專利名稱：作為抗哮喘藥和免疫抑制劑的特異性親免蛋白配體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的特異性親免蛋白配體，其結(jié)構(gòu)式如下
基團(tuán)R1、R2、R3、R4、X、Y、A、B和D定義如下R1是氫原子、C1-C12烷基或C2-C6烷氧基，其中烷基是直鏈或支鏈的，并可被一個(gè)含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的單環(huán)-或二環(huán)雜芳基取代，該雜芳基如嗎啉、哌嗪、哌啶、吲哚、吲唑、2,3-二氮雜萘、噻吩、呋喃或咪唑基，上述烷基也可被苯環(huán)單取代或多取代。該苯環(huán)本身可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；?、三氟甲基、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基一次或多次取代，而上述取代基本身可被芐基、苯甲?；蛞阴；〈?，R1還可以是下列氨基酸甲酯的胺部分組氨酸、亮氨酸、纈氨酸、絲氨酸(Bzl)、蘇氨酸、2-哌啶酸、哌啶-4-羧酸，哌啶-3-羧酸、ε-NH2-賴氨酸、ε-Z-NH-賴氨酸、ε-(2Cl-Z)-NH-賴氨酸、2-吡啶基丙氨酸、苯丙胺酸、色氨酸、谷氨酸、精氨酸(Tos)、天冬氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、二氫吲哚-2-羧酸、八氫吲哚(octahydroindoline)羧酸、四氫異喹啉羧酸、5-氨基戊酸和8-氨基辛酸，R2是氫原子、C1-C12烷基或C2-C6烷氧基，其中烷基是直鏈或支鏈的，并可被含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的單環(huán)或二環(huán)雜芳基取代，該雜芳基如嗎啉、哌嗪、哌啶、吲哚、吲唑、2,3-二氮雜萘、噻吩、呋喃或咪唑基，上述烷基也可被苯環(huán)單取代或多取代。該苯環(huán)本身可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；⑷谆?、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基一次或多次取代，而上述取代基本身又可被芐基、苯甲?；蛞阴；〈?，R3是氫原子，丁氧羰基，羧芐基，單、二或三環(huán)羰基芳基或含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的雜芳基，其中該芳基或雜芳基本身又可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；⑷谆?、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基取代一次或多次，而上述取代基本身又可被芐基、苯甲?；蛞阴；〈3也可以是羧基-C1-C6烷基，其中烷基是直鏈或支鏈的，并可被含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的單環(huán)或二環(huán)雜芳基取代，該雜芳基如嗎啉、哌嗪、哌啶、吲哚、吲唑、2,3-二氮雜萘、噻吩、呋喃或咪唑基，上述烷基也可被苯環(huán)單取代或多取代，該苯環(huán)本身可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；⑷谆?、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基取代一次或多次，而上述取代基本身又可被芐基、苯甲?；蛞阴；〈?，R3還可以是下列氨基酸的羧基組氨酸、亮氨酸、纈氨酸、絲氨酸(Bzl)、蘇氨酸、2-哌啶酸、哌啶-4-羧酸，哌啶-3-羧酸、ε-NH2-賴氨酸、ε-Z-NH-賴氨酸、ε-(2Cl-Z)-NH-賴氨酸、2-吡啶基丙氨酸、苯丙胺酸、色氨酸、谷氨酸、精氨酸(Tos)、天冬氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、二氫吲哚-2-羧酸、八氫吲哚(octahydroindoline)羧酸、四氫異喹啉羧酸、5-氨基戊酸和8-氨基辛酸，其中氨基酸的N末端可被丁氧羰基、羧芐基取代或被單、二或三環(huán)芳基羧酸或含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的雜芳基羧酸的羧基取代，例如甲氧基苯乙酸、萘基乙酸、吡啶基乙酸、喹唑啉基乙酸、吲唑基乙酸、吲哚基乙醛酸、苯基乙醛酸、吲哚基乙醛酸和2-氨基-噻唑基-4-乙醛酸，或者被羧基-(C1-C12)烷基、羧基環(huán)戊烷、羧基環(huán)己烷或苯甲?；〈?，該取代基可被鹵原子、甲氧基、氨基、氨基甲?；?、三氟甲基、羧基或被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基單-或多次取代，
R4是H、F或OR5，R5是氫原子、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷基或羧基-C1-C6烷基，其中烷基是直鏈或支鏈的，并可被單、二或三環(huán)羰基芳基或含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的單環(huán)或二環(huán)羰基雜芳基取代，其中芳基或雜芳基本身可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；?、三氟甲基、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基取代一次或多次，而上述氨基本身又可被芐基、苯甲酰基或乙?；〈?，A是芳族、非芳族的，為含1-2個(gè)雜原子的芳族雜環(huán)，該雜原子優(yōu)選N、S或O，或者是含1-2個(gè)雜原子的非芳族雜環(huán)，該雜原子優(yōu)選N,S或O，B是CH2，D是CH，B-D是CH=C，X是O、S或H2，Y是C或單鍵。
本發(fā)明還涉及式Ⅰ化合物的生物相容鹽，涉及式Ⅰ化合物的制備方法及其在制藥方面的用途。
環(huán)孢菌素A(CsA)和Fk506是得自真菌的天然免疫抑制物質(zhì)，它們抑制一些類型細(xì)胞的、依靠鈣離子的信號(hào)傳遞路徑。在T細(xì)胞中，這兩種試劑都可抑制包括IL-2基因在內(nèi)的一些基因的轉(zhuǎn)錄，該基因通過T細(xì)胞受體(TCR)刺激而活化。FK506和CsA對(duì)可溶性受體蛋白都具有高度親和性(G.Fisher等，自然，337,476-478,1989；M.W.Harding等，自然，341,755-760,1989)。FK506受體和CsA受體被分別稱為FKBP和親環(huán)蛋白(Cyp)。這兩種蛋白都能對(duì)肽的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的順、反酰胺鍵的異構(gòu)反應(yīng)起催化作用，并也常被稱為親免蛋白。
CsA-Cyp或FK506-FKBP大分子結(jié)合鈣調(diào)磷酸酶(CN)并抑制其磷酸化活性。已確認(rèn)轉(zhuǎn)錄因子NF-AT的胞質(zhì)磷酸化成分是CN的細(xì)胞靶分子；如果CN活性喪失，所述分子在細(xì)胞核作用中不能去磷酸化，故在IL-2啟動(dòng)子上的活性轉(zhuǎn)錄復(fù)合物不能啟動(dòng)(M.K.Rosen,Fisher，應(yīng)用化學(xué)，106(1994),1479-1501)。
過敏性哮喘由T細(xì)胞和其介體控制的炎性反應(yīng)引起。皮質(zhì)類固醇仍是治療多種過敏性疾病的優(yōu)選藥物。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究也證明，CsA和FK506是支氣管哮喘和伴發(fā)炎癥的有效的治療劑。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，可顯示對(duì)多種細(xì)胞因子例如IL-2、IL-4和IL-5的阻斷，這些因子引起過敏性炎性反應(yīng)。
盡管為確定新的有活性的親免蛋白抑制劑進(jìn)行了多方努力，至今尚不能制備或分離比CsA、FK506、雷怕霉素或這些天然物質(zhì)的衍生物更具活性的結(jié)構(gòu)。但是，CsA、FK506及其雷怕霉素的高抑制能力因其成倍加重的副作用、特別是對(duì)腎和神經(jīng)毒性而大打折扣(N.H.Sigal等，實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)雜志173,619-628,1991)。其原因是親免蛋白配體和細(xì)胞特異性結(jié)合蛋白之間非特異性的作用。這就從本質(zhì)上限制了這些免疫抑制劑的已知藥物治療作用。該化合物選擇性的缺乏在長期治療中還帶來了其它問題。
本發(fā)明的目的是，尋找具備藥用價(jià)值的新的化合物并用特定的方法制備該化合物。
本發(fā)明的式Ⅰ化合物代表了一類嶄新的物質(zhì)，該物質(zhì)具有驚人的結(jié)合親免蛋白的特異性并驚人地抑制IL-2的繁殖。此類化合物及其藥用鹽對(duì)親免蛋白如CypA、CypB、CypC和FKBP12具有高度親和性。
