專利名稱：積雪草酸衍生物在制備防治心、腦血管疾病的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于將積雪草酸衍生物用于制備防治心、腦血管疾病藥物中的用途。
背景技術(shù)：
積雪草Centella asiatica(L.)Urban為傘形科積雪草屬植物，廣泛分布于長(zhǎng)江流域以南各地。全草入藥。在我國(guó)積雪草外用及內(nèi)服治病已有兩千多年歷史。其具有清熱利濕，解毒消腫之功能。適用于濕熱黃疸，中暑腹瀉，砂淋血淋，癰腫瘡毒，跌撲損傷。
積雪草的化學(xué)成分以三萜類為主，如積雪草苷(asiaticoside)、羥基積雪草苷(madecassoside)、波熱模苷(brahmoside)、波熱米苷(brahminoside)、參枯尼苷(thankuni-side)、異參枯尼苷(isothankuniside)、centelloside等五環(huán)三萜型酯苷。積雪草中還含有一些三萜酸類，如積雪草酸(asiatic acid)、羥基積雪草酸(madecassic acid)、波熱米酸(brahmic acid)、馬達(dá)積雪草酸(madasiatic acid)、centicacid，centoic acid，cenellic acid，indocentic acid等。此外，積雪草中還有少量的多炔烯類、揮發(fā)油類、beta-谷甾醇、香草酸等。
文獻(xiàn)報(bào)道，積雪草酸及其衍生物具有體內(nèi)外活性(Res Commun Mol Pathol Pharmacol，2000，108(1-2)75-86)。
現(xiàn)有技術(shù)中，積雪草酸衍生物具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、治療乳腺增生癥、抗肝纖維化、肺纖維化和腎纖維化等活性和用途。但未見積雪草酸衍生物用于防治心絞痛、心肌梗死、腦血栓形成、腦栓塞等冠心病和腦血管病的報(bào)道。
冠心病是由于供應(yīng)心臟營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的血管-冠狀動(dòng)脈發(fā)生了粥樣硬化所致。冠狀動(dòng)脈的粥樣硬化斑塊可使冠狀動(dòng)脈管腔嚴(yán)重狹窄甚至閉塞，導(dǎo)致心肌的血流量減少，供氧不足，表現(xiàn)胸悶，憋氣，心絞痛，心肌梗死甚至猝死等。冠心病在國(guó)內(nèi)平均患病率約為6.49％，且患病率隨著年齡增長(zhǎng)而增高，因而冠心病是老年人最常見的一種心血管疾病。目前冠心病的發(fā)病趨向低齡化，已成為中老年人的常見病。目前冠心病的治療藥物有硝酸酯制劑、β受體阻滯劑、鈣通道阻滯劑、抗血小板藥物和溶血栓藥物等，還有一些中成藥如復(fù)方丹參片、通心絡(luò)膠囊、地奧心血康與心腦舒通等，有一定的療效。但總體而言，有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、療效確切和無明顯毒副作用的防治冠心病藥物不多。
隨著人口老齡化，腦血管病發(fā)病率不斷增高，成為危害人類健康最重要的疾病之一。在聯(lián)合國(guó)世界衛(wèi)生組織調(diào)查的57個(gè)國(guó)家中死于腦血管病者占11.3％，其中40個(gè)國(guó)家腦血管病占死因前三位。世界平均發(fā)病率為150～200萬/(10萬人口/年)，患病率為500～600萬/(10萬人口/年)，全世界按50億人口算，大約有2500～3000萬病人。在我國(guó)死于腦血管病者多于心臟病及癌癥，居三大死因首位。我國(guó)標(biāo)化的發(fā)病率為120～180萬/(10萬人口/年)，患病率為429萬/(10萬人口/年)，大約有500～600萬病人，其中缺血性腦血管病占多數(shù)，包括腦血栓形成、腦栓塞、腔隙性腦梗塞和短暫性腦缺血發(fā)作。腦血栓形成、腦栓塞具有高發(fā)病率、高致殘率及高復(fù)發(fā)率的特點(diǎn)，造成大量的殘疾人群，帶來了沉重的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。治療藥物方法包括擴(kuò)血管、抗凝、抗血小板聚集和溶栓治療。但是缺血性腦病的治療效果還不理想，仍然迫切需要研究新的治療藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供積雪草酸衍生物用于制備防治心、腦血管疾病的藥物中的用途。
