、以及防腐劑，所述磷酸鈉和磷酸可提供的pH值等于或小于當(dāng)酶具有最大活性時(shí)的pH值，所述防腐劑在所述pH值下具有活性。在根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，組分A可以下面的量包含以下組分胃蛋白酶磷酸鈉氫氧化鈉羥乙基纖維素對(duì)羥基苯甲酸甲酯:對(duì)羥基苯甲酸丙酯:水約0.1至約1.0重量％約0.6至約2.4重量％約0.001至約0.5重量Q/。約0.2至約1.0重量％約0.005至約0.05重量％約0.005至約1.0重量％加至100重量％在根據(jù)本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，組分B可以下面的量包含以下組分磷酸鈉磷酸聚乙二醇羥乙基纖維素苯甲酸鈉或苯甲酸:水約10至約20重量％約5至約10重量％約2至約5重量％約0,2至約1.0重量％約0.01至約2.0重量％加至100重量％根據(jù)本發(fā)明的所述牙科用組合物可用于除去齲齒牙質(zhì)和/或壞死的組織。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，它可在牙髓處理諸如去除牙髓和制成牙根管后被用于去除牙髓、牙髓玷污層和/或牙髓殘留物。本發(fā)明的組合物具有有利的生物相容性。它還可被用于對(duì)齲齒進(jìn)行消毒，和/或?qū)?zhǔn)備好的牙齒或基臺(tái)進(jìn)行清潔和/或消毒。這種消毒作用可防止齲齒在將填充材料放置到齲齒中后再次感染，并且如果齲病處于晚期，其可防止牙髓感染。對(duì)假牙修復(fù)目的而言，在牙齒制成后對(duì)基臺(tái)進(jìn)行清潔是有利的，因?yàn)檫@可快速去除玷污層和/或變性膠原殘留物。它還可用作牙髓沖洗液和/或用于對(duì)牙根管、牙根管壁微管和/或牙髓區(qū)域進(jìn)行消毒。實(shí)例當(dāng)在給定的處理時(shí)間期間，使大于99.999%的原有微生物失活(這相當(dāng)于5log10量級(jí)(DGHM，ListofDisinfectants,2003))則認(rèn)為微生物消毒方法是有效的。因此，可在給定的處理時(shí)間內(nèi)或更快地使生齲齒細(xì)菌減少51og1Q量級(jí)以上的齲齒去除體系是高度有效的。用生齲類鏈球菌和乳酸菌中的致酸菌株來(lái)評(píng)測(cè)本發(fā)明的抗菌作用。建立實(shí)驗(yàn)體系，其可用于夠檢測(cè)510g1Q量級(jí)以上的細(xì)菌含量縮減量。轉(zhuǎn)糖鏈球菌DSM20523和干酪乳桿菌DSM5622得自DSMZ，Braunschweig,并且通過(guò)分別覆蓋在Columbia/血瓊脂(Oxoid)和Rogosa-瓊脂(Oxoid)上，來(lái)進(jìn)行存貯培養(yǎng)。使用單一菌落，來(lái)接種10mL在37。C下培養(yǎng)的腦心浸液(BHI)。用1%至2%的10mL培養(yǎng)菌來(lái)培養(yǎng)100mL，使其生長(zhǎng)，直至相穩(wěn)定，并通過(guò)離心濃縮。根據(jù)實(shí)例，通過(guò)將100tU濃縮的細(xì)菌懸浮液(轉(zhuǎn)糖鏈球菌或干酪乳桿菌)加入到900lU各自溶液中來(lái)開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。隨著各自的溶液加入細(xì)菌懸浮液中，失活反應(yīng)開始了。在溫度調(diào)節(jié)裝置中，使混合物平衡至37°C。在指定的時(shí)間間隔后，取出lOOul樣本，并且與營(yíng)養(yǎng)液混合，以終止失活反應(yīng)。對(duì)照實(shí)驗(yàn)顯示，營(yíng)養(yǎng)液可有效地終止失活反應(yīng)，因?yàn)榫湫纬蓡挝?-CFU)沒有出現(xiàn)進(jìn)一步的降低。通過(guò)將適宜的稀釋液覆蓋在瓊脂板上，來(lái)測(cè)定以CFU為單位的細(xì)菌濃度。由每個(gè)實(shí)驗(yàn)中CFU的縮減量來(lái)測(cè)定各自溶液的功效。細(xì)菌縮減量以log1Q縮減量來(lái)表示。根據(jù)log1Q(CFU+l)to-loglQ(CFU+l)tx(Paddick等人，2003，"Appl.EnvironMicrobiol"71:2467-2472)，來(lái)計(jì)算Log縮減量。對(duì)于每個(gè)實(shí)驗(yàn)，tQ代表起始時(shí)(t=0)的樣本，而tx代表給定時(shí)間點(diǎn)處的樣本。