專(zhuān)利名稱(chēng)：藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物，具體地，涉及藥物組合物。盡管利用本發(fā)明可以治療許多其它疾病，但認(rèn)為該藥物特別適合治療神經(jīng)疾病。本發(fā)明的各個(gè)方面還涉及制備這種藥物的方法，利用所述藥物治療疾病的方法。
背景技術(shù)：
PCT公開(kāi)號(hào)WO03/004049和WO03/064472描述了基于具有很多令人驚訝的有益功效的血清組合物的治療劑和治療。這兩份申請(qǐng)中每一份的各自?xún)?nèi)容通過(guò)特別參考全文結(jié)合于此。具體地，讀者參考它們來(lái)理解可以如何制備治療劑，及了解可以治療的疾病。
典型地，用在H9細(xì)胞中產(chǎn)生的HIV-3B病毒裂解物來(lái)免疫山羊。認(rèn)為得到的血清對(duì)多發(fā)性硬化，連同其它疾病是有活性的。讀者可具體參考WO03/004049的第3和第4頁(yè)標(biāo)題為“產(chǎn)生山羊血清的實(shí)施例”來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)了解血清的制備。該部分通過(guò)參考結(jié)合于此。下面提供了簡(jiǎn)述。
血清的制備在無(wú)菌技術(shù)下采取山羊血液約400cc。一旦血液的體積得到補(bǔ)充，可以典型地在10-14天對(duì)動(dòng)物進(jìn)行再采血。預(yù)采血方案對(duì)于刺激產(chǎn)生血清的活性成分是有用的。然后將血液離心，以分離血清，并將血清過(guò)濾以去除大的凝塊和特殊的物質(zhì)。然后用過(guò)飽和的硫酸鈉處理血清(47％溶液，于4℃)，以沉淀抗體和其它物質(zhì)。將得到的溶液在Beckman J6/ME離心機(jī)中于3500rpm離心45分鐘，然后去除上清液。將沉淀的免疫球蛋白和其它固體物質(zhì)重懸于PBS緩沖液(磷酸鹽緩沖液)中，所述緩沖液足以再溶解沉淀。
然后將溶液于4℃進(jìn)行針對(duì)PBS緩沖液的滲濾，截留分子量為10,000道爾頓。滲濾后，將產(chǎn)品經(jīng)0.2微米濾器過(guò)濾到無(wú)菌容器中，并將蛋白濃度調(diào)整到4mg/ml。將溶液置于小瓶中，以提供1ml的單一劑量，在使用前貯存于-22℃。在此處將該產(chǎn)品稱(chēng)為血清組合物，組合物或產(chǎn)品，而對(duì)患者的處理涉及通過(guò)適當(dāng)途徑(通常是經(jīng)皮下)對(duì)患者施用組合物。
不認(rèn)為使用HIV-3B病毒裂解物作為免疫原是產(chǎn)生活性血清所必需的；認(rèn)為已用于生長(zhǎng)病毒培養(yǎng)物或適于該生長(zhǎng)的培養(yǎng)基當(dāng)被用作免疫原時(shí)也可產(chǎn)生合適的應(yīng)答。細(xì)胞培養(yǎng)物生長(zhǎng)培養(yǎng)基的上清液如PBMC或用于生長(zhǎng)HIV-3B的癌癥無(wú)限增殖細(xì)胞系是給出的實(shí)例。不需要存在HIV或其它病毒以產(chǎn)生有效的免疫原來(lái)產(chǎn)生組合物。其它合適的免疫原在WO03/064472的第12和13頁(yè)中提及。
可以使用熱原性物質(zhì)(如RIBI或Freund’s佐劑)以促進(jìn)產(chǎn)生血清中的活性組分。另一種可能的因素是將動(dòng)物暴露于日光，更長(zhǎng)的日光時(shí)間(或暴露于日光等價(jià)物)可增加活性組分血清水平。
血清組合物的應(yīng)用認(rèn)為該組合物對(duì)于許多疾病是有效的，特別是多發(fā)性硬化。在前述的出版物中還提及了該組合物在治療炎性疾病如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；視神經(jīng)炎；運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾??；自身免疫疾?。惠S突或神經(jīng)損傷；和癌癥是有效的。還認(rèn)為該組合物在HIV患者中導(dǎo)致病毒負(fù)荷的降低，并增加CD4+細(xì)胞。
描述了可用該組合物治療的幾種其它疾病，讀者可參考這些早期出版物來(lái)全面理解可以治療的病癥的范圍和性質(zhì)。具體地，WO03/004049和WO03/064472的內(nèi)容通過(guò)參考特別結(jié)合于此。
除了那些上述提及的疾病以外，認(rèn)為血清組合物對(duì)非窮舉性列舉的疾病是有效的，所述疾病包括癌癥，特別是骨髓瘤，黑素瘤和淋巴瘤；心血管疾??；和神經(jīng)疾病，脫髓鞘和非脫髓鞘的。
按照本發(fā)明可以治療的疾病的實(shí)例包括腦血管局部缺血性疾??；阿爾茲海默氏??；亨廷頓舞蹈??；混合性結(jié)締組織??；硬皮??；過(guò)敏性反應(yīng)；感染性休克；心臟炎和心內(nèi)膜炎；傷口愈合；接觸性皮炎；職業(yè)肺病；腎小球腎炎；移植排斥；顳動(dòng)脈炎；脈管炎疾?。桓窝?；和燒傷。所有這些疾病可具有炎性組分，但認(rèn)為基于疾病的非脫髓鞘的方面而言又是可治療的。其它的可治療的、認(rèn)為具有退行性組分的非脫髓鞘的疾病包括多系統(tǒng)萎縮；癲癇??；肌肉萎縮癥；精神分裂癥；雙相型障礙；和抑郁。其它可治療的非脫髓鞘疾病包括channelopathies；myaesthenia gravis；由于惡性腫瘤的疼痛；慢性疲勞綜合征；纖維肌炎；腸易激綜合征；工作相關(guān)的上肢疾??；從集性頭痛；偏頭痛；和慢性日常性頭痛。
可治療的脫髓鞘疾病包括神經(jīng)系統(tǒng)的感染；神經(jīng)包埋和局部損傷；創(chuàng)傷性脊髓損傷；臂叢病(先天的和創(chuàng)傷性的，臂神經(jīng)炎，parsonage turnersyndrome，神經(jīng)痛肌萎縮)；神經(jīng)根?。籧hannelopathies；和三叉神經(jīng)痛。
該組合物可以用于治療自身免疫疾病，包括狼瘡，銀屑病，濕疹，甲狀腺炎和多肌炎。
還認(rèn)為該組合物對(duì)炎性疾病是有效的。
