專利名稱：一種治療慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎的藥物及制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于一種中藥及其制備方法。
背景技術：
目前伴隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提高，人們生活節(jié)奏也不斷加快，同時也會導致生活的不規(guī)律，脾胃功能失調(diào)，腹瀉伴有持續(xù)性或反復性粘液血便、腹痛及不同程度的全身癥狀。特發(fā)性潰瘍性結(jié)腸炎又稱為非特異性潰瘍性結(jié)腸炎，是一種原因不明的主要發(fā)生在結(jié)腸粘膜層的炎癥性腸病，以潰瘍糜爛為主，主要累及直腸、乙狀結(jié)腸粘膜，向上擴展可至左半、右半結(jié)腸，甚至全結(jié)腸和回腸末端。本病多見于青、中年，其主要的臨床表現(xiàn)有血性粘液便、腹痛、腹瀉、里急后重等。本病可發(fā)生嚴重的并發(fā)癥。因此研究一種高效、無毒的治療藥物，就顯得非常重要，它對改善人民生活質(zhì)量，提高工作效率，造福人類具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種治療慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎的藥物及制備方法，以解決目前治療慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎療效不好的問題。
結(jié)腸炎中醫(yī)應屬于“泄瀉”、“腸癖”、“休息痢”等范疇。早在《內(nèi)經(jīng)》中就有相關記載。腎為先天之本，為胃之關，主司二便開合，且脾胃腐熟水谷與運化精微有賴于腎陽命火的溫煦。若腎陽不足，命門火衰，則不能溫養(yǎng)脾土，以至運化失常，每易引起久瀉不愈之證。故《不居集》吳澄指出“命門火衰；則陰寒獨盛；丹田不暖，則尾閭不固?！蓖舭骸夺t(yī)方集解》亦指出“久瀉皆由腎命火衰，不能專責脾胃，故大補下焦元陽，使火勝土強，則能制水而不復妄行矣?！闭f明溫腎助陽是澀腸止瀉較重要的治療方法。同時由于脾居中焦，職司運化，若脾失健運，不能腐熟水谷并運化精微，遂致瀉泄之證。《景岳全書》張介賓指出“瀉泄之本，無不由于脾胃?！币蚨鴮τ谄⑽柑摵碌臑a痢日久，滑脫不禁者，其脾虛失運亦是其關鍵的病機之一。
結(jié)腸病變與先天不足、腎陽虧損、調(diào)理二便之職失調(diào)有關。其致病原因，有感受外邪、飲食所傷，七情不和及臟腑虛弱等，但主要關鍵在于脾腎功能失調(diào)，脾失健運，腎失固澀。慢性結(jié)腸炎大多病程長、病情纏綿難愈，尤其是潰瘍性結(jié)腸炎，大便帶粘液和膿血，患者十分痛苦，這些癥狀不是通過調(diào)理脾胃、健脾益腸就能解決的，以中醫(yī)辯證和西醫(yī)辨病相結(jié)合的“整體觀念”為指導。
應補腎健脾、兼以益氣、寬中、厚腸止瀉、燮理陰陽，調(diào)整免疫功能，誘導炎癥細胞調(diào)亡，減輕炎癥反應，從而達到治療結(jié)腸炎的目的。本方適合脾腎兩虛的久治不愈的非特異性潰瘍型結(jié)腸炎。
分析以上過程，本方以鹽補骨脂、白術為君藥，補骨脂其性溫斂澀，益脾助陽，溫脾止瀉，可補腎陽以養(yǎng)脾土，使中陽充足，水谷腐熟，運化不息而泄瀉自止。白術苦、甘溫、入脾胃經(jīng)。補脾燥濕，《珍珠囊》“除濕益氣，和中補陽，消疾逐水，生津止渴，止瀉痢”。補骨脂以補腎為主，白術以補脾為長。二藥合用，則一腎一脾，腎脾同治，相得益彰，溫腎健脾，而有釜底抽薪之功。
臣藥為炒山藥、煨肉豆蔻、五倍子、茯苓、吳茱萸五味藥。炒山藥補脾胃，益肺腎，補而不滯，性平不燥，能補脾氣而益胃陰，作用和緩，君藥的輔助之品肉豆蔻味辛性溫，歸脾、胃、大腸經(jīng)。性善溫脾胃并澀腸止瀉，行氣消脹。五倍子固腎氣，澀精止瀉。《本草拾遺》“治腸虛瀉痢”吳茱萸溫脾胃，以散陰寒。茯苓的作用一是健脾補中，二是利尿滲濕，腸道水分因而減少，使稀溏的大便變稠。與白術配伍，一健一滲，脾土健運、水濕可除。兩藥相輔相成，增強健中運化水濕之力。
秦皮為佐藥，中醫(yī)有″無濕不成瀉″之說，感受濕邪，影響脾的運化，能導致腹瀉，加以秦皮，苦澀寒，入肝、膽、大腸經(jīng)?？汕鍩嵩餄?，收澀止瀉。
使藥為炙甘草、煨木香二味。甘草甘平，入心肺脾胃經(jīng)，具有益氣補中，緩急止痛作用，與健脾補氣的白術配伍，出自《太平惠民和劑局方》白術六一湯，起到相輔相成、互相發(fā)揮特長，增強補脾益氣、緩急止痛下利等作用。大隊的固澀、補益之品，易壅滯氣機，且腸腑以通為補，以行為順。酌配少量行氣藥木香，使?jié)杏行?，有斂而不滯之妙。諸藥合用共奏益腎健脾澀腸止瀉之效，主要用于慢性潰瘍性結(jié)腸炎中醫(yī)辨證為脾腎兩虛之證。
本發(fā)明藥物組分的用量也是經(jīng)過發(fā)明人進行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量為在下述重量范圍內(nèi)都具有較好療效鹽補骨脂120～200份，炒白術120～200份，炒山藥80～160份，茯苓80～160份，五倍子40～120份，秦皮40～120份，煨肉豆蔻40～120份，煨木香20～60份，吳茱萸20～60份，炙甘草20～60份。
優(yōu)選為鹽補骨脂160份，炒白術160份，炒山藥120份，茯苓120份，五倍子80份，秦皮80份，煨肉豆蔻80份，煨木香40份，吳茱萸40份，炙甘草40份。
本發(fā)明藥物活性組分的制備方法如下1)稱取以上十味，其中鹽補骨脂及1/3量的炒山藥粉碎成細粉，備用；2)炒白術、煨肉豆蔻、煨木香和吳茱萸加6倍量水，浸泡12小時，水蒸氣蒸餾6小時，得揮發(fā)油與水提取液，水提取液及藥渣備用；3)稱取2)所得揮發(fā)油8倍量的β-環(huán)糊精，置適當玻璃容器中，加入β-環(huán)糊精6倍量的水，于磁力加熱攪拌器上，恒溫攪拌至30℃，取上述揮發(fā)油，按1∶1比例用無水乙醇稀釋后，滴入β-環(huán)糊精溶液中，恒溫攪拌3小時，置4℃冰箱中冷藏24小時，抽濾，40℃干燥4小時，備用。
4)藥渣與其余2/3量炒山藥，茯苓、五倍子、秦皮、炙甘草等五味加6倍量水煎煮三次，每次2小時，合并煎液，過濾。將濾液與上述提取揮發(fā)油后的水提取液合并，濃縮至相對密度為1.12的稀膏，加入乙醇使含醇量達50％，放置24小時，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.30～1.40稠膏，5)將4)所得稠膏加入1)中所述細粉，混勻，60℃～80℃下干燥，加入3)中所述揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物。
本發(fā)明藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤滑劑、粘合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用劑型，如丸劑、散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液等。
將步驟5)所得活性組分粉碎，制粒，干燥，裝入膠囊，得到膠囊劑。
本發(fā)明具有補腎健脾、澀腸止瀉之功效，適用于治療慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎。本發(fā)明藥物用法用量成人1.7g～4.0g/人.日。
具體實施例方式
以下通過試驗例來進一步闡述本發(fā)明藥物的有益效果，這些試驗例包括了本發(fā)明藥物(以下簡稱慢結(jié)靈膠囊)的藥效學試驗及急性毒性試驗和長期毒性試驗。
試驗例1慢結(jié)靈膠囊藥效學研究1.材料1.1動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22g，購自長春生物制品研究所動物室，合格證編號分別為10-1001。Wstar大鼠，體重180～200g雌性，125～155g，雌雄各半，購自解放軍農(nóng)牧大學動物室，合格證編號為10-5112。大耳白兔體重2.5～3.0kg，購自解放軍農(nóng)牧大學動物室，合格證編號為10-5113。
1.2藥物 慢結(jié)靈膠囊內(nèi)容物為棕色粉末，2.71g生藥/g內(nèi)容物，臨床成人4粒/次，2次/日，0.34g/粒。批號20030308。由吉林大學藥學院提供。柳氮磺吡啶片為上海福達制藥有限公司，批號030407。固本益腸片為沈陽綠洲制藥有限責任公司產(chǎn)品，批號20030304。補脾益腸丸為中國深圳三九醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品，批號20030314。番瀉葉購自吉林省中醫(yī)中藥研究院中藥房，用開水浸泡24小時，制成20％浸劑。