在所有坐標(biāo)圖的Y軸上，這被描述為"縮減量(lOgl0CFU/mL)"。實(shí)例1:通過(guò)混合以下物質(zhì)來(lái)制備水溶液A:成分濃度[重量％]磷酸鈉1.5氫氧化鈉<0.10/o羥乙基纖維素0.5胃蛋白酶0.9對(duì)羥基苯甲酸甲酯0.07對(duì)羥基苯甲酸丙酯0.02水加至100除了氫氧化鈉以外，將所有成分混合在一起，然后逐滴加入氫氧化鈉，以將溶液A的pH值調(diào)節(jié)至5.5。通過(guò)混合以下物質(zhì)來(lái)制備水溶液B:成分磷酸鈉磷酸濃度[重量％]聚乙二醇200羥乙基纖維素苯甲酸鈉水加至100除了磷酸以外，將所有成分混合在一起，然后緩慢加入磷酸，以將溶液B的pH值調(diào)節(jié)至2.1。將溶液A和B以A:B為1:3的比率混合。所得牙科用組合物(實(shí)例i)用于如下所述的實(shí)例2、3和4中。比較實(shí)例1如下制備比較實(shí)例(比較實(shí)例1):通過(guò)混合以下物質(zhì)來(lái)制備水溶液A':除了氫氧化鈉以外，將所有成分混合在一起，然后逐滴加入氫氧化鈉，以將溶液A'的pH值調(diào)節(jié)至5.5。通過(guò)混合以下物質(zhì)來(lái)制備溶液B':成分磷酸鈉氫氧化鈉水濃度[重量％]<0.1%加至100成分磷酸鈉磷酸<6水加至100除了磷酸以外，將所有成分混合在一起，然后緩慢加入磷酸，以將溶液B'的pH值調(diào)節(jié)至2.1。將溶液A'和B'以A':B'為1:3的比率混合。所得比較組合物(比較實(shí)例1)用于如下所述的實(shí)例2、3中。實(shí)例2:為表明實(shí)例1和比較實(shí)例1抗生齲性細(xì)菌的抗菌作用，實(shí)施下列實(shí)例2。將兩種溶液均加入到如上所述的濃縮細(xì)菌懸浮液中。所示出的值是處理后可監(jiān)測(cè)到細(xì)菌處的平均值(SD)。帶有"〉"標(biāo)記的值代表處理后細(xì)菌無(wú)法培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)。因此，帶有">5"標(biāo)記的值代表可重復(fù)殺滅量超過(guò)5-l0g1Q單位的實(shí)驗(yàn)。"N/D"表示未測(cè)定。實(shí)例1和比較實(shí)例1抗生齲性細(xì)菌的Log,o-縮減量[logCFU/mL]<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>從得自此處的數(shù)據(jù)可以看出，實(shí)例1在1分鐘后已顯示出大幅度的細(xì)菌縮減量。相反，比較實(shí)例1在1分鐘后表現(xiàn)無(wú)細(xì)菌縮減量，并且在給定的5分鐘時(shí)限內(nèi)，僅有少量的縮減量。實(shí)例3:對(duì)于以下物質(zhì)，在2分鐘(圖l)和5分鐘(圖2)后，分別測(cè)定實(shí)例1中單獨(dú)成分的抗菌作用。Pep=胃蛋白酶PEG=聚乙二醇200Benz-苯甲酸鈉PHB=對(duì)羥基苯甲酸甲酯/丙酯從而制備混合物，所述混合物包含比較實(shí)例1中的成分，以及一種指定物質(zhì)(Pep、PEG、Benz、PHB)。每種指定物質(zhì)的濃度等于實(shí)例1中的那些濃度。根據(jù)比較實(shí)例1，相應(yīng)減少水的濃度。在所有縮減量大于5log1()單位的實(shí)驗(yàn)中，均達(dá)到了檢測(cè)限。因此，log縮減量大于所述值。從結(jié)果可以看出，2分鐘后以及5分鐘后，抗菌作用無(wú)法歸因于任何單一成分，相反，制劑的協(xié)同作用是強(qiáng)力抗細(xì)菌功效的基礎(chǔ)。比較實(shí)例2:如下制備比較實(shí)例(比較實(shí)例2):通過(guò)混合以下物質(zhì)來(lái)制備水溶液A":成分磷酸鈉氫氧化鈉羥乙基纖維素胃蛋白酶對(duì)羥基苯甲酸甲酯濃度[重量％]1.5<0.1%0.50.90,07對(duì)羥基苯甲酸丙酯水0.02加至100除了氫氧化鈉以外，將所有成分混合在一起，然后逐滴加入氫氧化鈉，以將溶液A"的pH值調(diào)節(jié)至5.5。通過(guò)混合以下物質(zhì)，來(lái)制備溶液B":成分磷酸鈉磷酸聚乙二醇200羥乙基纖維素水濃度[重量％]15<640.5加至100除了磷酸以外，將所有成分混合在一起，然后緩慢加入磷酸，以將溶液B"的pH值調(diào)節(jié)至2.0。將溶液A"和B"以A":B"為1:3的比率混合。所得比較組合物(比較實(shí)例2)用于如下所述的實(shí)例4中。