該組合物用于治療所有種類(lèi)的軸突和脫髓鞘型的外周神經(jīng)病，包括所有類(lèi)型的運(yùn)動(dòng)和感官神經(jīng)??；進(jìn)行性神經(jīng)病性肌萎縮(CMT)型CMT1A，CMT1B，CMT2，CMT3(進(jìn)行性肥大性間質(zhì)性神經(jīng)病)，CMT4(類(lèi)型A，B C和D)，X-連接的進(jìn)行性神經(jīng)病性肌萎縮(CMTX)；具有對(duì)壓力性癱瘓具有易感性的遺傳性神經(jīng)病(HNPP)-也稱(chēng)為臘腸樣神經(jīng)?。痪哂卸@-Lorn的遺傳性運(yùn)動(dòng)和感官神經(jīng)病(HMSNL)；進(jìn)端遺傳性運(yùn)動(dòng)和感官神經(jīng)病/神經(jīng)元病(HMSNP)；遺傳性神經(jīng)痛肌萎縮；遺傳性感官和自主神經(jīng)病(HSAN1，HSAN2，HSAN3(也稱(chēng)為賴(lài)?yán)?戴綜合征或家族性自主神經(jīng)異常)，HSAN4，HSAN5)；家族性淀粉樣多神經(jīng)病(類(lèi)型I，類(lèi)型II，類(lèi)型III，類(lèi)型IV)；異染性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良；克拉貝??；法布萊??；腎上腺腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良；雷弗素姆病(HMSN IV)；丹吉爾??；弗里德賴(lài)希共濟(jì)失調(diào)；脊柱腦共濟(jì)失調(diào)(SCA)所有類(lèi)型-SCA1，SCA2，SCA3，SCA4，SCA5，SCA6，SCA7，SCA8，SCA10，SCA11，SCA12，SCA13，SCA14，SCA16；脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)；科克因綜合征；和巨軸突神經(jīng)病。
該組合物還可用于治療慢性炎性和脫髓鞘多神經(jīng)病(CIDP)和急性熱病性多神經(jīng)炎。
該組合物還具有抗血管生成性能，其由分子血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)和血小板因子-4(PF-4)導(dǎo)致。
認(rèn)為該組合物還有效用于治療動(dòng)物，特別是，但是非排他的，治療犬異位皮炎，犬口黑素瘤和馬肺病。
血清的性質(zhì)盡管血清組合物顯示了很多令人驚訝的功效，并已被廣泛地研究，直到目前仍未鑒定血清的活性組分。這對(duì)于分離活性組分以進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)活性組分的可能的備選來(lái)源方面已經(jīng)是不利的。而且，已經(jīng)必需以血清方式對(duì)患者進(jìn)行治療，其需要注射，并對(duì)組合物的處理和加工強(qiáng)加了某些限制。認(rèn)為血清具有對(duì)蛋白酶降解敏感的生物活性組分。
我們目前已鑒定了血清的許多潛在的活性組分。該鑒定允許制備新的包含各種形式的一種或多種活性組分的藥物組合物，和利用活性組分來(lái)治療一種或多種上述提及和在我們?cè)缙趯?zhuān)利申請(qǐng)?zhí)峒暗募膊??；诨钚越M分和不僅僅基于血清本身，該鑒定還開(kāi)辟了新的治療各種疾病的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及在被治療的患者中引發(fā)分子級(jí)聯(lián)的生物活性組合物。
依照本發(fā)明的第一方面，提供了一種藥物組合物，其包含促腎上腺皮質(zhì)激素釋放素(CRF)肽。CRF也已知為促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)。
CRF是在下丘腦中產(chǎn)生的肽，認(rèn)為其參與應(yīng)激反應(yīng)。人CRF詳細(xì)描述于OMIM的目錄122560(人的在線(xiàn)孟德?tīng)栠z傳，可通過(guò)http://www.ncbi.nlm.nih.gov/進(jìn)入)。也已知人CRF的核苷酸和氨基酸序列，其GENBANK登記號(hào)為BC011031。人CRF序列和大小數(shù)據(jù)的知識(shí)允許技術(shù)人員確定非人CRF包括山羊CRF的等價(jià)信息。
“CRF肽”表示具有相應(yīng)序列、結(jié)構(gòu)或功能的任何肽。對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員明顯的是上述GENBANK登記號(hào)的人CRF的標(biāo)準(zhǔn)核苷酸和/或氨基酸序列可以被改變到一定程度而不影響肽的結(jié)構(gòu)或功能。特別地，該定義包括等位基因變體和功能突變體。突變體可以包括保守性氨基酸取代；和CRF的片段和衍生物。
認(rèn)為對(duì)患者施用CRF刺激內(nèi)源性CRF的產(chǎn)生，其反過(guò)來(lái)又刺激阿皮素原(POMC)和其相關(guān)組分肽的產(chǎn)生。
POMC是在垂體腺(以及許多其它器官，某些腫瘤如黑素瘤和正常皮膚細(xì)胞)中產(chǎn)生的肽(激素原)，其是一組對(duì)宿主發(fā)揮許多功效的促皮質(zhì)激素的前體。POMC是α、β和γ促黑素細(xì)胞激素(MSH)、促皮質(zhì)素(ACTH)、β和γ促脂解素(LPH)和β內(nèi)啡肽的前體。這些激素全部是從一個(gè)單一的大前體POMC切割而成，并在此處稱(chēng)為“POMC產(chǎn)物”。
優(yōu)選的藥物組合物包括非人CRF；適宜的有蹄動(dòng)物CRF；和最優(yōu)選山羊CRF。已經(jīng)令人驚訝地鑒定了山羊血清包括CRF，特定是當(dāng)山羊被物理性應(yīng)力所刺激的時(shí)候，如放血或免疫。這提供了用于本發(fā)明藥物組合物的CRF的方便的來(lái)源。還認(rèn)為CRF在患者體內(nèi)可具有自身維持作用，因?yàn)槭┯脝⑹剂康腃RF導(dǎo)致CRF在患者中的內(nèi)源性產(chǎn)生；因此，啟始施用低水平的CRF可對(duì)患者具有重要作用，包括增加POMC肽的水平。
本發(fā)明的藥物組合物的施用可通過(guò)口服或胃腸外施用來(lái)進(jìn)行。胃腸外遞送的方法包括局部、內(nèi)動(dòng)脈、肌肉內(nèi)、皮下、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或鼻內(nèi)施用。除了活性成分，該組合物可包含合適的藥用載體，包括賦形劑和其它組分，其促進(jìn)將活性化合物加工成使用藥物施用的制劑形式。
可利用在本領(lǐng)域已知的藥用載體將用于口服施用的藥物組合物配制成使用口服施用的劑量。這樣的載體能將組合物配制成片劑，丸劑，糖錠劑，膠囊，液體，凝膠，糖漿，結(jié)晶漿液，混懸液等，適于患者攝入。
可以通過(guò)將活性化合物組合以固體賦形劑，在如果需要添加合適的另外的化合物以獲得片劑或糖錠劑核之后，任選研磨得到的混合物，加工顆粒的混合物，獲得用于口服應(yīng)用的藥物制劑。合適的賦形劑包括糖或蛋白質(zhì)填料，如糖，包括乳糖，蔗糖，甘露醇，山梨醇，來(lái)自玉米、小麥、水稻、馬鈴薯、或其它植物的淀粉；纖維素，如甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，或羧甲基纖維素鈉；和樹(shù)膠包括阿拉伯樹(shù)膠和黃芪膠；以及蛋白質(zhì)明膠和膠原蛋白。如果需要，可以添加崩解劑或增溶劑，如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂，海藻酸或其鹽。