申請(qǐng)人在篩選治療心、腦血管疾病藥物的過程，出人意料地發(fā)現(xiàn)積雪草酸衍生物具有顯著的抗心肌梗死活性，對(duì)用于防治冠心病、心絞痛、心肌梗死和腦血栓形成、腦栓塞等心、腦血管疾病有特效，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)大鼠腦缺血性損傷有治療作用。因此，可將積雪草酸衍生物用于制備防治心、腦血管疾病的藥物。其是將積雪草總酸衍生物和醫(yī)學(xué)上可接受的賦形劑或載體按照常規(guī)的制劑工藝，以10-90∶90-10的重量比例制成適于胃腸道途徑給藥或胃腸道外途徑給藥的各種劑型對(duì)患者給藥，如加入常規(guī)的賦形劑、調(diào)味劑、防腐劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、粘合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔劑，制成任何一種適合于臨床使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸、注射劑等。
由于本發(fā)明首次公開了積雪草酸衍生物在防治心、腦血管的藥用作用，因此，將積雪草酸衍生物單獨(dú)或與其它活性組份或輔料配合制成藥劑，只要是該藥劑用于治療心、腦血管疾病，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的積雪草酸衍生物在制成任何一種劑型時(shí)，均具有防治心腦血管的作用。
本發(fā)明所述的積雪草酸衍生物，包括積雪草酸和羥基積雪草酸。實(shí)施例中所用積雪草酸或羥基積雪草酸可采用現(xiàn)有的工藝方法制備，或采用市購(gòu)商品，如可采用廣西昌洲天然產(chǎn)物開發(fā)有限公司的產(chǎn)品，其純度均達(dá)到95％以上。
積雪草酸衍生物的藥效學(xué)試驗(yàn)方案和結(jié)果如下(1)利用離體大鼠心臟缺氧/再灌損傷模型，積雪草甙、羥基積雪草甙、積雪草酸、羥基積雪草酸各5mg/kg，使冠脈流量明顯增加，心率保持不變或減慢，心臟跳動(dòng)規(guī)則，梗塞面積明顯縮小，效果極為顯著。
(2)利用結(jié)扎大鼠冠脈引起急性心肌梗塞病理模型，觀察積雪草酸、羥基積雪草酸的抗心肌梗死作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，結(jié)扎前1h灌服積雪草酸、羥基積雪草酸各20mg/kg，能使冠脈結(jié)扎后大鼠比結(jié)扎前心率均有所減慢，大鼠心電圖像S-T段、T波下降，大鼠血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)值均比對(duì)照組降低，對(duì)心肌梗塞面積有明顯的縮小作用，效果非常顯著。
(3)利用結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈左前降支中段引起犬心肌梗死模型，觀察積雪草酸、羥基積雪草酸的心肌保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，積雪草酸、羥基積雪草酸能明顯減少結(jié)扎冠脈造成的心肌梗死區(qū)重量，同時(shí)使反映心肌損害范圍的生化代謝指標(biāo)LDH及CK活性明顯下降。
(4)利用大鼠急性局灶性腦缺血模型觀察積雪草酸和羥基積雪草酸的療效。將吸有50％三氯化鐵溶液(1mol/L鹽酸)的小片定量濾紙敷于大鼠大腦中動(dòng)脈上制備腦血栓形成模型。造模前連續(xù)給藥3天，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、積雪草酸20mg/kg組、羥基積雪草酸20mg/kg組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，積雪草酸、羥基積雪草酸均能明顯縮小腦梗死面積，羥基積雪草酸能明顯降低大腦中動(dòng)脈栓塞大鼠腦的含水量。
