專利名稱：取代的α－羥基酸天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑及其用途的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領域本發(fā)明屬于醫(yī)藥化學領域。確切地說，本發(fā)明涉及取代的α-羥基酸，它們是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)的抑制劑。本發(fā)明還涉及這些取代的α-羥基酸的用途，用于減少或治療編程性細胞死亡和/或減少白介素1-β產(chǎn)生。
背景技術(shù)：
生物體排除所不需要的細胞的過程已知為調(diào)節(jié)性細胞死亡、細胞程序死亡或編程性細胞死亡。這類細胞死亡是動物發(fā)育以及組織體內(nèi)穩(wěn)態(tài)和衰老中的一個正常方面(Glucksmann，A.，Biol.Rev.CambridgePhilos.Soc.2659-86(1951)；Glucksmann，A.，Archives de Biologie(生物學文獻)76419-437(1965)；Ellis等，Dev.(發(fā)育)112591-603(1991)；Vaux等，Cell(細胞)76777-779(1994))。編程性細胞死亡調(diào)節(jié)細胞數(shù)量，有利于形態(tài)發(fā)生，除去有害或異常的細胞，排除已經(jīng)完成其功能的細胞。另外，編程性細胞死亡響應于各種生理應激反應引起的，例如低氧或缺血(PCT申請公報WO 96/20721)。
有大量形態(tài)改變?yōu)榻?jīng)歷調(diào)節(jié)性細胞死亡的細胞所共有，包括血漿與核膜的水泡狀生長、細胞皺縮(核質(zhì)與胞質(zhì)的縮合)、細胞器的再定位與壓縮、染色質(zhì)縮合和編程性細胞死亡的細胞體的產(chǎn)生(含有細胞內(nèi)材料的膜限內(nèi)粒子)(Orrenius，S.，J.Internal Medicine(內(nèi)科學雜志)237529-536(1995))。
編程性細胞死亡是通過細胞自殺的內(nèi)源性機理而被實現(xiàn)的(Wyllie，A.H.，Cell Death in Biology and Pathology(生物學與病理學中的細胞死亡)，Bowen和Lockshin編，Chapman and Hall(1981)，pp.9-34)。作為內(nèi)部或外部信號的結(jié)果，細胞激活它的內(nèi)部編碼的自殺程序。自殺程序是通過小心調(diào)節(jié)的遺傳程序活化而被執(zhí)行的(Wylie等，Int.Rev.Cyt.68251(1980)；Ellis等，Ann.Rev.Cell Bio.(細胞生物學年評)7663(1991))。編程性細胞死亡的細胞和細胞體在溶解之前通常被相鄰細胞或巨噬細胞所識別和清除。由于這種清除機理，即使清除大量細胞也不誘發(fā)炎癥(Orrenius，S.，J Internal Medicine(內(nèi)科學雜志)237529-536(1995))。
哺乳動物的白介素-1β(IL-1β)在各種病理過程中扮演重要角色，包括慢性與急性炎癥和自體免疫疾病(Oppenheim，J.H.等，ImmunologyToday(今日免疫學)，7，45-56(1986))。IL-1β是作為與細胞締合的前體多肽(IL-1β原)而被合成的，它不能結(jié)合IL-1受體，是生物學上無活性的(Mosley等，J Biol.Chem.(生物化學雜志)2622941-2944(1987))。通過抑制前體IL-1β向成熟IL-1β的轉(zhuǎn)化，能夠抑制白介素-1的活性。白介素-1β轉(zhuǎn)化酶(ICE)是負責白介素-1β(IL-1β)活化的蛋白酶(Thornberry，N.A.等，Nature(自然)356768(1992)；Yuan，J.等，Cell(細胞)75641(1993))。ICE是底物特異性半胱氨酸蛋白酶，它裂解無活性白介素-1原，產(chǎn)生成熟IL-1。編碼ICE和CPP32的基因是哺乳動物ICE/Ced-3家族基因的成員，該家族目前包括至少十二種成員ICE、CPP32/Yama/Apopain、mICE2、ICE4、ICH1、TX/ICH-2、MCH2、MCH3、MCH4、FLICE/MACH/MCH5、ICE-LAP6和ICErelIII。該家族半胱氨酸蛋白酶的活性部位(半胱氨酸殘基)是ICE介導的編程性細胞死亡所必需的，其蛋白分解活性似乎是介導細胞死亡的關鍵(Miura等，Cell(細胞)75653-660(1993))。該基因家族最近已經(jīng)被命名為天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(Alnernri，E.S.等，Cell(細胞)，87，171(1996)，和Thornberry，N.A.等，J.Biol.Chem.(生物化學雜志)272，17907-17911(1997))，根據(jù)其已知功能分為三組。表1總結(jié)了這些已知的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶。
表1