可對(duì)糖錠劑核提供合適的包衣，如濃縮的糖溶液，其還可包含阿拉伯樹(shù)膠，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，卡波普凝膠，聚乙二醇，二氧化鈦，漆溶液，和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物?？蓪⑷玖匣蝾伭咸砑拥狡瑒┗蛱清V劑包衣，以用于產(chǎn)品鑒定或表征活性化合物的量。
可以口服使用的藥物制劑包括由明膠制備的壓入混合(push-fit)膠囊，以及由明膠和包衣如甘油或山梨醇制備的軟、密封的膠囊。壓入混合膠囊可包含活性成分，其混合以填料或粘結(jié)劑如乳糖或淀粉，潤(rùn)滑劑如滑石或硬脂酸鎂，和任選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，活性化合物可被溶解或懸浮在合適的液體中，如脂肪油，液體石蠟，或液體聚乙二醇，具有或不具有穩(wěn)定劑。
用于胃腸外施用的藥物制劑包括活性化合物的水溶液。為了注射，可將本發(fā)明的藥物組合物配制成水溶液，優(yōu)選生理可接受的緩沖液如Hank’s溶液，Ringer’s溶液或生理鹽水。水性混懸液注射液可包含增加混懸液粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉，山梨醇或葡聚糖。另外，活性化合物的混懸液可被制備為適當(dāng)?shù)挠托宰⑸浠鞈乙?。合適的脂性溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質(zhì)體。任選的，混懸液還可包括合適的穩(wěn)定劑或增加化合物的溶解度以允許制備高濃度的溶液的試劑。
對(duì)于局部或鼻內(nèi)施用，可在制劑中使用適于穿透特定屏障的滲透劑。
基本上按照本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)制備程序可制備本發(fā)明的藥物組合物。
該組合物還可包含一種或多種肽調(diào)節(jié)或釋放因子，其可誘導(dǎo)患者的各種細(xì)胞對(duì)另外的肽的級(jí)聯(lián)釋放。這類(lèi)另外的因子優(yōu)選源自與CRF相同的來(lái)源，特別是山羊血清。其中，合適的因子包括α-HLA，TGF-β，和IL-10。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該組合物可包括一種或多種加壓素，β內(nèi)啡肽和腦啡肽。在某些實(shí)施方案中，該組合物可包含CRF結(jié)合蛋白，CRF-BP。其結(jié)合CRF并且可作為存儲(chǔ)庫(kù)對(duì)患者進(jìn)行CRF的隨后釋放。
該組合物還可包含POMC肽或POMC產(chǎn)物；某些POMC產(chǎn)物對(duì)患者施用可有效刺激進(jìn)一步產(chǎn)生，或其可有效用于在產(chǎn)生內(nèi)源POMC前獲得理想的應(yīng)答。
人POMC詳細(xì)描述于OMIM的目錄號(hào)176830(人在線(xiàn)孟德?tīng)栠z傳，可通過(guò)http://www.ncbi.nlm.nih.gov進(jìn)入)。也已知人POMC的核苷酸和氨基酸序列，其具有GENBANK登記號(hào)BC065832。人POMC產(chǎn)生具有31kDa分子量的糖基化的蛋白質(zhì)前體。
“POMC肽”表示任何具有相應(yīng)序列、結(jié)構(gòu)或功能的肽。對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員明顯的是，在上述GENBANK登記目錄中人POMC的標(biāo)準(zhǔn)核苷酸和/或氨基酸序列可被改變到一定程度而不影響肽的結(jié)構(gòu)或功能。特別地，等位基因變體和功能突變體包括在該定義中。突變體可包括保守性的氨基酸取代。此處使用的“POMC肽”表示任何肽，其作為MSH，ACTH的至少一種形式；LPH，β內(nèi)啡肽，met-腦啡肽和leu-腦啡肽的至少一種形式；和優(yōu)選α、β、和γMSH；ACTH；β和γLPH；和β內(nèi)啡肽，met-腦啡肽和leu-腦啡肽的前體。
盡管已經(jīng)研究POMC肽某些單個(gè)產(chǎn)物的藥物功效，認(rèn)為尚不確定施用POMC本身具有任何醫(yī)學(xué)用途。可能POMC本身是無(wú)活性的，在具備活性前其必須被切割成它的產(chǎn)物。
優(yōu)選的藥物組合物包括非人POMC；適宜的有蹄動(dòng)物POMC；最有效山羊POMC。盡管POMC在垂體腺中產(chǎn)生，因而似乎不用期待其存在于血清中，至少是以顯著的水平存在，然而，令人驚訝地鑒定到山羊血清包括POMC，POMC-相關(guān)的肽，和與POMC級(jí)聯(lián)相關(guān)的分子，特別是當(dāng)山羊被物理應(yīng)力如放血或免疫所刺激的時(shí)候。這提供了POMC的適宜來(lái)源可用于本發(fā)明的藥物組合物中。還認(rèn)為POMC在患者中具有自身維持功效，因?yàn)槭┯米畛趿康腜OMC后導(dǎo)致患者中內(nèi)源POMC的產(chǎn)生；因此，最初施用低水平的POMC度患者具有有效的作用。
認(rèn)為，通過(guò)對(duì)受試者施用POMC和其相關(guān)分子，肽被蛋白酶水解，以提供一種或多種POMC的產(chǎn)物，其對(duì)于受試者而言是容易獲得的形式；還存在誘導(dǎo)分子級(jí)聯(lián)，其刺激下丘腦-垂體-腎上腺軸線(xiàn)(HPA)。這與先前觀察的未純化的山羊血清的功效相一致；例如，舌下施用的快速‘buzz’效應(yīng)可能是由于POMC的蛋白水解，從而釋放β內(nèi)啡肽，其可隨后通過(guò)粘膜被吸收。另外，已知αMSH對(duì)IL-10和TGF-β的產(chǎn)生具有作用，其導(dǎo)致抗炎性效應(yīng)，與用山羊血清觀察到的結(jié)果相一致。還已知αMSH抑制促炎細(xì)胞因子的釋放。
該組合物還可具有抗炎性能。我們認(rèn)為存在從用于產(chǎn)生血清的山羊或其它動(dòng)物到患者的抗炎應(yīng)答的被動(dòng)轉(zhuǎn)移。這是用于制備該組合物的純化過(guò)程的結(jié)果，其中在血清中存在多種活性因子。該組合物還包含另外的提供抗炎作用的活性組分。
如上所述，認(rèn)為POMC的啟始施用(任選結(jié)合以CRF和/或加壓素)可刺激POMC及其調(diào)節(jié)肽的天然產(chǎn)生。因此，本發(fā)明的另一方面提供了一種刺激患者中POMC產(chǎn)生的方法，包括對(duì)患者施用外源POMC。外源POMC優(yōu)選為非人的，更優(yōu)選山羊POMC。便利地，進(jìn)行皮下施用；這提供了活性組合物的皮下貯存，用于隨后緩慢釋放到患者系統(tǒng)中。
本發(fā)明的另一發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含POMC肽。
