專利名稱：積雪草酸衍生物以及含有該衍生物的用于治療創(chuàng)傷的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)結(jié)構(gòu)式Ⅰ所示的積雪草酸衍生物

其中，R1表示氫、可由乙酰基或芐基保護(hù)的羥基、甲磺酰氧基、(甲硫基)硫代羰氧基、鹵素、乙氧基甲氧基或辛氧基甲氧基；R2表示氫或羥基；R1和R2可以形成一個(gè)氧代基；R3表示氫或可被乙?；虮郊柞；Ｗo(hù)的羥基；R2和R3可以形成環(huán)氧基；R4表示可被乙?；虮郊柞；Ｗo(hù)的羥甲基；R3和R4可以形成-OC(R6)(R7)OCH2-[其中，R6是氫、含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或苯基，R7表示氫、含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或苯基，并且R6和R7可以形成-(CH2)5-]；R5表示氫、含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、含有1至4個(gè)碳原子的烷氧基甲基、辛氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、芐氧基甲基或2-四氫吡喃基；以及含有上述衍生物作為活性組分用于治療創(chuàng)傷的藥物。
背景技術(shù)：
由積雪草中提取出的化合物積雪草酸、羥基積雪草酸(madecassic acid)和積雪草皂苷(積雪草酸的三糖)是由Bontems在1941年首次分離[J.E.Bontems,Bull.Sci.Pharmacol.,49,186-91(1941)]并由Polonsky確定了其結(jié)構(gòu)[J.Polonsky,Compt.Rend,,232,1978-80(1951)；J.Polonsky,Bull.Soc.Chim.,173-80(1953)]。自早期以來，包括積雪草酸和積雪草皂苷在內(nèi)的積雪草提取物被用于治療創(chuàng)傷皮膚或慢性潰瘍，同時(shí)也被用于治療因頓挫性結(jié)核和麻風(fēng)引起的皮膚變形[P.Boiteau,A.Buzas,E.Lederer & J.Polonsky,Bull.Soc.Chim.,31,46-51(1949)]。據(jù)報(bào)導(dǎo)，這些化合物治療創(chuàng)傷皮膚的機(jī)理包括活化馬爾皮基層細(xì)胞以及誘發(fā)角質(zhì)化[May.Anne,Eur.J.Pharmacol.,4(3),331-9(1968)]。
市售皮膚病治療藥一積雪草總苷(madecassol)是上述三種組分，即積雪草皂苷(40％)與積雪草酸和羥基積雪草酸(60％)的混合物。現(xiàn)已知道，治療作用主要來源于三個(gè)組分中的積雪草皂苷，即積雪草酸的三糖，而積雪草酸本身并無治療功效[Kiesswetter,Wien.Med.Wochschr.114(7),124-6(1964)]。然而，有報(bào)導(dǎo)稱，該結(jié)果歸因于上述化合物在體內(nèi)的吸收過程存在差異，而且實(shí)際顯示治療作用的原料是積雪草酸本身[L.F.Chasseaud,B.J.Fry,D.R.Hawkins,J.D.Lewis,T.Talor & D.E.Hathway,Arzneim-Forsch,21(9),179-84(1971)]。因此，積雪草酸的合成及其治療效果成為關(guān)注焦點(diǎn)。但是，當(dāng)從簡(jiǎn)單反應(yīng)原料開始合成時(shí)，積雪草酸的全合成需要相當(dāng)多的合成步驟，由于過程復(fù)雜并且經(jīng)濟(jì)上的缺點(diǎn)使這種方法存在許多問題。
發(fā)明公開本發(fā)明人以從積雪草獲得的積雪草酸作為起始物合成多種積雪草酸衍生物。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)所述衍生物在治療創(chuàng)傷方面具有優(yōu)異的治療作用，并且完成了本發(fā)明。
本發(fā)明涉及由下式Ⅰ所示積雪草酸衍生物

其中，R1表示氫、可由乙?；蚱S基保護(hù)的羥基、甲磺酰氧基、(甲硫基)硫代羰氧基、鹵素、乙氧基甲氧基或辛氧基甲氧基；R2表示氫或羥基；R1和R2可以形成一個(gè)氧代基；R3表示氫或可被乙酰基或苯甲?；Ｗo(hù)的羥基；R2和R3可以形成環(huán)氧基；R4表示可被乙?；虮郊柞；Ｗo(hù)的羥甲基；R3和R4可以形成-OC(R6)(R7)OCH2-[其中，R6是氫、含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或苯基，R7表示氫、含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或苯基，并且R6和R7可以形成-(CH2)5-]；R5表示氫、含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、含有1至4個(gè)碳原子的烷氧基甲基、辛氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、芐氧基甲基或2-四氫吡喃基；以及含有上述衍生物作為活性組分并用于治療創(chuàng)傷的藥物。
本發(fā)明所述積雪草酸衍生物的制備方法將在下文加以描述。方法1將積雪草的滴定提取物(TECA)水解，得到積雪草酸和羥基積雪草酸的混合物(2)，將該混合物在酸性催化劑下與2,2-二甲氧基丙烷與反應(yīng)。所得反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)柱色譜純化，分離出3,23-二羥基被保護(hù)的3,23-O-異亞丙基積雪草酸(3)。用重氮甲烷處理該產(chǎn)物以合成3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲酯(4)[參見合成路線1]。合成路線1

將積雪草酸3-和23-位上的兩個(gè)羥基用不同的酮或醛進(jìn)行保護(hù)合成出通式(5)所示化合物。[條件是R6=H并且R7=H，該化合物的合成采用了二甲基亞砜和三甲基氯硅烷]。通式(5)化合物在用氯甲基辛基醚處理后可合成出通式(6)所示化合物。[參見合成路線2]