IL-1還是參與介導廣泛生物學反應的細胞因子，包括炎癥、膿毒性休克、傷口愈合、血細胞生成和某些白血病的發(fā)展(Dinarello，C.A.，Blood(血液)771627-1652(1991)；diGiovine等，Immunology Today(今日免疫學)1113(1990))。
根據(jù)天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶的肽底物結(jié)構(gòu)，已經(jīng)制備了很多有力的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑。不過，據(jù)報道與它們的體外效力相反，在編程性細胞死亡的全細胞模型中很少有功效良好的抑制劑(IC50＜1μM)(Thornberry，N.A.Chem.Biol.(化學與生物學)5R97-103(1998))。因此存在對細胞死亡抑制劑的需求，它們在編程性細胞死亡的全細胞模型中是有效的，在編程性細胞死亡的動物模型中是活性的。這些抑制劑因而能夠作為治療劑，用于治療調(diào)節(jié)性細胞死亡和IL-1的細胞因子活性在其中扮演角色的疾病狀態(tài)。
WO 93/05071公開了下式的肽ICE抑制劑Z-Q2-Asp-Q1其中Z是N-末端保護基團；Q2是0至4個氨基酸，以便序列Q2-Asp相當于序列Ala-Tyr-Val-His-Asp的至少一部分；Q1包含負電性離去基團。
WO 96/03982公開了下式的天冬氨酸類似物是ICE抑制劑 其中R2是H或烷基；R3是離去基團，例如鹵素；R1是雜芳基-CO或氨基酸殘基。
美國專利5,585,357公開了下式的肽酮是ICE抑制劑 其中n是0-2；每個AA獨立地是L-纈氨酸或L-丙氨酸；R1選自由N-芐氧羰基等組成的組；R8、R9、R10各自獨立地是氫、低級烷基等。
Mjalli等(Bioorg.Med Chem.Lett.(生物有機化學與醫(yī)藥化學快報)，3，2689-2692，1993)報道了肽苯基烷基酮的制備，它們是可逆性ICE抑制劑，例如 Thornberry等(Biochemistry(生物化學)，33，3934-3940，1994)報道了肽酰氧基甲基酮對ICE的不可逆滅活作用 其中Ar是COPh-2，6-(CF3)2、COPh-2，6-(CH3)2、Ph-F5等。
Dolle等(J.Med.Chem.(醫(yī)藥化學雜志)37，563-564，1994)報道了P1天冬氨酸鹽類肽α-((2，6-二氯苯甲酰基)氧基)甲基酮的制備，它們是有力的時間依賴性ICE抑制劑，例如 Mjalli等(Bioorg.Med.Chem.Lett.(生物有機化學與醫(yī)藥化學快報)，4，1965-1968，1994)報道了活化酮的制備，它們是有力的可逆性ICE抑制劑 其中X是NH(CH2)2、OCO(CH2)2、S(CH2)3等。
Dolle等(J.Med.Chem.(醫(yī)藥化學雜志)37，3863-3866，1994)報道了α-((1-苯基-3-(三氟甲基)-吡唑-5-基)氧基)甲基酮的制備，它們是不可逆性ICE抑制劑，例如 Mjalli等(Bioorg.Med.Chem.Lett.(生物有機化學與醫(yī)藥化學快報)，5，1405-1408，1995)報道了N-?；?天冬氨酸酮對ICE的抑制作用 其中XR2是NH(CH2)2Ph、OCO(CH2)2環(huán)己基等。
Mjalli等(Bioorg.Med.Chem.Lett.(生物有機化學與醫(yī)藥化學快報)，5，1409-1414，1995)報道了N-?；?天冬氨酰芳氧基甲基酮對ICE的抑制作用 Dolle等(J.Med.Chem.(醫(yī)藥化學雜志)38，220-222，1995)報道了天冬氨酰α-((二苯氧膦基)氧基)甲基酮的制備，它們是不可逆性ICE抑制劑，例如 Graybill等(Bioorg.Med.Chem.Lett.(生物有機化學與醫(yī)藥化學快報)，7，41-46，1997)報道了α-((特窗酰基(tetronoyl))氧基)-與α-((四氨?；?tetramoyl))氧基)甲基酮的制備，它們是ICE抑制劑，例如 Semple等(Bioorg Med.Chem.Lett.(生物有機化學與醫(yī)藥化學快報)，8，959-964，1998)報道了擬肽氨基亞甲基酮的制備，它們是ICE抑制劑，例如 Okamoto等(Chem.Pharm.Bull.(化學與藥學通報)47，11-21，1999)報道了肽類ICE抑制劑的制備，使P1羧基轉(zhuǎn)化為酰胺，例如 EP 618223專利申請公開了作為抗炎劑的ICE抑制劑R-A1-A2-X-A3其中R是保護基團或可選被取代的芐氧基；A1是α-羥基或α-氨基酸殘基或下式原子團 其中A環(huán)可選地被羥基或C1-4烷氧基取代，Ra是CO或CS；A2是α-羥基或α-氨基酸殘基，或者A1和A2一起構(gòu)成假二肽或擬二肽殘基；X是從Asp衍生的殘基；A3是-CH2-X1-CO-Y1、-CH2-O-Y2、-CH2-S-Y3，其中X1是O或S；Y1、Y2或Y3是脂環(huán)族殘基和可選被取代的芳基。