在本發(fā)明中，若非特指，所有的量、份和百分比均為重量單位，所有的設(shè)備和原材料等均可從市場(chǎng)購(gòu)得或是本行業(yè)常用的。
以下結(jié)合實(shí)施例詳述本發(fā)明，但實(shí)施例僅用于說明并不能限制本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 膠囊劑的制備取積雪草酸或羥基積雪草酸原料500克，藥用淀粉1000克，攪拌均勻，裝入0號(hào)膠囊，每粒0.3克，每次口服2粒，每日三次。
實(shí)施例2 片劑制備取積雪草酸或羥基積雪草酸原料500克，藥用淀粉500克，攪拌均勻，用適量乙醇制粒，經(jīng)整粒，壓片，每片0.2克，口服，每次2片，每日三次。
實(shí)施例3 顆粒劑的制備取積雪草酸或羥基積雪草酸原料200克，藥用淀粉4000克，蔗糖800克，混合均勻，用適量乙醇制粒，干燥，整粒，分裝即得，每袋5克，每次1袋，每日三次。
實(shí)施例4 滴丸的制備稱取300克聚乙醇4000為基質(zhì)，在水浴上溶化，加入積雪草酸或羥基積雪草酸原料100克，攪拌均勻，傾入保溫管中，用恒溫裝置保溫，使含積雪草酸衍生物的聚乙醇液體在80-90℃條件下滴入預(yù)冷的液體石蠟中(4-10℃)，滴完后，將藥丸傾入濾紙上吸干石蠟油，再加入少量滑石粉，混勻，得積雪草酸或羥基積雪草酸滴丸1000粒。口服，1次2粒，1日3次。
實(shí)施例5 注射劑的制備取積雪草酸或羥基積雪草酸原料30克，丙二醇40ml，聚乙二醇-400 100ml，混合，水浴加熱30min，加注射用水至600ml，超聲波中處理20min，再在水浴中加熱，調(diào)節(jié)pH值7.0-7.2。過濾，灌封，滅菌即得。每支2ml，肌肉注射，1次2ml，每日3次，或與生理鹽水，5％葡萄糖液500ml，混勻后，靜脈滴注，每日1次，每次3支。
實(shí)施例6 積雪草酸衍生物對(duì)離體大鼠心臟缺氧/再灌注損傷的影響Wistar清潔大鼠，雄性，體重200-240g。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用積雪草酸(純度大于95％)和羥基積雪草酸(純度大于95％)購(gòu)自廣西昌洲天然產(chǎn)物開發(fā)有限公司。積雪草酸和羥基積雪草酸用生理鹽水溶解，再用生理鹽水稀釋，乙醇終濃度為0.1％(V/V)。紅四氮唑(TTC)由上海試劑三廠生產(chǎn)，磷酸鉀鹽緩沖液(pH7.8)自配，肝素鈉注射液，上海第一生化藥業(yè)公司，乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒、磷酸肌酸激酶(CK)試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)。Langendorff灌流裝置，日本光電心電圖儀，SABA-18全自動(dòng)生化分析儀。
取體重為200-240g的大鼠，腹腔注射500U/kg肝素抗凝，15min后注射異戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉，迅速在打開胸腔，暴露心臟，剪破心包膜，分離出心臟后輕輕提起，于主動(dòng)脈根部5-7mm處用彎頭組織剪迅速剪斷上下腔靜脈，肺動(dòng)脈，主動(dòng)脈及心臟周圍組織，摘出心臟，置于預(yù)冷(4℃)的K-H液中，用手指輕輕擠壓心臟，使心臟內(nèi)剩余血液排出，以防止凝血塊形成而堵塞血管，將主動(dòng)脈用絲線固定于灌流裝置的套管上。以37.5℃的灌流液恒壓(壓力高度為75cm水柱)進(jìn)行逆行灌流。Krebs-Henseleit(K-H)平衡營(yíng)養(yǎng)液，組成成分為(mmol/L)NaCl 118，KCl 4.63，MgCl21.2，CaCl24.8，NaHCO325，KH2PO41.17，葡萄糖11.0，實(shí)驗(yàn)前先將營(yíng)養(yǎng)液通入95％O2和5％CO2的混合氣10min進(jìn)行充分飽和，氣流量為1.0L/min，pH7.4。