1.3試劑盒 一氧化氮、考馬斯亮蘭蛋白、丙二醛和超氧化物歧化酶測定試劑盒南京建成生物工程研究所，批號20030701、20030630、20030318、20030702。分泌性免疫球蛋白A和免疫球蛋白G放射免疫藥盒購自中國原子能科學研究院同位素研究所，腫瘤壞死因子和白細胞介素-2放射免疫試劑盒購自天津九鼎醫(yī)學生物工程有限公司。T細胞亞群試劑盒購自深圳達科為生物技術有限公司。弗氏完全佐劑盒購自北京鼎國生物技術發(fā)展中心。
1.4儀器美國COULTER流式細胞儀，上海752紫外可見分光光度計，日本日立高速冷凍離心機，中佳光電GC-2016γ放射免疫計數(shù)器。
1.5數(shù)據(jù)處理 試驗數(shù)據(jù)以X±SD表示，結(jié)果進行組間t檢驗。
2.方法和結(jié)果2.1慢結(jié)靈膠囊對醋酸型潰瘍性結(jié)腸炎的影響取180～220g雌性大鼠72只，禁食12小時，不禁水，隨機分6組，分別為正常對照組，模型組，陽性藥組，慢結(jié)靈膠囊高、中、低劑量組。除正常對照組外，其余5組均灌胃番瀉葉浸劑15ml/kg，每日一次，連續(xù)3日。禁食不禁水35小時，用20％氨基甲酸乙酯0.5g/kg腹腔注射輕度麻醉，用0.5％肥皂水2ml灌腸沖洗，20分鐘后，自肛門約8厘米處注入5％冰醋酸1ml，計時30秒鐘。大鼠清醒后正常飼養(yǎng)，次日繼續(xù)灌胃番瀉葉浸劑15ml/kg2次。自造模后第3日，取6只模型大鼠結(jié)腸光鏡下觀察。其余大鼠開始灌胃。正常對照組和模型組灌胃給予10ml/kg蒸餾水；陽性藥組灌胃補脾益腸丸3.86g/kg(臨床用藥劑量15倍)，慢結(jié)靈膠囊高、中、低劑量組分別灌胃慢結(jié)靈內(nèi)容物1.16、0.58、0.29g/kg(臨床劑量30、15、7.5倍)。每日一次，連續(xù)7日。每日觀察大鼠的外觀情況和脾虛癥狀等。末次給藥后，禁食12小時，不禁水，稱體重后，戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈采血，用于測定腫瘤壞死因子(TNF)、白細胞介素-2(IL-2)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)，取全部結(jié)腸，肉眼觀察結(jié)腸變化(充血評分0分無充血；1分充血小于全長1/3；2分充血在全長1/3＞2/3之間；3分充血大于全長2/3)(總評分標準0分無損傷；1分局部充血水腫，但未出現(xiàn)潰瘍；2分有輕度潰瘍＜0.5cm；3分潰瘍在＜1.0cm＞0.5cm之間；4分潰瘍＞1.0cm。注即充血水腫又有潰瘍累計加分)，取近肛門8厘米結(jié)腸段(1cm)甲醛液固定，進行組織切片檢查。
結(jié)果(1)外觀模型組大鼠給予番瀉葉后陸續(xù)出現(xiàn)稀便、拱背，體重下降，活動減少，毛失光澤，精神倦怠，給與醋酸后，2～3天，有的大鼠出現(xiàn)腹脹、粘液便，血性便，有的大鼠腸穿孔死亡。經(jīng)藥物治療后，大鼠脾虛癥狀有不同程度好轉(zhuǎn)，稀便逐漸減少，體重回升，活動增加，精神狀態(tài)較好。結(jié)果見表1。
表1 慢結(jié)靈膠囊對醋酸型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠體重的影響組別 動物數(shù)體重(g)(g/kg) (只) 開始給醋酸前 結(jié)束前后差值正常對照組10207.1±14.2215.6±14.8*226.6±12.7*19.5±6.8*模 型 組10208.2±13.5194.5±10.8 210.7±19.1 1.8±19.4補脾益腸丸3.8610207.8±13.9194.4±12.0 225.5±14.2 17.7±4.6*慢結(jié)靈膠囊1.1610207.5±10.1194.7±8.8 228.3±9.5*20.8±6.9*慢結(jié)靈膠囊0.5810207.3±11.8193.7±9.7 223.9±14.6 16.6±8.4*慢結(jié)靈膠囊0.2910207.9±11.1195.5±12.9 222.0±15.6 14.1±11.3(注與模型組比較*表示P＜0.05，**P＜0.05，***P＜0.05下同)(2)結(jié)腸先處死的6只模型大鼠，結(jié)腸粘膜水腫、充血、鏡下觀察粘膜和粘膜下充血水腫，彌漫炎細胞浸潤，粘膜大面積壞死，結(jié)構(gòu)破壞，出現(xiàn)大面積潰瘍，表明模型成立。肉眼觀察給藥組結(jié)腸水腫面積和潰瘍面積與模型組比較顯著縮小，充血情況稍有好轉(zhuǎn)，綜合評分顯著低于模型組。光鏡下觀察，正常對照組結(jié)腸粘膜細胞排列整齊，粘膜完整，無炎性細胞浸潤。模型組結(jié)腸粘膜層和粘膜下層有大量炎細胞浸潤，腺體結(jié)構(gòu)破壞明顯，細胞大部分壞死脫落，形成潰瘍。陽性藥組炎細胞大量減少，粘膜上皮基本恢復。慢結(jié)靈膠囊高劑量組炎細胞大量減少，粘膜上皮基本恢復，粘膜下肌層增厚。慢結(jié)靈膠囊中劑量組炎細胞多于高劑量組，大部分粘膜上皮基本恢復，粘膜下肌層大部分增厚。慢結(jié)靈膠囊低劑量組炎細胞仍有很多，但少于模型組，粘膜上皮修復不完全，仍可見腺體缺損。結(jié)果見表2。
表2 慢結(jié)靈膠囊對醋酸型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸的影響組別 動物數(shù) 水腫面積充血積分糜爛面積 總評分(g/kg) (只) (cm2)(cm2)正常對照組- 100***0.1±0.32***0***0.1±0.32***模 型 組- 102.15±0.57 2.6±0.51 0.38±0.10 4.9±0.32補脾益腸丸3.86101.20±0.76**1.0±0.47***0.17±0.12***3.8±1.13*慢結(jié)靈膠囊1.16101.33±0.43**1.1±0.57***0.18±0.08***3.7±0.82***慢結(jié)靈膠囊0.58101.35±0.44**1.4±0.52***0.21±0.15* 4.0±0.82**慢結(jié)靈膠囊0.29101.59±0.48* 1.5±0.53***0.25±0.13* 4.3±0.82*(3)生化指標慢結(jié)靈膠囊組血清中TNF、NO、MDA明顯降低，IL-2和SOD明顯升高，見表3。
表3慢結(jié)靈膠囊對醋酸型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清中TNF、IL-2、NO、MDA、SOD的影響組別動物數(shù) TNFIL-2 NO MDA SOD(g/kg)(只) (ng/ml) (ng/ml) (μmol/L) (nmol/L) (U/L)正常對照組- 100.86±0.23**2.41±0.71**5.34±1.73***4.25±0.99 202.0±8.75**模 型 組- 101.15±0.16 1.44±0.31 12.46±4.85 8.21±2.16 187.9±10.28補脾益腸丸3.86100.91±0.22* 2.05±0.38**7.39±4.51* 5.68±1.43**204.2±6.39***慢結(jié)靈膠囊1.16100.80±0.24**2.38±0.70**6.09±2.53** 5.15±1.34**203.7±8.79**慢結(jié)靈膠囊0.58100.72±0.19*** 1.96±0.36**7.19±3.51* 5.41±1.98**199.8±11.38*慢結(jié)靈膠囊0.29100.89±0.21* 1.89±0.37* 7.53±4.64* 6.18±1.51* 196.1±9.142.2慢結(jié)靈膠囊對免疫型潰瘍性結(jié)腸炎的影響取125～155g大鼠80只，隨機分為正常對照組(10只)，模型組(70只)?？乖苽淙〈蠖淄?只，血栓致死，取結(jié)腸(距肛門10厘米至橫結(jié)腸處)粘膜，用生理鹽水研磨，冷凍3日，低溫離心3000轉(zhuǎn)30分鐘，取上清，測定蛋白質(zhì)濃度，按每次所需濃度與弗氏完全佐劑配成乳液。分別在首次、7日、14日、21日、28日在不同部位(足跖、足跖、皮下、腹股溝、腹腔)注射抗原(末次不加佐劑)4mg，于21日和28日各取3只大鼠，檢查模型是否成立。