專利名稱：葛根素眼用凝膠及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于各種類型青光眼、視網(wǎng)膜動(靜)脈阻塞等慢性眼病治療的葛根素眼用凝膠，還涉及該凝膠的制備方法。
現(xiàn)有技術(shù)葛根素(puerarin)為常用中藥野葛pueraria labata(willd.)Ohwi(P.thunbergeriana S.et Z.)Benth.P.pseudohirsuta Tang et Wang和甘葛藤(粉葛)pueraria homsonii Benth根中分離出來的有效成份，其化學(xué)名8-β-D葡萄吡喃糖-4′，7-二羥基異黃酮[眼科新進(jìn)展1999，19(2)73～77]。該品為白色針狀結(jié)晶，能溶于水，但溶解度低(6.24g/L)，水溶液為無色或微黃色[眼科新進(jìn)展2000，20(6)454～455]。葛根素已被批準(zhǔn)為西藥新藥，劑型有注射液和滴眼液，葛根素原料和注射液已被中國藥典2000年版增補本收載。
青光眼是以眼壓持續(xù)地或間斷地增高、視野缺損、視乳頭凹陷和萎縮及視力下降為主要特征的一種疾病。我國人群中發(fā)病率約為1％～2％，在全盲人中，約有10％盲人系青光眼所致。葛根素具有β受體阻滯作用，能降低眼內(nèi)壓[Intraocular Pressure，IOP]，并且能改善眼底微循環(huán)[中華眼科雜志1999，29(6)336]。10g/L葛根素滴眼液(南京藥物研究所眼科藥理研究中心研制)對慢性眼高壓模型試驗表明具降眼壓作用、對急性眼高壓模型試驗表明具抑制眼壓升高作用[中國藥理學(xué)通報1998，14(6)569～570]。1％葛根素滴眼液用于治療慢性單純性青光眼，眼壓開始下降最快的是點眼藥后15min，最慢是4h，眼壓下降維持時間最短3h，最長10h[中西醫(yī)結(jié)合眼科雜志1992，10(2)65～67]。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的任務(wù)是提供一種葛根素眼用凝膠，該凝膠是由葛根素滴眼液通過改變劑型而得，在適應(yīng)癥與原滴眼液劑型完全一致的基礎(chǔ)上，葛根素眼用凝膠具有比滴眼液起效快、易于涂布、無刺激性、藥物在眼內(nèi)停留時間長、藥物作用時間長和療效好等優(yōu)點，特別適合青光眼、視網(wǎng)膜動、靜脈阻塞這類需長期治療的患者使用。
為實現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取了如下技術(shù)措施本發(fā)明葛根素眼用凝膠是以葛根素為主要活性成份，輔以凝膠基料、pH調(diào)節(jié)劑、注射用水，以100份凝膠重量計，葛根素為0.5～2.0，凝膠基料為0.1～1.0，以硼砂、硼酸為pH調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)pH值5.0～7.0，其余為注射用水。
本發(fā)明葛根素眼用凝膠的較佳配方為以100份凝膠重量計，葛根素為0.8～1.5，凝膠基料為0.2～0.6，以硼砂、硼酸為pH調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)pH值6.0～6.5，其余為注射用水。
本發(fā)明所述的凝膠基料為卡波姆。
本發(fā)明所述的葛根素眼用凝膠的制備方法是葛根素用注射用水溶解，然后將凝膠基料卡波姆浸泡其中12h。將pH值調(diào)節(jié)劑硼砂、硼酸加入其中，攪拌均勻，控制pH值5.0～7.0，加注射用水至全量，充分?jǐn)嚢?，?20目篩布過濾，得透明凝膠，然后熱壓滅菌，冷卻，分裝，即得到本發(fā)明凝膠。