實(shí)例4:對(duì)照WO2004/017988中公開的比較實(shí)例2，對(duì)實(shí)例1進(jìn)行測(cè)試。在所有標(biāo)記*的實(shí)驗(yàn)中，均達(dá)到了檢測(cè)限。因此，log1Q縮減量大于所述值。權(quán)利要求1.一種牙科用組合物，所述組合物包含在酸性pH值下具有酶活性的酶、提供酸性pH值的緩沖劑、以及一種或多種防腐劑，其中至少一種防腐劑在酸性pH下具有活性。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牙科用組合物，其中所述酶在小于4.0的pH值或pH范圍內(nèi)具有酶活性，并且所述緩沖劑提供所述pH值或所述pH范圍。3.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，其中至少一種所述防腐劑選自由下列物質(zhì)組成的組苯甲酸、苯甲酸衍生物、或可釋放苯甲酸的化合物。4.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，其中至少一種所述防腐劑為苯甲酸。5.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，其中所述緩沖劑為磷酸鹽緩沖劑。6.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，其中所述酶選自由蛋白酶組成的組。7.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，其中所述酶為胃蛋白酶。8.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，所述組合物另外包含流變添加劑和/或溶劑和/或在pH高于4.0時(shí)具有活性的防腐劑。9.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，所述組合物包含磷酸鈉、磷酸、氫氧化鈉、聚乙二醇200、羥乙基纖維素、胃蛋白酶、苯甲酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯和水。10.—種牙科用組合物，所述組合物包含兩種組分A和B，其中組分A包含溶劑、在酸性pH值下具有酶活性的酶、以及緩沖劑，所述緩沖劑可提供的pH值高于所述酶具有最大活性時(shí)的pH值；并且組分B包含溶劑、緩沖劑和防腐劑，所述緩沖劑可提供的pH值等于或小于所述酶具有最大活性時(shí)的pH值，并且所述防腐劑在所述pH值下具有活性。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的牙科用組合物，其中組分A包含可提供約5至6pH值的緩沖劑，并且組分B包含可提供約1.5至3.5pH值的緩沖劑。12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的牙科用組合物，所述組合物包含兩種組分A和B，其中組分A包含水、在酸性pH值下具有酶活性的酶、作為緩沖劑的磷酸鈉和氫氧化鈉、以及防腐劑；并且組分B包含水、作為緩沖劑的磷酸鈉和磷酸、以及在所述pH值下具有活性的防腐劑。13.根據(jù)權(quán)利要求10至12中任一項(xiàng)所述的牙科用組合物，其中至少一種所述防腐劑選自由下列物質(zhì)組成的組苯甲酸、苯甲酸衍生物、或可釋放苯甲酸的化合物。14.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，其中所述溶液用于除去齲齒牙質(zhì)和/或?qū)λ鳊x齒進(jìn)行消毒。15.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，其中所述溶液用作牙髓沖洗液和/或用于對(duì)所述牙根管進(jìn)行消毒。16.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的牙科用組合物，其中所述溶液用于對(duì)制成的牙齒或基臺(tái)進(jìn)行清潔和/或消毒。全文摘要本發(fā)明涉及牙科用組合物，所述組合物包含在酸性pH值下具有酶活性的酶、提供酸性pH值的緩沖劑、以及一種或多種防腐劑，其中至少一種防腐劑在酸性pH下具有活性。文檔編號(hào)A61K6/033GK101257885SQ200680032301公開日2008年9月3日申請(qǐng)日期2006年8月16日優(yōu)先權(quán)日2005年8月17日發(fā)明者奧利弗·卡普勒,英戈·R·黑貝爾萊因申請(qǐng)人:3M創(chuàng)新有限公司