依照本發(fā)明的另外方面，提供了一種藥物組合物，其包含兩種或多種α、β和γ促黑色細(xì)胞激素(MSH)；促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)；β和γ促脂解素(LPH)；和β內(nèi)啡肽?？紤]到在施用時(shí)POMC可能的蛋白水解，可通過(guò)施用兩種或多種衍生自POMC的獨(dú)特激素來(lái)實(shí)現(xiàn)相似的作用。該藥物組合物可提供列舉的激素作為獨(dú)特的肽，或作為一種或多種前體分子(例如，POMC的部分分解產(chǎn)物)。優(yōu)選的，在藥物組合物中包括三種、四種、五種、六種或七種激素(任選結(jié)合CRF)，其誘導(dǎo)持續(xù)產(chǎn)生這類(lèi)分子的級(jí)聯(lián)反應(yīng)?？山Y(jié)合一種或多種載體分子來(lái)提供各種組分，所述載體分子結(jié)合一種或多種組分，從而作為釋放所述組分的貯存庫(kù)或貯存池發(fā)揮作用。還可將載體分子與POMC和其相關(guān)肽結(jié)合使用。
依照本發(fā)明的另一方面。提供了一種治療疾病的方法，所述疾病選自多發(fā)性硬化；類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；視神經(jīng)炎；運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病；自身免疫疾病，包括狼瘡，銀屑病，濕疹，甲狀腺炎，和多肌炎；軸突或神經(jīng)損傷；癌癥，具體地骨髓瘤，黑素瘤，和淋巴瘤；神經(jīng)系統(tǒng)疾病，為脫髓鞘的和非脫髓鞘的；炎性疾?。环逝?；神經(jīng)傳導(dǎo)疾?。缓托怨δ苷系K，具體地勃起功能障礙；所述方法包括對(duì)需要其的患者施用CRF。備選地，該方法可包含施用POMC。
治療的優(yōu)化劑量尚未確定；然而適宜的是對(duì)受試者施用0.01和10mg/kg的劑量進(jìn)行治療；更優(yōu)選0.01和5mg/kg，0.025和2mg/kg，最優(yōu)選0.05和1mg/kg的劑量。在初步研究中，將血清產(chǎn)品以總蛋白濃度為4mg/ml對(duì)患者施用。
施用的精確劑量可根據(jù)因素如患者的年齡、性別和體重，施用的方法和劑型，以及待治療的疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性而變化。可考慮其它因素如飲食，施用時(shí)間，患者的狀態(tài)，藥物組合和反應(yīng)靈敏度。通過(guò)負(fù)責(zé)治療的臨床醫(yī)師可確定有效的治療方案?？蛇M(jìn)行一次或多次施用，典型地，在一系列至少三次、五次或更多次施用后觀察益處。對(duì)于維持組合物的有益功效而言重復(fù)施用是理想的。
通過(guò)任何有效途徑，優(yōu)選通過(guò)皮下注射進(jìn)行治療，盡管可使用備選途徑包括肌肉內(nèi)或損害內(nèi)注射，口服，氣溶膠，胃腸外或局部途徑。
優(yōu)選作為液體制劑來(lái)進(jìn)行施用，盡管可使用其它制劑。例如，在合適的組合物中可混合以合適的藥物載體，和配制成固體(片劑，丸劑，膠囊，顆粒等)來(lái)口服、局部或胃腸外施用來(lái)進(jìn)行治療。
本發(fā)明還提供了CRF在制備用于治療上述列舉的一種或多種疾病的藥物中的應(yīng)用。還提供了POMC中制備用于治療上述列舉一種或多種疾病的藥物中的應(yīng)用。CRF或POMC可以是被分離的，純化的CRF或POMC，盡管優(yōu)選將它們?nèi)缟纤鼋M合以各種其它成分來(lái)施用。具體地，可使用生物活性載體蛋白和加壓素。
依照本發(fā)明的另一方面，提供了一種生產(chǎn)CRF的方法，所述方法包括從山羊獲得血液樣品；從保留(remaining)的血液組分中分離血清；通過(guò)沉淀固體純化血清的步驟。
還可將沉淀重懸浮于生理可接受的緩沖液中，例如，PBS緩沖液。還可通過(guò)透析或滲濾來(lái)進(jìn)一步純化重懸的沉淀物；例如，利用50,000Da，優(yōu)選40,000Da，和更優(yōu)選31,000Da的截留分子量來(lái)進(jìn)行。
還可對(duì)沉淀物進(jìn)行進(jìn)一步的純化以分離CRF；例如，抗體和其它親和純化。通過(guò)針對(duì)CRF產(chǎn)生的抗體或通過(guò)利用CRF-BP來(lái)結(jié)合CRF。
通過(guò)離心可實(shí)現(xiàn)血清的分離。
通過(guò)病毒過(guò)濾可進(jìn)一步純化血清；優(yōu)選所使用的任何純化方法不滅活或去除血清的任何生物活性成分，所述血清可包括除了CRF/POMC外的組分。
可通過(guò)硫酸銨沉淀法或通過(guò)辛酸純化來(lái)進(jìn)行沉淀?？墒褂闷渌线m的沉淀劑。
優(yōu)選地，山羊是被免疫的山羊。認(rèn)為對(duì)山羊進(jìn)行免疫刺激CRF和加壓素的產(chǎn)生，使得其以更高的水平存在于血清中。該方法還包括免疫山羊的步驟。備選地，可對(duì)山羊進(jìn)行生理應(yīng)力處理，例如放血。
還認(rèn)為，在某些情形中，使用免疫原是不必要的，從非免疫的動(dòng)物(即未用具體的免疫原進(jìn)行預(yù)免疫的動(dòng)物)可獲得有用的產(chǎn)品。能接受的是將正常的山羊預(yù)先充分暴露于環(huán)境免疫原，這樣的山羊可用于制備本發(fā)明的組合物。因此，本發(fā)明還意欲包含藥物組合物，其包括獲自非免疫的山羊的血清。本發(fā)明還延伸至這類(lèi)組合物或這類(lèi)血清在治療上述于標(biāo)題為“血清組合物的應(yīng)用”部分中所列舉的各種疾病或障礙、或制備用于治療上述于標(biāo)題為“血清組合物的應(yīng)用”部分中所列舉的各種疾病或障礙的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還進(jìn)一步延伸至從獲自非免疫的山羊的血清中制備POMC和/或CRF。
附圖簡(jiǎn)述現(xiàn)在，通過(guò)參考附圖的實(shí)施例來(lái)描述本發(fā)明的這些和其方面，在附圖中

圖1-4顯示血清組分的胰蛋白酶消化的質(zhì)譜分析；圖5-7顯示在用組合物治療前和治療后的患者血清的質(zhì)譜分析；圖8和9顯示通過(guò)用組合物治療對(duì)POMC肽誘導(dǎo)的分析；圖10-14顯示在用組合物治療后，關(guān)于在患者的炎癥模式(profile)中轉(zhuǎn)換的證據(jù)；圖15顯示在人血清和組合物中加壓素的水平；圖16顯示了在人血清和組合物中CRF的水平；和圖17顯示組合物的建議成分和它們的作用方法的概述圖表。
發(fā)明詳述血清組合物的制備在無(wú)菌技術(shù)下從山羊中采約400cc的血液。典型地，一旦血液的體積得到補(bǔ)充，將動(dòng)物在10-14天再次放血。預(yù)采血的方案對(duì)于刺激血清的活性組分的產(chǎn)生是有用的。然后將血清離心以分離血清，然后將血清過(guò)濾以去除大的凝塊和特定的物質(zhì)。然后將血清用過(guò)飽和的硫酸銨(于4℃，47％溶液)處理，以沉淀抗體和其它物質(zhì)。將得到的溶液在Beckman J6M/E離心機(jī)中于3500rpm離心45分鐘，之后去除上清液。將沉淀的免疫球蛋白和其它固體物質(zhì)重懸浮于足以再溶解沉淀的PBS緩沖液(磷酸鹽緩沖液)中。