本發(fā)明的積極效果在于青光眼，視網(wǎng)膜動、靜脈阻塞作為一種慢性病，需要長期用藥，并希望藥物在眼內(nèi)停留時間長，藥物發(fā)揮最大作用。葛根素眼用凝膠以卡波姆為凝膠基質(zhì)，卡波姆是由充滿水份的聚合物組成的一個呈鏈狀連接、粘連的骨架，該聚合物具有獨特的觸變性即其結(jié)構(gòu)在外力作用下，會被破壞，導(dǎo)致粘度降低；經(jīng)過休整，其粘結(jié)的凝膠劑骨架又會重建，凝膠體恢復(fù)至原來的粘度。葛根素眼用凝膠劑滴入眼內(nèi)后先是由于眨眼產(chǎn)生的碰撞作用，使凝膠劑表現(xiàn)出觸變性，其次是眼內(nèi)電解質(zhì)的水解作用以及溫度的影響，使凝膠劑中的水分會大量均衡地釋放，快速彌散在眼表，能同時替代二層淚膜(水液層和粘蛋白層)，延長在眼表的附著時間。因此，本發(fā)明制成的葛根素眼用凝膠具有釋藥快、無油膩性、易涂展、能與水溶液混合和能延長藥物作用時間等特點。
眼內(nèi)藥代動力學(xué)研究表明，葛根素制成的眼用凝膠，通過這一局部用藥途徑，能夠很好的被眼組織吸收，發(fā)揮藥效作用，藥物的高峰濃度出現(xiàn)在2h，眼壓下降的最低點在4h，說明藥效有滯后現(xiàn)象，藥物在房水中消除半衰期(t1/2β)為8.32h，一次滴藥后24h仍能維持較低眼壓，說明藥效作用時間長；葛根素滴眼液一天滴3次，而葛根素眼用凝膠一天只需滴一次。
同時藥效實驗也表明，葛根素眼用凝膠具有抗大鼠血栓形成的作用；明顯改變大鼠血瘀模型血液流變學(xué)參數(shù)；改善兔眼球結(jié)膜微循環(huán)；降低實驗性兔高眼壓，且葛根素眼用凝膠比滴眼液的藥效作用時間早、發(fā)揮藥效作用時間長，獲得了意想不到的效果。
本發(fā)明詳細(xì)說明視網(wǎng)膜中央動脈阻塞是視網(wǎng)膜中央動脈因血管壁硬化導(dǎo)致管壁增厚、狹窄、血栓形成或血管痙攣，栓子脫落所致的視網(wǎng)膜動脈阻塞。視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞特征為視網(wǎng)膜靜脈迂曲擴張沿受累靜脈有出血、水腫和滲出等。本病病因比較復(fù)雜，常由多種因素造成，與高血壓、動脈硬化、高血脂、血液粘滯度以及血液動力學(xué)等均有密接關(guān)系。葛根素屬異異黃酮類，具有廣泛的β-受體阻斷作用，也具改善微循環(huán)作用。葛根素有降低眼壓和改善眼微循環(huán)的雙重作用，對治療青光眼是很有利的。近期研究還發(fā)現(xiàn)葛根素有對抗谷氨酸引起神經(jīng)細(xì)胞興奮作用[中國藥理學(xué)報1998，19(4)339～342]，葛根素眼用制劑將成為一種優(yōu)良的抗青光眼藥物。
本發(fā)明涉及中藥葛根素的特定眼用凝膠劑型，活性成分為葛根素。凝膠基質(zhì)選擇卡波姆，卡波姆[藥典2000版(二部)P133]是丙烯酸與烷基蔗糖交聯(lián)而成的丙烯酸聚合物，卡波姆易溶于水，形成膠體，在pH值6～10時，加入無機或有機堿可形成透明且稠厚的凝膠，對皮膚和粘膜無毒性和刺激性，并具有釋藥快，無油膩性、易涂展，能與水溶液混合，理化性質(zhì)穩(wěn)定，是一種非常理想的藥物賦型劑。pH調(diào)節(jié)劑采用硼砂和硼酸?？ú窞槟z基質(zhì)，硼砂、硼酸與卡波姆形成透明穩(wěn)定的凝膠，并能保持pH值的穩(wěn)定，添加活性成分葛根素制成的葛根素凝膠，滴入眼瞼內(nèi)后和淚液結(jié)合接近中性，對眼無刺激，釋藥快，能夠很好的被眼組織吸收，發(fā)揮藥效作用。
本發(fā)明葛根素眼用凝膠的藥物學(xué)試驗驗證葛根素眼用凝膠活血化瘀(治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞)和降眼壓的作用，并與葛根素滴眼液比較。
葛根素眼用凝膠，含量為1％，基質(zhì)為0.2％卡波姆；葛根素滴眼液，含量為1％；1％甲基纖維素的制備取1g甲基纖維素(上海試劑二廠生產(chǎn))加煮沸的注射用林格氏液30ml中，冷卻后再加入注射用林格氏液70ml，高壓消毒滅菌備用。
儀器Schiotz眼壓計，蘇州醫(yī)療器械廠生產(chǎn)。
Wistar大鼠，體重200g～300g，雌雄各半。日本大耳白家兔，體重1.6g～2.3g，雌雄各半，均由中國醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)院實驗動物中心提供。