WO 99/18781公開了下式的二肽 其中R1是N-末端保護基團；AA是任意天然或非天然的α-氨基酸、β-氨基酸、α-氨基酸或β-氨基酸的衍生物的殘基；R2是H或CH2R4，其中R4是負電性離去基團；R3是烷基或H，其條件是AA不是His、Tyr、Pro或Phe。這些二肽在細胞類系統(tǒng)中驚人地是編程性細胞死亡的有力的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑。這些化合物有體內(nèi)全身活性，在小鼠肝臟編程性細胞死亡模型中是抗Fas誘導致死性的有力抑制劑，在大鼠缺血性中風模型中具有強健的神經(jīng)保護作用。
WO 99/47154公開了下式的二肽 其中R1是N-末端保護基團；AA是非天然α-氨基酸或β-氨基酸的殘基；R2是可選被取代的烷基或H。
WO 00/01666公開了C-末端修飾的草氨酰二肽是ICE/ced-3家族半胱氨酸蛋白酶的抑制劑 其中A是天然或非天然氨基酸；B是氫原子、氘原子、烷基、環(huán)烷基等；R1是烷基、環(huán)烷基等；R2是氫、低級烷基等。
WO 00/23421公開了ICE/ced-3家族半胱氨酸蛋白酶的(取代的)?；囊种苿?其中A是天然或非天然氨基酸；B是氫原子、氘原子、烷基、環(huán)烷基等；X是CH2、C＝O、O、S、NH、C＝ONH或CH2OC＝ONH；n是0、1或2；q是1或2；R1是可選被取代的芳基和雜芳基；R2是氫、烷基等；R3是氫、烷基等。
WO 00/32620公開了γ-酮酸四肽是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3的抑制劑 其中R是H和COR1；R1是氫、烷氧基等；R2是氫、CH3等；R3是氫、CH3等；R4是氫、CH3等；R5是C1-6烷基、芳基C1-6烷基等；X2、X3和X4獨立地是H，或者X2與R2、X3與R3或X4與R4可以一起構(gòu)成飽和的單環(huán)。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及式I化合物 或其藥學上可接受的鹽或前體藥物，其中R1是可選被取代的烷基或氫；R2是氫或可選被取代的烷基；R3和R4獨立地是氫、可選被取代的芳基、可選被取代的雜環(huán)基、可選被取代的碳環(huán)、可選被取代的雜芳基、可選被取代的烷基、可選被取代的烯基或可選被取代的炔基；R5是可選被取代的烷基、可選被取代的碳環(huán)、可選被取代的雜環(huán)基、可選被取代的芳基或可選被取代的雜芳基；Z是O、S、NR8或(CR9R10)n，其中R8、R9和R10獨立地是氫、烷基或環(huán)烷基，n是0、1、2或3；X是1-2個氨基酸的肽或一條鍵。
本發(fā)明提供藥物組合物，包含減少動物編程性細胞死亡有效量的式I化合物。
本發(fā)明涉及由式I代表的化合物是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶的抑制劑這一發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物的用途，用于減少、預防或治療以編程性細胞死亡為原因或結(jié)果的疾病。本發(fā)明用途的實例包括治療或改善動物中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)、視網(wǎng)膜神經(jīng)元、心肌或免疫系統(tǒng)細胞的細胞死亡；治療或預防動物多囊性腎疾病、腎淀粉樣變性、急性腎衰、環(huán)孢菌素A誘導鼠管狀上皮細胞死亡、HIV誘導腎病或貧血/紅細胞生成；保護哺乳動物器官或組織不由正常血液供應缺乏引起細胞死亡；減少或預防供體器官或組織在被移植到宿主內(nèi)后由宿主免疫細胞的作用引起的細胞死亡；減少或預防用于體外受精程序的哺乳動物精子或卵子死亡；延長哺乳動物或酵母細胞系的壽命；治療或改善哺乳動物脫發(fā)或毛發(fā)早白；治療或改善哺乳動物由暴露于高水平輻射、熱或化學品引起的皮膚損害；治療或改善動物膿毒癥；治療或改善動物肝炎；治療或改善動物1型遺傳性酪氨酸血癥；治療或改善慢性酒精攝入誘導的動物頰黏膜細胞死亡；治療或改善植物或花卉細胞死亡；治療或改善輻射或紫外照射誘導的動物細胞死亡；治療或改善脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)中的骨髓細胞編程性細胞死亡；治療或改善急性胰腺炎中的編程性細胞死亡；治療或預防牛皮癬或炎性腸疾病中的炎性反應；治療或改善灼傷后的器官編程性細胞死亡；治療或改善腸缺血-再灌注后的小腸組織損傷；和治療、改善或預防由癌癥化學療法或放射療法導致的動物口腔黏膜炎、胃腸黏膜炎、膀胱黏膜炎、直腸炎、骨髓細胞死亡、皮膚細胞死亡或脫發(fā)。
發(fā)明的詳細說明本發(fā)明的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶與編程性細胞死亡的抑制劑是通式I化合物 或其藥學上可接受的鹽或前體藥物，其中R1是可選被取代的烷基或氫；R2是氫或可選被取代的烷基；R3和R4獨立地是氫、可選被取代的芳基、可選被取代的雜環(huán)基、可選被取代的碳環(huán)、可選被取代的雜芳基、可選被取代的烷基、可選被取代的烯基或可選被取代的炔基；R5是可選被取代的烷基、可選被取代的碳環(huán)、可選被取代的雜環(huán)基、可選被取代的芳基或可選被取代的雜芳基；Z是O、S、NR8或(CR9R10)n，其中R8、R9和R10獨立地是氫、烷基或環(huán)烷基，n是0、1、2或3；X是1-2個氨基酸的肽或一條鍵。若X是一個氨基酸，則它可以是普通20種氨基酸的任意一種，例如Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe、Trp、Met、Gly、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asp、Asn、Glu、Asn、Lys、Arg和His。若X是肽，則它可以是Asp-Glu、Asp-Ala、Asp-Phe、Val-Glu、Leu-Glu、Thr-Glu、Ile-Glu、Tyr-Glu和Trp-Glu。