觀察大鼠外觀癥狀。將模型大鼠隨機分6組，模型對照組(11只)，灌胃給予蒸餾水10ml/kg，西藥對照組(10只)給予柳氮磺吡啶片0.86g/kg(臨床劑量15倍)，中藥對照組(10只)給予固本益腸片1.64g/kg(臨床劑量15倍)，慢結(jié)靈膠囊組(10、10、10只)，分別給予慢結(jié)靈膠囊內(nèi)容物1.16、0.58、0.29g/kg(臨床劑量30、15、7.5倍)。每日一次，連續(xù)4周，末次給藥后，禁食12小時，不禁水，稱體重后，戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈采血，用于T細胞亞群CD3、CD4、和CD8(由中日聯(lián)誼醫(yī)院中心實驗室協(xié)助完成)，IgG和IgA，取全部結(jié)腸，肉眼觀察結(jié)腸變化(充血評分0分無充血；1分充血小于全長1/3；2分充血在全長1/3＞2/3之間；3分充血大于全長2/3)，(總評分標準0分無損傷；1分局部充血水腫，但未出現(xiàn)糜爛；2分有輕度糜爛＜0.5cm；3分糜爛在1.0cm＜0.5cm之間；4分糜爛＞1.0cm。注即充血水腫又有糜爛累計加分)，取近肛門8～9厘米結(jié)腸段(1cm)甲醛液固定，進行組織切片檢查，剩下結(jié)腸取近肛9～13cm處，測定一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。
結(jié)果(1)造型21日3只大鼠結(jié)腸光鏡下可見大量炎細胞浸潤，粘膜和粘膜下充血水腫，杯狀細胞減少；造型28日3只大鼠結(jié)腸大量炎細胞浸潤，粘膜和粘膜下充血水腫，杯狀細胞減少，腺體大部分破壞，粘膜脫落壞死。證明免疫型潰瘍性結(jié)腸炎模型成立。
(2)一般外觀給予抗原2周后，大鼠陸續(xù)開始出現(xiàn)生長緩慢(體重降低)，多數(shù)大鼠糞便不成形，個別有溏便，特臭，倦怠，活動減少，毛皮不潔，有些出現(xiàn)拱背現(xiàn)象，隨著時間延長癥狀加重。經(jīng)過4周藥物治療后，模型組大鼠，外觀癥狀變化不明顯；西藥對照組大鼠第四周消瘦死亡1只，其余大鼠4只仍有溏便，其他基本恢復正常，體重較模型組增加，但無明顯差異，活動有所增加；中藥對照組還有2只大鼠溏便，整組體重增加；慢結(jié)靈膠囊高劑量組大鼠無溏便現(xiàn)象，體重均增加，與模型組比較有顯著差異，外觀與正常大鼠相似；慢結(jié)靈膠囊中劑量組還有1只大鼠溏便，1只稀便，體重增加；慢結(jié)靈膠囊低劑量組3只有溏便現(xiàn)象，體重增長緩慢。見表4。
表4慢結(jié)靈膠囊對免疫型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠體重的影響組別 動物數(shù) 體重(g) 動物數(shù) 體重(g)(g/kg) (只) 造型前 造型后 前后差值 (只) 給藥前 給藥后前后差值正常對照組- 10♀145.6±7.6235.4±17.1**89.8±13.6***10♀236.4±17.7292.8±23.5**56.4±15.9*♂143.8±8.6254.6±18.3**110.8±15.6** ♂255.2±19.5330.0±20.9* 74.8±5.9*模 型 組- 100 ♀143.2±8.6209.3±18.8 66.1±16.6 10♀212.4±12.4249.0±17.2 36.6±6.2♂144.0±11.2 223.5±31.7 79.5±27.5 ♂234.6±29.2277.6±50.2 43.0±25.0柳氮磺吡啶片0.869 ♀210.6±12.2247.7±24.8 41.0±18.2♂234.8±19.5305.0±38.6 70.2±24.6固本益腸片1.64 10♀209.6±8.0 251.6±15.3 42.0±9.4♂236.8±45.7294.8±64.1 58.0±22.8慢結(jié)靈膠囊1.16 10♀212.2±8.4 267.8±21.6 55.6±15.1*♂234.6±34.8306.6±33.0 72±19.1*慢結(jié)靈膠囊0.58 10♀212.4±15.9259.4±17.9 47.0±20.4♂234.2±29.5303.8±52.0 69.6±27.1慢結(jié)靈膠囊0.29 10♀210.6±17.3253.6±15.1 43.0±5.5♂236.6±20.9298.0±26.0 61.4±14.3注動物數(shù)均雌雄各半，柳氮磺吡啶片組給藥期間死亡1只。
(3)肉眼觀察慢結(jié)靈膠囊各劑量組結(jié)腸水腫面積、糜爛面積明顯小于模型組，充血評分值和總評分值，明顯低于模型組。見表5。
表5 慢結(jié)靈膠囊對免疫型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸的影響組別 動物數(shù) 水腫面積充血積分 糜爛面積 總評分(g/kg) (只) (cm2) (cm2)正常對照組 - 100***0.1±0.32***0***0.1±0.32***模 型 組 - 104.33±1.90 2.3±0.48 0.67±0.25 4.6±0.52柳氮磺胺砒啶0.869 2.62±1.39* 0.3±0.50***0.43±0.05**3.3±0.50***固本益腸片 1.64102.17±0.95**0.2±0.42***0.46±0.09* 3.2±0.42***慢結(jié)靈膠囊 1.16101.85±0.85**0.6±0.70***0.41±0.08**2.8±0.63***慢結(jié)靈膠囊 0.58102.31±0.86**0.6±0.51***0.43±0.09* 3.5±0.71**慢結(jié)靈膠囊 0.29102.46±1.01* 0.80±0.79*** 0.42±0.17* 3.9±0.87*(4)光鏡下觀察正常組大鼠結(jié)腸粘膜上皮完整，腺體排列整齊，結(jié)構(gòu)正常。模型對照組有大量炎細胞浸潤，杯狀細胞減少，表面粘膜細胞脫落、壞死。西藥對照組仍可見炎細胞浸潤，還有4只大鼠結(jié)腸粘膜細胞沒有完全修復。中藥對照組有少量炎細胞浸潤，除3只大鼠結(jié)腸粘膜細胞沒有完全修復好外，粘膜細胞基本修復。慢結(jié)靈膠囊高劑量組個別可見少量炎細胞浸潤，粘膜細胞基本修復正常。慢結(jié)靈膠囊中劑量組有少量炎細胞浸潤，3只大鼠結(jié)腸沒有修復完全，其余大鼠結(jié)腸粘膜細胞基本修復正常。慢結(jié)靈膠囊低劑量組粘膜修復狀況遠不如高劑量組，炎細胞浸潤較上兩組多，但都好于模型組。
(5)生化指標慢結(jié)靈膠囊三個劑量組結(jié)腸粘膜NO和MDA明顯低于模型組，SOD顯著高與模型組。見表6。
表6慢結(jié)靈膠囊對免疫型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸粘膜中NO、MDA、SOD的影響組別 動物數(shù)NO MDA SOD(g/kg) (只) (μmol/mgProt) (nmol/mgProt) (U/mgProt)正常對照組 101.16±0.47***3.71±1.29***130.8±10.3***模 型 組 103.33±1.13 6.97±1.53 65.9±24.3柳氮磺胺砒啶0.869 2.24±0.58* 5.05±1.49* 94.6±25.7*固本益腸片 1.64101.95±1.08* 5.17±1.06** 97.1±19.9**慢結(jié)靈膠囊 1.16101.64±0.88** 5.12±1.21** 108.7±24.3**慢結(jié)靈膠囊 0.58101.93±1.01* 5.32±1.14* 99.0±22.2**慢結(jié)靈膠囊 0.29102.08±0.85* 5.65±1.11* 96.8±26.9*(6)T淋巴細胞亞群CD3和CD4所占T細胞中百分比明顯降低，CD8無明顯變化，CD4/CD8比值明顯降低。IgG含量降低，IgA無明顯變化。見表7。