1、抗大鼠血栓形成的作用取上述Wistar種大鼠40只，體重200g～300g，雌雄各半隨機分為4組，每組10只即空白對照組，葛根素滴眼液(20mg/kg)和葛根素眼用凝膠大、小劑量組(20mg/kg和10mg/kg)。各組大鼠均腹腔注射巴比妥鈉0.05g/kg，氣管內(nèi)插聚乙烯管后，分離右頸總動脈及左頸外靜脈。在三段聚乙烯管的中段放入一根長5cm的4號手術(shù)線。將肝素生理鹽水溶液(50u/ml)充滿聚乙烯管腔，當(dāng)管的一端插入左頸外靜脈后，從聚乙烯管注入肝素50u/kg，夾住管壁。將管的另一端插入右頸總動脈。手術(shù)后立即股靜脈注射葛根素滴眼液、眼用凝膠或2％卡波姆。5min后開放血流，開放血流15min后中斷血流，迅速取出絲線稱重，總重量減去絲線重即得血栓濕重。按如下公式計算抑制率，結(jié)果見表1。
抑制率(％)＝(對照組血栓重-給藥組血栓重)/對照組血栓重×100％。
表1對大鼠血栓形成的影響(X±SD)
組別劑量(mg/kg)動物數(shù)(n)血栓重量(mg)抑制率(％)對照組 等容量 10 22.3±2.1 0滴眼液20 10 13.2±2.3**40.8眼用凝膠大20 10 12.3±1.8**44.8小10 10 20.2±2.6 9.4與對照組比較**P＜0.01結(jié)果表明，葛根素眼用凝膠和滴眼液均使大鼠血栓濕重量顯著減輕，與生理鹽水組比較有顯著性差異(P＜0.01)。
2、對急性血瘀模型大鼠血液變學(xué)參數(shù)的影響取Wistar種大鼠40只，雌雄各半，體重為270g～290g，隨機分為4組。每組10只。即空白對照組(腹腔注射2％卡波姆)、葛根素滴眼液組(腹腔注射葛根素滴眼液200mg/kg)和葛根素眼用凝膠大、小劑量組(腹腔注射葛根素眼用凝膠20mg/kg和10mg/kg)，連續(xù)給藥7天后各組動物均皮下注射腎上腺素注射液0.5mg/kg，共2次，2次間隔4h。在2次注射腎上腺注射液之間(前后各間隔2h)將大鼠浸入冰水內(nèi)5min。各組大鼠停食24h后。取腹主動脈血。枸緣酸鈉抗凝，取0.5ml以旋轉(zhuǎn)式粘度計測定在低切變率(1.18s-1)和高切變率(118s-1)下的全血粘度；以毛細(xì)管法測定紅細(xì)胞壓積；以加熱沉淀法測定血漿纖維蛋白原含量；取腹主動脈血以毛細(xì)管粘度計測定血漿粘度。結(jié)果見表2。
表2對大鼠血液流變學(xué)參數(shù)的影響(X±SD，n＝10)全血粘度 全血粘度 紅細(xì)胞壓 纖維蛋白劑量血漿組別(mpa.sec) (mpa.sec) 積 原mg/kg 粘度118s-11.18s-1(％) (％)空白對照等容量 4.53±0.4110.9±1.9 45.6±8.0 4.74±0.66 2.62±0.74滴眼液203.94±0.36**11.4±2.1 38.5±5.9*4.69±0.70 1.97±0.18*眼用凝膠大203.93±0.25**11.1±1.6 38.8±4.4*4.80±0.92 1.98±0.28*小104.34±0.4512.0±2.1 45.5±6.6 4.72±0.95 2.13±0.31
與生理鹽水組相比較，*P＜0.05**P＜0.01結(jié)果表明，葛根素眼用凝膠和滴眼液一樣，均可使高切變率下的全血粘度與紅細(xì)胞壓積明顯降低，也可使血漿粘度明顯降低。
3、對家兔眼球結(jié)膜微循環(huán)的影響取健康無眼疾家兔40只，體重1.6kg～2.3kg，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只。即模型對照組、葛根素滴眼液(1％)和葛根素眼用凝膠大、小劑量組(1％和0.5％)。家兔眼球結(jié)膜微循環(huán)觀察采用XS-SI微循環(huán)顯微鏡(6×8倍)，兔清醒狀態(tài)側(cè)臥位固定，冷光源照射。觀察指標(biāo)(1)流態(tài)描述，可將紅細(xì)胞流態(tài)分為四級，評分標(biāo)準(zhǔn)見表3-1。
(2)毛細(xì)血管網(wǎng)交點計算方法，觀察1mm2區(qū)域毛細(xì)血管的網(wǎng)交點變化，先觀察正常左眼球結(jié)膜微循環(huán)，然后自耳緣靜脈注入10％高分子右旋糖酐生理鹽水溶液15ml/kg造成微循環(huán)障礙(即血流緩慢，血細(xì)胞聚集)。此現(xiàn)象穩(wěn)定后，對照組滴2％卡波姆，給藥組滴眼給3滴(0.15ml)，然后觀察給藥后5min、10min、15min、20min和30min微循環(huán)變化情況，結(jié)果見表3-2和表3-3。