然后將溶液針對(duì)PBS緩沖液于4℃進(jìn)行滲濾，截留分子量為10,000Daltons。滲濾后，將產(chǎn)品經(jīng)過(guò)0.2微米的濾器過(guò)濾到無(wú)菌的容器中，并將蛋白質(zhì)濃度調(diào)整至4mg/ml。將溶液置于小瓶中，以提供1ml的單一劑量，并在使用前貯存于-22℃。
討論先前已描述了血清的作用，但先前并未進(jìn)行活性組分的確定。
血清組合物的分析將組合物樣品在凝膠上進(jìn)行大小分級(jí)，利用針對(duì)β內(nèi)啡肽的抗體進(jìn)行蛋白印跡分析。檢測(cè)到強(qiáng)烈的信號(hào)，表明存在β內(nèi)啡肽，盡管表觀分子量接近31kDa，遠(yuǎn)大于β內(nèi)啡肽的預(yù)期大小。這提示β內(nèi)啡肽作為較大肽的一部分存在于樣品中，；大小與POMC的大小相一致。
我們還對(duì)組合物進(jìn)行了質(zhì)譜分析，檢測(cè)到至少兩個(gè)POMC-衍生的肽，β內(nèi)啡肽和促腎上腺皮質(zhì)激素相關(guān)的分子。也已鑒定了CRH-BP(促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素結(jié)合蛋白)。
圖1-4通過(guò)Thermofinnegan LCQ質(zhì)譜已在產(chǎn)品中鑒定了POMC肽和CRF-BP。CRF主要調(diào)節(jié)ACTH在垂體前葉中的合成和分泌。認(rèn)為施用POMC和/或其組分肽(除了CRF和CRF-BP)啟動(dòng)了級(jí)聯(lián)效應(yīng)，因而增加了合成的和持續(xù)升高濃度的POMC肽的產(chǎn)生。CRF-BP能夠作為CRF的貯存庫(kù)。
圖1-4顯示獲自產(chǎn)物的胰蛋白酶消化物的質(zhì)譜分析的采樣數(shù)(hits)，所述產(chǎn)物通過(guò)SDS-PAGE分離自污染蛋白。如上所述，這些分子的一些是POMC級(jí)聯(lián)的誘導(dǎo)劑和調(diào)節(jié)劑。利用更多的焦點(diǎn)分析的進(jìn)一步研究(如肽分餾，免疫沉淀和濃縮)將揭示存在更多的肽。圖1顯示存在POMC-衍生的促腎上腺皮質(zhì)激素，圖2顯示存在CRF-BP，圖3顯示存在腦啡肽原A，圖4顯示存在腦啡肽原B。CRF-BP的存在提示產(chǎn)物中包括一些CRF，而POMC和相關(guān)的肽也清楚地存在。
我們還研究了用血清組合物治療對(duì)患者自身的血清的應(yīng)用。如下描述這些影響。
治療誘導(dǎo)在患者血清中蛋白質(zhì)/肽表達(dá)圖5顯示在治療前后患者血清的質(zhì)譜。比較了2-10kDa的質(zhì)譜。該分子量范圍與目標(biāo)生物活性肽相關(guān)。通過(guò)比較在治療前后血清中圖譜，可見(jiàn)在2-6kD區(qū)域中肽表達(dá)的清晰的差別。為了容易進(jìn)行比較，還提供了圖譜的重疊觀察。
圖6顯示了在六個(gè)治療的患者中比較肽/蛋白質(zhì)表達(dá)。每個(gè)患者顯示增加水平的誘導(dǎo)的肽/蛋白質(zhì)表達(dá)，特別是在4kD區(qū)域中。
圖7a顯示未處理的山羊血清在接種前(免疫前圖譜，頂部的圖譜)、免疫后53天的未加工的血清和加工的產(chǎn)物的質(zhì)譜圖譜?？梢?jiàn)在下部的兩個(gè)圖譜中，血清圖譜顯著不同于免疫前的圖譜，表明誘導(dǎo)了蛋白表達(dá)。此處存在的圖譜表示活性產(chǎn)物，特定的免疫/放血方案已經(jīng)顯示在誘導(dǎo)該血清圖譜中是有用的。顯示了圖譜的重疊觀察(圖7b)。
誘導(dǎo)POMC肽的證據(jù)圖8顯示在接受治療前后，患者血清中ACTH的相對(duì)水平。還將其與來(lái)自健康志愿者的血清和給予患者的產(chǎn)物中ACTH進(jìn)行了比較。將血清稀釋1∶100倍，通過(guò)與產(chǎn)物相比的血清ELISA進(jìn)行定量。數(shù)據(jù)是三次測(cè)定+/-標(biāo)準(zhǔn)誤差的平均值。治療后n＝5；治療前n＝3；正常人血清n＝5。數(shù)據(jù)顯示治療增加了ACTH水平。
圖9將β內(nèi)啡肽在治療的患者血清中的水平與在治療前相同患者血清中的水平進(jìn)行比較。比較了健康志愿者血清和產(chǎn)物中的水平。將血清稀釋1∶100倍，通過(guò)與產(chǎn)物相比的血清ELISA進(jìn)行定量。數(shù)據(jù)是三次測(cè)定+/-標(biāo)準(zhǔn)誤差的平均值。該數(shù)據(jù)顯示治療增加了β內(nèi)啡肽的水平。
在治療的患者中，從促炎性TH-1圖譜到抗炎性TH-2細(xì)胞因子圖譜轉(zhuǎn)換的證據(jù)圖10顯示在治療前后兩組患者血清中TGF-β的水平。兩種患者(每組n＝3)顯示對(duì)于產(chǎn)生的TGF-β濃度的不同應(yīng)答，但所有患者應(yīng)答于治療顯示血清水平增加(前血清＝治療前患者的血清水平；第2次和第5次后＝第2次和第5次施用后)。數(shù)據(jù)顯示治療誘導(dǎo)增加濃度的抗炎細(xì)胞因子TGF-β。
圖11顯示在治療前(前血清)和治療后一組患者血清中IL-4的水平?？梢?jiàn)治療后(第2次施用后)，在患者血清中IL-4水平顯著增加(n＝5)。然而，在第5次施用后，在所有患者中IL-4水平下降，但相比于治療前還是較高。已知IL-4下調(diào)TH-1細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子。多半在所有患者中所見(jiàn)到的濃度的一致變化與IL-4在TH-1至TH-2轉(zhuǎn)換中的作用相一致。
圖12顯示IL-6在治療前后一組患者血清中IL-6水平。可見(jiàn)在治療后(第2次施用和第5次施用后)，患者血清中IL-6的水平降低(n＝4)。
圖13顯示IFN-γ在治療前后一組患者血清中的水平?？梢?jiàn)在治療后(第2次施用和第5次施用后)，在患者血清中IFN-γ的水平降低。
圖14顯示人外周血細(xì)胞(PBMC)的治療誘導(dǎo)在單核亞群中抗炎細(xì)胞因子IL-10的產(chǎn)生。T和B淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞分離自從人志愿者獲得的PBMC。用等劑量的產(chǎn)物處理所有細(xì)胞類(lèi)型16小時(shí)，利用ELISA對(duì)它們的上清液分析IL-10?？梢?jiàn)由T細(xì)胞群產(chǎn)生的IL-10水平不受治療的影響，在B細(xì)胞中僅誘導(dǎo)了IL-10的少量增加，然而，通過(guò)治療在單核細(xì)胞群中誘導(dǎo)了IL-10濃度的顯著增加。所有的測(cè)定重復(fù)三次，并按照+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)進(jìn)行。這些數(shù)據(jù)是至少三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表。