式Ⅰ化合物含不對(duì)稱碳原子，因此一般以外消旋混合物的形式存在，可通過本領(lǐng)域已知方式如用光學(xué)活性酸將其拆分為光學(xué)活性異構(gòu)體。但是，反應(yīng)開始時(shí)也可用光學(xué)活性的起始物質(zhì)，這時(shí)相應(yīng)光學(xué)活性或非對(duì)映異構(gòu)體即終產(chǎn)物。
因此，本發(fā)明包括含一個(gè)不對(duì)稱碳原子的式Ⅰ化合物的R型、S型及R、S-混合物，及含若干個(gè)不對(duì)稱碳原子時(shí)的非對(duì)映異構(gòu)體形式。
根據(jù)制備條件和起始物，可得到式Ⅰ化合物的游離化合物或其鹽。以本領(lǐng)域已知方法，例如用酸、堿或離子交換劑，可將所得鹽轉(zhuǎn)化為游離堿或酸。
這樣得到的式Ⅰ的游離化合物與無機(jī)或有機(jī)酸或堿反應(yīng)，可轉(zhuǎn)化為適當(dāng)?shù)纳锵嗳菟峒映甥}。
游離堿及其鹽都有生物活性。式Ⅰ化合物可以以游離方式或以與生物相容酸或堿形成的鹽使用?？赏ㄟ^口服、非腸道、靜脈內(nèi)、透皮或吸入給藥。
本發(fā)明還涉及含至少一種式Ⅰ化合物或其與生物相容的無機(jī)或有機(jī)酸或堿形成的鹽，及選擇性存在的藥用賦形劑和輔劑的藥物制劑。
給藥劑型的適當(dāng)實(shí)例為片劑或包衣片劑、膠囊、溶液劑或安瓿、栓劑、硬膏或吸入劑用散劑。
上述藥物制劑的劑量依賴于患者的情況和給藥形式?；钚晕镔|(zhì)的日劑量為每千克體重每天0.01至100mg。
例如，通過R.B.Merrifield的固相合成法制備式Ⅰ表示的化合物，該方法優(yōu)選在不溶性聚合物如聚苯乙烯樹脂(如聚苯乙烯和1％二乙烯基苯的共聚物)珠上進(jìn)行，該樹脂珠在有機(jī)溶劑中是可膨脹的，使用固相肽合成的標(biāo)準(zhǔn)肽偶聯(lián)方法。
通過如下方法制備通式Ⅰ的化合物首先，兩個(gè)官能團(tuán)(α-氨基或ε-氨基和α-羧基)被保護(hù)基保護(hù)，然后游離的第三官能團(tuán)以適當(dāng)?shù)姆绞椒磻?yīng)。另外一種更好的方式，在第一步中向中間體中引入保護(hù)基，并在第二步后將保護(hù)基換為所需基團(tuán)。適宜的保護(hù)基及其引入方法是本領(lǐng)域已知的。保護(hù)基的實(shí)例描述于《肽合成原理》，Springer出版社1984；J.M.Stewart和J.D.Young所著《固相肽合成》，Pierce化學(xué)公司，Rockford,第11版，1984；及G.Barany和R.B.Merrifield所著《肽》，第1章，1-285頁，1979，科學(xué)出版公司。
例如，通過如下方法進(jìn)行逐步合成首先使其α-氨基被保護(hù)的羧基末端氨基酸與常用的不溶性載體共價(jià)結(jié)合，將此氨基酸的α-保護(hù)基裂解，將下一個(gè)被保護(hù)的氨基酸通過其羧基結(jié)合至如上得到的現(xiàn)已游離的氨基上，所要合成肽中的其余氨基酸以此方式以正確的順序逐步偶聯(lián)，并必要時(shí)將存在的其它側(cè)鏈功能保護(hù)基都裂解掉，當(dāng)所有氨基酸偶合完畢后，測定作為固定化合物的完成的配體以檢測Cyp或FKBP的結(jié)合。該逐步縮合反應(yīng)以常規(guī)方式實(shí)現(xiàn)，由適當(dāng)?shù)?、常?guī)保護(hù)的氨基酸合成。還可以用自動(dòng)肽合成儀，例如Bachen,Switzerland的Labortec SP 650型，使用市售的保護(hù)了的氨基酸。
下面是式Ⅰ化合物的實(shí)施例實(shí)施例1 N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺實(shí)施例2 N-[哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(ε-NH2)賴氨酸甲酯]酰胺實(shí)施例3 N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺實(shí)施例4 N-[二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(ε-NH2)賴氨酸甲酯]酰胺實(shí)施例5 N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺實(shí)施例6 1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺實(shí)施例7 1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(S-苯丙胺酸甲酯)酰胺實(shí)施例8 N-[N’-(4-甲氧基苯基乙酰基)哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸甲酯(作為制備通式Ⅰ酰胺的前體)實(shí)施例9 N-(4-甲氧基苯基乙酰基)二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸甲酯(作為制備通式Ⅰ酰胺的前體)實(shí)施例10 N-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸4-哌啶基酰胺實(shí)施例11 N-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(哌嗪子基乙酰嗎啉)酰胺實(shí)施例12 N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(哌嗪子基乙酰嗎啉)酰胺實(shí)施例13 N-[N’-(4-甲氧基苯基乙?；?哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺按照本發(fā)明，式Ⅰ的化合物還可通過下列方法制備
按照本發(fā)明，通過R4、A、B、D、X和Y定義如上的式Ⅱ吲哚衍生物與鏈長為C1-C12的烷醇Ⅲ反應(yīng)，制備R4、A、B、D、X和Y定義如上的吲哚衍生物的烷基酯Ⅳ，隨后此酯Ⅳ與R3、X和Y定義如上的化合物Ⅴ反應(yīng)，得到R3、R4、A、B、D、X和Y定義如上的化合物Ⅵ，然后將此化合物Ⅵ皂化，得到R3、R4、A、B、D、X和Y定義如上的化合物Ⅶ，然后化合物Ⅶ與R1和R2定義如上的化合物Ⅷ反應(yīng)，得到目的化合物Ⅰ，即R1、R2、R3、R4、A、B、D、X、Y定義如上的式Ⅰ化合物。
為制備生物相容鹽，式Ⅰ化合物以已知方式與無機(jī)或有機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、乙酸、酒石酸、枸櫞酸、富馬酸、馬來酸、乳酸或雙羥萘酸，或者與無機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)。
藥物制劑含至少一種通式Ⅰ化合物或其與生物相容的無機(jī)或有機(jī)酸或堿形成的鹽，及選擇性存在的藥用賦形劑和輔劑。
給藥劑型的實(shí)例為片劑或包衣片劑、膠囊、溶液劑或安瓿、栓劑、硬膏或吸入用散劑。
上述藥物制劑的劑量依賴于患者的情況和給藥形式。活性物質(zhì)的日劑量為每千克體重每天0.01至100mg。
通過結(jié)合親免蛋白及抑制其異構(gòu)酶活性來識(shí)別本發(fā)明的式(Ⅰ)化合物。通過世界通用的常規(guī)酶實(shí)驗(yàn)G.Fisher,H.Bang,A.Schellinberger,生物化學(xué)與生物物理學(xué)，791,87-97,1984；D.H.Rich等，藥物化學(xué)雜志38,4164-4170,1995測定此脯氨酰基異構(gòu)酶活性。
雖然，親免蛋白的肽基順/反異構(gòu)酶活性不是每時(shí)每刻起作用，但是這些化合物以驚人的特異性抑制肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和活化的T細(xì)胞產(chǎn)生IL-2。與環(huán)孢菌素A(Sandimmun,CsA)、FK506或雷怕霉素(Tacrolimus)一樣，本發(fā)明的化合物可用作免疫抑制劑(R.Y.Calne等,英國藥物學(xué)雜志282,934-936,1981)，用于治療自身免疫性疾病(R.H.Wiener等，肝病學(xué)7,1025，摘要.9,1987；L.Fry，自動(dòng)免疫學(xué)雜志，5,183-195,1992；EP610743)，免疫性炎癥(P.Zabel等，Lancet343,1984)，哮喘(C.Bachert，呼吸道-肺疾病20,59,1994)，胰島素依賴性糖尿病(C.R.Stiller,科學(xué)，223,1362-1367,1984)和膿毒癥，并也可與已知親免蛋白配體如CsA、FK506或雷怕霉素合用(M.J.Wyvratt,N.H.Sigal，藥物開發(fā)和設(shè)計(jì)中的構(gòu)想(Perpspectives in DrugDiscovery and Design)，免疫抑制，2,1,1994；WO92/21313；US5330993)。
以實(shí)施例的方式對(duì)本發(fā)明詳加闡述，其中使用了如下縮略語AcOEt 酸乙酯Boc 叔丁氧羰基(Boc)2O叔丁氧羰基酸酐CN 鈣調(diào)磷酸酶CsA 環(huán)孢菌素A