表3-1紅細(xì)胞流態(tài)分級分級 流態(tài) 分值O直線狀0I虛線狀1II 粒狀 2III 瘀滯狀(撇流現(xiàn)象) 3表3-2對兔眼素結(jié)膜毛細(xì)血管細(xì)胞流態(tài)分值的影響(X±SD)


與模型對照組比較*P＜0.05**P＜0.01表3-3對兔眼球結(jié)膜毛細(xì)血管網(wǎng)交點的影響(X±SD)

與模型對照組比較，*P＜0.05**P＜0.01；與滴眼液組比較ΔP＜0.05結(jié)果表明，靜脈注射高分子右旋糖酐后，微循環(huán)由下去常流態(tài)變?yōu)镮I-III級，并出現(xiàn)紅色微小血栓，血流速度顯著減慢，個別出現(xiàn)來回擺動和停流，滴眼給藥后，血流流態(tài)顯著改善。葛根素眼用凝膠大、小劑量組及滴眼液組滴眼后10min～30min，均可使血流基本恢復(fù)正常(P＜0.05，0.01)，兩藥作用相當(dāng)。但30min時，葛根素眼用凝膠作用強于滴眼液(P＜0.05)。
4、對實驗性兔高眼壓模型的影響取健康無眼疾家兔30只，體重1.6kg～2.1kg，雌雄各半，隨機分為5組，每組6只(12只眼)。即空白對照組、模型組、葛根素滴眼液(1％)和葛根素眼用凝膠大、小劑量組(1％和0.5％)，實驗前先測每只眼眼壓2次，取平均值作為正常眼壓值。然后各組家兔，在無菌條件下抽取0.2ml房水，代之注入1％甲基纖維素或平衡鹽溶液0.2ml(空白對照組)，如此造模2次，間隔2日。末次造模后次日開始滴眼給藥，每天1次，每次3滴(0.15ml)，連續(xù)給藥7天，給藥后0.5天、1天、3天、7天測各組動物眼壓值，所有數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗，結(jié)果見表4。
表4實驗性兔高眼壓模型的影響(X±SD)

與空白對照組比較ΔP＜0.01；與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01結(jié)果表明，模型組與空白對照組比較差異非常顯著(P＜0.01)，說明造模成功。葛根素眼用凝膠大、小劑量組與滴眼液組均可降低1％甲基纖維引起的兔眼高壓值(P＜0.05，0.01)。但葛根素眼用凝膠比滴眼液作用時間較早。
藥效實驗結(jié)果表明，葛根素眼用凝膠和滴眼液均有抗大鼠血栓形成的作用，均可改變急性血瘀模型大鼠血液流變學(xué)參數(shù)，明顯改善兔眼球結(jié)膜循環(huán)，說明具有活血化瘀的作用，臨床可用于治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞。結(jié)果同時表明，葛根素眼用凝膠較滴眼液作用強。葛根素眼用凝膠可明顯降低1％甲基纖維素引起的兔高眼壓，且起效時間早于滴眼液。
5、葛根素眼用凝膠急性毒性試驗葛根素眼用凝膠小鼠腹腔注射給藥的最大耐受量為0.1g/kg，相當(dāng)于臨床人用滴眼日劑量的1667倍，小鼠靜脈注射給藥的最大耐受量為0.05g/kg，相當(dāng)于臨床人用滴眼日劑量的833倍，說明本發(fā)明產(chǎn)品臨床滴眼是安全的。
6、葛根素眼用凝膠眼刺激性和過敏性試驗葛根素眼用凝膠對兔眼一次或多次給藥均未呈現(xiàn)局部刺激反應(yīng)，對破損結(jié)膜也沒有明顯刺激反應(yīng)；經(jīng)豚鼠過敏實驗，未發(fā)現(xiàn)過敏反應(yīng)。
實施例1制備本發(fā)明凝膠的配方葛根素8.0g，卡波姆2.0g，硼砂8.0g，硼酸3.0g，注射用水加至1000g。
制法取葛根素8.0g用約900ml注射用水溶解，然后將凝膠基質(zhì)卡波姆2.0g浸泡其中12h。取硼砂8.0g、硼酸3.0g加入其中，攪拌均勻，加注射用水至全量，充分?jǐn)嚢?，?20目篩布過濾，得透明凝膠，熱壓滅菌，冷卻，分裝得本發(fā)明產(chǎn)品，pH為6.3。