加壓素和CRF誘導(dǎo)的證據(jù)圖15顯示比較在產(chǎn)物、對(duì)照患者和用產(chǎn)物處理的患者、以及處理前的患者中加壓素的水平。該圖顯示在任何血清組中沒(méi)有顯著差異，然而產(chǎn)物中包含顯著水平的加壓素，其足以在患者中激發(fā)應(yīng)答。已知加壓素與CRF協(xié)同作用以釋放POMC。所有的測(cè)定重復(fù)三次，并按照+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)進(jìn)行。這些數(shù)據(jù)是至少3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表。預(yù)處理的患者n＝3；處理的患者n＝6。
圖16顯示與安慰劑相比，在產(chǎn)物中CRF的增加的存在，與未治療的個(gè)體相比在治療的患者中CRF增加；后者是應(yīng)答于治療在患者中誘導(dǎo)CRF的證據(jù)。所有的測(cè)定重復(fù)三次，并按照+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)進(jìn)行。這些時(shí)間是至少3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表。對(duì)照個(gè)體n＝4；處理的患者n＝13。
總結(jié)和結(jié)論盡管是初步的，但是由此認(rèn)為迄今的證據(jù)證明主要活性組分是CRF，其與其它組分協(xié)同作用，認(rèn)為其誘導(dǎo)POMC產(chǎn)生。還存在證據(jù)證明POMC本身和POMC衍生的肽可用作治療劑。這提示新的藥物組合物，CRF和POMC的應(yīng)用，以及表明利用CRF和POMC可治療的另外的疾病。我們還提供了從山羊產(chǎn)生CRF和POMC的便利的方法。
目前的數(shù)據(jù)提示所述產(chǎn)物不僅包含CRF，POMC肽和抗炎細(xì)胞因子(IL＝10和TGF-β)，而且誘導(dǎo)在患者中CRF、進(jìn)而POMC肽的表達(dá)和釋放，其隨后將患者的免疫圖譜從TH-1促炎圖譜轉(zhuǎn)換成主要的TH-2抗炎圖譜。
對(duì)組合物功效的其它觀察與對(duì)導(dǎo)致POMC產(chǎn)生的活性成分CRF的觀察相一致。例如，對(duì)白細(xì)胞粘附的作用可能歸因于β內(nèi)啡肽。血清產(chǎn)物增加通過(guò)人PBMC的IL-10產(chǎn)生；αMSH影響IL-10產(chǎn)生。對(duì)神經(jīng)傳導(dǎo)和神經(jīng)保護(hù)作用的影響可能歸因于ACTH和加壓素；對(duì)食欲的影響可能歸因于αMSH。產(chǎn)物本身還包含顯著水平的IL-10和TGF-β(數(shù)據(jù)未顯示)。
在所有主要的炎癥形式中，αMSH具有顯著的抗炎作用，其拮抗促炎細(xì)胞因子如TNFα和IL1-β的作用。在細(xì)胞因子系統(tǒng)和POMC系統(tǒng)中存在干擾，這已經(jīng)在用組合物治療的患者中觀察到，導(dǎo)致了減少促炎細(xì)胞因子和建立TH-2抗炎細(xì)胞因子體系(在整個(gè)治療進(jìn)程中保持)，所述TH-2抗炎細(xì)胞因子體系包括升高水平的IL-10和TGF-β。我們還鑒定了在血清產(chǎn)品中升高水平的IL1-β。
先前已顯示血清產(chǎn)品對(duì)蛋白酶降解非常敏感，這與理論相一致，即施用時(shí)POMC被蛋白酶解產(chǎn)生個(gè)體激素，但其進(jìn)一步的降解則破壞活性。具體地，認(rèn)為如果去除了末端三肽序列，αMSH具有顯著降低的活性；此外，這與活性組分包括POMC相一致。產(chǎn)品本身在本性上是不穩(wěn)定的，原因在于其活性組分是短期的，但顯示強(qiáng)有力的功效。
我們還進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，提示血清調(diào)節(jié)白細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮；這與β內(nèi)啡肽的作用相一致。我們還認(rèn)為血清抑制PHA誘導(dǎo)的PBMC增殖，提示可解釋血清的免疫調(diào)節(jié)作用。我們還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)存在產(chǎn)物時(shí)，對(duì)LPS-誘導(dǎo)的刺激和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的應(yīng)答降低(數(shù)據(jù)未顯示)。
產(chǎn)物還誘導(dǎo)在人腦微神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(microglial cell)中的酪氨酸磷酸化，并通過(guò)蛋白印跡證明調(diào)節(jié)NFκB途徑(數(shù)據(jù)未顯示)。已知NFκB調(diào)節(jié)參與促炎細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄，因此抑制NFκB可減少在自身免疫疾病中促炎細(xì)胞因子應(yīng)答，和減少炎癥應(yīng)答。對(duì)此進(jìn)行研究的另外的實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行中。
發(fā)現(xiàn)在形成視神經(jīng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞中存在一些POMC肽的受體(MCR3和MCR4)，其可被治療后產(chǎn)生的POMC肽刺激。這可能解釋在先前已描述的具有視神經(jīng)炎的MS患者所經(jīng)歷的一些視覺(jué)快速改善。已知ACTH引發(fā)皮質(zhì)類(lèi)固醇途徑，其可在少至20-30分鐘內(nèi)發(fā)揮作用。初步的數(shù)據(jù)提示在于患者的血液體系中稀釋后，肽在產(chǎn)物中的濃度對(duì)于在患者中激發(fā)治療應(yīng)答是不夠的。然而，產(chǎn)物可局部發(fā)揮作用(當(dāng)其以皮下藥丸形式注射時(shí))，以誘導(dǎo)生物化學(xué)級(jí)聯(lián)，其引發(fā)生物活性肽在治療的患者中的合成和釋放。目前已知可以避免任何干擾產(chǎn)物的醫(yī)學(xué)治療，例如通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)受體或在HPA中封閉分子。