Cyp 親環(huán)蛋白DMAPN,N-二甲基氨基吡啶EA 元素分析FKBPFK506結(jié)合蛋白HPLC高壓液相色譜i.PV 在油泵真空中Lsg.溶劑MeOH甲醇PPlase 肽基-脯氨酸順/反異構(gòu)酶i.RV. 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中i.V.在真空中RT 室溫下rac.消旋混合的ent.對(duì)抗/對(duì)映TFA 三氟乙酸Z 芐氧羰基實(shí)施例1N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺的合成步驟1(R,S)-二氫吲哚-2-羧酸甲酯鹽酸鹽在100ml三頸燒瓶中，將5.3g(32.5mmol)(R,S)-二氫吲哚-2-羧酸溶解于70ml無水甲醇中，室溫下加入4.25g(35.75mmol)亞硫酰氯。將此黃色反應(yīng)混合物回流5小時(shí)，冷卻后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑。在油泵真空中干燥后，得到結(jié)晶固體形式的粗品，將其用乙醚攪拌并抽濾。
產(chǎn)率5.4g(78％)。
步驟2Boc-哌啶-4-羧酸在250ml單頸燒瓶中，將7g(54mmol)哌啶-4-羧酸溶解于50ml二噁烷和40.5ml 2N氫氧化鈉中，并將此溶液冷卻至0℃。在30分鐘內(nèi)，滴加12.99g(59.4mmol)(Boc)2O的30ml二噁烷溶液。然后將此化合物室溫下攪拌24小時(shí)。形成白色沉淀。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去二噁烷并用硫酸氫鉀溶液回收此殘余物。用乙酸乙酯兩次萃取水相。用飽和氯化鈉溶液洗滌有機(jī)相一次并用硫酸鎂干燥。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，得到11.93g(96％)白色粉末。1H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.25-1.5(m,11,Boc,2-pip)；1.8(m,2-pip)；2.4(m,1,H-C4)；2.8(t,2,H-C3,H-C5)；3.8(d,2,H-C2,H-C6)；12.25(s,1,COOH).EA計(jì)算值 C11H19N1O4(229.1):C57.62；H8.29；N6.11實(shí)測值C57.89；H8.36；N5.86步驟3:N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸甲酯將(R,S)-二氫吲哚-2-羧酸甲酯鹽酸鹽4.6g(22mmol)和Boc-哌啶-4-羧酸7.4g(32mmol)溶解于50ml二氯甲烷中并在30分鐘內(nèi)將此溶液室溫下滴加于9.27g(36mmol)2-氯-1-甲基吡啶碘和8.06ml(58mmol)三乙胺的40ml二氯甲烷懸浮液中。然后將此混合物回流8小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，用200ml乙酸乙酯回收此殘余物并用水洗滌有機(jī)相一次，用半飽和硫酸氫鉀洗滌兩次，用2N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次，并用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑并通過在400g硅膠色譜上、用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫純化此殘余物。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，在油泵真空條件下干燥，得到4.61g(54％)淡棕色粉末。M.p.:54-56°TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=O.611H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.35-1.85(m,15,Boc,6-pip)；2.7-2.8(m,2,H-C3,H-C5)；3.25(m,1,H-C3-ind)；3.65(m,1,H-C3′-ind)；3.8(s,3,COOCH3)；3.95(m,2,H-C6-pip)；5.45(d,1,H-C2-ind)；7.05(m,1,Ar)；7.1-7.3(m,2,Ar)；8.1(d,1,Ar).EA:計(jì)算值C21H28N2O5(388.47):C64.92；H7.27；
N 7.21實(shí)測值C65.20；H7.49；N7.38Ms:(ESI+)計(jì)算值388.3；實(shí)測值389.2步驟4:N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸在50ml三頸燒瓶中，將3.3g(8.51mmol)N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸甲酯溶解于25ml甲醇中，加入2.14g(51mmol)單水氫氧化鋰，并將此混合物室溫下攪拌2.5小時(shí)。用半飽和硫酸氫鉀水溶液將此溶液酸化至pH=5，并用乙酸乙酯萃取兩次。用氯化鈉飽和溶液將有機(jī)相洗滌一次，用硫酸鎂干燥并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑。在油泵真空條件下干燥，得到3.09g(97％)淡棕色粉末。M.p.:118-119°TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=0.141H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.35-1.85(m,15,BOC,6-pip)；2.7-2.85(m,2,H-C3,H-C5)；3.2(m,1,H-C3-ind)；3.65(m,1,H-C3′-ind)；3.95(m,2,H-C6-pip)；5.45(d,1,H-C2-ind)；7.05(m,1,Ar)；7.1-7.3(m,2,Ar)；8.1(d,1,Ar)；13.0-13.3(s,1,COOH).Ms:(EsI+)計(jì)算值374.3；實(shí)測值375.1步驟5:N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺將2g(5.35mmol)N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸和1.59g(5.35mmol)N-ε-Boc-賴氨酸甲酯鹽酸鹽溶解于20ml二氯甲烷中，并在30分鐘內(nèi)室溫下將此溶液滴加于2.81g(11mmol,2.73g)2-氯-1-甲基吡啶碘和1.62g(16mmol)三乙胺的30ml二氯甲烷懸浮液中。然后將此混合物回流8小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，用200ml乙酸乙酯回收此殘余物，并用水洗滌有機(jī)相一次，用半飽和硫酸氫鉀洗滌兩次，用2N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次，并用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并通過在400g硅膠色譜上用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫純化此殘余物。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，在油泵真空條件下干燥，得到2.61g(79％)淡棕色粉末。M.p.:83-84°TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=0.48FT-IR(KBr):3365w(N-H)；2976w(C-H)；1744m(C=O)；1684s(CONH)；1540w(C-O)；1407m(C-H)；1170s(C-O)；755m(C=C).1H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.25-1.9(m,28,18Boc+3CH2-lys+4-pip)；2.7-3.05(m,5,ε-CH2-lys+H-C3-ind+2-pip)；3.55-3.7(m,3,COOMe)；3.9-4.1(m,2,pip)；4.15-4.3(m,1,H-C3-ind)；5.15(m,1,H-C2-ind)；6.8(m,1,Ar-ind)；7.0(m,1,Ar-ind)；7.1-7.3(m,2,Ar-ind+α-NHCO)；8.1(d,1,Ar-ind)；8.7-8.9(dd,1,NHCO-Boc).Ms:(ESI+)計(jì)算值616.4；實(shí)測值617.5HPLC:2峰在24.25和24.63minEA計(jì)算值C32H48N4O8(616.4):C62.34；H7.47；N9.09實(shí)測值C62.08；H7.67；N8.86實(shí)施例2N-[1-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(ε-NH2)賴氨酸甲酯]酰胺的合成在25ml單頸燒瓶中，將500mg(0.812mmol)N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺溶解于2.8mml二氯甲烷中，加入15當(dāng)量(0.0122mol,0.93ml)的三氟乙酸并將此混合物室溫下攪拌2小時(shí)。