表7慢結(jié)靈膠囊對免疫型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠T淋巴細胞亞群和IgG和IgA的影響組別 動物數(shù) CD3CD4 CD8 CD4/CD8IgG IgA(g/kg) (只) (％) (％)(％) 比值 (μg/ml) (μg/ml)正常對照組 - 1054.8±8.05*36.4±6.30**22.8±4.971.62±0.22**1.33±0.14*0.15±0.04模 型 組 - 1065.1±7.80 46.1±8.00 20.3±5.012.41±0.73 1.61±0.30 0.18±0.03柳氮磺胺砒啶0.869 59.9±7.43 40.6±5.72 21.4±4.051.95±0.37 1.45±0.28 0.15±0.05固本益腸片 1.641060.3±10.4940.7±5.96 21.9±6.622.03±0.73 1.33±0.26*0.15±0.03慢結(jié)靈膠囊 1.161055.2±11.0*38.4±4.83* 23.8±4.611.69±0.54* 1.30±0.26*0.15±0.06慢結(jié)靈膠囊 0.581059.7±9.6 39.9±3.71* 21.6±4.871.94±0.49 1.49±0.18 0.16±0.06慢結(jié)靈膠囊 0.291061.7±9.28 41.9±5.16 20.5±5.342.13±0.45 1.35±0.24*0.15±0.072.3鎮(zhèn)痛作用2.3.1慢結(jié)靈膠囊對熱板法致小鼠疼痛的影響取雌性小鼠放于熱板上(GJ-8402型熱板測痛儀，浙江產(chǎn))篩選。以自小鼠放在熱板上至出現(xiàn)舔后足所用的時間(秒)，作為該鼠痛閾值，取痛閾值在8～22秒的小鼠50只，隨機分5組，分別灌胃給藥10ml/kg蒸餾水，固本益腸片2.18g/kg，慢結(jié)靈膠囊內(nèi)容物1.56、0.78、0.39g/kg。每日1次，連續(xù)7日，末次給藥后1、2、3、4小時，測小鼠痛閾值，結(jié)果見表8。
表8 慢結(jié)靈膠囊對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(熱板法)組別動物數(shù)分組痛給藥不同時間(小時)痛閾值(秒)(只)閾值(秒) 12 34正常對照 - 1015.6±3.5316.5±3.41 17.2±3.12 16.5±2.79 17.8±3.55固本益腸片2.181015.5±4.1730.8±7.55###37.1±10.62###32.8±7.25###31.6±9.89###慢結(jié)靈膠囊1.561015.3±3.8729.4±6.71###35.3±10.79###34.1±9.06###32.1±8.97###慢結(jié)靈膠囊0.781015.6±3.9429.0±10.85##32.5±8.04###33.2±5.67###35.5±12.83###慢結(jié)靈膠囊0.391015.3±4.5924.0±9.77#24.3±8.12#20.9±9.84 23.5±9.97注與正常對照組比較#表示P＜0.05，##表示P＜0.01，###表示P＜0.001。
結(jié)果表明慢結(jié)靈膠囊可延長小鼠痛閾值，與正常對照組比較差異顯著。
2.3.2慢結(jié)靈膠囊對醋酸所致小鼠扭體反應次數(shù)的影響取小鼠50只，隨機分5組，分別灌胃給藥10ml/kg蒸餾水，固本益腸片2.18g/kg(臨床劑量20倍)，慢結(jié)靈膠囊內(nèi)容物1.56、0.78、0.39g/kg(臨床劑量40、20、10倍)。每日1次，連續(xù)7日，末次給藥后1h，腹腔注射1％HAC10ml/kg，觀察15分鐘內(nèi)扭體次數(shù)。結(jié)果見表9。
表9 慢結(jié)靈膠囊對醋酸所致小鼠扭體反應次數(shù)的影響組別(g/kg) 動物數(shù)(只)15分鐘內(nèi)扭體次數(shù)(次)P正 常 對 照 - 10 20.7±7.2固本益腸片2.1810 12.8±4.8＜0.05慢結(jié)靈膠囊1.5610 11.8±5.0＜0.01慢結(jié)靈膠囊0.7810 12.5±5.5＜0.05慢結(jié)靈膠囊0.3910 13.9±5.3＜0.05結(jié)果表明，慢結(jié)靈膠囊能顯著減少醋酸引起的小鼠扭體反應次數(shù)。
2.4慢結(jié)靈膠囊對小鼠二甲苯所致耳腫脹的影響取小鼠50只，隨機分5組，分別灌胃給藥10ml/kg蒸餾水，固本益腸片2.18g/kg，慢結(jié)靈膠囊內(nèi)容物1.56、0.78、0.39g/kg。每日一次，連續(xù)7日。末次給藥后1h，給小鼠右耳涂二甲苯0.03ml/只，左耳作對照，2h拉頸處死小鼠，用直徑7mm打孔器將雙耳同部位的面積切下，用JN-A型精密扭力天平稱重，以左右耳片重量之差為腫脹程度。結(jié)果見表10。
表10 慢結(jié)靈膠囊對小鼠二甲苯所致耳腫脹的影響組別(g/kg) 動物數(shù)(只) 耳腫脹程度(mg) P正常對照組-109.3±2.26固本益腸片2.18 106.2±2.97＜0.05慢結(jié)靈膠囊1.56 105.6±2.29＜0.01慢結(jié)靈膠囊0.78 106.7±1.77＜0.05慢結(jié)靈膠囊0.39 107.6±1.84＞0.05結(jié)果表明，慢結(jié)靈膠囊1.56、0.78g/kg劑量組，能夠明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹。
2.5慢結(jié)靈膠囊對小鼠毛細血管通透性的影響取小鼠50只，隨機分5組，分別灌胃蒸餾水10ml/kg，固本益腸片2.18g/kg，慢結(jié)靈膠囊內(nèi)容物1.56、0.78、0.39g/kg，每日1次，連續(xù)7日，末次給藥后1小時，每只小鼠靜脈注射0.5％伊文氏蘭生理鹽水溶液10ml/kg，隨即腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml/只，20分鐘后脫頸椎處死小鼠，剪開腹部皮膚肌肉，用6ml生理鹽水溶液沖洗腹腔，用吸管吸出洗滌液，合并生理鹽水至10ml，3000rpm離心15分鐘，取上清，于590nm處比色，用伊文氏蘭標準曲線測出伊文氏蘭含量。結(jié)果見表11。
表11 慢結(jié)靈膠囊對小鼠毛細血管通透性的影響組別(g/kg) 動物數(shù)(只)伊文氏蘭含量(μg/ml)P正常對照組- 10 3.5±0.54固本益腸片2.1810 2.9±0.49 ＜0.05慢結(jié)靈膠囊1.5610 2.5±0.88 ＜0.01慢結(jié)靈膠囊0.7810 2.8±0.55 ＜0.05慢結(jié)靈膠囊0.3910 2.9±0.75 ＞0.05結(jié)果表明，慢結(jié)靈膠囊1.56、0.78g/kg劑量組能夠明顯抑制冰醋酸所致的小鼠腹腔毛細管通透性的增加。
3.討論 結(jié)腸炎中醫(yī)應屬于“泄瀉”、“腸癖”、“休息痢”等范疇。益以補腎陽健脾為本。本方是以補骨脂補腎陽溫脾，白術健脾燥濕二味為主藥，配合肉豆蔻、五倍子等共奏補腎健脾澀腸止瀉的功效。
本試驗認為慢結(jié)靈膠囊作用機制為1.降低血中和腸粘膜中NO含量，促進潰瘍面愈合。2.降低血中和腸粘膜中MDA含量，提高SOD活性，減少粘膜損傷程度。3.降低TNF含量，增加IL-2含量，提高腸道防御功能。4.調(diào)節(jié)T淋巴細胞亞群比例，降低IgG含量，調(diào)節(jié)免疫功能。5.減輕血管水腫，降低血管通透性，利于組織修復。
4.結(jié)論慢結(jié)靈膠囊對醋酸型和免疫型大鼠潰瘍性結(jié)腸炎有較好治療作用。
試驗例2慢結(jié)靈膠囊最大給藥量的研究目的一日內(nèi)以最大劑量灌胃給予慢結(jié)靈膠囊，觀察小鼠的急性毒性反應。
動物昆明種小鼠，體重19～21克，雌雄各半，購自長春生物制品研究所，動物合格證編號10-5112。實驗動物環(huán)境設施合格證號為吉動設字10-1028。實驗動物繁殖鼠全價顆粒飼料(粗蛋白18～20％、粗脂肪3～4％、粗纖維10～15％、粗灰粉7～9％、鈣1～1.5％、磷0.6～1.0％、氯化鈉0.5、水分＜11)購自沈陽市實驗動物飼料廠。受試物慢結(jié)靈膠囊內(nèi)容物為棕色粉末，2.71g生藥/g內(nèi)容物，臨床4粒/次，2次/日，0.34g/粒。批號20030308。由吉林大學藥學院提供。成人按70公斤計算，臨床成人每公斤用藥量為4×0.34/次×2次÷70kg＝0.038857g/kg藥物配制取慢結(jié)靈膠囊內(nèi)容物60g加水至90ml，即0.6667g/ml。方法取小鼠60只，雌雄各半，禁食12小時，不禁水。按40ml/kg體重灌胃給藥，24小時內(nèi)分別給藥1次和3次。給藥后，觀察小鼠體重、行為活動、外觀、飲食、飲水、糞便等情況。