為了支持該假設(shè)，對(duì)產(chǎn)物的質(zhì)譜已鑒定了另外的分子，它們中的一些參與誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)促腎上腺皮質(zhì)激素系統(tǒng)；即CRH結(jié)合蛋白和leu-腦啡肽，促腎上腺皮質(zhì)激素-促脂解素前體和促腦啡肽A前體(見(jiàn)圖1-4)。另外，可能更重要地，我們發(fā)現(xiàn)與治療前水平相比，還與來(lái)自健康對(duì)照志愿者的水平相比，兩種主要POMC肽在治療的患者血清中被顯示上調(diào)。該發(fā)現(xiàn)，結(jié)合免疫學(xué)數(shù)據(jù)，提示治療誘導(dǎo)POMC在患者中的表達(dá)和釋放，其隨后將患者的免疫體系從TH-1促炎系統(tǒng)轉(zhuǎn)變?yōu)門(mén)H-2抗炎體系。在患者中級(jí)聯(lián)機(jī)制的另外的闡明目前正在研究中。
應(yīng)注意盡管產(chǎn)物在本質(zhì)上是抗炎性的，其并不完全抑制炎癥應(yīng)答。我們的數(shù)據(jù)提示產(chǎn)物誘導(dǎo)從在自身免疫疾病中所見(jiàn)的不利的TH-1細(xì)胞因子模式轉(zhuǎn)變?yōu)楦欣钠胶獾募?xì)胞因子水平。這可在治療后最初出現(xiàn)，原因在于TH-1網(wǎng)絡(luò)關(guān)閉，快速轉(zhuǎn)變成了抗炎TH-2體系。在治療后不久，TH-1網(wǎng)絡(luò)運(yùn)作，即使以較低的水平運(yùn)作。
所報(bào)道的血清產(chǎn)物對(duì)腫瘤的作用導(dǎo)致我們考慮血清的抗血管發(fā)生作用的可能性。在這點(diǎn)上，通過(guò)來(lái)自SDS PAGE凝膠的胰蛋白酶消化產(chǎn)物的質(zhì)譜，已鑒定了在產(chǎn)物中存在蛋白質(zhì)血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)和血小板因子4(PF-4)。利用用于肽鑒定的Biowork Browser進(jìn)行的計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)檢索在數(shù)個(gè)物種中得到了強(qiáng)的匹配，包括智人。盡管尚未建立產(chǎn)物中TSP-1和PF-4蛋白含量的精確定量，在SDS PAGE凝膠上蛋白條帶的明顯性質(zhì)說(shuō)明該蛋白質(zhì)以生物顯著量(上限亳微克)存在。
圖17顯示了產(chǎn)物的假設(shè)的組分、作用方法的概述。認(rèn)為該產(chǎn)物包含CRF，一些水平的CRF-BP，β內(nèi)啡肽，加壓素和腦啡肽。CRF誘導(dǎo)另外的CRF在患者中產(chǎn)生，β內(nèi)啡肽和腦啡肽也一樣。內(nèi)源性CRF導(dǎo)致產(chǎn)生POMC，其產(chǎn)生ACTH，αMSH和β內(nèi)啡肽等。該最后的產(chǎn)物以反饋回路的方式發(fā)揮作用，低水平刺激另外的CRF釋放，而高水平抑制CRF釋放。認(rèn)為該完整的CRF/POMC級(jí)聯(lián)在患者中誘導(dǎo)免疫轉(zhuǎn)換，這可解釋在各種條件下所見(jiàn)到的令人驚訝的有益功效。
權(quán)利要求
1.藥物組合物，其包含促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)肽。
2.權(quán)利要求1的組合物，其包含山羊CRF。
3.權(quán)利要求1或2的組合物，其還包含一種或多種加壓素，β內(nèi)啡肽和腦啡肽。
4.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，包含CRF結(jié)合蛋白。
5.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其還包含POMC肽。
6.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其還包含一種或多種α、β和γMSH；ACTH；β和γLPH；met-腦啡肽，leu-腦啡肽和β內(nèi)啡肽。
7.在患者中刺激POMC產(chǎn)生的方法，包括對(duì)患者施用外源性POMC。
8.權(quán)利要求7的方法，其還包括對(duì)患者施用外源性CRF。
9.權(quán)利要求7或權(quán)利要求8的方法，其還包括對(duì)患者施用外源性加壓素。
10.藥物組合物，其包含POMC肽。
11.分離的CRF肽在制備藥物中的應(yīng)用。
12.分離的POMC肽在制備藥物中的應(yīng)用。
13.治療疾病的方法，所述疾病選自多發(fā)性硬化；類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；視神經(jīng)炎；運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾?。蛔陨砻庖呒膊?，包括狼瘡，銀屑病，濕疹，甲狀腺炎，和多肌炎；軸突或神經(jīng)損傷；癌癥，具體地骨髓瘤，黑素瘤，和淋巴瘤；神經(jīng)疾病，為脫髓鞘的或非脫髓鞘的；炎性疾?。环逝?；神經(jīng)傳導(dǎo)疾??；和性功能障礙，具體地勃起功能障礙；所述方法包括對(duì)需要其的患者施用CRF。
14.一種治療疾病的方法，所述疾病選自多發(fā)性硬化；類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；視神經(jīng)炎；運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病；自身免疫疾病包括狼瘡，銀屑病，濕疹，甲狀腺炎，和多肌炎；軸突或神經(jīng)損傷；癌癥，具體地骨髓瘤，黑素瘤，和淋巴瘤；神經(jīng)疾病，為脫髓鞘的和非脫髓鞘的；炎性疾??；肥胖；神經(jīng)傳導(dǎo)疾?。缓托怨δ苷系K，具體地勃起功能障礙；該方法包括對(duì)需要其的患者施用POMC。
15.產(chǎn)生CRF的方法，所述方法包括從山羊獲得血液樣品；從保留的血液組分中分離血清；通過(guò)沉淀固體純化血清的步驟。
16.有療效的、改善或預(yù)防性治療疾病的方法，所述疾病選自類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；視神經(jīng)炎；運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾?。惠S突或神經(jīng)損傷；癌癥，具體地骨髓瘤，黑素瘤，和淋巴瘤；非脫髓鞘的神經(jīng)疾病，包括腦血管局部缺血性疾病，阿爾茲海默氏病，亨廷頓舞蹈病，混合性結(jié)締組織病，硬皮病，過(guò)敏性反應(yīng)，感染性休克，心臟炎和心內(nèi)膜炎，傷口愈合，接觸性皮炎，職業(yè)肺病，腎小球腎炎，移植排斥，顳動(dòng)脈炎，脈管炎疾病，肝炎，燒傷，多系統(tǒng)萎縮，癲癇病，肌肉萎縮癥，精神分裂癥，雙相型障礙，抑郁，channelopathies，myaestheniagravis，由于惡性腫瘤的疼痛，慢性疲勞綜合癥，纖維肌炎，腸易激綜合征，工作相關(guān)的上肢疾病，從集性頭痛，偏頭痛，和慢性日常性頭痛；脫髓鞘的疾病，包括神經(jīng)系統(tǒng)的感染，神經(jīng)包埋和局部損傷，創(chuàng)傷性脊髓損傷，臂叢病(先天的和創(chuàng)傷性的，臂神經(jīng)炎，parsonage turnersyndrome，神經(jīng)痛肌萎縮)；神經(jīng)根??