一種豬肉中過(guò)氧化物酶的快速定量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品衛(wèi)生與安全技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種豬肉中過(guò)氧化物酶的快速定 量檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著社會(huì)發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，各國(guó)政府和消費(fèi)者對(duì)食品安全問題日 益關(guān)注。如何保證食品安全，確保食品消費(fèi)者的健康，已成為政府主管部門、肉類食品生產(chǎn) 部門以及食品檢驗(yàn)檢疫工作者共同思考的問題。
[0003] 病死豬肉是指法律法規(guī)規(guī)定的，患有對(duì)人體有害的傳染性疾病、寄生蟲病和中毒 性疾病的生豬，非經(jīng)屠宰死亡的生豬以及經(jīng)檢疫檢驗(yàn)不合格、不能食用的豬肉及其肉類產(chǎn) 品。對(duì)于市場(chǎng)上來(lái)源復(fù)雜的病死豬肉及其產(chǎn)品，我國(guó)現(xiàn)行的病死豬肉的檢測(cè)和鑒別還相當(dāng) 缺乏。
[0004] 肉品的衛(wèi)生檢驗(yàn)是一個(gè)比較復(fù)雜的過(guò)程，主要包括肉品新鮮度檢驗(yàn)和肉品健康度 檢驗(yàn)。目前市場(chǎng)檢疫中心對(duì)于病死豬肉的檢驗(yàn)方法主要包括感官檢驗(yàn)、理化檢驗(yàn)和細(xì)菌學(xué) 檢驗(yàn)。
[0005] 感官檢驗(yàn)主要包括視檢、嗅檢和觸檢，主要檢查肉品的殺口狀態(tài)、放血程度、血液 墜積情況、組織和淋巴結(jié)病理變化以及肉品異常氣味等。檢驗(yàn)方法雖然簡(jiǎn)單，但多憑經(jīng)驗(yàn)判 斷且主觀性較強(qiáng)，對(duì)一些隱性感染和無(wú)臨床癥狀的染疫肉品很難檢出，肉品檢出合格率低。 細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)主要檢查肉品所含有的致病細(xì)菌的種類和數(shù)量，細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)條件要求 嚴(yán)格，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)有一定要求，難以達(dá)到快速或現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)病死畜禽肉的目的。
[0006] 理化檢驗(yàn)方法主要有PH值測(cè)定法、過(guò)氧化物酶法、硫酸銅蛋白沉淀法、細(xì)菌內(nèi)毒素 氧化呈色法等，這些方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)，均可以從某些側(cè)面反映肉品的健康狀況。其中硫酸 銅蛋白沉淀法和細(xì)菌內(nèi)毒素氧化呈色法是定性檢驗(yàn)病死畜禽肉的主要方法，雖然檢測(cè)效果 相對(duì)較好，但是只能滿足定性檢測(cè)的要求，有較大的主觀性，并且檢驗(yàn)程序較為復(fù)雜;其他 化學(xué)顯色的方法也是通過(guò)簡(jiǎn)單的目測(cè)和經(jīng)驗(yàn)比較方式對(duì)病死畜禽肉的性質(zhì)和情況進(jìn)行判 斷，無(wú)法提供準(zhǔn)確的圖譜和定量化數(shù)據(jù)，科學(xué)性和準(zhǔn)確性較差。
[0007] 因此在建立健全畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全管理體系的基礎(chǔ)上，建立一種病死豬肉標(biāo)準(zhǔn)化 的快速檢測(cè)技術(shù)和方法，已成為我國(guó)迫切需要解決的重要問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，其目的在于提供一種豬肉中過(guò)氧化物酶的快速定量 檢測(cè)方法。
[0009] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
[0010] -種豬肉中過(guò)氧化物酶的快速定量檢測(cè)方法，其特征在于，所述的檢測(cè)方法包括 以下步驟：
[0011] (1)配制一系列以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)準(zhǔn)酶的標(biāo)準(zhǔn)酶溶液；