(其中，R6和R7如上述定義)方法3將所得化合物(4)的2-位羥基用氫化鈉和咪唑處理，從而將其轉(zhuǎn)化為烷氧基。加入二硫化碳并將混合物加熱至回流，隨后用碘甲烷處理得到黃原酸酯(7)。所得混合物用氫化三丁基錫和催化量的AIBN處理，得到2-脫氧-3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲酯(8)，隨后將該化合物脫保護(hù)，生成2-脫氧積雪草酸甲酯(9)。將所得化合物(9)水解成為2-脫氧積雪草酸(10)。由2-脫氧草酸(10)合成得到2-脫氧-3,23-O-異亞丙基積雪草酸(11)，隨后將該化合物在方法2所述的條件下反應(yīng)，合成得到通式(12)所示化合物。[參見合成路線3]。

方法4按照方法2所述方式、從所得化合物(4)開始合成2-O-辛氧基甲基-3,23-異亞丙基積雪草酸甲酯(13)[參見合成路線4]。合成路線4

方法5將所得化合物(3)與烷基鹵化物在方法2所述的條件下反應(yīng)，得到通式(14)所示化合物，隨后將該化合物的2-位乙?；?，得到通式(15)化合物。[參見合成路線5]。合成路線5

(其中，R5如上所述)方法6由上述化合物(3)起始、在方法2所述但反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)的條件下制得2-O-乙氧基甲基-3,23-O-異亞丙基積雪草酸乙氧基甲酯(16)。按照相同的方式，利用氯甲基芐基醚使芐氧基甲基基團(tuán)與28-位的COOH基團(tuán)連接。所得化合物乙?；蟪蔀?,23-O-二乙?；e雪草酸芐氧基甲酯(17)。[參見合成路線6]合成路線6

方法7將積雪草酸的2,3-羥基轉(zhuǎn)化為2,3-環(huán)氧基，并將所得化合物與多種親核性化合物反應(yīng)以使環(huán)氧基開環(huán)，制得一系列本發(fā)明所述新化合物。也就是說，將化合物(4)與甲磺?；确磻?yīng)，得到2-O-甲磺?；?3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲酯(18)，隨后將該化合物用PTSA處理，生成2-O-甲磺?；e雪草酸甲酯(19)。進(jìn)而在甲醇溶劑中用碳酸鉀處理所得化合物，生成2,3-環(huán)氧積雪草酸甲酯(20)。將化合物(20)用碘化鋰三水合物和乙酸處理，生成為環(huán)氧基開環(huán)的2-α-碘-2-脫氧積雪草酸甲酯(21)。[參見合成路線7]合成路線7

方法8利用二甲基亞砜和三甲基氯硅烷將積雪草酸3-和23-位的兩個(gè)羥基進(jìn)行亞甲基保護(hù)以制得通式(5,R6=R7=H)所示化合物，隨后將該化合物用重鉻酸吡啶鎓(PDC)處理，得到通式(22)所示的化合物。將所得化合物與氯甲基辛基醚反應(yīng)，得到通式(23)化合物。[參見合成路線8]合成路線8


本發(fā)明的積雪草酸表現(xiàn)出與參比試劑，1％積雪草的定量提取物(TECA)相似或更優(yōu)異的作用。
通式(1)化合物的成人劑量是10至100mg/天。該劑量通常根據(jù)患者的年齡和體重以及癥狀的狀況決定。
利用常規(guī)方法可以將本發(fā)明所述用于治療創(chuàng)傷的藥物配制為軟膏劑。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式現(xiàn)在，本發(fā)明以實(shí)施例、試驗(yàn)例和制劑例作為參考加以說明。然而，本發(fā)明不局限在這些實(shí)施例中。實(shí)施例1積雪草皂苷和積雪草酸的大規(guī)模分離和提純通過柱色譜(硅膠，230-400目；二氯甲烷/甲醇=10/1)直接分離積雪草的定量提取物(5g)，得到積雪草酸(1.5g)、羥基積雪草酸(1.4g)以及積雪草皂苷和羥基積雪草皂苷的混合物(2.0g)。將所得混合物溶解在最少量的處于100℃水浴中的60％甲醇中，隨后冷卻至室溫，得到純的積雪草皂苷，該產(chǎn)物為針狀結(jié)晶(熔點(diǎn)230-240℃)。
另外，將提取物(62g)溶解在甲醇(700ml)中并加入5N氫氧化鈉溶液(50ml)，所得混合物在回流條件下加熱10小時(shí)。將反應(yīng)混合物在減壓條件下濃縮、中和、過濾并干燥，制得積雪草酸和羥基積雪草酸的混合物2.43g。實(shí)施例2制備3,23-O-異亞丙基積雪草酸(3)將積雪草酸和羥基積雪草酸的混合物(12g)和對(duì)甲苯磺酸(200g)溶解在無水DMF(100ml)中，以注射方式加入2,2-二甲氧基丙烷(5ml)。在室溫下將所得混合物攪拌14小時(shí)，隨后中和并在減壓條件下濃縮除去溶劑。在提取、洗滌和干燥后，將殘余物通過柱色譜(二氯甲烷∶甲醇=30∶1)純化得到8.04g 3,23-O-異亞丙基積雪草酸(3)。IR(neat):3440,1698,1200cm-1Mass(EI):m/e5 28(M+),513(M--Me),482(M+-HCOOME),452,424,407,248,203,189,1331H-NMR(CDCl3):δ0.75,1.04,1.06,1.09,1.45,1.46(each s,3H),0.85(d,3H,J=6.4Hz),0.95(d,3H,J=6.4Hz),2.18(d,1H,J=11.2Hz),3.32(d,1H,J=9.6Hz),3.46,3.51(ABq,2H,J=10.8Hz),3.78(m,1H),5.24(brt,1H)實(shí)施例33,23-O-異亞丙基積雪草酸甲酯(4)的制備將3,23-O-異丙基積雪草酸(3)(5g)溶解在乙醚中，并在0℃下緩慢滴加重氮甲烷的乙醚溶液。在室溫下攪拌1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物在減壓條件下濃縮除去乙醚，將該殘余物通過柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=3∶1)純化得到4.9g 3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲酯。