結(jié)果24小時內(nèi)一次性給藥給藥后1小時內(nèi)小鼠自主活動明顯減少，多數(shù)靜臥，趴著不動，閉眼。1小時后小鼠陸續(xù)開始活動。外觀行為活動與對照組小鼠無明顯差異。糞便中有藥物顏色。其他未見異常。24小時內(nèi)三次給藥(每次間隔6小時)第一次給藥后與上述癥狀一樣，第二次給藥后，小鼠活動明顯減少，有6只小鼠閉眼，8只小鼠有聳毛現(xiàn)象，有2只小鼠體軟。第三次給藥后2小時內(nèi)，有2只小鼠死亡。解剖小鼠胃體大，腸脹氣，肝臟顏色加深，心、脾、肺、腎未見明顯異常。存活小鼠第二日，又有5只小鼠死亡，死亡小鼠眼邊有分泌物，其他癥狀同上。存活下來的小鼠，吃食物后，外觀癥狀有所好轉(zhuǎn)，活動增多，毛色光亮，糞便正常，體重增加。未見其他異常表現(xiàn)。計算40ml/kg×1次/日×0.6667g/ml＝26.67g/kg，相當于臨床用藥量26.67g/kg÷0.038857g/kg＝686.4倍。
40ml/kg×3次/日×0.6667g/ml＝80.0g/kg，相當于臨床用藥量80.0g/kg÷0.0388g/kg＝2059.1倍。
表12.慢結(jié)靈膠囊一次和三次最大劑量給藥對小鼠體重的影響組別性別動物數(shù)(只) 給藥前體重(g) 動物數(shù)(只) 給藥后第七日體重(g)對照組 雄性10 20.0±0.6210 25.5±1.07雌性10 20.0±0.6310 24.4±1.13慢結(jié)靈膠囊 雄性10 20.0±0.5110 25.2±1.18一次給藥雌性10 20.1±0.6110 24.5±1.17慢結(jié)靈膠囊 雄性10 20.1±0.646 23.3±2.57*三次給藥雌性10 20.1±0.587 23.5±1.95注給藥前后自身比較P＜0.001，*表示與對照組雄性比較P＜0.05結(jié)論慢結(jié)靈膠囊一日內(nèi)最大劑量(最大濃度和最大體積)一次性灌胃給藥26.67g/kg，對小鼠無急性毒性反應。此劑量相當于臨床用藥量的686.4倍。一日內(nèi)最大劑量(最大濃度和最大體積)三次灌胃給藥，累積劑量為80.0g/kg，有7只小鼠死亡，死亡率為35％。小鼠活動明顯減少，有聳毛現(xiàn)象，死亡小鼠胃體大，腸脹氣，肝臟顏色加深，雄性小鼠體重增長緩慢等。此劑量相當于臨床用藥量2059.1倍。由于此劑量已經(jīng)是最大濃度和最大體積，故末能求出LD50。
試驗例3慢結(jié)靈膠囊長期毒性研究一、目的觀察連續(xù)26周灌胃給予慢結(jié)靈膠囊是否對大鼠產(chǎn)生毒性反應，并觀察是否有延遲毒性反應，為臨床應用提供依據(jù)。
二、試驗材料動物 Wistar大鼠，體重60～80克，5～6-周齡普通級，雌雄各半，中國人民解放軍農(nóng)牧大學實驗動物中心，合格證號10-5113。實驗動物環(huán)境設施合格證號為吉動設字10-1028。實驗動物繁殖鼠全價顆粒飼料(粗蛋白18～20％、粗脂肪3～4％、粗纖維10～15％、粗灰粉7～9％、鈣1～1.5％、磷0.6～1.0％、氯化鈉0.5、水分＜11)購自沈陽市實驗動物飼料廠。
受試物 慢結(jié)靈膠囊膠囊內(nèi)容物為棕色粉末，2.71g生藥/g內(nèi)容物，臨床成人4粒/次，2次/日，0.34g/粒。批號20030308。由吉林大學藥學院提供。試驗時用蒸餾水配成所需濃度。
試劑盒 生化檢驗所用試劑盒均為北京中生生物工程高技術公司(酶法或速率法)，血常規(guī)檢查試劑盒為美國庫爾特公司提供。
儀器日立7080型全自動生化分析儀，美國庫爾特(COULTRT)ACT-diff2全自動血球計數(shù)儀。
三、方法觀察飼養(yǎng)大鼠1周后，取160只隨機分成4組，每組雌雄各半。第一組為對照組，灌胃20ml/kg水，第二、三、四組為慢結(jié)靈膠囊高、中、低劑量組，分別灌胃給予慢結(jié)靈膠囊粉5.8、2.4、0.6g/kg(相當于臨床用藥量約150、60、15倍)，每日1次，一般均在上午8.30～10.30分。連續(xù)180日。每日觀察動物的行為活動、飲食、飲水及糞便等情況，每周稱體重1次。每周3次測定大鼠的飲食、飲水量。在給藥后24小時，第91日181各組分別處死10只大鼠，取血作白細胞(WBC)計數(shù)及分類、紅細胞計數(shù)(RBC)、血小板數(shù)(Pit)、血紅蛋白(Hb)、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)含量檢查，取血離心，用血清測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT，IFCC推薦的酶法)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST，IFCC推薦的酶法)、總蛋白(TP，雙縮脲法)、白蛋白(ALB，溴甲酚綠法)、肌酐(CR酶法)、尿素(UREA，PAP酶法)、血糖(GLU，氧化酶法)、總膽固醇(CHOL，PAP酶法)、總膽紅素(T-BLL，重氮法)、堿性磷酸酶(ALP，IFCC推薦的酶法)。解剖大鼠，肉眼觀察動物各臟器的變化，并取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、前列腺、甲狀腺、腦、卵巢和子宮稱重，計算臟器指數(shù)并取上述組織和胃、小腸、結(jié)腸做組織病理學檢查。剩下大鼠停藥后，繼續(xù)飼養(yǎng)兩周，同上述方法檢測。試驗結(jié)果經(jīng)t檢驗處理，用X±SD表示。
四、試驗結(jié)果1.對大鼠外觀行為等的影響 連續(xù)26周給大鼠灌胃慢結(jié)靈膠囊5.8、2.4、0.6g/kg，大鼠行為活動正常，毛色光亮、糞便正常，無異?，F(xiàn)象發(fā)生。
2.對大鼠體重的影響 連續(xù)26周給大鼠灌胃慢結(jié)靈膠囊5.8、2.4、0.6g/k，高劑量組大鼠，在給藥4周后體重稍低于對照組，但與對照組比較均無明顯差異。由于高劑量組大鼠攝食量也減少，認為是給藥劑量大，造成的體重增長較對照組稍慢。結(jié)果見表13。
3.對大鼠飲食飲水的影響 高劑量組、中劑量組、低劑量組大鼠與對照組大鼠飲食飲水量無明顯差異。高劑量組攝食量稍少于模型組。結(jié)果見表14。
4.對大鼠臟器指數(shù)的影響 高劑量組肝臟系數(shù)在給藥后三個和六個月有增加趨勢，高、中、低三個劑量劑量組脾臟系數(shù)均有增加趨勢，但與對照組比較無明顯差異。結(jié)果見表15。
5.對大鼠血液生化指標的影響 三個劑量組大鼠的ALT、TP、ALB、UREA、CR、CHOL、ALP、AST、GLU、T-BIL檢測值均在正常范圍內(nèi)，與對照組比較無明顯差異。但高劑量組ALT和AST在給藥后三個和六個月有增加趨勢，停藥后二者含量均降下來，結(jié)合肝臟系數(shù)的增加，認為高劑量組對肝臟有一定的影響。結(jié)果見表16。
6.對大鼠血常規(guī)影響 三個劑量組大鼠的RBC、WBC、Hb、Pit、GR、LY、MO、MCH、MCV檢測值均在正常范圍內(nèi)，與對照組比較無明顯差異。結(jié)果見表17。
7.對大鼠組織病理學的影響 三個劑量組大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、前列腺、甲狀腺、腦、卵巢、子宮、胃、小腸、結(jié)腸組織病理切片檢查，均是正常組織，與對照組比較無明顯差異。個別大鼠肺有間質(zhì)性肺炎，可能是與動物飼養(yǎng)壞境有關，與受試藥物無關。
試驗期間狀態(tài)不好的大鼠或死亡的大鼠解剖，肉眼觀察，心、肝、脾、肺、腎未見異常?？赡苁桥c動物自身條件和飼養(yǎng)環(huán)境有關。