關于R1，優(yōu)選的烷基是C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基、戊基和己基；取代的C1-6烷基，例如CH2OCH3和CH2OCOCH3(AM)。
優(yōu)選的R2是被負電性基團或離去基團取代的烷基，包括氟甲基、氯甲基、烷氧基甲基、芳氧基甲基、雜芳氧基甲基、烷硫基甲基、芳硫基甲基、氨基甲基、酰氧基甲基和芳酰氧基甲基?？梢猿霈F(xiàn)在R2烷基上的其他可選取代基的實例非限制性地包括可選在2、4與5位被低級烷基取代的3-吡唑氧基；3-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基；2，6-二(三氟甲基)苯甲酰氧基；2，6-二甲基苯甲酰氧基；五氟苯氧基；2，6-二氯苯甲酰氧基；2-(3-(2-咪唑基)萘基)氧基；二苯氧膦基氧基；特窗酰氧基；和四氨酰氧基。
關于R3和R4，優(yōu)選的基團是將匹配天然氨基酸或非天然氨基酸的側(cè)鏈的那些。在一種實施方式中，優(yōu)選的R3是氫，優(yōu)選的R4是直鏈或支鏈C1-6烷基，包括甲基、乙基、異丙基和異丁基；或者優(yōu)選的R4是環(huán)烷基、芳基或雜芳基；或者優(yōu)選的R4是可選被一個或多個羥基、鹵素、羧基、氨基、酰胺、酯、胍基、巰基、烷基巰基、芳基、雜環(huán)或雜芳基取代的直鏈或支鏈C1-6烷基。
關于R5，優(yōu)選的烷基是甲基、乙基、異丙基、異丁基；烷基上的優(yōu)選取代基是羥基、羧基、鹵素、C4-C7環(huán)烷基、飽和與不飽和雜環(huán)基、芳基或雜芳基；優(yōu)選的環(huán)烷基是環(huán)戊基和環(huán)己基；優(yōu)選的飽和與不飽和雜環(huán)基是哌啶基和嗎啉基；優(yōu)選的芳基是苯基和萘基；優(yōu)選的雜芳基是吡啶基、吲哚基、呋喃基和噻吩基；芳基和雜芳基上的優(yōu)選取代基是甲基、乙基、氯、氟、溴、三氟甲基、甲氧基、羥基、羧基、氰基和硝基。尤其優(yōu)選的R5是可選被取代的苯基、萘基、雜芳基或芐基。優(yōu)選的Z是O、NH或CH2。
本發(fā)明涉及由式I代表的化合物是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶的抑制劑這一發(fā)現(xiàn)。這些抑制劑減緩或阻滯各種臨床疾病和工業(yè)應用中的細胞死亡，其中發(fā)生細胞、組織或整個器官的損失。因此，本發(fā)明還涉及治療、預防或減少編程性細胞死亡在其中起作用的疾病的方法。這些疾病在下文中有更充分的描述。該方法包含在必要時將抑制編程性細胞死亡有效量的本發(fā)明抑制劑或其藥學上可接受的鹽或前體藥物對動物給藥。
可以用作天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的式I化合物的優(yōu)選實施方式是由式II代表的 或其藥學上可接受的鹽或前體藥物，其中R1-R4是如前文關于式I所定義的；R6和R7獨立地是氫、烷基、可選被取代的烷基、C4-C7環(huán)烷基、飽和或不飽和雜環(huán)基、芳基、雜芳基，或者R6和R7聯(lián)合氮一起構(gòu)成雜環(huán)。
優(yōu)選的R1是H、Me、Et、t-Bu或AM。優(yōu)選的R2是氟甲基、酰氧基甲基、芳酰氧基甲基、芳氧基甲基、雜芳氧基甲基和氨基甲基。關于R6和R7，優(yōu)選的烷基是甲基、乙基、異丙基、異丁基；烷基上的優(yōu)選取代基是羥基、羧基、氨基甲?；?、羧基酯、鹵素、C4-C7環(huán)烷基、飽和與不飽和雜環(huán)基、芳基或雜芳基；優(yōu)選的環(huán)烷基是環(huán)戊基和環(huán)己基；優(yōu)選的飽和與不飽和雜環(huán)基是哌啶基和嗎啉基；優(yōu)選的芳基是苯基和萘基；優(yōu)選的雜芳基是吡啶基、吲哚基、呋喃基和噻吩基；芳基和雜芳基上的優(yōu)選取代基是甲基、乙基、氯、氟、溴、三氟甲基、甲氧基、羥基、羧基、氰基和硝基。R6和R7與氮一起構(gòu)成的雜環(huán)優(yōu)選為哌啶、嗎啉和哌嗪。