IR(neat):3466,1724,1201cm-1Mass(EI):m/e542(M+),527(M+-Me),482(M+-HCOOME),483,467,451,407,262,203,189,1331H-NMR(CDCl3):δ0.66,0.97,1.00,1.02,1.40,1.39(each s,3H),0.79(d,3H,J=6.4Hz),0.87(d,3H,J=6.0Hz),2.15(d,1H),3.25(d,1H,J=9.6Hz),3.41 3.43(ABq,2H),3.53(s,3H),3.72(m,1H),5.18(brt,1H)實(shí)施例4:3,23-O-亞烷基積雪草酸(5)的制備(1)R6=H,R7=H在攪拌下將二甲基亞砜(2.5當(dāng)量)和三甲基氯硅烷(2.5當(dāng)量)加入到THF中。將所得積雪草酸(2)(2.53g,5.18mmol)加入其中，并在回流和氬氣氛的條件下將混合物加熱3天。減壓條件下蒸除溶劑，所得殘余物通過柱色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)純化，制得2.01g淺黃色固體(收率79.45％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.75,1.05,1.08,1.12(each s,3H),0.85(d,3H,J=6.18Hz),0.95(d,3H,J=5.76Hz),2.19(d,1H,J=10.9Hz),3.04,3.76(ABq,2H,J=10.11Hz),3.23(d,1H,J=10.23Hz),3.87(dt,1H,J=4.26Hz,10.02Hz),4.95(d,d,2H,J=5.9Hz),5.24(t,1H)(2)R6=H,R7=CH3在減壓條件下，將所得積雪草酸(255mg,0.52mmol)用對(duì)甲苯磺酸干燥。隨后將該化合物溶解在無水THF中，并且滴加CH3CH(OEt)2(0.15ml)，將所得混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。向該反應(yīng)混合物中注入碳酸鈉的飽和溶液，減壓條件下蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物用乙酸乙酯稀釋、洗滌并干燥，通過柱色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)純化得到178g標(biāo)題化合物(收率66.2％)。IR(neat)2926,1695cm-1Mass(EI)m/e514[M+]
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.14(t,1H),4.64(qt,1H,J=4.92Hz),3.75(m,1H),3.63,2.97(ABq,2H,J=10.1Hz),3.17(d,1H,J=10.4Hz),0.98,0.95,0.65(each s,3H),0.85(d,3H,J=5,49Hz),0.75(d,3H,J=6.39Hz)(3)R6=H,R7=C6H5除用C6H5CH(OMe)2代替CH3CH(OEt)2之外，采用與實(shí)施例4(2)相同的方法(收率32.1％)。IR(neat)3437,1696cm-1Mass(EI)m/e576[M-]5781H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.52～7.49(m,2H),7.37～7.35(m,3H),5.53(s,1H),5.24(t,1H),3.90,3.30(ABq,2H,J=10.11Hz),3.47(d,1H,J=10.47Hz),2.18(d,1H,J=11.46Hz),1.19,1.09,4.07,0.77(each s,3H),0.93(d,3H,J=6.09Hz),0.85(d,3H,J=6.33Hz)(4)R6=CH3,R7=C2H5除用C2H5COCH3代替CH3CH(OEt)2之外，采用與實(shí)施例4(2)相同的方法(收率58.96％)。IR(neat)3436,1694cm-1Mass(EI)m/e542[M+]1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.18(t,1H),3.68,3.47(ABq,2H,J=4.26Hz),3.48(d,1H,J=7.05Hz),2.12(d,1H,J=10.65Hz),0.97,0.89,0.69(each s,3H)(5)R6=CH3,R7=C3H7除用C3H7COCH3代替CH3CH(OEt)2之外，采用與實(shí)施例4(2)相同的方法(收率43.01％)。IR(neat)3369,2928,1694cm-1
Mass(EI)m/e558[M+2]1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.18(t,1H),3.79～3.75(m,1H),3.18(d,1H,J=10.23Hz),3.67,2.98(ABq,2H,J=9.8Hz),2.12(d,1H,J=10.65Hz),1.05,1.01,0.98,0.69(each s,3H),0.88(d.3H,J=5.55Hz),0.79(d,3H,J=6.39Hz)(6)R6.R7=-(CH2)5-除用環(huán)己酮代替CH3CH(OEt)2之外，采用與實(shí)施例4(2)相同的方法。
Mass(EI)m/e1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.77,0.96,1.07(each s,3H),0.85(d,3H,J=6.33Hz),2.18(d,1H,J=11.46Hz),3.24(d,1H,J=9.51Hz),3.41,3.59(ABq,2H,J=10.47Hz),3.76(dt,1H,J=8.54Hz),5.23(t,1H)實(shí)施例5制備3,23-O-亞烷基積雪草酸辛氧基甲酯(6)(1)R6=H,R7=H將實(shí)施例4(1)所得化合物5(258.4mg,0.52mmol)溶解在無水二氯甲烷中。將二異丙基乙基胺(0.18ml)加入其中并在室溫下攪拌10分鐘。在0℃下，滴加氯甲基辛基醚(0.1ml)并攪拌5分鐘。向其中加入甲醇，將殘余物通過柱色譜(二氯甲烷∶甲醇=30∶1)純化得到138mg白色固體(收率41.6％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.76,1.05,1.09,1.13(each s,3H),0.88(d,3H,J=5.6Hz),0.95(d,3H,J=6.36Hz),2.25(d,1H,J=10.8Hz),3.04,3.76(ABq,2H,J=10.0Hz),3.22(d,1H,J=10.8Hz),3.58(m,2H),4.94(d,d,2H,J=6.0Hz)5.21,5.24(ABq,2H,J=5.88Hz),5.26(t,1H)(2)R6=H,R7=CH3