結(jié)論 給大鼠灌胃慢結(jié)靈膠囊5.8、2.4、0.6g/kg，連續(xù)六個月，對大鼠無長期毒性反應，也無延遲毒性反應。此劑量相當于臨床用藥量的150、60和15倍。計算0.34g/?！?粒/次/成人×2次/日÷70kg＝0.0388g/kg5.8g/kg÷0.0388g/kg＝149.5倍2.4g/kg÷0.0388g/kg＝61.8倍0.6g/kg÷0.0388g/kg＝15.5倍表13 慢結(jié)靈膠囊連續(xù)灌胃給藥對大鼠體重的影響(X±SD)組別 初次 二周 四周 六周 八周 十周 十二周 十四周對照組♂73.5±6.3134.8±16.4178.4±27.5216.2±36.4251.2±42.4287.3±48.4324.2±55.0349.8±56.5高劑量♂73.2±6.2130.0±16.3169.4±18.7212.8±28.4246.2±38.3279.6±38.9311.9±44.7337.4±48.9中劑量♂73.0±6.4131.2±14.2175.3±21.6218.1±27.4252.4±36.5287.6±46.7323.4±55.2345.6±47.7低劑量♂73.4±6.1131.4±15.2178.6±17.0221.8±33.0254.3±45.4290.5±53.4328.8±56.2357.9±45.3對照組♀73.7±6.5122.8±13.1164.6±14.9195.1±25.9219.8±30.6241.1±33.8256.8±34.2276.3±27.9高劑量♀73.2±6.3121.4±14.1154.8±22.8187.9±30.2214.2±33.9231.1±35.6248.6±31.4264.2±27.8中劑量♀73.5±6.5124.5±13.6162.4±19.2196.7±23.6222.8±21.9239.2±22.5254.0±27.1271.6±19.9低劑量♀73.3±6.5123.0±13.5162.7±19.7198.3±24.4224.6±22.5245.2±22.5262.1±21.6273.2±22.8續(xù)表13組別 十六周十八周 二十周二十二周 二十四周 二十六周 停藥后兩周對照組♂365.5±55.5378.2±54.0392.2±53.9403.8±54.4415.8±54.5428.5±54.5432.9±47.1高劑量♂353.6±51.4364.6±54.3381.4±51.6391.5±50.3401.0±49.4413.7±52.9418.5±48.9中劑量♂360.2±51.9374.6±52.3387.7±54.3400.2±57.2409.6±57.4421.5±57.9424.0±45.8低劑量♂373.6±50.1385.8±50.2397.8±49.0410.5±48.1422.5±50.1432.2±48.7435.5±35.0對照組♀288.0±24.8300.4±25.0312.0±26.7324.0±26.7334.2±27.8346.8±30.2355.9±24.9高劑量♀277.2±29.6292.9±30.8304.3±27.0315.3±26.3325.8±28.3336.0±28.4346.0±24.9中劑量♀287.6±21.0300.6±25.0310.3±24.6323.9±26.9334.2±30.7346.7±31.7351.7±22.2低劑量♀290.0±22.0304.4±23.9315.2±23.6325.4±25.5335.8±28.8350.7±28.6361.8±17.8
表14 慢結(jié)靈膠囊連續(xù)灌胃給藥對大鼠攝食飲水量的影響 (X±SD)組別 動物數(shù) 二周 四周 六周 八周 十周 十二周 (只數(shù)) 十四周♂水量(ml)對照組(20)705.3±31.0714.6±29.6746.0±54.1855.6±32.6748.0±25.5951.6±65.8(15)722.0±70.1慢結(jié)靈膠囊高劑量 (20)693.6±33.6704.6±49.6768.0±30.6813.3±29.1756.6±22.1944.6±58.2(15)690.6±51.0慢結(jié)靈膠囊中劑量 (20)728.0±49.1674.0±48.6727.3±40.5834.6±28.0758.0±48.5939.3±72.5(15)728.3±72.2慢結(jié)靈膠囊低劑量 (20)716.6±26.4678.6±15.0735.6±34.5840.0±36.1724.0±19.2958.3±88.3(15)687.3±64.7♂食量(g)對照組(20)315.3±14.1369.0±16.7408.6±24.1440.0±15.3480.0±14.1508.0±21.6(15)373.6±9.0慢結(jié)靈膠囊高劑量 (20)310.3±15.0360.6±15.9392.6±10.2425.6±11.5465.6±20.7488.0±18.7(15)355.6±20.5慢結(jié)靈膠囊中劑量 (20)315.0±15.7365.0±10.0401.6±11.5443.0±17.3476.0±27.5508.6±16.7(15)363.3±17.0慢結(jié)靈膠囊低劑量 (20)318.6±16.5366.0±14.0410.0±14.1445.0±20.0481.0±17.6513.0±8.5 (15)382.0±24.9♀水量(ml)對照組(20)589.3±36.1606.6±55.6610.3±26.5712.3±43.8600.6±50.2783.3±60.4(15)589.6±27.9慢結(jié)靈膠囊高劑量 (20)594.3±43.1587.3±39.5614.0±39.8729.0±31.0584.0±39.7797.0±54.2(15)564.3±35.5慢結(jié)靈膠囊中劑量 (20)615.3±27.0570.6±47.0623.6±50.3723.0±53.8601.3±29.5770.3±49.7(15)560.3±40.5慢結(jié)靈膠囊低劑量 (20)605.0±23.8585.6±44.5601.6±22.0707.0±32.6612.0±54.2790.6±40.0(15)571.0±52.0♀食量(g)對照組(20)301.6±17.2342.6±13.0375.3±11.9398.3±15.3435.6±12.5453.3±20.7(15)325.6±7.0慢結(jié)靈膠囊高劑量 (20)297.3±12.0332.6±12.4361.0±7.8 387.3±11.3414.0±16.0433.6±8.0 (15)303.6±22.4慢結(jié)靈膠囊中劑量 (20)303.3±12.0343.6±13.0380.0±12.8402.3±10.6430.3±28.3457.0±8.1 (15)315.6±9.2慢結(jié)靈膠囊低劑量 (20)304.6±7.0 340.0±10.0385.3±12.8408.3±20.1438.3±16.8456.6±18.9(15)320.0±10.8
續(xù)表14組別 十六周十八周(只數(shù)) 二十周(只數(shù)) 二十二周 (只數(shù)) 二十四周 二十六周 停藥兩周 (只數(shù))♂水量(ml) 670.6±45.4734.0±21.5625.3±37.0705.0±57.6770.6±52.8615.3±48.2426.0±23.4 (10)對照組 664.0±42.7720.3±56.5576.0±36.8 (14) 671.0±45.5714.0±45.8581.3±43.0379.0±30.0 (9)慢結(jié)靈膠囊高劑量660.6±22.0705.3±45.0620.6±44.7696.0±47.0769.6±56.5602.6±39.7409.3±16.2 (10)慢結(jié)靈膠囊中劑量651.3±58.0718.6±36.3643.0±35.5726.3±38.1775.0±40.9627.6±32.0417.6±26.7 (10)慢結(jié)靈膠囊低劑量♂食量(g) 387.0±15.3402.6±22.1414.0±24.7429.6±14.5435.3±10.0443.3±14.0286.6±12.5 (10)對照組 367.3±14.2380.3±14.1366.0±22.6380.0±20.0388.3±15.7390.6±10.5260.3±10.5 (9)慢結(jié)靈膠囊高劑量382.0±13.0396.0±23.3406.6±10.4420.0±13.7428.3±12.0437.0±9.0 294.6±7.5 (10)慢結(jié)靈膠囊中劑量397.1±12.0411.6±24.0424.6±6.1 435.6±16.0442.0±9.1 448.3±12.3307.3±6.4 (10)慢結(jié)靈膠囊低劑量♀水量(ml) 494.6±18.5562.3±43.1476.3±40.9550.0±45.8646.3±31.1455.0±33.1270.6±28.0 (10)對照組 511.6±58.5517.6±45.1439.6±33.2495.0±31.0573.3±41.5403.3±55.3234.6±29.5 (9)慢結(jié)靈膠囊高劑量483.3±31.3550.0±33.1485.3±43.3484.0±35.1(14)588.0±50.5413.3±39.5215.0±27.5 (8)慢結(jié)靈膠囊中劑量484.3±21.8560.0±21.0484.6±53.5558.0±27.1609.1±37.1463.3±34.5260.0±35.0 (10)慢結(jié)靈膠囊低劑量♀食量(g) 332.6±15.9341.6±11.5349.0±12.7356.1±16.03362.0±9.1366.6±11.5234.0±14.0 (10)對照組 310.3±16.0293.