關于R3和R4，優(yōu)選的R3是氫，優(yōu)選的R4是將匹配天然氨基酸或非天然氨基酸的側(cè)鏈的那些。具體來說，優(yōu)選的R3和R4與所連接的碳、氧和羰基一起是α-羥基酸的殘基。這些α-羥基酸包括但不限于3-甲氧基扁桃酸、4-甲氧基扁桃酸、2-甲氧基扁桃酸、4-溴扁桃酸、4-甲基扁桃酸、2，5-二甲基扁桃酸、4-甲硫基扁桃酸、4-氯扁桃酸、3-氯扁桃酸、2-氯扁桃酸、4-氟扁桃酸、2，3-二氟扁桃酸、2，4-二氟扁桃酸、2，5-二氟扁桃酸、3，5-二氟扁桃酸、3，4-二氟扁桃酸、2，6-二氟扁桃酸、2，3，5-三氟扁桃酸、2，3，6-三氟扁桃酸、3，4-亞甲二氧基扁桃酸、4-三氟甲基扁桃酸、3-硝基扁桃酸、4-硝基扁桃酸、扁桃酸、六氫扁桃酸、2-羥基-3-甲基丁酸、2-羥基-3，3-二甲基丁酸、2-羥基-4-苯基丁酸、2-羥基丁酸、2-羥基丁炔酸、2-羥基-4-(甲硫基)丁酸、2-羥基-3-丁烯酸、2-羥基-3-甲基戊酸、2-羥基-4-甲基戊酸、3-苯基乳酸、乳酸、3-氯乳酸、3-咪唑乳酸、3，3，3-三氟乳酸、3，3-二氟-3-(4-氟苯基)乳酸、3，3-二氟-3-(4-甲氧基苯基)乳酸、3，3-二氟-3-(4-氯苯基)乳酸、3，3-二氟-3-苯基乳酸、3-(1-萘氧基)乳酸、閃白酸、乙醇酸、2-羥基己酸、2-羥基戊酸、2-羥基辛酸和吲哚-3-乳酸。這些α-羥基酸在商業(yè)上可從Aldrich、Sigma、Lancaster、Maybridge等公司獲得。
示范性優(yōu)選的式I與II的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑非限制性地包括1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯，1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-芐基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-芐基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2，6-二氯苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2，5-二氯苯基)-氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2，4-二氯苯基)-氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DCB)丙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DCB)丙基N-(2，6-二氯苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2PTP)丙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2PTP)丙基N-(2，6-二氯苯基)-氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DPP)丙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DPP)丙基N-(2，6-二氯苯基)-氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(3-氟苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(4-氟苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(3，4-二氟苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(4-苯氧基苯基)氨基甲酸酯，1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯，1-(羰基-Asp-CH2F)丁基N-苯基氨基甲酸酯，1-(羰基-Asp-CH2F)-2-丙烯基N-苯基氨基甲酸酯，2-(4-咪唑基)-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯，2-苯基-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丁基N-苯基氨基甲酸酯，3-甲基--1(羰基-Asp-CH2F)丁基N-苯基氨基甲酸酯，1-苯基-1-(羰基-Asp-CH2F)甲基N-苯基氨基甲酸酯，1-(2-氯苯基)-1-(羰基-Asp-CH2F)甲基N-苯基氨基甲酸酯，1-(4-氯苯基)-1-(羰基-Asp-CH2F)甲基N-苯基氨基甲酸酯，1-環(huán)己基-1-(羰基-Asp-CH2F)甲基N-苯基氨基甲酸酯，2-氯-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯，2，2，2-三氟-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯，和Z-纈氨酸2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基酯。其中Z是芐氧羰基，DPP是二苯氧膦基氧基，PTP是1-苯基-3-(三氟甲基)吡唑-5-基氧基，DCB是2，6-二氯苯甲酰氧基。
有用的芳基是C6-14芳基，尤其是C6-10芳基。典型的C6-14芳基包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、薁基、聯(lián)苯、亞聯(lián)苯基和芴基。
有用的環(huán)烷基是C3-8環(huán)烷基。典型的環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。