除用實(shí)施例4(2)制得的化合物5代替實(shí)施例4(1)中的化合物5之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法。IR(neat)3481,2927,1732cm-1Mass(EI)m/e656[M+]1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.22(t,1H),5.20,5.17(ABq,2H,J=6.21Hz),4.69(qt,1H,J=4.95Hz),3.84～3.77(m,1H),3.69,3.03(ABq,2H,J=10.07Hz),3.55(m,2H)2.22(d,1H,J=11.16Hz),1.05,1.00,0.95,0.72(each s,3H),0.84(d,3H,J=2.55Hz),0.82(d,3H,J=2.19Hz)(3)R6=H,R7=C6H5除用實(shí)施例4(3)制得的化合物5代替實(shí)施例4(1)中的化合物5之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率23.8％)。IR(均相)3697,1730cm-1質(zhì)譜(EI)m/e719[M++1](4)R6=CH3,R7=C2H5除用實(shí)施例4(4)制得的化合物5代替實(shí)施例4(1)中的化合物5之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率58.96％)。IR(neat)3469,1733cm-1Mass(EI)m/e684[M+]1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.16(t,1H),5.14,5.11(ABq,2H,J=6.29Hz),3.68(m,1H),3.48(m,2H,),3.24(d,1H,J=9.57Hz),2.16(d,1H,J=11.5Hz),1.00,0.96,0.91,0.66(each s,3H),0.84(d,1 H,J=5.55Hz),0.76(d,1H,J=5.73Hz)(5)R6=CH3,R7=C3H7除用實(shí)施例4(5)制得的化合物5代替實(shí)施例4(1)中的化合物5之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率80.2％)。IR(neat)3468,2927,1729cm-1Mass(EI)m/e698[M+]1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.26～5.20(m,2H),5.10(t,1H),3.87～3.84(m,1H),3.60～3.56(m,2H),2.27(d,1H),1.08,1.07,1.03,0.76(each s,3H),0.94(d,3H,J=5.84Hz),0.87(d,3H,J=5.4Hz)(6)R6-R7=-(CH2)5-除用實(shí)施例4(6)制得的化合物5代替實(shí)施例4(1)中的化合物5之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率34％)。
Mass(EI)m/e710[M+],667,596,567,522,5211H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.75,0.95,1.03(each s,3H),0.87(d,3H,J=5.86Hz),1.09(d,3H,J=3.9Hz),2.10(d,1H,J=4.40Hz),3.35(d,1H,J=9.77Hz),3.48,3.52(ABq,2H,J=11.24Hz),3.58(m,2H),3.8(m,1H),5.21,5.24(dd,2H,J=5.86Hz),5.26(t,1H)實(shí)施例6制備3,23-O-異亞丙基-2-O-[(甲硫基)硫羰基]積雪草酸甲酯(7)將氫化鈉(處于礦物油中的60％分散體，18.3mg,0.46mmol)、咪唑(2mg)和四氫呋喃(2ml)加至3,23-異亞丙基積雪草酸甲酯(4)(50mg,0.092mmol)中，并且將所得混合物攪拌30分鐘。將二硫化碳(0.2ml，過量)加入其中并回流2小時(shí)。加入碘甲烷(0.1ml,過量)并再次于回流條件下加熱1小時(shí)。反應(yīng)混合物用水處理并在減壓條件下除去溶劑。在提取、洗滌和干燥后，將殘余物通過柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=10∶1)純化得到56mg白色固體(收率96％)。IR(neat):1723,1233,1057cm-11H NMR(CDCl3)δ5.78(1H,m),5.24(1H,bt),3.80(1H,d,J=10Hz),3.60(3H,s),3.54,3.58(2H,dd,J=7.2Hz),2.51(3H,s),2.23(1H,d,J=11.2Hz),0.94(3H,d,J=5.2Hz),0.84(3H,d,J=6Hz),0.73,1.09,1.11,1.14,1.41,1.45(each 3H,s).實(shí)施例72-脫氧-3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲酯(8)的制備將催化量的AIBN和苯(10ml)加入到上述黃原酸酯化合物(7)(202mg,0.32mmol)中。加入氫化三丁基錫(0.26ml,0.96mmol)并將生成物在回流條件下加熱并攪拌1.5小時(shí)。將所得混合物在減壓條件下濃縮并除去溶劑。所得殘余物通過柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=10∶1)精制得到168mg白色固體(收率100％)。該產(chǎn)物用己烷重結(jié)晶生成針狀結(jié)晶。
MS(EI):527(M++1),512,407,262,203,133.