±10.3(14) 301.3±10.0307.0±10.5312.1±17.0313.0±12.1203.3±12.5 (9)慢結(jié)靈膠囊高劑量330.3±15.0344.6±21.0348.0±16.7322.3±11.6331.3±10.9336.3±13.0184.3±15.5 (8)慢結(jié)靈膠囊中劑量337.3±13.2350.3±11.5358.0±13.0364.0±15.0371.3±4.1 377.0±12.1254.3±5.0 (10)慢結(jié)靈膠囊低劑量表15慢結(jié)靈膠囊連續(xù)灌胃給藥對大鼠臟器指數(shù)的影響(X±SD)時間 組別心 肝脾 肺 腎 腎上腺(g/100g) (g/100g) (g/100g) (g/100g) (g/100g) (mg/100g)給對照組 0.33±0.043.81±0.60.39±0.10.80±0.10.34±0.0617.5±4.6藥慢結(jié)靈膠囊 高劑量 0.32±0.034.23±0.30.40±0.20.82±0.20.33±0.0518.4±4.2后慢結(jié)靈膠囊 中劑量 0.32±0.033.95±0.50.50±0.20.76±0.20.35±0.0716.4±3.813慢結(jié)靈膠囊 低劑量 0.33±0.033.92±0.40.44±0.10.80±0.20.35±0.0219.6±5.9周給對照組 0.30±0.053.62±0.60.39±0.10.66±0.10.31±0.0515.3±3.1藥慢結(jié)靈膠囊 高劑量 0.29±0.043.78±0.60.43±0.10.60±0.10.30±0.0215.0±3.9后慢結(jié)靈膠囊 中劑量 0.30±0.063.63±0.80.48±0.20.67±0.20.29±0.0514.0±2.726慢結(jié)靈膠囊 低劑量 0.31±0.043.56±0.70.45±0.10.70±0.10.32±0.0616.0±3.8周停對照組 0.29±0.043.42±0.60.35±0.10.62±0.20.29±0.0613.2±2.8藥慢結(jié)靈膠囊 高劑量 0.28±0.033.39±0.80.39±0.10.60±0.10.29±0.0612.7±2.8后慢結(jié)靈膠囊 中劑量 0.30±0.023.28±0.70.37±0.20.58±0.10.29±0.0313.1±3.12 慢結(jié)靈膠囊 低劑量 0.29±0.043.20±0.50.36±0.10.62±0.10.31±0.0714.5±4.0周續(xù)表15時間 組別 甲狀腺睪丸 附睪 子宮 卵巢 前列腺 胸腺(mg/100g) (g/100g) (g/100g) (g/100g) (mg/100g) (g/100g) (g/100g)給對照組 13.3±2.50.52±0.110.20±0.060.25±0.0954.1±17.20.12±0.030.15±0.07藥慢結(jié)靈膠囊 高劑量 14.1±1.50.56±0.150.19±0.050.21±0.0650.7±9.1 0.13±0.050.14±0.04后慢結(jié)靈膠囊 中劑量 12.8±2.70.59±0.180.19±0.050.20±0.1058.2±8.1 0.15±0.070.15±0.0613慢結(jié)靈膠囊 低劑量 14.6±2.00.58±0.120.22±0.050.24±0.0957.9±11.20.13±0.020.17±0.02周給對照組 12.9±2.80.50±0.120.19±0.030.20±0.0245.2±16.80.11±0.030.13±0.04藥慢結(jié)靈膠囊 高劑量 13.1±1.80.49±0.090.18±0.020.19±0.0443.5±12.70.12±0.040.12±0.03后慢結(jié)靈膠囊 中劑量 11.9±3.00.50±0.140.19±0.010.19±0.0548.1±8.6 0.11±0.040.13±0.0526慢結(jié)靈膠囊 低劑量 13.2±3.00.50±0.100.21±0.060.21±0.0447.2±11.10.12±0.020.14±0.01周停對照組 12.0±3.50.45±0.060.15±0.040.19±0.0443.5±7.8 0.10±0.020.11±0.04藥慢結(jié)靈膠囊 高劑量 12.7±2.80.42±0.100.16±0.040.20±0.0248.0±9.3 0.09±0.030.10±0.02后慢結(jié)靈膠囊 中劑量 10.8±1.50.41±0.060.15±0.030.18±0.0346.6±6.2 0.08±0.020.12±0.032 慢結(jié)靈膠囊 低劑量 12.0±3.20.40±0.070.16±0.020.20±0.0449.4±3.0 0.10±0.020.13±0.02周表16 慢結(jié)靈膠囊連續(xù)灌胃給藥對大鼠血液生化指標的影響 (X±SD)時 組別動物數(shù) ALT ASTALP T-BIL TP間 (只) (U/L) (u/L) (u/L) (μmol/L) (g/L)給 對照組1044.0±15.5122.5±28.2189.0±36.16.35±0.461.9±4.1藥 慢結(jié)靈膠囊高劑量組1047.1±14.9132.7±36.8197.4±33.26.40±0.362.2±7.8后 慢結(jié)靈膠囊中劑量組1038.9±9.3 116.9±32.3193.6±33.66.27±0.360.7±2.513 慢結(jié)靈膠囊低劑量組1040.2±16.8122.4±40.5188.3±32.56.18±0.363.7±6.3周給 對照組1044.4±13.7136.8±28.3186.0±33.16.17±1.162.9±1.7藥 慢結(jié)靈膠囊高劑量組1051.2±16.6142.0±28.9181.0±54.06.02±0.865.1±3.9后 慢結(jié)靈膠囊中劑量組1047.1±12.4126.0±29.0166.7±63.36.12±1.062.9±1.726 慢結(jié)靈膠囊低劑量組1045.8±13.6125.2±29.3174.3±65.66.05±0.467.8±7.2周停 對照組1047.0±6.7 130.4±34.8178.6±41.96.41±0.462.1±2.6藥 慢結(jié)靈膠囊高劑量組1048.6±13.2133.3±35.7167.0±59.76.27±0.561.2±2.1后 慢結(jié)靈膠囊中劑量組1044.6±11.0127.2±47.4154.0±60.26.21±0.462.9±2.52 慢結(jié)靈膠囊低劑量組1046.6±12.6115.5±26.5153.2±61.76.27±0.463.2±6.2周續(xù)表16時間 組別動物數(shù) ALB UREA CR CHOL GLU(只) (g/L) (mmol/L) (umol/L) (mmol/L) (mmol/L)給對照組1022.2±3.06.48±1.8278.9±6.11.36±0.225.7±1.1藥慢結(jié)靈膠囊高劑量組1022.7±2.56.63±1.9281.2±6.01.40±0.406.0±1.6后慢結(jié)靈膠囊中劑量組1022.3±2.96.40±2.2078.6±7.81.35±0.376.2±1.313慢結(jié)靈膠囊低劑量組1021.7±2.26.55±2.1076.6±18.9 1.36±0.275.6±1.3周給對照組1022.9±1.76.53±1.4072.7±16.4 1.50±0.166.4±1.2藥慢結(jié)靈膠囊高劑量組1024.0±2.06.69±1.3673.1±16.6 1.45±0.316.5±1.7后慢結(jié)靈膠囊中劑量組1024.7±0.96.29±1.6675.7±13.3 1.49±0.426.6±1.026慢結(jié)靈膠囊低劑量組1024.2±3.06.58±1.7474.0±14.8 1.35±0.256.9±1.1周停對照組1022.5±2.66.54±1.2874.6±8.81.44±0.195.6±0.6藥慢結(jié)靈膠囊高劑量組1023.3±1.26.13±1.3476.8±4.31.55±0.175.5±0.8后慢結(jié)靈膠囊中劑量組1024.4±1.06.30±1.7176.2±2.31.40±0.215.4±1.32 慢結(jié)靈膠囊低劑量組1023.3±3.57.95±1.6 78.6±4.71.38±0.306.0±0.9周表17 