向此溶液中加入10ml乙醚并抽濾出形成的白色沉淀，并用乙醚洗滌6次。在油泵真空條件下干燥后，得到513mg(98％)白色粉末。M.p.:164-165°TLC(RP):CH3CN/H2O 1∶1,1％TFA；Rf=0.61FT-IR(KBr):3435w(N-H)；3049w(C-H)；1740w(C=O)；1676s(CONH)；1420m(C-H)；1205m,1135s(C-O).1H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.2-2.05(m,10,3CH2-lys+4-pip)；2.7-3.15(m,5,ε-CH2-lys+H-C3-ind+2-pip)；3.55-3.7(m,3,COOMe)；4.1-4.25(m,1,C3-ind)；5.15(d,1,H-C2-ind)； 6.95(m,1,Ar-ind)；7.1-7.3(m,2,Ar-ind)；7.7-7.85(s,3,NH3+)；8.1(d,1,Ar-ind)；8.7-8.9(m,2,NH2+).MS:(ESI+): 計(jì)算值418.2；實(shí)測值417.3和209.1為m/2HPLC:2 峰在11.54在12.65分鐘實(shí)施例3N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺的合成步驟1:Boc-(R,S)-二氫吲哚-2-羧酸在250ml單頸燒瓶中，將5g(30.8mmol)(R,S)-二氫吲哚-22-羧酸溶解于30ml二噁烷和23ml 2N氫氧化鈉中，并將此溶液冷卻至0℃。在30分鐘內(nèi)，滴加7.39g(33.9mmol)(Boc)2O的20ml二噁烷溶液，然后將此化合物室溫下攪拌24小時(shí)。形成白色沉淀。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去二噁烷并用硫酸氫鉀溶液回收此殘余物，并用乙酸乙酯兩次萃取。用飽和氯化鈉溶液洗滌有機(jī)相一次并用硫酸鎂干燥。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，在油泵真空條件下干燥，得到7.76g(96％)白色粉末。TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5+1％NEt3；Rf=0.911H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.4-1.7(s,9,Boc)；3.1(m,1,H-C3)；3.5(m,1,H-C3′)；4.9(m,1,H-C2)；7.0(m,1,Ar)；7.1-7.3(m,2,Ar)；7.5-7.9(m,1,Ar)；11.5(m,1,COOH).EA計(jì)算值 C14H17N104(263.2):C63.88；H6.46；N5.32實(shí)測值C64.05；H6.53；N5.41步驟2:N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸甲酯將5g(0.023mol)(R,S)-二氫吲哚-2-羧酸甲酯鹽酸鹽和12.11g(46mmol)Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸溶解于40ml二氯甲烷中，并在30分鐘內(nèi)將此溶液室溫下滴加于12.92g(51mmol)2-氯-1-甲基吡啶碘和10.23ml(74mmol)三乙胺的40ml二氯甲烷懸浮液中。然后將此混合物回流8小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，用200ml乙酸乙酯回收此殘余物并用水洗滌有機(jī)相一次，用半飽和硫酸氫鉀洗滌兩次，用2N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次，并用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并通過在400g硅膠色譜上用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫純化此殘余物。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，在油泵真空條件下干燥，得到5.01g(51％)深棕色粉末。M.p.:86℃TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=0.67和0.7FT-IR(KBr):3448w(N-H)；2976w(C-H)；1751s,1707s(C=O)；1680s(CONH)；1485s(C-H)；1168m(C-O)；1020m(C-O)；752s(C=C).Ms:(EsI+)計(jì)算值422.4；實(shí)測值423.3EA計(jì)算值C24H26N2O5(422.4):C68.25；H6.16；N6.64實(shí)測值C67.96；H6.17；N6.4步驟3:N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸在50ml單頸燒瓶中，將2.84g(6.77mmol)N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸甲酯溶解于20ml甲醇中。加入1.71g(41mmol)單水氫氧化鋰并將此混合物室溫下攪拌2.5小時(shí)。用半飽和硫酸氫鉀水溶液將此溶液酸化至pH=5并用乙酸乙酯萃取兩次。用氯化鈉飽和溶液將有機(jī)相洗滌一次，用硫酸鎂干燥并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑。在油泵真空條件下干燥，得到2.71g(98％)深棕色粉末。M.p.:118-119°TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=0.14Ms:(EsI+)計(jì)算值408.2；實(shí)測值409.3步驟4:N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺將2g(4.9mmol)N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸和1.45g(4.9mmol)N-ε-Boc-賴氨酸甲酯鹽酸鹽溶解于20ml二氯甲烷中，并在30分鐘內(nèi)室溫下將此溶液滴加于2.51g(9.8mmol)2-氯-1-甲基吡啶碘和2.04g(14.7mmol)三乙胺的30ml二氯甲烷懸浮液中。然后將此混合物回流8小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，用200ml乙酸乙酯回收此殘余物并用水洗滌有機(jī)相一次，用半飽和硫酸氫鉀洗滌兩次，用2N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次，并用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑并通過在400g硅膠色譜上用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫純化此殘余物。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，在油泵真空條件下干燥，得到2.21g(69％)棕色粉末。M.p.:78-80°TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=0.51FT-IR(KBr):3504w(N-H)；2975w(C-H)；1749s,1690s(CONH,C=O)；1490s(C-H)；1407m(C-H)；1170s(C-O)；757m(C=C).1H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.2-1.8(m,24,18Boc,3CH2-lys)；2.8-3.0(m,3,ε-CH2-lys,H-C3-ind)；3.0-3.2(m,1,H-C3-ind)；3.4-3.5(m,1,H-C3-ind)；3.5-3.7(m,3,COOMe)；4.2-4.3(m,1,H-C3-ind)；4.7-4.9(m,1,H-C2-ind)；5.0-5.5(m,1,H-C2-ind)；6.7-6.8(m,1,Ar-ind)；6.85-7.3(m,6,Ar-ind)；7.7-8.9(m,3,NHCO,Ar-ind,α-NHCO).Ms:(ESI+)計(jì)算值650.2；實(shí)測值651.4HPLC:4 峰在24.82分鐘，29.9分鐘，30.3分鐘和31.2分鐘實(shí)施例4N-[二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-NH2)賴氨酸甲酯]酰胺的合成在25ml單頸燒瓶中，將500mg(0.812mmol)N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺溶解于2.8mml二氯甲烷中，加入15當(dāng)量(0.0122mol,0.93ml)三氟乙酸，并將此混合物室溫下攪拌2小時(shí)。