；channelopathies；和三叉神經(jīng)痛；自身免疫疾病，包括狼瘡，銀屑病，濕疹，甲狀腺炎，和多肌炎；炎性疾病；所有類(lèi)型的遺傳性運(yùn)動(dòng)或感官神經(jīng)??；進(jìn)行性神經(jīng)病性肌萎縮(CMT)類(lèi)型CMT1A，CMT1B，CMT2，CMT3(進(jìn)行性肥大性間質(zhì)性神經(jīng)病)，CMT4(類(lèi)型A，B，C和D)，X-連接的進(jìn)行性神經(jīng)病性肌萎縮(CMTX)；具有對(duì)壓力性癱瘓具有易感性的遺傳性神經(jīng)病(HNPP)-也稱(chēng)為臘腸樣神經(jīng)?。痪哂卸@-Lorn的遺傳性運(yùn)動(dòng)和感官神經(jīng)病(HMSNL)；進(jìn)端遺傳性運(yùn)動(dòng)和感官神經(jīng)病/神經(jīng)元病(HMSNP)；遺傳性神經(jīng)痛肌萎縮；遺傳性感官和自主神經(jīng)病(HSAN1，HSAN2，HSAN3(也稱(chēng)為賴(lài)?yán)?戴綜合征或家族性自主神經(jīng)異常)，HSAN4，HSAN5)；家族性淀粉樣多神經(jīng)病(類(lèi)型I，類(lèi)型II，類(lèi)型III，類(lèi)型IV)；異染性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良；克拉貝病；法布萊?。荒I上腺腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良；雷弗索姆病(HMSN IV)；丹吉爾病；弗里德賴(lài)希共濟(jì)失調(diào)；脊柱小腦共濟(jì)失調(diào)(SCA)所有類(lèi)型-SCA1，SCA2，SCA3，SCA4，SCA5，SCA6，SCA7，SCA8，SCA10，SCA11，SCA12，SCA13，SCA14，SCA16；脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)；科克因綜合征；和巨軸突神經(jīng)??；慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病(CIDP)，和急性熱病性多神經(jīng)炎；犬異位皮炎，犬口黑素瘤，和馬肺??；所述方法包括對(duì)患者施用CRF。
17.有療效的、改善的或預(yù)防性的治療疾病的方法，所述疾病選自類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；視神經(jīng)炎；運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾??；軸突或神經(jīng)損傷；癌癥，具體地骨髓瘤，黑素瘤，和淋巴瘤；非脫髓鞘的神經(jīng)疾病，包括腦血管局部缺血性疾病，阿爾茲海默氏病，亨廷頓舞蹈病，混合性結(jié)締組織病，硬皮病，過(guò)敏性反應(yīng)，感染性休克，心臟炎和心內(nèi)膜炎，傷口愈合，接觸性皮炎，職業(yè)肺病，腎小球腎炎，移植排斥，顳動(dòng)脈炎，脈管炎疾病，肝炎，燒傷，多系統(tǒng)萎縮，癲癇病，肌肉萎縮癥，精神分裂癥，雙相型障礙，抑郁，channelopathies，myaesthenia gravis，由于惡性腫瘤的疼痛，慢性疲勞綜合癥，纖維肌炎，腸易激綜合征，工作相關(guān)的上肢疾病，從集性頭痛，偏頭痛，和慢性日常性頭痛；脫髓鞘疾病，包括神經(jīng)系統(tǒng)的感染，神經(jīng)包埋和局部損傷，創(chuàng)傷性脊髓損傷，臂叢病(先天的和創(chuàng)傷性的，臂神經(jīng)炎，parsonage turnersyndrome，神經(jīng)痛肌萎縮)；神經(jīng)根病；channelopathies；和三叉神經(jīng)痛；自身免疫疾病，包括狼瘡，銀屑病，濕疹，甲狀腺炎，和多肌炎；炎性疾??；所有類(lèi)型的運(yùn)動(dòng)和感官神經(jīng)??；進(jìn)行性神經(jīng)病性肌萎縮(CMT)類(lèi)型CMT1A7 CMT1B，CMT2，CMT3(進(jìn)行性肥大性間質(zhì)性神經(jīng)病)，CMT4(類(lèi)型A，B，C和D)，X-連接的進(jìn)行性神經(jīng)病性肌萎縮(CMTX)；具有對(duì)壓力性癱瘓具有易感性的遺傳性神經(jīng)病(HNPP)-也稱(chēng)為臘腸樣神經(jīng)??；具有耳聾-Lorn的遺傳性運(yùn)動(dòng)和感官神經(jīng)病(HMSNL)；進(jìn)端遺傳性運(yùn)動(dòng)和感官神經(jīng)病/神經(jīng)元病(HMSNP)；遺傳性神經(jīng)痛肌萎縮；遺傳性感官和自主神經(jīng)病(HSAN1，HSAN2，HSAN3(也稱(chēng)為賴(lài)?yán)?戴綜合征或家族性自主神經(jīng)異常)，HSAN4，HSAN5)；家族性淀粉樣多神經(jīng)病(類(lèi)型I，類(lèi)型II，類(lèi)型III，類(lèi)型IV)；異染性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良；克拉貝病；法布萊病；腎上腺腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良；雷弗素姆病(HMSN IV)；丹吉爾??；弗里德賴(lài)希共濟(jì)失調(diào)；脊柱小腦共濟(jì)失調(diào)(SCA)所有類(lèi)型-SCA1，SCA2，SCA3，SCA4，SCA5，SCA6，SCA7，SCA8，SCA10，SCA11，SCA12，SCA13，SCA14，SCA16；脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)；科克因綜合征；和巨軸突神經(jīng)??；慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病(CIDP)，和急性熱病性多神經(jīng)炎；犬異位皮炎，犬口黑素瘤，和馬肺?。凰龇椒ò▽?duì)患者施用POMC。
全文摘要
描述了對(duì)具有很多治療功效的山羊血清產(chǎn)品分析。該產(chǎn)品被表征為包含阿黑皮素原(POMC)和促皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)肽，以及這些肽的分解產(chǎn)物。我們描述了使用這些肽和它們的產(chǎn)物治療疾病的方法，所述疾病包括癌癥，多發(fā)性硬化，和神經(jīng)疾病，以及包括這些肽的藥物，和產(chǎn)生這些肽的方法。
文檔編號(hào)A61K38/35GK101060857SQ200580028451
公開(kāi)日2007年10月24日 申請(qǐng)日期2005年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月8日
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