在實(shí)驗(yàn)過程中，心臟放在玻璃小室中以保持在38±1℃的外環(huán)境中。剪去心臟周圍的附著組織，在肺動(dòng)脈起始部和右室圓錐部位剪開一小口，有利于冠脈回流液的排出，用刻度量杯測(cè)量流出液即冠脈流量。定時(shí)收集冠脈流出液，記錄1min冠脈流量(CF)，用全自動(dòng)生化儀測(cè)定流出液的乳酸脫氫酶(LDH)和磷酸肌酶(CK)含量。分別在左心室部和右心房部插入鉑金電極，描記心電圖II導(dǎo)聯(lián)，用于觀察心率(HR)、S-T段、T波、R波、Q-T間期的變化。心臟逆行灌流10min為平衡時(shí)間，利用恒流泵將5ml生理鹽水或藥液(1mg藥量)以0.5ml/min的速度同灌流液灌入心臟內(nèi)，給藥10min后于冠狀動(dòng)脈前降支根部穿一根000號(hào)絲線，連同1mm直徑塑料棒一起結(jié)扎，缺血時(shí)間30min后取出塑料棒，使冠狀動(dòng)脈前降支支配的心肌再通60min。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將心臟取下切成0.1cm厚的5片，將心肌片放在1％的TTC磷酸緩沖溶液中，pH7.8，在37℃溫孵15min，正常心肌染為紅色，梗死區(qū)的心肌不著色或淺著色，染色后將心肌片放入10％甲醛溶液中固定。用電子天平稱取全心重，再剪取未著色區(qū)(梗死區(qū)心肌)稱重，計(jì)算心肌梗塞面積。心肌梗塞面積(％)＝梗塞重(mg)/全心重(mg)×100％。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)，積雪草酸衍生物能使冠脈流量增加，均比對(duì)照組高，表明積雪草酸衍生物抗心肌梗死的活性(表1)。
表1積雪草酸衍生物對(duì)大鼠離體心臟缺氧再灌注所致冠脈血流量變化的影響組別劑量 冠脈血流量(ml/min)mg/kg 平衡期 給藥期5min 給藥期10min L15min L30minR15min R30min對(duì)照組 -10.1±1.6-8.6±1.8 6.6±1.4 5.9±1.0 7.3±1.8 6.4±2.0積雪草酸510.0±1.910.9±2.210.5±2.3*9.6±1.7*9.3±1.3**9.3±2.1*8.4±1.8*羥基積雪草酸511.4±1.410.0±1.810.7±1.2*9.2±1.2*9.0±2.1*9.1±2.1*8.0±1.6*注與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。L結(jié)扎；R再灌給積雪草酸、羥基積雪草酸后，各組心率均略有所減慢。結(jié)扎和再灌后對(duì)照組心臟心率變慢(表2)。積雪草酸、羥基積雪草酸均可使心率加快或保持正常。
表2積雪草酸衍生物對(duì)大鼠離體心臟缺氧再灌注所致心率變化的影響組別 劑量心率(次/min)mg/k平衡期給 藥 L30min R15min R30min R60ming 10min對(duì)照組 - 246±42224±40 184±54 181±25 191±34 173±52積雪草酸 5 233±19220±32 222±35*223±40*225±76 210±27羥基積雪草酸 5 230±38224±42 235±62*232±77*249±53*228±82注與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。L結(jié)扎；R再灌積雪草酸、羥基積雪草酸均能使心肌梗死面積縮小(表3)。
表3積雪草酸衍生物對(duì)大鼠離體心臟缺氧再灌注所致心肌梗塞面積的影響組別 劑量(mg/kg) 全心濕重(mg) 梗死區(qū)濕重(mg) 心肌梗死面積％對(duì)照組 - 720.3±68.2 247.8±84.9 33.7±9.3積雪草酸 5 663.1±26.0 98.7±45.8**10.1±4.1***羥基積雪草酸 5 621.6±37.3 69.1±44.6***11.3±3.7***注與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