有用的飽和或部分飽和碳環(huán)基團是如上所定義的環(huán)烷基，以及環(huán)烯基，例如環(huán)戊烯基、環(huán)庚烯基和環(huán)辛烯基。
有用的鹵代或鹵素基團包括氟、氯、溴和碘。
有用的烷基包括直鏈與支鏈C1-10烷基，更優(yōu)選為C1-6烷基。典型的C1-10烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、3-戊基、己基和辛基。還涵蓋取代在本發(fā)明化合物苯環(huán)上兩個鄰接位置上的1，3-亞丙基。
有用的烯基包括直鏈與支鏈C2-10烯基，更優(yōu)選為C2-6烯基。典型的C2-10烯基包括乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基和辛烯基。
有用的炔基包括直鏈與支鏈C2-10炔基，更優(yōu)選為C2-6炔基。典型的C2-10炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基和辛炔基。
有用的芳烷基包括被任意上述C6-14芳基取代的任意上述C1-10烷基。有用的基團包括芐基、苯乙基和萘甲基。
有用的鹵代烷基包括被一個或多個氟、氯、溴或碘原子取代的C1-10烷基，例如氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1，1-二氟乙基、氯甲基、氯氟甲基和三氯甲基。
有用的烷氧基包括被上述C1-10烷基之一取代的氧。
有用的烷硫基包括被上述C1-10烷基之一取代的硫。還包括這類烷硫基的亞砜和砜。
有用的酰氨基是與氨基氮連接的任意C1-6?；?烷?；?，例如乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、戊酰氨基、己酰氨基以及芳基取代的C2-6取代?；?。
有用的酰氧基是與氧基(-O-)連接的任意C1-6酰基(烷?；?，例如甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基、己酰氧基等。
有用的芳酰氧基包括取代在上述任意酰氧基上的上述任意芳基，例如2，6-二氯苯甲酰氧基、2，6-二氟苯甲酰氧基和2，6-二(三氟甲基)苯甲酰氧基。
有用的氨基包括-NH2、-NHR11和-NR11R12，其中的R11和R12是如上所定義的C1-10烷基或環(huán)烷基。
有用的飽和或部分飽和雜環(huán)基包括四氫呋喃基、吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、奎寧環(huán)基、嗎啉基、異苯并二氫吡喃基、苯并二氫吡喃基、吡唑烷基、吡唑啉基、特窗?；退陌滨；?。
有用的雜芳基包括下列任意一種噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、苯并吡喃基、呫噸基、吩噁噻基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、啶基、菲咯啉基、吩嗪基、異噻唑基、吩噻嗪基、異噁唑基、呋咱基、吩噁嗪基、1，4-二氫喹喔啉-2，3-二酮、7-氨基異香豆素、吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮、1，2-苯并異噁唑-3-基、苯并咪唑基、2-羥吲哚基和2-氧代苯并咪唑基。若雜芳基在環(huán)中含有氮原子，則該氮原子可以是N-氧化物的形式，例如吡啶基N-氧化物、吡嗪基N-氧化物、嘧啶基N-氧化物等。
可選的取代基包括一個或多個烷基；鹵代；鹵代烷基；環(huán)烷基；芳基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代、鹵代烷基或雜芳基取代；芳氧基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代、鹵代烷基或雜芳基取代；芳烷基；雜芳基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代；雜芳氧基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代；烷氧基；烷硫基；芳硫基；氨基；酰氧基；芳酰氧基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代；二苯氧膦基氧基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代或鹵代烷基取代；雜環(huán)基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代；雜環(huán)烷氧基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代；部分不飽和的雜環(huán)烷基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代；或部分不飽和的雜環(huán)烷氧基，可選地被一個或多個低級烷基、鹵代烷基和芳基取代。
某些本發(fā)明化合物可以存在立體異構(gòu)體，包括旋光異構(gòu)體。本發(fā)明包括所有立體異構(gòu)體和這類立體異構(gòu)體的外消旋混合物以及個別的對映異構(gòu)體，它們可以按照本領域普通技術(shù)人員熟知的方法加以分離。