向此溶液中加入10ml乙醚，抽濾出形成的白色沉淀并用乙醚洗滌6次。在油泵真空條件下干燥后，得到513mg(98％)白色粉末。M.p.:164-165°TLC(RP):CH3CN/H20 1∶1,1％TFA；Rf=0.61FT-IR(KBr):3435w(N-H)；3049w(C-H)；1740w(C=O)；1676s(CONH)；1420m(C-H)；1205m,1135s(C-O).1H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.2-2.05(m,10,3CH2-lys+4-pip)；2.7-3.15(m,5,ε-CH2-lys+H-C3-ind+2-pip)；3.55-3.7(m,3,COOMe)；4.1-4.25(m,1,C3-ind)；5.15(d,1,H-C2-ind)；6.95(m,1,Ar-ind)；7.1-7.3(m,2,Ar-ind)；7.7-7.85(s,3,NH3+)；8.1(d,1,Ar-ind)；8.7-8.9(m,2,NH2+).Ms:(EsI+)計(jì)算值418.2；實(shí)測值417.3和209.1為m/2HPLC:2 峰在11.54和12.65分鐘實(shí)施例5N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺的合成將2.5g(6.13mmol)N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸和2.03g(6.13mmol)N-ε-Z-賴氨酸甲酯鹽酸鹽溶解于20ml二氯甲烷中，并在30分鐘內(nèi)室溫下將此溶液滴加于2.35g(9.2mmol)2-氯-1-甲基吡啶碘和2.13ml(15mmol)三乙胺的30ml二氯甲烷懸浮液中。然后將此混合物回流8小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，用200ml乙酸乙酯回收此殘余物并用水洗滌有機(jī)相一次，用半飽和硫酸氫鉀洗滌兩次，用2N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次，并用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并通過在400g硅膠色譜上用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫純化此殘余物。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，在油泵真空條件下干燥，得到2.57g(61％)棕色粉末。M.p.:68°TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=0.48FT-IR(KBr):3329w(N-H)；2935w(C-H)；1701s(C=O)；1485s(C-H)；1260m(C-O)；1149m,1020m(C-O)；753m(C=C).Ms:(EsI+)計(jì)算值684.5；實(shí)測值685.4EA計(jì)算值C38H44N4O8(684.5):C66.67；H6.43；N8.19實(shí)測值C64.15；H6.5；N7.88實(shí)施例61-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺的合成將6.36g(0.0242mol)1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸和8.0g(24.2mmol)N-ε-Z-賴氨酸甲酯鹽酸鹽溶解于70ml二氯甲烷中，并在30分鐘內(nèi)室溫下將此溶液滴加于9.27g(36.3mmol)2-氯-1-甲基吡啶碘和8.41ml(60.4mmol)三乙胺的60ml二氯甲烷懸浮液中。然后將此混合物回流8小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，用200ml乙酸乙酯回收此殘余物并用水洗滌有機(jī)相一次，用半飽和硫酸氫鉀洗滌兩次，用2N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次，并用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并通過在400g硅膠色譜上用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫純化此殘余物。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，在油泵真空條件下干燥，得到10.91g(84％)淡棕色粉末。TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=0.741H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.3-1.75(m,15,9Boc+6CH2-lys)；2.8-3.0(m,3,CH2-lys+H-C3-ind)；3.4-3.55(m,1,H-C3′-ind)；3.65(s,3,COOCH3)；4.2(m,1,Hα-C-lys)；4.8(m,1,H-C2-ind)；5.0(s,2,CH2-Z)；6.85(m,1,Ar-ind)；7.15(t,2,Ar-ind)；7.2-7.4(m,5,Ph-Z)；7.7(m,1,NHCO)；8.4(m,1,Ar-ind).EA計(jì)算值C29H37N307(539.4):C64.56；H6.86；N7.79實(shí)測值C64.61；H7.06；N7.67Ms:(EsI+)計(jì)算值539.4；實(shí)測值540.3實(shí)施例71-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(S-苯丙胺酸甲酯)酰胺的合成步驟1:S-苯丙胺酸甲酯鹽酸鹽在100ml三頸燒瓶中，在30分鐘內(nèi)室溫下將5.3ml(72.6mmol)亞硫酰氯滴加于8.0g(48.4mmol)S-苯丙胺酸的50ml甲醇懸浮液中。將此混合物回流3小時(shí)。先用噴水真空泵并然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，蒸除甲醇和過量的亞硫酰氯。將此殘余物溶解于50ml甲醇中并加入800ml乙醚。形成白色沉淀。用過濾板抽濾掉溶劑，得到7.93g(75％)白色粉末。1H NMR(DMSO-d6,270MHz):3.0-3.2(m,2,CH2)；3.65(5,3,COOMe)；4.35(m,1,Hα-C)；7.2-7.4(m,5,Ph)；8.5-8.7(m,3,NH3+).
步驟2:N-[1-Boc-二氫吲哚-2(R,S)-羰基]-(S-苯丙胺酸甲酯)酰胺將3.5g(16.2mmol)S-苯丙胺酸甲酯鹽酸鹽和4.27g(16.2mmol)1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸溶解于70ml二氯甲烷中，并在30分鐘內(nèi)將此溶液室溫下滴加于6.21g(24.3mmol)2-氯-1-甲基吡啶碘和5.32ml(40.5mmol)三乙胺的60ml二氯甲烷懸浮液中。然后將此混合物回流8小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，用200ml乙酸乙酯回收此殘余物，并用水洗滌有機(jī)相一次，用半飽和硫酸氫鉀洗滌兩次，用2N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次，并用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并通過在400g硅膠色譜上用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫純化此殘余物。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，在油泵真空條件下干燥，得到7.71g(62％)淡黃色粉末。TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=0.871H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.2-1.5(m,9,Boc)；2.3-2.45(m,0.5,H-C3-ind)；2.8-3.5(m,3.5,C3-ind+CH2)；3.65(d,3,COOMe)；4.4-4.65(m,1,C2-ind)；4.8(m,1,Hα-C)；6.8-7.3(m,8,5Ph+3Ar-ind)；7.7(m,1,Ar-ind)；8.55(m,1,NH).EA計(jì)算值C24H28N2O5(424.3):C67.92；H6.6；N6.6實(shí)測值C67.94；H6.79；N6.59Ms:(EsI+):cal計(jì)算值424.4；實(shí)測值425.2