[0012] (2)以過(guò)氧化脲為反應(yīng)底物，以3,3'，5,5'_四甲基聯(lián)苯胺為顯色劑，以磷酸二氫鈉 緩沖液為緩沖液，分別測(cè)試步驟（1)中所配制的標(biāo)準(zhǔn)酶溶液，測(cè)試的反應(yīng)溫度為20-30°C，反 應(yīng)pH值為4.0-5.0，反應(yīng)時(shí)間為30-90s，反應(yīng)結(jié)束后加入稀硫酸溶液，終止反應(yīng)，獲得反應(yīng)產(chǎn) 物溶液；
[0013] ⑶將各反應(yīng)產(chǎn)物溶液置于紫外分光光度計(jì)中，在450nm的吸收波長(zhǎng)下分別測(cè)定其 0D值，獲得辣根過(guò)氧化物酶濃度-0D值的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0014] (4)測(cè)試待測(cè)豬肉中過(guò)氧化物酶反應(yīng)后其反應(yīng)產(chǎn)物溶液的0D值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì) 算出豬肉中過(guò)氧化物酶的濃度。
[0015] 步驟(1)中所述標(biāo)準(zhǔn)酶溶液的濃度為〇. 001-0.128yg/mL。
[0016] 步驟(2)中所述的過(guò)氧化脲的濃度為0.94g/100mL，3,3'，5,5'_四甲基聯(lián)苯胺的濃 度為0.15g/100mL，磷酸二氫鈉緩沖液的濃度為lg/mL，pH值為4.0-5.0。
[0017] 步驟(2)中所述反應(yīng)溫度為25°C，反應(yīng)pH值為4.5，反應(yīng)時(shí)間為60s。
[0018] 步驟(2)所述稀硫酸溶液的濃度為1 -3mo1 /L。
[0019] 步驟(4)中所述待測(cè)豬肉中過(guò)氧化物酶的提取步驟為：
[0020] (1)豬肉樣品的采集:豬肉樣品按照通脊肉、五花肉、前臀尖、前腿肉、后臀尖和后 腿肉的六個(gè)部位等份采集豬肉樣品；
[0021] (2)豬肉中過(guò)氧化物酶提取液的制備:采集后的豬肉樣品分別去除脂肪和結(jié)締組 織后，剪碎均勻，加入3-8倍豬肉樣品量的蒸餾水?dāng)嚢杈鶆蚝?，置于搖床上搖晃15-25min，過(guò) 濾，濾液即為待測(cè)豬肉中過(guò)氧化物酶的提取液。
[0022]所述檢測(cè)方法中待測(cè)豬肉的存放時(shí)間不超過(guò)3d。
[0023] 所述檢測(cè)方法待測(cè)豬肉中病死豬肉的過(guò)氧化氫酶含量高于健康豬肉中過(guò)氧化氫 酶的含量。
[0024] 本發(fā)明的有益效果為：所述的檢測(cè)方法是豬肉中過(guò)氧化物酶快速定量的檢測(cè)方 法，最低檢測(cè)限為〇.〇〇lyg/mL，符合方法學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，且檢測(cè)方式簡(jiǎn)單易行，可以用于農(nóng)貿(mào) 市場(chǎng)上病死豬肉的檢測(cè)與鑒別，以評(píng)定農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)豬肉的品質(zhì)。
【附圖說(shuō)明】
[0025] 圖1為辣根過(guò)氧化物酶濃度-0D值的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，以下的實(shí)施例便于更好地理解本 發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法;所用的 材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0027] 實(shí)施例1:辣根過(guò)氧化物酶濃度-0D值標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
[0028] 取辣根過(guò)氧化物酶，分別配置濃度為0·001、0·002、0·004、0·008、0·016、0·032、 0.064、0.128yg/mL的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0029] 在比色皿中依次加入磷酸二氫鈉緩沖液（18/11^，？!14.5)211^，過(guò)氧化脲（0.94 8/ 1OOmL) 0.2mL，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)液0.2mL，3，3 '，5，5 ' -四甲基聯(lián)苯胺（TMD) (0.15g/ 100mL)0.2mL后，在25°C下反應(yīng)60s，然后加入稀硫酸溶液(2mol/L)0.lmL終止反應(yīng)；
[0030]將各反應(yīng)產(chǎn)物溶液置于紫外分光光度計(jì)中，在450nm的吸收波長(zhǎng)下測(cè)定其0D值，每 個(gè)濃度測(cè)定3次，取其平均值，以等量的生理鹽水代替TMD溶液作為空白對(duì)照。以0D值為橫坐 標(biāo)，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1