藥學上可接受的加成鹽實例包括無機與有機酸加成鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、扁桃酸鹽和草酸鹽；和無機與有機堿加成鹽，堿例如氫氧化鈉和三(羥甲基)氨基甲烷(TRIS，tromethane)。
前體藥物的實例包括式I-II化合物，其中R1是烷基或取代的烷基，例如CH2OCH3和CH2OCOCH3(AM酯)。
本發(fā)明還涉及治療動物對天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制有應答的障礙的方法。特別優(yōu)選用于本發(fā)明方法的化合物的實施方式是由如前文所定義的式I-II所代表的。
本發(fā)明的化合物可以利用本領域技術(shù)人員已知的方法加以制備。具體來說，具有氟甲基(CH2F)的式I-II化合物可以如流程1中的示范性反應所述加以制備。羥基酸與異氰酸苯基酯的反應得到氨基甲酸酯保護的酸。該酸與中間體羥基胺的偶聯(lián)(Revesz等，Tetrahedron Lett.(四面體快報)359693-9696(1994))生成酰胺。按照Revesz等(TetrahedronLett.(四面體快報)359693-9696(1994))，羥基被Dess-Martin試劑氧化得到酮，為非對映體混合物?？梢允褂闷渌趸瘎┐鍰ess-Martin試劑，包括氯鉻酸吡啶鎓(PCC)。TFA催化t-Bu酯的裂解，生成酸。
流程1 具有二氯苯甲酰氧基(DCB)的式I-II化合物可以如流程2中的示范性反應所述加以制備。溴甲基酮與二氯苯甲酸的反應得到酯。通過氫化作用除去Z保護基團，得到胺，與酸偶聯(lián)生成酰胺。用TFA裂解t-Bu酯，得到酸。
流程2 類似地，具有1-苯基-3-(三氟甲基)吡唑-5-基氧基(PTP)和二苯氧膦基氧基(DPP)的式I-II化合物可以分別如流程3和4中的示范性反應所述加以制備。
流程3
流程4 本發(fā)明的一個重要方面是式I-II化合物是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶的抑制劑這一發(fā)現(xiàn)。因此，這些抑制劑預期減緩或阻滯各種臨床疾病中的細胞死亡，其中發(fā)生細胞、組織或整個器官的損失。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑可以用于減少或預防神經(jīng)系統(tǒng)(腦、脊髓和外周神經(jīng)系統(tǒng))在各種缺血和興奮毒性條件下的細胞死亡，包括但不限于由中風引起的局灶性缺血和由心搏停止引起的普遍性缺血，以及脊髓損傷(Emery等，J.Neurosurgery(神經(jīng)外科學雜志)89911-920(1998)和Springer等，Nat.Med.(天然醫(yī)藥)5943-946(1999))。一種特定的用途是治療缺氧后果，這可能發(fā)生在高危分娩嬰兒出生或淹溺期間。細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防由創(chuàng)傷性損傷(例如頭部創(chuàng)傷)引起的神經(jīng)系統(tǒng)細胞死亡、病毒感染或輻射誘導的神經(jīng)細胞死亡(例如是癌癥放射療法的副作用)。細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防一定范圍神經(jīng)變性障礙中的細胞死亡，包括但不限于阿爾茨海默氏病(Mattson等，Brain Res.(腦研究)807167-176(1998))、亨廷頓氏病、帕金森氏病、蛋白感染病毒(prion)病、多發(fā)性硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化和脊髓延髓萎縮。在大鼠短暫的局灶性腦缺血模型中可以試驗本發(fā)明細胞死亡抑制劑的體內(nèi)神經(jīng)保護性質(zhì)(Xue等，Stroke(中風)21166(1990))。
細胞死亡抑制劑還可以用于治療或改善由急性細菌性腦膜炎引起的中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)中的細胞死亡。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑可以用于減少或預防任何潛在導致心肌死亡的疾病中的細胞死亡(Black等，J.Mol.Cel.Card.(分子與細胞心臟病學雜志)30733-742(1998)和Maulik等，F(xiàn)ree Radic.Biol.Med.(自由基與生物醫(yī)學)24869-875(1998))。這包括由心肌缺血與再灌注引起的心肌梗塞、充血性心力衰竭和心肌病。一種特定的應用是減少或預防發(fā)生在心臟的某些病毒感染中的心肌細胞死亡。