1H NMR(CDCl3)δ5.25(1H,bt),3.60(3H,s),3.52(1H,t),3.44,3.54(2H,dd,J=10Hz),2.23(1H,dJ=11.2Hz),0.94(3H,d,J=5.6Hz),0.86(3H,d,J=6.4Hz),0.73,0.97,1.07,1.09,1.42,1.45(each 3H,s)實(shí)施例8:2-脫氧積雪草酸(9)的制備將四氫呋喃(10ml)和1N鹽酸溶液(1ml)加入到所得化合物(8)(460mg,0.87mmol)中并在室溫下攪拌5小時(shí)。減壓下蒸餾除去全部溶劑。所得殘余物通過柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=3∶2)精制得到402mg白色固體(收率95％)。所得粗產(chǎn)物用乙酸乙酯重結(jié)晶得到針狀結(jié)晶。IR(均相)3400,1724cm-1MS(EI):486(M+),426,262,203,133施例9:2-脫氧積雪草酸(10)的制備將LiI-3H2O(450mg,2.39mmol)和2,4,6-三甲吡啶(colidine)(5ml)加至2-脫氧積雪草酸甲酯(9)(38mg,0.78mmol)中并在回流條件下加熱10小時(shí)。用鋁箔將反應(yīng)燒瓶覆蓋起來以阻斷回流過程中的光線。在減壓條件下濃縮所得溶液除去可力丁。所得殘余物通過柱色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)純化得到淺黃色固體(收率99％)。所得產(chǎn)物用甲醇重結(jié)晶得到280mg針狀結(jié)晶(收率76％)。IR(KBr):3436,1693cm-1MS(EI):472(M+),426,248,203,1331H NMR(CDCl3+pyridine-d5)δ5.21(1H,bt,J=2.8Hz,3.6Hz),3.60(1H,t,J=7.2Hz,8.2Hz),3.36,3.70(2H,dd,J=10.0Hz),2.21(1H,d,J=11.2Hz).實(shí)施例10:2-脫氧-3,23-O-異亞丙基積雪草酸(11)的制備除用化合物10代替積雪草酸和羥基積雪草酸的混合物之外，采用與實(shí)施例2相同的方法(收率59.9％)。IR(neat)2928,1697cm-11H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.25(d,1H),3.52(t,1H),2.17(d,1H)1.44,1.40,1.10,1.04,0.98,0.78(each s,3H),0.95(d,3H,J=6.4Hz),0.87(d,3H,J=6.4Hz)實(shí)施例11:2-脫氧-3,23-O-異亞丙基積雪草酸辛氧基甲酯(12,R5=辛氧基甲基)的制備除用化合物11代替實(shí)施例5(1)中的化合物5之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率53.9％)。
IR(neat)2929,1733cm-1Mass(EI)m/e654[M+]
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.17(t,1H),5.14,5.12(ABq,2H,J=6.02Hz),3.49～3.48(m,2H),3.46,3.34(ABq,2H,J=6.17Hz),2.15(d,1H),1.35,1.32,1.01,0.96,0.67(each s,3H),0.87(d,3H,J=7.04Hz),實(shí)施例12:2-脫氧-3,23-O-異亞丙基積雪草酸乙氧基甲酯(12,R5=乙氧基甲基)除用化合物11代替實(shí)施例5(1)中的化合物5以及用氯甲基乙基醚代替氯甲基辛基醚之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率46％)。
IR(neat)2929,1733cm-1Mass(EI)n/e570[M+]1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.16(t,1H),5.16(s,2H),3.60,3.58(ABq,2H,J=1.36Hz),3.45～3.35(m.3H),2.15(d,1H),1.45,1.38,1.34,1.04,0.98,0.70(each s,3H),0.88(d,3H,J=6.32Hz),0.79(d,3H,J=2.24Hz)實(shí)施例13:2-脫氧-3,23-O-異亞丙基積雪草酸四氫吡喃基酯(12,R5=2-四氫吡喃基)化合物11(133mg,0.26mmol)和對(duì)甲苯磺酸吡啶鎓(催化量)溶解在無水二氯甲烷中。將二氫吡喃(0.07ml)滴加其中并在室溫下攪拌40小時(shí)。將生成物中和并在減壓條件下除去溶劑。在提取、洗滌和干燥后，所得殘余物通過柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=8∶1)純化得到73mg化合物(12,R5=2-四氫吡喃基)(收率47.2％)。
IR(neat)2945,1733cm-11H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.96(t,1/2H),5.92(t,1/2H),5.28(t,1/2H),5.26(t,1/2H),3.88(t,1H),3.67(t,1H),3.52(t,2H),3.46(t,2H),1.45,1.42,1.11,1.05,
0.96(each s,3H),0.87(d,3H,J=6.4Hz)實(shí)施例14:2-O-辛氧基甲基-3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲酯(13)的制備除用化合物4代替實(shí)施例5(1)中的化合物5之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法。