實(shí)施例7 積雪草酸衍生物對(duì)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈引起急性心肌梗塞的影響Wistar清潔大鼠，雄性，體重200～240g。積雪草酸和羥基積雪草酸購(gòu)自廣西昌洲天然產(chǎn)物開發(fā)有限公司，純度大于95％。紅四氮唑(TTC)由上海試劑三廠生產(chǎn)，磷酸鉀鹽緩沖液(pH7.8)自配，戊巴比妥鈉，上海化學(xué)試劑公司，乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒、磷酸肌酸激酶(CK)試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)儀器HXQ-1人工呼吸機(jī)，日本光電心電圖儀，SABA-18全自動(dòng)生化分析儀，IEC離心機(jī)。
取200～240g大鼠，分組模型對(duì)照組；積雪草酸20mg/kg組；羥基積雪草酸20mg/kg組。用1％羧甲基纖維素鈉混勻灌服給藥，1小時(shí)后，戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射淺麻醉，背位固定。用大半個(gè)橡皮球(大小正好套住大鼠頭頸部)連接到人工呼吸機(jī)，進(jìn)行人工呼吸。胸部去毛、消毒、沿左鎖骨中線縱行切開皮膚約2cm，在第四或第五肋間鈍性分離肌層，打開胸腔，剪開心包，輕壓右側(cè)胸廓，擠出心臟。在動(dòng)脈圓錐與左心耳之間冠狀靜脈處結(jié)扎前降支后，把心臟放回胸腔。迅速關(guān)閉胸腔，停止人工呼吸，用食指和拇指輕輕擠壓胸部，使心臟跳動(dòng)恢復(fù)正常，放置動(dòng)物籠內(nèi)進(jìn)行觀察。使用心電圖儀分別記錄結(jié)扎前，結(jié)扎后2h、4h、6h心電圖，用于觀察S-T段變化。結(jié)扎6小時(shí)，用戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔淺麻醉后，打開腹腔，從下腔靜脈抽取5ml靜脈血，用離心機(jī)以3000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘，取血清，利用全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清乳酸脫氫酶(LDH)和磷酸肌酶(CK)的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠心臟取出放置在心肌切片模具內(nèi)，切成0.1cm厚的5片放入1％的TTC磷酸緩沖溶液中，pH7.8，在37℃溫孵15min，正常心肌染為紅色，梗死區(qū)的心肌不著色或淺著色，染色后將心肌片放入10％甲醛溶液中固定，拍攝心肌梗塞影相。用電子天平稱取全心重、左心重，再剪取未著色區(qū)(心肌梗死區(qū))稱重，計(jì)算心肌梗塞面積。
全心肌梗塞面積(％)＝梗塞重(mg)/全心肌重(mg)×100％左心肌梗塞面積(％)＝梗塞重(mg)/左心肌重(mg)×100％結(jié)果發(fā)現(xiàn)，積雪草酸、羥基積雪草酸對(duì)心臟結(jié)扎冠脈大鼠S-T段均有下降作用，其中在結(jié)扎2h和4h較為明顯(表4)。
表4積雪草酸衍生物對(duì)大鼠心臟結(jié)扎冠脈所致S-T段變化的影響組別 劑量 動(dòng)物數(shù) S-T段抬高(mm)mg/kg(只) 結(jié)扎前 結(jié)扎2h結(jié)扎4h 結(jié)扎6h對(duì)照組 - 6 03.1±1.5 1.2±0.7 1.2±1.0積雪草酸 20 6 01.3±0.5***0.3±0.1***0.4±0.2**羥基積雪草酸 20 6 01.2±1.6**0.4±0.2**0.5±0.2**注與對(duì)照組比，**P＜0.01，***P＜0.001。
積雪草酸、羥基積雪草酸可使得大鼠血清中CK、LDH值降低(表5)。
表5積雪草酸衍生物對(duì)大鼠心臟結(jié)扎冠脈所致CK、LDH值變化的影響組別 劑 量動(dòng)物數(shù) LDH(U/L) CK(U/L)(mg/kg)對(duì)照組 - 6 1727.3±205.7 4216.6±443.5積雪草酸20 6 1212.6±134.5*2153.2±1127.8*羥基積雪草酸20 6 1101.3±224.2*2082.5±786.8*注與對(duì)照組比，*P＜0.05。