實(shí)施例8N-[N’-(4-甲氧基苯基乙?；?哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸甲酯的合成(此化合物可作為制備通式Ⅰ酰胺的前體)室溫下將1.2g(3.0mmol)N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸甲酯溶于30ml二氯甲烷中，加入1.14g(10mmol)TFA并將此反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空濃縮，用100ml乙酸乙酯回收，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌3次并用飽和氯化鈉水溶液洗滌1次。用硫酸鎂干燥有機(jī)相并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑。將此殘余物溶解于30ml二氯甲烷中，加入1.01g(10mmol)三乙胺和366mg(3.0mmol)4-二甲基氨基吡啶，將此混合物冷卻至0℃并加入606mg(3.3mmol)4-甲氧基苯基乙酰氯的10ml二氯甲烷溶液。攪拌24小時(shí)后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空將反應(yīng)混合物的溶劑除去，并用100ml乙酸乙酯回收此殘余物，用1N鹽酸洗滌1次，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌2次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌1次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中將溶劑真空蒸除后，在80g閃蒸硅膠柱上用正己烷/乙酸乙酯作洗脫劑將此殘余物色譜純化。收集適當(dāng)?shù)酿s份，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并在油泵真空條件下干燥，得到1.1g白色泡沫狀產(chǎn)物。TLC:AcOEt；Rf=0.221H NMR(DMSO-d6,270MHz):1.35-1.85(m,13,Boc,4-pip)；2.7-2.8(m,4,H-C(3),H-C(5))；3.25(m,1,H-C(3)-ind)；3.65(m,1,H-C(3′)-ind)；3.8(s,3,COOCH3)；3.95(m,1,H-C(4)-pip)；5.45(d,1,H-C(2)-ind)；7.05(m,1,Ar)；7.1-7.3(m,2,Ar)；8.1(d,1,Ar).EA計(jì)算值C25H28N2O5(436.51):C68.70；H6.47；N6.42實(shí)測值C69.97；H6.98；N5.27實(shí)施例9N-(4-甲氧基苯基乙?；?二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸甲酯的合成(該化合物作為制備通式Ⅰ酰胺的前體)
將存在于25ml干燥的二氯甲烷中的1g(R,S)-二氫吲哚-2-羧酸甲酯鹽酸鹽和1.14g(9.36mmol)DMAP置于100ml帶有隔擋的單頸燒瓶中。在0℃，攪拌下，在30分鐘內(nèi)用加液器滴加1.04g(856μl)的4-甲氧基苯乙酰氯。然后將此混合物室溫下攪拌3小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并通過閃蒸色譜在150g閃式硅膠上用二氯甲烷/甲醇(9∶1)洗脫純化此殘余物。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，得到830mg(59％)淡灰色粉末。TLC:CH2Cl2；Rf=0.311H NMR(DMSO-d6,270MHz):3.15-3.3(m,1,H-C(3)-ind)；3.5-3.7(m,3,CH2+H-C(3′)-ind)；5.0(m,1,H-C(2)-ind)；6.85(m,2,Ar-ind)；7.0(m,1,Ar-ind)；7.1-7.3(m,4,phenyl)；8.25(d,1,Ar-ind).EA計(jì)算值C19H19N1O4(325.3):C70.15；H5.85；N4.31實(shí)測值C70.34； H5.7 8；N4.22Ms:(ESI+)計(jì)算值325.3；實(shí)測值326.1實(shí)施例10N-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸4-哌啶基酰胺的合成在0℃，將存在于30ml二氯甲烷中的2.63(10.0mmol)1-Boc-(R,S)-二氫吲哚-2-羧酸、1.13g(12.0mmol)4-氨基吡啶和1.47g(12.0mmol)4-二甲基氨基吡啶加入到100ml單頸燒瓶中，并加入2.48g(12.0mmol)二環(huán)己基碳二亞胺的5ml二氯甲烷溶液。48小時(shí)后用硅藻土板將此反應(yīng)混合物過濾，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑并用100ml乙酸乙酯回收此殘余物，并用10％鹽酸水溶液洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空蒸除溶劑后，在50g閃蒸硅膠柱上用正己烷/乙酸乙酯洗脫將此殘余物色譜純化。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，用乙酸乙酯/乙醚將此殘余物重結(jié)晶，得到2.4g產(chǎn)物。TLC:CH2Cl2/MeOH=95/5；Rf=0.191H NMR(CDCl3,270MHz):1.58(s,9H,Boc)；3.43-3.54(m,2H,H-C(3)-ind)；5.0(m,1,H-C2-ind)；7.02(m,1H,H-C(7)-ind)；7.17-7.26(m,3H,H-C(6),H-C(5),H-C(4)-ind)；7.45(q,2H,H-C(3),H-C(5)-py)；7.57(NH)；8.47(q,2H,H-C(2),H-C(6)-py).EA計(jì)算值C19H21N3O3(339.40):C67.84；H6.29；N12.49實(shí)測值C67.75；H6.33；N12.53實(shí)施例11N-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(哌嗪子基乙酰嗎啉)酰胺的合成在0℃，將存在于30ml二氯甲烷中的2.63(10.0mmol)1-Boc-(R,S)-二氫吲哚-2-羧酸、2.56g(12.0mmol)哌嗪子基乙酰嗎啉和1.479(12.0mmol)4-二甲基氨基吡啶加入到100ml單頸燒瓶中，并加入2.489(12.0mmol)二環(huán)己基碳二亞胺的5ml二氯甲烷溶液。48小時(shí)后用硅藻土板將此反應(yīng)混合物過濾，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并用100ml乙酸乙酯回收此殘余物并用10％鹽酸水溶液洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空蒸除溶劑后，在50g閃蒸硅膠柱上用正己烷/乙酸乙酯洗脫，將此殘余物色譜純化。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑后，用乙酸乙酯/乙醚將此殘余物重結(jié)晶，得到2.4g產(chǎn)物。TLC:CH2Cl2/MeOH=95/5；Rf=0.191H NMR(CDCl3,270MHz):1.48-1.58(d,9H,Boc)；3.21(s,2H,H-C(2″))； 3.42-3.69(m,16H)；5.1(br,2H,H-C(3)-ind)；6.48(q,1H)；6.90(q,1H)；7.14(m,1H)；8.22(q,1H).EA計(jì)算值C24H34N4O5(458.56):C62.86；H7.47；N12.21實(shí)測值C63.21；H7.48；N13.61實(shí)施例12N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(哌嗪子基乙酰嗎啉)酰胺的合成室溫下將458.56mg(1.0mmol)1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(哌嗪子基乙酰嗎啉)酰胺溶解于20ml二氯甲烷中，加入1.14g(10mmol)TFA并將此反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空濃縮，用乙酸乙酯10ml回收并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次。用硫酸鎂干燥有機(jī)相并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑。將殘余物溶解于10ml二氯甲烷中，加入505mg(5mmol)三乙胺、320.7mg(1.4mmol)4-Boc-哌啶羧酸和357.7mg(1.4mmol)2-氯-1-甲基吡啶鹽酸鹽，并將此反應(yīng)混合物回流8小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，用100ml乙酸乙酯回收此殘余物，用水洗滌兩次，用10％鹽酸洗滌一次，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次，用硫酸鎂干燥。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空蒸除溶劑后，殘余物用乙酸乙酯/異丙醇重結(jié)晶。