IR(neat)2927,1728cm-1Mass(EI)m/e684[M+]1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.18(t,1H),4.73,4.62(ABq,2H,J=6.72Hz),3.70～3,65(m,1H),3.53(s,3H),3.35(d,1H,J=9.76Hz),1.36,1.33,1.02,1.01,0.96,0.66(each s,3H),0.87(d,3H,J=6.18Hz),0.79(d,3H,J=6.46Hz)實(shí)施例15:3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲氧基甲酯(14,R5=甲氧基甲基)的制備除用化合物3代替實(shí)施例5(1)中的化合物5以及用氯甲基乙基醚代替氯甲基辛基醚之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率19％)。熔點(diǎn)104-112℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.77,1.04,1.08,1.11,1.45,1.46(each s,3H),0.87(d,3H,J=6.3Hz),0.96(d,3H,J=5.7Hz),2.27(d,1H,J=11.1Hz),3.32(d,1H,J=9.6Hz),3.45(s,3H),3.47(d,1H,9.6Hz),3.55(d,1H,9Hz),3.79(m,1H),5.17(d,1H,6Hz),5.20(d,2H,J=6Hz),5.28(t,1H,J=3.5Hz)IR(KBr)cm-13500,2950,1740,1450,1380,1065,925,860[α]o23=+10.4°(c=0.2,CHCl3)實(shí)施例16:3,23-O-異亞丙基積雪草酸乙氧基甲酯(14,R5=乙氧基甲基)的制備除用化合物3代替實(shí)施例5(1)中的化合物5以及用氯甲基乙基醚代替氯甲基辛基醚之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率46％)。IR(neat):3468,1734cm-1MS(EI)m/z:586(M+)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.27(t,1H),5.23(s,2H),3.74-3.82(m,1H),3.66(q,2H,J=7.6Hz),3.53,3.44(ABq,2H),3.32(d,1H,J=9.6Hz),2.25(d,1H),1.46,1.44,1.10(ABq,2H),1.07,1.03,0.76(each s,3H),1.22(t,3H,J=6.8Hz),0.95(d,3H,J=5.6Hz),0.86(d,3H,J=6.4Hz)實(shí)施例17:3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲氧基乙氧基甲酯(14,R5=甲氧基乙氧基甲基)除用化合物3代替實(shí)施例5(1)中的化合物5以及用甲氧基乙氧基甲基氯代替氯甲基辛基醚之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率25％)。熔點(diǎn)76-79℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.77,1.04,1.08,1.11,1.45,1.46(each s,3H),0.86(d,6.3Hz,J=3Hz),0.96(d,3H,J=5.7Hz)2.2-0.9(m,21H),2.26(d,1H,J=10.2Hz),3.32(d,1H,J=9.6Hz)3.39(s,3H),3.47(d,J=9.0Hz),3.52(d,1H,J=9.0Hz),3.55(t,2H,J=5.1Hz),3.77(m,1H),3.77(t,2H,J=5.1Hz),5.26(t,1H,J=3.6H2),5.28(s,2H)IR(KBr)cm-13500,2950,1725,1450,1380,1070,940,860[α]o24=+38.7°(c=0.1,CHCl3)實(shí)施例18:2-O-乙酰基-3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲氧基甲酯(15,R5=甲氧基甲基)的制備將所得化合物(14)(R5=甲氧基甲基,139mg,0.24mmol)溶解在吡啶中并攪拌。向其中加入乙酸酐(0.04ml,0.38mmol)且攪拌2天。將生成物減壓濃縮、洗滌、干燥并通過柱色譜(二氯甲烷∶甲醇=30∶1)純化，得到75mg白色固體(收率52％)。熔點(diǎn)110-115℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.77,1.09,1.11,1.12,1.41,1.43,2.01(each s,3H),0.86(d,3H,J=6.3Hz),0.95(d,3H,J=6Hz),2.27(d,1H,J=10.8Hz),3.45(s,3H),3.50(d,1H,J=9.6Hz),3.52(d,1H,J=9.6Hz),3.56(d,3H,J=9Hz),5.0(m,1H),5.17(d,1H,J=6Hz),5.20(d,1H.J=6Hz),5.27(t,1H,J=3.5Hz)IR(KBr)cm-12950,2740,1450,1240,1080,1025,950,800[α]o24=+43.6°(c=0.1,CHCl3)實(shí)施例19:2-O-乙?；?3,23-O-異亞丙基積雪草酸乙氧基甲酯(15,R5=乙氧基甲基)的制備除用化合物14(R5=乙氧基甲基)代替實(shí)施例18中所用的化合物14(R5=甲氧基甲基)外，采用與實(shí)施例18相同的方法(收率91％)熔點(diǎn)136-137℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.85(d,3H,J=6.1Hz),0.95(d,3H,J=5.7Hz),1.01,1.06,1.08,1.41,1.43,2.01(each s,3H),0.9-2.2(m,20H),1.21(t,7.3Hz),2.26(d,1H,11.1Hz),3.48(d,1H,J=9Hz),3.53(d,1H,J=9Hz),3.54(d,1H,J=10.7Hz),3.66(q,2H,J=7.3Hz),5.00(dt,1H,4.3,10.7Hz),5.23(s,2H),5.26(t,1H,J=4.2Hz)[α]o24=-0.66°(c=0.34,CCl4)實(shí)施例20:2-O-乙氧基甲基-3,23-O-異亞丙基積雪草酸乙氧基甲酯(16)的制備除用化合物3代替實(shí)施例5(1)中所得化合物5并用氯甲基乙基醚代替氯甲基辛基醚外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率19％)熔點(diǎn)68-70℃1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.86(d,3H,J=6.3Hz),0.95(d,3H,J=5.7Hz),0.80,1.05,1.10,1.41,1.51(each