專利名稱：與人血管生成素-2特異性結(jié)合的藥物融合體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及一類與人血管生成素-2結(jié)合的特異性藥物融合體及其應(yīng)用。主要涉及通過基因工程手段將具有活性的、能與人血管生成素-2結(jié)合的多肽片段(幻 通過連接鏈與由(X)n鏡像氨基酸序列組成的多肽片段(X’)n連接在一起，在連接鏈處有聚合物、脂肪酸和糖修飾任一種修飾。所形成的藥物融合體包含2段反向重復(fù)的多肽片段序列(X)n與(X’)n。本發(fā)明還涵蓋了該多肽及其修飾產(chǎn)物在治療伴隨血管異常增生的疾病應(yīng)用。
背景技術(shù)：
很多疾病與血管異常生成相關(guān)，如老年性黃斑病變、腫瘤及炎性疾病等。目前的研究進(jìn)展表明，在血管發(fā)生進(jìn)程中，有很多信號(hào)系統(tǒng)參與，其中Tie-2受體酪氨酸激酶信號(hào)通路研究的較為充分，血管生成素是Tie-2受體的特異性配體。目前已發(fā)現(xiàn)4中血管生成素，分別命名為血管生成素-I、血管生成素_2、血管生成素-3及血管生成素-4。體內(nèi)和體外試驗(yàn)研究表明，血管生成素-2在上述病理發(fā)生進(jìn)程中與Tie-2受體結(jié)合，有益于血管可塑性狀態(tài)，在這些病理進(jìn)程中血管生成素-2的表達(dá)被顯著上調(diào)。相反，正常組織的血管生成素-2表達(dá)十分有限。因此通過阻斷血管生成素-2與Tie-2受體結(jié)合是治療腫瘤、老年性黃斑病變及炎癥的有效方法。研究發(fā)現(xiàn)一類小肽可顯著抑制血管生成素的活性(CN 200910159451. 9，在此引入作為參考)，但這類小肽分子量較小(約1000-2000道爾頓)，很容易在人體內(nèi)被腎清除，無法在體內(nèi)發(fā)揮其有效活性。因此本發(fā)明的目的是提供一種體內(nèi)長(zhǎng)效的血管生成素-2特異性結(jié)合藥物融合體。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述不足，本發(fā)明提供了下述構(gòu)型的化合物
權(quán)利要求
1.具有下式的與人血管生成素-2特異性結(jié)合的藥物融合體
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的藥物融合體，其結(jié)構(gòu)特征在于所述藥物融合體中包含2段反向重復(fù)的多肽序列(互為鏡像的(幻 與(X’)n)，所述的2段重復(fù)序列((幻 與(X’)n)通過連接鏈Y連接在一起；在連接鏈的部位有聚合物、脂肪酸或糖其中任一種修飾；X與Y間和X’與Y間不存在或有1-20個(gè)氨基酸殘基間隔。
3.根據(jù)權(quán)利要求I和權(quán)利要求2所述，η是4。
4.根據(jù)權(quán)利要求I和權(quán)利要求2所述，η是3。
5.根據(jù)權(quán)利要求I和權(quán)利要求2所述，η是2。
6.根據(jù)權(quán)利要求I和權(quán)利要求2所述，η是I。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述，藥物融合體中連接鏈Y包含一個(gè)可發(fā)生化學(xué)修飾的氨基酸位點(diǎn)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述，藥物融合體中X選自 Ca)在SEQ ID No: I給出的序列； (b)Ca)的氨基酸序列中，具有在一個(gè)或多個(gè)位置的氨基酸被絲氨酸替換； (C) Ca)的氨基酸序列中，具有在一個(gè)或多個(gè)位置的氨基酸被甘氨酸替換； Cd) Ca)的氨基酸序列中，具有在一個(gè)或多個(gè)位置的氨基酸被丙氨酸替換； Ce)氨基酸組成中有>80%與(a)的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7項(xiàng)所述的藥物融合體中，連接鏈Y長(zhǎng)度為3-20個(gè)氨基酸，所述連接鏈包括但不限于SEQ NO 2給出的氨基酸序列。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述修飾，可發(fā)生化學(xué)修飾的氨基酸位點(diǎn)為賴氨酸。
11.任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述，藥物融合體的化學(xué)修飾，包括但不限于脂肪酸修飾、聚乙二醇修飾、包含乙氧基重復(fù)結(jié)構(gòu)的嵌段共聚物修飾、糖修飾任一種。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述修飾，是通過Z末端的化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)和連接鏈Y上游離的半胱氨酸反應(yīng)進(jìn)行修飾，制備藥物融合體。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述修飾制備的藥物融合體中Z為脂肪酸，所述脂肪酸的碳鏈長(zhǎng)度為5-30個(gè)。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述修飾制備的藥物融合體中Z為聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量范圍為5000-40000道爾頓之間。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述修飾制備的藥物融合體中Z為包含乙氧基重復(fù)結(jié)構(gòu)的嵌段共聚物，所述的包含乙氧基重復(fù)結(jié)構(gòu)的嵌段共聚物的分子量范圍為5000-40000道爾頓之間。
16.根據(jù)權(quán)力要求14所述的藥物融合體，聚乙二醇包括線性的聚乙二醇和分枝型聚乙二醇。
17.—種編碼權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)的多肽的核苷酸序列。
18.—種包含權(quán)利要求17的表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。
19.權(quán)利要求18的宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞。
20.權(quán)利要求18的宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞。
21.任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的藥物融合體在治療伴隨血管異常增生的疾病應(yīng)用。
22.權(quán)利要求21所述的疾病，包括老年性黃斑病變、腫瘤、炎性疾病、子宮內(nèi)膜異位癥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類與人血管生成素-2特異性結(jié)合的藥物融合體，還公開了該類藥物融合體的制備方法及利用該藥物融合體治療老年性黃斑病變、腫瘤、炎性疾病、子宮內(nèi)膜異位癥的方法。
文檔編號(hào)A61K38/18GK102949732SQ201110404479
公開日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2011年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
發(fā)明者于鵬展 申請(qǐng)人:西藏海思科藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司