EA計(jì)算值C25H28N2O5(557.70):C62.46；H7.77；N12.56實(shí)測值C61.56；H7.62；N11.96實(shí)施例13N-[N’-(4-甲氧基苯基乙酰基)哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺的合成步驟1:N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺將3.74g(10mmol)N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸和3.31g(10mmol)N-ε-Z-賴氨酸甲酯鹽酸鹽溶解于20ml二氯甲烷中，并在30分鐘內(nèi)室溫下將此溶液滴加于5.11g(20mmol)2-氯-1-甲基吡啶碘和4.04g(40mmol)三乙胺的30ml二氯甲烷懸浮液中。然后將此混合物回流8小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，用200ml乙酸乙酯回收此殘余物并用水洗滌有機(jī)相一次，用半飽和硫酸氫鉀洗滌兩次，用2N氫氧化鈉水溶液洗滌兩次，并用飽和氯化鈉溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并通過在400g硅膠色譜上用二氯甲烷/甲醇(95∶5)洗脫純化此殘余物。合并適當(dāng)?shù)酿s份并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑。在油泵真空條件下干燥后，得到4.2g淡棕色粉末。TLC:CH2Cl2/MeOH 95∶5；Rf=0.41EA計(jì)算值C32H48N4O8(650.78):C64.60；H7.13；N8.61實(shí)測值C64.73；H7.01；N8.64步驟2:N-[N’-(4-甲氧基苯基乙?；?哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺室溫下將3.25g(5.0mmol)N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺溶解于50ml二氯甲烷中，加入2.28g(20mmol)TFA并將此混合物攪拌4小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空濃縮，用100ml乙酸乙酯回收并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌三次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次。用硫酸鎂干燥有機(jī)相，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空蒸除溶劑。將此殘余物溶解于30ml二氯甲烷中，加入1.01g(10mmol)三乙胺和366mg(3.0mmol)4-二甲基氨基吡啶，將此混合物冷卻至0℃并加入1.01g(5.5mmol)4-甲氧基苯乙酰氯在10ml二氯甲烷中的溶液。攪拌24小時(shí)后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去反應(yīng)混合物中的溶劑，并用100ml乙酸乙酯回收此殘余物，用1N氯化氫水溶液洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空蒸除溶劑后，將此殘余物在80g閃蒸硅膠柱上用正己烷/乙酸乙酯洗脫，進(jìn)行色譜純化。收集適當(dāng)?shù)酿s份，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空除去溶劑，并在油泵真空條件下干燥此殘余物，得到白色泡沫形式的產(chǎn)物。EA計(jì)算值C39H46N4O8×H2O(716.84):C65.35；H6.75；N7.82實(shí)測值C65.47；H6.89；N7.81令人驚奇的是，發(fā)現(xiàn)上述實(shí)施例1-7和10-13的化合物是強(qiáng)親免蛋白調(diào)節(jié)劑，它們適用于載體固定的形式，并能由流體、特別是體液中結(jié)合有病理活性的親免蛋白。
為了尋找式Ⅰ的強(qiáng)結(jié)合的Cyp B或FKBP配體，將固定化的配體與細(xì)胞均漿一起進(jìn)行SDS-PAGE(

圖1)。對(duì)親免蛋白有特異性親和力的載體固定的配體與親免蛋白特異性結(jié)合，其親和力比CsA或FK506高。式Ⅰ表示的載體固定配體對(duì)親免蛋白的高親和力可通過SDS-PAGE表明。SDS-PAGE的解釋a)細(xì)胞均漿b)與載體固定的通式Ⅰ配體平衡后的細(xì)胞洗脫物c)在25℃，用SDS從上述b)的基質(zhì)中分離親環(huán)蛋白Bd)SDS對(duì)照e)在95℃，用SDS從上述b)的基質(zhì)中分離親環(huán)蛋白Bf)蛋白標(biāo)準(zhǔn)物(Sigma:12kDa,18kDa,25kDa,45kDa,66kDa)g)用固定化的CsA平衡后的細(xì)胞洗脫物h)在25℃，用SDS從上述g)的CsA基質(zhì)中分離親環(huán)蛋白Bi)在95℃，用SDS從上述g)的CsA基質(zhì)中分離親環(huán)蛋白Bk)SDS對(duì)照令人驚奇的是，本發(fā)明的式(Ⅰ)化合物出色地結(jié)合親免蛋白并抑制其肽基-脯氨酸順/反異構(gòu)酶(PPlase)的活性。在起初的篩選(1μmol/l物質(zhì))中，用PPlase試驗(yàn)測定人親環(huán)蛋白B的抑制。此PPlase活性是通過常用的酶試驗(yàn)測定的，見G.Fisher,H.Bang,C.Mech，生物藥物生物化學(xué)，43,1101-1111；G.Fisher,H.Bang,A.Schellenberger,生物化學(xué)生物物理學(xué)，791,87-97,1984；D.H.Rich等，藥物化學(xué)雜志，38,4164-4170,1995。
本發(fā)明的通式Ⅰ的化合物與10nmol的Cyp B在4℃預(yù)孵育15分鐘。加入糜蛋白酶和HEPES緩沖液后，用試驗(yàn)肽Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-Nan進(jìn)行酶反應(yīng)。然后監(jiān)測并評(píng)價(jià)在390nm的消光變化。通過分光法測定的消光變化由兩個(gè)反應(yīng)產(chǎn)生a)反式肽的快速糜蛋白酶裂解；和b)親環(huán)蛋白催化的非酶順/反異構(gòu)反應(yīng)。本發(fā)明的通式Ⅰ化合物的相應(yīng)的PPlase活性見表1表1
<p>由CsA-Cyp B-鈣調(diào)磷酸酶(Ca2+-依賴性磷酸酶)形成的大分子似乎造成了CsA的已知免疫抑制作用。為了研究與由CsA-Cyp B或CsA-CypB-鈣調(diào)磷酸酶形成的大分子的相互作用，將本發(fā)明的通式Ⅰ的化合物與含3H-CsA(100nmol)的人T細(xì)胞系的細(xì)胞均漿一起孵育。在Superose12上凝膠過濾后，測定洗脫餾份的放射性并與未處理的對(duì)照組比較。通過本發(fā)明的通式Ⅰ的化合物由大分子CsA-Cyp B和CsA-Cyp B-鈣調(diào)磷酸酶中對(duì)3H-CsA進(jìn)行的相應(yīng)置換的結(jié)果見表2。表2
<p>IL-2繁殖試驗(yàn)中，將3H-胸苷摻入T細(xì)胞中，該細(xì)胞用OKT-3(人抗-CD3抗體)刺激，具體方法如下在微量滴定板中，向每孔150μl培養(yǎng)基中接種100000個(gè)T細(xì)胞，通過加入OKT-3(1μg/ml)刺激并與本發(fā)明的通式Ⅰ的各一個(gè)化合物分別孵育45小時(shí)。孵育后，向每孔中加入10μl3H-胸苷溶液(0.5μCi)。然后，在37℃、5％二氧化碳?xì)夥障路跤?小時(shí)。收獲細(xì)胞后，在B計(jì)數(shù)器中測定放射性。本發(fā)明的通式Ⅰ的化合物對(duì)CD3誘導(dǎo)的IL-2繁殖的抑制見表3。表3
在動(dòng)物試驗(yàn)中，同CsA、FK506和雷怕霉素一樣，本發(fā)明的通式Ⅰ的化合物表現(xiàn)出阻斷細(xì)胞因子如IL-2、IL-4和IL-5的作用，這些細(xì)胞因子引起患者的過敏性炎癥反應(yīng)。
為了測定本發(fā)明的通式Ⅰ的化合物對(duì)細(xì)胞分裂的抑制，在本發(fā)明的通式Ⅰ化合物的存在下，將50000個(gè)人類腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)，加入10μl黃色四唑鎓鹽溶液(MTT)并在37℃、二氧化碳?xì)夥障略倥囵B(yǎng)4小時(shí)。通過分光光度法在570nm分析所得的紫色。向每個(gè)中加入100μl SDS溶液后，通過分光光度法測定顏色。本發(fā)明的通式Ⅰ的化合物無一般的細(xì)胞毒性。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ的特異性親免蛋白配體