積雪草酸和羥基積雪草酸對(duì)心臟結(jié)扎冠脈大鼠模型心肌梗塞面積有明顯的縮小作用(表6)。
表6積雪草酸衍生物對(duì)大鼠心臟結(jié)扎冠脈所致心肌梗塞面積的影響組別 給藥劑量動(dòng)物數(shù)心肌梗塞面積(％)(mg/kg) (只) 占左心室面積 占左心室面積對(duì)照組 -636.5±3.5 31.4±2.2積雪草酸 20 616.8±6.4**14.5±4.1**羥基積雪草酸 20 613.7±4.5**13.1±3.5**注與對(duì)照組相比，**P＜0.05，**P＜0.01，實(shí)施例8 積雪草酸衍生物對(duì)犬急性心肌梗死的影響造擇健康成年家犬36只，雌雄兼用，禁食過夜，隨機(jī)分為6組，每組6只。分組及給藥劑量見表。灌服給藥3小時(shí)后將家犬用烏拉坦麻醉并固定于手術(shù)臺(tái)，行氣管插管術(shù)，連接人工呼吸機(jī)，然后于左側(cè)第4肋間開胸暴露心臟，剪開心包膜并結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支中段。6小時(shí)后，取血測(cè)定LDH和CK的活性；再取出全心稱重并橫切成若干薄塊，放進(jìn)1％氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液作大體標(biāo)本染色10min，正常心肌被染為深紅色，梗死區(qū)不著色。仔細(xì)剪下不著色的心肌并稱重，計(jì)算心肌梗死部分占全心重量的百分比，見表1。結(jié)果表明，積雪草酸和羥基積雪草酸能明顯縮小結(jié)扎冠脈造成的心肌梗死范圍，同時(shí)使反映心肌缺血損害范圍的生化代謝指標(biāo)LDH及CK活性明顯下降(表7)。
表7積雪草酸衍生物對(duì)冠脈結(jié)扎所致犬心肌梗死的影響組別 劑量 梗死區(qū)重量百分比 LDH(U/L) CK(U/L)生理鹽水 - 20.1±4.3 387.3±23.2 121.2±23.1積雪草酸10mg/kg 9.2±3.5**245.9±31.5*80.4±17.2**羥基積雪草酸10mg/kg 7.1±3.6**210.2±27.4**66.5±20.3**復(fù)方丹參片 1.5片/kg 13.1±3.8*289.0±21.9*82.1±17.9*注與生理鹽水對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01實(shí)施例9 積雪草酸衍生物對(duì)大鼠急性局灶性腦缺血的影響Wistar大鼠，雄性，體重210±20克。二級(jí)。分為2批進(jìn)行。試劑氯代三苯基四氮唑(TTC)北京化工廠生產(chǎn)。每批動(dòng)物按體重隨機(jī)分正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、積雪草酸20mg/kg組、羥基積雪草酸20mg/kg組。每組12只。按體重灌胃給予各藥液0.5ml/100g體重，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水水，均連續(xù)給藥3天。于第2天藥后1h，戊巴比妥鈉(35mg/kg)腹腔注射麻醉。按文獻(xiàn)方法，暴露大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈，將吸有50％三氯化鐵溶液(1mol/L鹽酸)的小片定量濾紙敷于大腦中動(dòng)脈上，用解剖顯微鏡觀察血栓形成后取下濾紙，縫合創(chuàng)口。對(duì)照組除不敷蓋三氯化鐵濾紙外，其余手術(shù)步驟同模型組。造模后23h再灌胃給藥1次。于造模后24h，斷頭取腦。腦梗塞面積的測(cè)定大鼠斷頭后迅速取出全腦，除去嗅球、小腦和低位腦干，剩余部分在4℃下冠狀切成5片。迅速將腦片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC 1.5ml，1mol/L K2HPO40.1ml)，37℃避光溫孵30min，取出后置于10％甲醛溶液中避光保存。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細(xì)分離稱重，以梗塞組織重量占總腦重量的百分比作為腦梗塞面積。腦含水量的測(cè)定大鼠斷頭后迅速取出全腦，取右半腦球，稱濕重，110℃烘干24h，稱干重，計(jì)算腦含水量。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)，積雪草酸和羥基積雪草酸均能明顯縮小腦梗死面積，羥基積雪草酸還能明顯降低大腦中動(dòng)脈栓塞大鼠腦的含水量。