實施例2制備本發(fā)明凝膠的配方葛根素15.0g，卡波姆6.0g，硼砂15.0g，硼酸8.0g，注射用水加至1000g。
制法取葛根素15.0g用約900m1注射用水溶解，然后將凝膠基質(zhì)卡波姆8.0g浸泡其中12h。取硼砂15.0g、硼酸8.0g加入其中，攪拌均勻，加注射用水至全量，充分?jǐn)嚢?，?20目篩布過濾，得透明凝膠，熱壓滅菌，冷卻，分裝得本發(fā)明產(chǎn)品，pH為6.2。
實施例3制備本發(fā)明凝膠的配方葛根素10.0g，卡波姆4.0g，硼砂10.0g，硼酸5.0g，注射用水加至1000g。
制法取葛根素10.0g用約900ml注射用水溶解，然后將凝膠基質(zhì)卡波姆4.0g浸泡其中12h。取硼砂10.0g、硼酸5.0g加入其中，攪拌均勻，加注射用水至全量，充分?jǐn)嚢瑁?20目篩布過濾，得透明凝膠，熱壓滅菌，冷卻，分裝得本發(fā)明產(chǎn)品，pH值為6.3。
實施例4制備本發(fā)明凝膠的配方葛根素5.0g，卡波姆2.0g，硼砂5.0g，硼酸3.0g，注射用水加至1000g。
制法取葛根素5.0g用約900ml注射用水溶解，然后將凝膠基質(zhì)卡波姆2.0g浸泡其中12h。取硼砂5.0g、硼酸3.0g加入其中，攪拌均勻，加注射用水至全量，充分?jǐn)嚢瑁?20目篩布過濾，得透明凝膠，熱壓滅菌，冷卻，分裝得本發(fā)明產(chǎn)品，pH值為5.5。
實施例5制備本發(fā)明凝膠的配方葛根素20.0g，卡波姆10.0g，硼砂20.0g，硼酸8.0g，注射用水加至1000g。
制法取葛根素20.0g用約900ml注射用水溶解，然后將凝膠基質(zhì)卡波姆10.0g浸泡其中12h。取硼砂20.0g、硼酸8.0g加入其中，攪拌均勻，加注射用水至全量，充分?jǐn)嚢瑁?20目篩布過濾，得透明凝膠，熱壓滅菌，冷卻，分裝得本發(fā)明產(chǎn)品，pH為6.6。
權(quán)利要求
1.一種葛根素眼用凝膠，其特征是由葛根素、凝膠基料、pH調(diào)節(jié)劑、注射用水組成，以100份凝膠重量計，重量比葛根素為0.5～2.0，凝膠基料為0.1～1.0，以硼砂、硼酸為pH調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)pH值5.0～7.0，其余為注射用水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝膠，其特征是以100份凝膠重量計，重量比葛根素為0.8～1.5，凝膠基料為0.2～0.6，以硼砂、硼酸為pH調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)pH值6.0～6.5，其余為注射用水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的凝膠，其特征是所述的凝膠基料是卡波姆。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3所述的凝膠的制備方法，其特征是葛根素用注射用水溶解，然后將凝膠基料卡波姆浸泡其中12h。將pH調(diào)節(jié)劑硼砂、硼酸加入其中，攪拌均勻，控制pH值5.0～7.0，加注射用水至全量，充分?jǐn)嚢?，?20目篩布過濾，得透明凝膠，熱壓滅菌，冷卻，分裝進(jìn)庫。
全文摘要
本發(fā)明涉及葛根素眼用凝膠，用于治療各種類型的青光眼、視網(wǎng)膜動、靜脈阻塞等慢性眼病，其主要成分為葛根素，凝膠基質(zhì)為卡波姆，以硼砂、硼酸為pH值調(diào)節(jié)劑，按100份凝膠重量計，重量比葛根素為0.5～2.0，凝膠基料為0.1～1.0，調(diào)節(jié)pH值5.0～7.0，其余為注射用水。本發(fā)明制成的葛根素凝膠，比滴眼液劑的藥效作用時間早、發(fā)揮藥效作用時間長，是一種較為理想的抗青光眼用藥物。
文檔編號A61K31/7048GK1498624SQ02145139
公開日2004年5月26日 申請日期2002年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月5日
發(fā)明者韓紅路, 鄒慶宇 申請人:浙江大學(xué)藥業(yè)有限公司