慢結(jié)靈膠囊連續(xù)灌胃給藥對大鼠血常規(guī)的影響(X±SD)時間 組別 動物數(shù) WBC LY MO GR RBC HgbPitMCV MCH(只) (×109/L) (％)(％) (％) (×1012/L) (g/L)(×109/L)(fL)(Pg)給對照組 1011.4±3.973.2±5.77.9±1.918.9±5.47.4±0.7137.9±19.9709.3±227.258.7±5.325.0±3.5藥高劑量組1011.9±4.771.5±6.98.2±2.020.3±5.77.1±0.6138.1±16.3673.2±149.959.5±3.327.7±4.0后中劑量組1012.3±3.471.9±7.28.5±1.719.4±6.97.3±0.7139.6±16.1689.7±161.958.4±4.625.9±4.213低劑量組1010.8±3.972.3±7.68.5±1.319.1±6.57.2±0.8142.3±12.1659.9±98.0 58.7±7.424.4±3.9周給對照組 1012.2±2.772.4±6.17.6±1.520.0±6.07.0±0.9144.4±10.4680.3±134.960.1±2.422.5±0.9藥高劑量組1013.1±4.974.0±4.57.2±2.618.8±3.97.2±0.8146.3±9.3 687.8±167.460.2±2.622.4±1.2后中劑量組1012.7±2.773.9±2.97.6±1.818.4±3.16.8±0.8150.6±8.5 715.1±151.661.7±2.423.3±1.026低劑量組1013.9±2.972.6±6.77.6±2.419.8±6.87.1±0.8147.9±10.9740.8±130.560.0±1.922.4±0.7周停對照組 1012.5±4.272.1±5.28.2±3.019.6±3.97.2±1.0140.4±9.7 692.6±79.1 64.2±2.521.7±0.9藥高劑量組1011.9±4.673.8±5.68.4±3.117.8±8.07.4±0.9140.9±9.5 659.9±102.961.2±6.723.5±3.3后中劑量組1012.9±4.373.5±4.97.8±2.118.6±4.86.9±0.9142.0±6.4 707.8±55.5 59.5±4.021.3±1.52 低劑量組1012.5±5.773.8±7.78.1±1.117.9±7.57.2±1.1140.0±9.0 724.9±92.0 59.4±5.621.9±0.9周以下通過實施例來進一步闡述本發(fā)明藥物的制備方法。
實施例1 本發(fā)明藥物膠囊劑的制備它由下列的原料藥制成鹽補骨脂160g，炒白術160g，炒山藥120g，茯苓120g，五倍子80g，秦皮80g，煨肉豆蔻80g，煨木香40g，吳茱萸40g，炙甘草40g。
1)稱取以上十味，其中鹽補骨脂及1/3量的炒山藥40g粉碎成細粉，備用；2)炒白術、煨肉豆蔻、煨木香和吳茱萸加6倍量水，浸泡12小時，水蒸氣蒸餾6小時，得揮發(fā)油與水提取液，水提取液及藥渣備用；3)稱取2)所得揮發(fā)油8倍量的β-環(huán)糊精，置適當玻璃容器中，加入β-環(huán)糊精6倍量的水，于磁力加熱攪拌器上，恒溫攪拌至30℃，取上述揮發(fā)油，按1∶1比例用無水乙醇稀釋后，滴入β-環(huán)糊精溶液中，恒溫攪拌3小時，置4℃冰箱中冷藏24小時，抽濾，40℃干燥4小時，備用。
4)藥渣與其余2/3量炒山藥80g，茯苓、五倍子、秦皮、炙甘草等五味加6倍量水煎煮三次，每次2小時，合并煎液，過濾。將濾液與上述提取揮發(fā)油后的水提取液合并，濃縮至相對密度為1.12的稀膏，加入乙醇使含醇量達50％，放置24小時，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.30～1.40稠膏，5)將4)所得稠膏加入1)中所述細粉，混勻，60℃～80℃下干燥，加入3)中所述揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物；6)將5)所得活性組分粉碎，制粒，干燥，裝入膠囊，得到膠囊劑。
實施例2 本發(fā)明藥物顆粒劑的制備它由下列的原料藥制成鹽補骨脂120g，炒白術120g，炒山藥80g，茯苓80g，五倍子40g，秦皮40g，煨肉豆蔻40g，煨木香20g，吳茱萸20g，炙甘草20g。
制備活性物質(zhì)的步驟同實施例1的1)～5)，6)將5)所得活性組分粉碎，制粒，干燥。
實施例3 本發(fā)明藥物片劑的制備它由下列的原料藥制成鹽補骨脂200g，炒白術200g，炒山藥160g，茯苓160g，五倍子120g，秦皮120g，煨肉豆蔻120g，煨木香60g，吳茱萸60g，炙甘草60g。
制備活性物質(zhì)的步驟同實施例1的1)～5)，6)將5)所得活性組分粉碎，壓片。
權(quán)利要求
1.一種治療慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎的藥物，其特征在于它主要是由下列重量份的原料藥制成鹽補骨脂120～200份，炒白術120～200份，炒山藥80～160份，茯苓80～160份，五倍子40～120份，秦皮40～120份，煨肉豆蔻40～120份，煨木香20～60份，吳茱萸20～60份，炙甘草20～60份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其中各原料藥的用量為鹽補骨脂160份，炒白術160份，炒山藥120份，茯苓120份，五倍子80份，秦皮80份，煨肉豆蔻80份，煨木香40份，吳茱萸40份，炙甘草40份。
3.權(quán)利要求1或2所述藥物的制備方法它包括下列步驟1)稱取以上十味原料藥，其中鹽補骨脂及1/3量的炒山藥粉碎成細粉，備用；2)炒白術、煨肉豆蔻、煨木香和吳茱萸加6倍量水，浸泡12小時，水蒸氣蒸餾6小時，得揮發(fā)油與水提取液，水提取液及藥渣備用；3)稱取2)所得揮發(fā)油8倍量的β-環(huán)糊精，置適當玻璃容器中，加入β-環(huán)糊精6倍量的水，于磁力加熱攪拌器上，恒溫攪拌至30℃，取上述揮發(fā)油，按1∶1比例用無水乙醇稀釋后，滴入β-環(huán)糊精溶液中，恒溫攪拌3小時，置4℃冰箱中冷藏24小時，抽濾，40℃干燥4小時，備用。4)藥渣與其余2/3量炒山藥，茯苓、五倍子、秦皮、炙甘草等五味加6倍量水煎煮三次，每次2小時，合并煎液，過濾。將濾液與上述提取揮發(fā)油后的水提取液合并，濃縮至相對密度為1.12的稀膏，加入乙醇使含醇量達50％，放置24小時，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.30～1.40稠膏，5)將4)所得稠膏加入1)中所述細粉，混勻，60℃～80℃下干燥，加入3)中所述揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物，就制備成了本發(fā)明藥物的活性組分。
4.權(quán)利要求3所述藥物的制備方法，還包括如下步驟6)將步驟5)所得活性組分粉碎，制粒，干燥，裝入膠囊，得到膠囊劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎的藥物及制備方法，屬于中藥及其制備方法領域。它主要是由下列重量份的原料藥制成鹽補骨脂120～200份，炒白術120～200份，炒山藥80～160份，茯苓80～160份，五倍子40～120份，秦皮40～120份，煨肉豆蔻40～120份，煨木香20～60份，吳茱萸20～60份，炙甘草20～60份。本發(fā)明藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤滑劑、粘合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用劑型，如丸劑、散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液等。本發(fā)明具有補腎健脾、澀腸止瀉之功效，適用于治療慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎。
文檔編號A61P1/04GK1631418SQ20041001123
公開日2005年6月29日 申請日期2004年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月17日
發(fā)明者王恩思, 王永生, 年斗印, 徐春平 申請人:徐春平, 王恩思, 王永生, 年斗印