表8積雪草酸衍生物對(duì)大鼠急性局灶性腦缺血的影響組 別 劑量(mg/kg)動(dòng)物腦梗塞面積(％)腦含水量(％)正常對(duì)照 - 10 0.01++0.00277.1++0.4模型對(duì)照 - 10 5.12++1.34#80.1++1.4#積雪草酸 20 10 2.19++1.76**79.6++1.3羥基積雪草酸 20 10 2.43++1.23*77.2++2.1*注與正常對(duì)照組比較，#P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.0權(quán)利要求
1 積雪草酸衍生物在制備防治心、腦血管疾病的藥物中的用途。
2 根據(jù)權(quán)利要求1所述的積雪草酸衍生物的用途，其特征在于積雪草酸衍生物在制備防治心血管疾病的藥物中的用途。
3 根據(jù)權(quán)利要求1所述的積雪草酸衍生物的用途，其特征在于積雪草酸衍生物在制備防治腦血管疾病的藥物中的用途。
4 根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的積雪草酸衍生物的用途，其中所述積雪草酸衍生物用下式I表示 式I其中，R1、R2和R3分別選自氫，C1-C12直鏈或去鏈烷烴，C1-C12直鏈或支鏈烷?；?，取代芳烴烷烴或取代芳烴烷?；?；R4分別選自氫、羥基、胺基，C1-C12直鏈或支鏈烷氧基；X選自氧、硫、氮；R5選自氫，C1-C12直鏈或支鏈烷基或環(huán)狀烴基，取代芳烴烷基，單糖或多糖苷。
5 根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的積雪草酸衍生物的用途，其特征是化合物(I)中的取代基是R1＝R2＝R3＝R4＝H，R5＝H或葡萄糖基-葡萄糖基-鼠李糖基，X＝O。
6 根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的積雪草酸衍生物的用途，其特征是化合物(I)中的取代基是R1＝R2＝R3＝H，R4＝OH，R5＝H，或葡萄糖基-葡萄糖基-鼠李糖基，X＝O。
7 根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的積雪草酸衍生物的用途，其特征在于將積雪草酸衍生物和醫(yī)學(xué)上可接受的賦形劑或載體混合，制成藥物組合物，其形式可為片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸、注射劑。
8 根據(jù)權(quán)利要求7所述的積雪草酸衍生物的用途，其特征在于積雪草酸衍生物和醫(yī)學(xué)上可接受的賦形劑或載體以10-90∶90-10的重量比例混合。
9 根據(jù)權(quán)利要求7所述的積雪草酸衍生物的用途，其特征在于可制成適于胃腸道途徑給藥的劑型對(duì)患者給藥。
10 根據(jù)權(quán)利要求7所述的積雪草酸衍生物的用途，其特征在于可制成適于胃腸道外途徑給藥的劑型對(duì)患者給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是將積雪草酸衍生物用于制備防治心、腦血管疾病藥物中的新用途。本發(fā)明所述的積雪草酸衍生物加入輔料可制成膠囊、片劑、顆粒劑和針劑等劑型。
文檔編號(hào)A61K31/56GK1582946SQ200410046490
公開日2005年2月23日 申請(qǐng)日期2004年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月9日
發(fā)明者崔福貴 申請(qǐng)人:崔福貴