s,3H),0.9-2.2(m,20H),1.22(t,3H,J=7.2Hz),2.26(d,1H,J=11.1Hz),3.35(d,1H,J=9Hz),3.39(d,1H,J=9Hz),3.46(d,1H,J=9.6Hz),3.60(q,2H,J=7.2Hz),3.76(q,2H,J=7.2Hz),3.80(dt,1H,4.2,9.6Hz),4.67(s,2H),5.24(s,2H),5.27(t,1H,J=3.6Hz)IR(KBr)cm-12950,1715,1450,1380,1020,925,860[α]o24=+33.1°(c=0.1,CHCl3)實(shí)施例21:3,23-O-二乙?；e雪草酸芐氧基甲酯(17)的制備除用化合物3代替實(shí)施例5(1)中所得化合物5并用氯甲基芐基醚代替氯甲基辛基醚外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法并隨后通過乙?；饔眠M(jìn)行合成(收率45％)1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.75,0.85,0.99,1.10,2.04,2.09(each s,3H),0.89(d,3H,J=6.3Hz),0.9-2.2(m,21H),2.27(d,1H,J=12.9Hz),3.57(d,J=11.7Hz),3.83(d,J=11.7Hz),3.90(dt,1H,3.9,10.2Hz),4.68(s,2H),5.04(d,1H,J=10.2Hz),5.28(t,1H,J=3.6Hz),5.32(s,3H),7.34(s,5H)IR(neat)cm-12950,2740,1450,1380,1065,925,860,800[α]o25=+25.25°(c=0.1,CHCl3)實(shí)施例22:2-O-甲磺酰基-3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲酯(18)的制備將3,23-O-異亞丙基積雪草酸甲酯(4)(354.7mg,0.65mmol)溶解在二氯甲烷(15ml)中。向其中加入三乙胺(82.4mg,0.72mmol)和甲磺酰氯(99.2mg,0.98mmol)并在0℃和氮?dú)夥盏臈l件下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)完畢后，除去溶劑。在提取、洗滌和干燥后，將殘余物通過柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=2∶1)純化，得到380mg純的化合物(18)，該化合物為白色固體(收率93％)。1H NMR(CDCl3)δ5.24(1H,m),4.69-4.62(1H,m),3.60(3H,s),3.57(1H,d,J=10.5Hz),3.53(1H,d,J=10.5Hz),3.49(1H,d,J=10.5Hz),3.01(3H,s),2.26-2.20(1H,m),2.23(1H,bs),1.44(3H,s),1.40(3H,s),1.11(3H,s),1.09(3H,s),1.07(3H,s),0.94(3H,d,J=6.0Hz),0.83(3H,d,J=7.0Hz),0.72(3H,s)實(shí)施例23:2-O-甲磺?；e雪草酸甲酯(19)的制備將所得化合物(18)(1.2g,1.92mmol)溶解在甲醇(30ml)中。加入對(duì)甲苯磺酸(480mg,2.52mmol)并在氮?dú)夥盏臈l件下回流10分鐘。將反應(yīng)物中和、提取、洗滌、干燥并用柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=1∶1)純化，得到1.06g的純化合物(19)，該化合物為無色油狀物(收率94％)。1H NMR(CDCl3)δ5.24(1H,m),4.77-4.74(1H,m),3.69(1H,d,J=10.5Hz),3.61(3H,s),3.44(1H,d,J=10.5Hz),3.70(1H,bs),3.10(3H,s),1.08(3H,s),1.07(3H,s),0.95(3H,s),0.94(3H,d,J=5.1Hz),0.85(3H,d,J=6.5Hz),0.74(3H,s)實(shí)施例24:2,3-環(huán)氧積雪草酸甲酯(20)的制備將所得化合物(19)(2.78g,4.77mmol)溶解在甲醇(60ml)中。向其中加入碳酸鉀(1.32g,9.53mmol)并在室溫和氮?dú)夥障聰嚢?天。反應(yīng)完畢后，除去溶劑。在提取、洗滌和干燥后，將殘余物用柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=2∶1)純化得到2.05g的純化合物(20)，該化合物為白色固體(收率89％)。熔點(diǎn)230-234℃IR(KBr):3400,2920,1730,1430,1450,1200,1040cm-11H NMR(CDCl3)δ5.27(1H,m),3.60(3H,s),3.56(1H,m),3.31(1H,m),3.27(1H,m),3.11(1H,d,J=4.0Hz),1.12(3H,s),1.6(3H,s),0.96(3H,s),0.94(3H,d,J=5.1Hz),0.86(3H,d,J=6.4Hz),0.74(3H,s)實(shí)施例25:2β-碘-2-脫氧積雪草酸甲酯(21)的制備將化合物20(24.5mg,0.05mmol)、LiI·3H2O(98mg,10.3當(dāng)量)溶解在THF(5ml)中。在攪拌的同時(shí)加入AcOH(0.5ml)并使生成物在氮?dú)夥盏臈l件下反應(yīng)1天。