基團(tuán)R1、R2、R3、R4、X、Y、A、B和D定義如下R1是氫原子、C1-C12烷基或C2-C6烷氧基，其中烷基是直鏈或支鏈的，并可被一個(gè)含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的單環(huán)或二環(huán)雜芳基取代，該雜芳基如嗎啉、哌嗪、哌啶、吲哚、吲唑、2,3-二氮雜萘、噻吩、呋喃或咪唑基，上述烷基也可被苯環(huán)單取代或多取代，該苯環(huán)本身可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；⑷谆?、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基取代一次或多次，而上述取代基可被芐基、苯甲?；蛞阴；〈?，R1還可以是下列氨基酸甲酯的胺部分組氨酸、亮氨酸、纈氨酸、絲氨酸(Bzl)、蘇氨酸、2-哌啶酸、哌啶-4-羧酸，哌啶-3-羧酸、ε-NH2-賴氨酸、ε-Z-NH-賴氨酸、ε-(2Cl-Z)-NH-賴氨酸、2-吡啶基丙氨酸、苯丙胺酸、色氨酸、谷氨酸、精氨酸(Tos)、天冬氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、二氫吲哚-2-羧酸、八氫吲哚羧酸、四氫異喹啉羧酸、5-氨基戊酸和8-氨基辛酸，R2是氫原子、C1-C12烷基或C2-C6烷氧基，其中烷基是直鏈或支鏈的，并可被含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的單環(huán)或二環(huán)雜芳基取代，該雜芳基如嗎啉、哌嗪、哌啶、吲哚、吲唑、2,3-二氮雜萘、噻吩、呋喃或咪唑基，上述烷基也可被苯環(huán)單取代或多取代，該苯環(huán)本身可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；⑷谆?、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基取代一次或多次，而上述取代基本身又可被芐基、苯甲?；蛞阴；〈?，R3是氫原子，丁氧羰基，羧芐基，單、二或三環(huán)羰基芳基或含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的雜芳基，其中該芳基或雜芳基本身又可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；?、三氟甲基、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基取代一次或多次，而上述取代基本身又可被芐基、苯甲?；蛞阴；〈?，R3也可以是羧基-C1-C6烷基，其中烷基是直鏈或支鏈的，并可被含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的單環(huán)或二環(huán)雜芳基取代，該雜芳基如嗎啉、哌嗪、哌啶、吲哚、吲唑、2,3-二氮雜萘、噻吩、呋喃或咪唑基，上述烷基也可被苯環(huán)單取代或多取代，該苯環(huán)本身可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；⑷谆?、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基取代一次或多次，而上述取代基本身又可被芐基、苯甲酰基或乙?；〈琑3還可以是下列氨基酸的羧基組氨酸、亮氨酸、纈氨酸、絲氨酸(Bzl)、蘇氨酸、2-哌啶酸、哌啶-4-羧酸，哌啶-3-羧酸、ε-NH2-賴氨酸、ε-Z-NH-賴氨酸、ε-(2Cl-Z)-NH-賴氨酸、2-吡啶基丙氨酸、苯丙胺酸、色氨酸、谷氨酸、精氨酸(Tos)、天冬氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、二氫吲哚-2-羧酸、八氫吲哚羧酸、四氫異喹啉羧酸、5-氨基戊酸和8-氨基辛酸，其中氨基酸的N末端可被丁氧羰基、羧芐基取代或被單、二或三環(huán)芳基羧酸或含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的雜芳基羧酸的羧基取代，例如甲氧基苯乙酸、萘基乙酸、吡啶基乙酸、喹唑啉基乙酸、吲唑基乙酸、吲哚基乙醛酸、苯基乙醛酸、吲哚基乙醛酸和2-氨基-噻唑基-4-乙醛酸，或者被羧基-(C1-C12)烷基、羧基環(huán)戊烷、羧基環(huán)己烷或苯甲?；〈撊〈杀畸u原子、甲氧基、氨基、氨基甲?；⑷谆?、羧基或被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基單-或多次取代，R4是H、F或OR5，R5是氫原子、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷基或羧基-C1-C6烷基，其中烷基是直鏈或支鏈的，并可被單、二或三環(huán)羰基芳基或含1-4個(gè)雜原子、優(yōu)選N、S或O的單環(huán)或二環(huán)羰基雜芳基取代，其中芳基或雜芳基本身可被鹵原子、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、羧基、被直鏈或支鏈C1-C6烷醇酯化的羧基、氨基甲?；?、三氟甲基、羥基、甲氧基、乙氧基、芐氧基或氨基取代一次或多次，而上述氨基本身又可被芐基、苯甲?；蛞阴；〈?，A是芳族、非芳族的、是含1-2個(gè)雜原子的芳族雜環(huán)，該雜原子優(yōu)選N、S或O，或者是含1-2個(gè)雜原子的非芳族雜環(huán)，該雜原子優(yōu)選N,S或O，B是CH2，D是CH，B-D是CH=C，X是O、S或H2，Y是C或單鍵。
2．N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺。
3．N-[哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(ε-NH2)賴氨酸甲酯]酰胺。
4．N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Boc)賴氨酸甲酯]酰胺。
5．N-[二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(ε-NH2)賴氨酸甲酯]酰胺。
6．N-[1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺。
7．1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺。
8．1-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(S-苯丙胺酸甲酯)酰胺。
9．N-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸4-哌啶基酰胺。
10．N-Boc-二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(哌嗪子基乙酰嗎啉)酰胺。
11．N-[1-Boc-哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸(哌嗪子基乙酰嗎啉)酰胺。
12．N-[N’-(4-甲氧基苯基乙酰基)哌啶基-4-羰基]二氫吲哚-2-(R,S)-羧酸[S-(N-ε-Z)賴氨酸甲酯]酰胺。
13．權(quán)利要求1至12的任一項(xiàng)所述化合物在制備藥物中的用途。
14．權(quán)利要求13所述的化合物的用途，用于制備一種具有抗哮喘和免疫抑制作用的藥物，或用于與已知抗哮喘藥或免疫抑制劑制成合劑。
15．載體固定的劑型，其中含有權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)所述的化合物，該劑型用于結(jié)合流體、特別是體液中有病理活性的親免蛋白。
16．一種藥物，其中含至少一種權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)所述化合物，還含有常規(guī)賦形劑和/或稀釋劑或輔劑。
17．一種制備藥物的方法，其特征是，將權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)所述的化合物與常規(guī)藥物賦形劑或稀釋劑或者其它輔劑一起制成藥物制劑，或?qū)⑵滢D(zhuǎn)化為可用于治療的形式。
18．權(quán)利要求1至14、16和17所述的藥物，其特征是，片劑或包衣片劑、膠囊、溶液劑或安瓿、栓劑、硬膏或可用于吸入的粉劑。
19．權(quán)利要求1所述的新的特異性親免蛋白配體的制備方法，其中R1、R2、R3、R4、X、Y、A、B和D定義如權(quán)利要求1，其特征是吲哚衍生物Ⅱ
其中R4,A、B、D、X和Y定義如上，與鏈長為C1-C12的式Ⅲ烷醇反應(yīng)AlOHⅢ得到吲哚衍生物烷基酯Ⅳ
其中R4、A、B、D、X和Y定義如上，該酯Ⅳ與化合物Ⅴ反應(yīng)
其中R3、X和Y定義如上，得到化合物Ⅵ
其中R3、R4、A、B、D、X和Y定義如上，然后將此化合物Ⅵ皂化，得到化合物Ⅶ
其中R3、R4、A、B、D、X和Y定義如上，化合物Ⅶ然后與化合物Ⅷ反應(yīng)
其中R1和R2定義如上，得到式Ⅰ化合物。
全文摘要
通式Ⅰ的新的特異性親免蛋白配體具有抗哮喘和免疫抑制作用并適于制藥。
文檔編號(hào)C07D401/06GK1214690SQ97193256
公開日1999年4月21日 申請(qǐng)日期1997年4月4日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月25日
發(fā)明者D·雷徹特, B·庫茨徹, H·班, K·布魯恩, G·奎恩克特, H·G·斯凱保 申請(qǐng)人:Asta藥物股份公司