該生成物用水稀釋、用乙酸乙酯提取、用鹽水和10％Na2S2O3洗滌、干燥并通過柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=3∶1)純化，得到16.5mg無色固體(收率53.3％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ0.74,0.85,1.02,1.08(each s,3H),0.86(d,3H,J=6.3Hz),0.94(d,3H,J=5.13Hz),2.24(d,1H,J=11.2Hz),3.42,3.72(ABq,2H,J=12.7Hz),3.60(s,3H),4.57(dt,1H),5.25(t,1H)Mass(EI)m/e612[M+],552,467,407,349實(shí)施例26:3,23-O亞甲基-2-氧代積雪草酸(22)的制備將化合物22(1.1g,2.2mmol)和重鉻酸吡啶鎓(0.83g,2.2mmol)溶解在無水二氯甲烷中。向其中加入乙酸酐(0.62ml)并在回流條件下加熱2小時(shí)。將生成物用乙酸乙酯稀釋、過濾并通過柱色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)純化,得到化合物23(0.32g，收率29.2％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.75,1.02,1.07,1.13(each s,3H),0.95(d,3H,J=5.9Hz),0.85(d,3H,J=6.3Hz),2.11-2.21(m,2H),2.39(d,1H,J=12.7Hz),3.42,3.84(ABq,2H,J=10.4Hz),4.10(s,1H),4.69,5.20(ABq,2H,J=5.9Hz),5.23(t,1H)實(shí)施例27:3,23-O-亞甲基-2-氧代積雪草酸辛氧基甲酯(23)的制備除用化合物22代替實(shí)施例5(1)所用化合物5之外，采用與實(shí)施例5(1)相同的方法(收率44％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.78,1.02,1.10,1.14(each s,3H),0.87(d,3H,J=7.3Hz),0.95(d,3H,J=5.9Hz),2.13,2.40(ABq,2H,J=12.7Hz),2.27(d,1H,J=11.5Hz),3.42,3.84(ABq,2H,J=10.1Hz),3.58(dt,2H,J=5.6Hz),4.10(s,1H),4.69,5.24(ABq,2H,J=6.1Hz),5.20-5.25(m,2H),5.25(t,1H)試驗(yàn)例1本發(fā)明所述化合物對(duì)創(chuàng)傷的治療作用制劑軟膏劑將本發(fā)明所述積雪草酸衍生物(200mg)精確稱重并置于20ml注射器內(nèi)。準(zhǔn)確稱量丙二醇(6g)、硬脂酸乙二醇酯(3g)和白凡士林(1g)并加入其中。使注射器中的內(nèi)容物在80℃的水浴中完全熔融并攪拌約5分鐘使活性組分均勻分散在上述三種載體中。另外，將加熱至80℃的純水置于另一個(gè)注射器。將上述兩個(gè)注射器用三通連接管相連，自兩端注射并反復(fù)約20次以使內(nèi)容物均化。將均勻的內(nèi)容物放置在容器內(nèi)并在室溫下緩慢固化。
試驗(yàn)方法為了測(cè)定新合成的積雪草酸衍生物、自天然物分離出的羥基積雪草酸和積雪草皂苷的治療作用，在大鼠上制造實(shí)驗(yàn)創(chuàng)傷并觀察結(jié)果。在若干創(chuàng)傷治療效果的測(cè)定方法中，所述測(cè)定方法是基于通過組織繁殖(例如肉芽)治療因壞死所造成的創(chuàng)傷或損害的邏輯，牽引韌力的測(cè)定是基于牽引韌力將穩(wěn)定增加直至恢復(fù)部位再次撕開的事實(shí)。在測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，拉扯創(chuàng)傷兩側(cè)，以測(cè)定在創(chuàng)傷部位撕開時(shí)牽引韌力所達(dá)到的最高點(diǎn)。已知，牽引韌力的測(cè)量結(jié)果反映出被切傷口在恢復(fù)質(zhì)量和速度上均很良好。
在表1中，合成積雪草酸衍生物以及市售積雪草總苷軟膏中的主組分一積雪草滴定提取物(TECA)在治療創(chuàng)傷上的效果均通過牽引韌力試驗(yàn)加以驗(yàn)證和比較。表1．新的積雪草皂苷衍生物對(duì)創(chuàng)傷的治療作用

從上述試驗(yàn)例可看出，本發(fā)明所述積雪草酸衍生物顯示出優(yōu)異的創(chuàng)傷治療效果。
權(quán)利要求
1．一種通式Ⅰ所示的積雪草酸衍生物或其可藥用的鹽或酯
其中，R1表示氫、可由乙?；蚱S基保護(hù)的羥基、甲磺酰氧基、甲硫基硫代羰氧基、鹵素、乙氧基甲氧基或辛氧基甲氧基；R2表示氫或羥基；R1和R2可以形成一個(gè)氧代基；R3表示氫或可被乙酰基或苯甲?；Ｗo(hù)的羥基或氫；R2和R3可以形成環(huán)氧基；R4表示可被乙?；虮郊柞；Ｗo(hù)的羥甲基；R3和R4可以形成-OC(R6)(R7)OCH2-，其中，R6是氫、含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或苯基，R7表示氫、含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基或苯基，并且R6和R7可以形成-(CH2)5-；R5表示氫、含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、含有1至4個(gè)碳原子的烷氧基甲基、辛氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、芐氧基甲基或2-四氫吡喃基。
2．一種治療創(chuàng)傷的藥物，該方法含有權(quán)利要求1所述的通式1的積雪草酸衍生物或其可藥用的鹽或酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(1)所示的積雪草酸衍生物以及用于治療創(chuàng)傷的含有該衍生物作為活性組分的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/357GK1238756SQ97180161
公開日1999年12月15日 申請(qǐng)日期1997年11月27日 優(yōu)先權(quán)日1996年11月27日
發(fā)明者朱尚涉, 樸亨根, 金熙斗, 鄭英薰, 樸恩希, 金洪杓, 徐城基, 南泰圭, 韓德熙, 劉知炯, 林斗然, 金廷勛, 金姬萬, 李美卿, 林景花, 林珉廷, 金到河, 金昭延, 沈必鐘, 丁珠銀, 犯姬英 申請(qǐng)人:東國(guó)制藥株式會(huì)社