利用Rodriguez等所述“小鼠肝臟編程性細胞死亡”模型(Rodriguez等，J.Exp.Med.(實驗醫(yī)學雜志)1842067-2072(1996))可以試驗本發(fā)明細胞死亡抑制劑的體內(nèi)活性。該模型中，將小鼠用抗Fas抗體靜脈內(nèi)(IV)處理，該抗體誘導肝臟和其他器官中的大量編程性細胞死亡，引起全身性器官衰竭和死亡。該模型可用于間接試驗本發(fā)明細胞死亡抑制劑的全身生物利用度以及它們的體內(nèi)抗編程性細胞死亡性質(zhì)。本發(fā)明的細胞死亡抑制劑因此可以用于減少或預防肝細胞的編程性細胞死亡(Jones等，Hepatology(肝臟病學)271632-1642(1998))，例如膿毒癥(Jaeschke等，J.Immunol.(免疫學雜志)1603480-3486(1998))和1型遺傳性酪氨酸血癥(HT1)(Kubo等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(美國國家科學院院報)959552-9557(1998))。本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于治療肝炎(Suzuki，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.(實驗生物學與實驗醫(yī)學會會志)217450-454(1998))。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑可以用于減少或預防視網(wǎng)膜神經(jīng)元的細胞死亡(Kermer等，J Neurosci.(神經(jīng)科學雜志)184656-4662(1998)和Miller等，Am.J.Vet.Res.(美國獸醫(yī)研究雜志)59149-152(1998))，這可能發(fā)生在增加眼內(nèi)壓力的障礙(例如青光眼)或與衰老過程有關的視網(wǎng)膜障礙(例如與衰老有關的黃斑變性)中。抑制劑還可以用于治療視網(wǎng)膜的遺傳變性性障礙，例如色素性視網(wǎng)膜炎。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防腎臟中的細胞死亡。這包括腎淀粉樣變性(Hiraoka等，Nippon Jinzo Gakkai Shi(日本腎臟學會志)40276-83(1998))、急性腎衰(Lieberthal等.SeminNephrol.18505-518(1998))、由環(huán)孢菌素A誘導的鼠管狀上皮細胞死亡(Ortiz等，Kidney International Supp.(國際腎臟學增刊)68S25 S29(1998))和HIV誘發(fā)的腎病(Conaldi等，J Clin.Invest.(臨床檢查雜志)1022041-2049(1998))。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防由慢性酒精攝入引起的頰黏膜細胞死亡(Slomiany等，Biochem.Mol.Biol.Int.(國際生物化學與分子生物學)451199-1209(1998))。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防急性胰腺炎中的編程性細胞死亡(Iovanna，Int.J.Pancreatol.(國際胰腺病學雜志)2077-84(1996)和Sata等，Pancreas(胰腺)1976-82(1999))。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防植物中的細胞死亡(Richberg等，Curr.Opin.Plant Biol.(植物生物學最新觀點)1480-485(1998))，例如由病原體引起的植物細胞死亡(Pozo等，Curr.Biol.(最新生物學)81129-1132(1998)和Greenberg等，Cell(細胞)，77551-563(1994))。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防由輻射和紫外照射引起的細胞死亡(Sheikh等，Oncogene(致癌基因)172555-2563(1998))。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)中的骨髓細胞編程性細胞死亡(Mundle等，Am.J.Hematol.(美國血液學雜志)6036-47(1999))。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防在灼傷后早期的器官編程性細胞死亡，例如胸腺和脾(Fukuzuka等，Ann.Surg(外科學紀事)229851-858(1999))。
本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于減少或預防免疫系統(tǒng)細胞的早熟性死亡，特別可用于治療免疫缺陷性障礙，例如獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)、嚴重聯(lián)合免疫缺陷綜合征(SCIDS)和有關疾病。細胞死亡抑制劑還可以用于治療輻射誘發(fā)的免疫抑制。
細胞死亡抑制劑還可以用于治療或改善自體免疫障礙，包括紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎和I型糖尿病。
人體器官與組織移植是器官衰竭的普通治療措施。不過，在移植過程期間，供體器官或組織面臨細胞死亡的危險，因為它在植入宿主之前缺乏正常的血液供應。這種缺血狀態(tài)可以用細胞死亡抑制劑處理，將其輸注到供體器官或組織內(nèi)，或者直接將細胞死亡抑制劑加入到器官/組織貯存培養(yǎng)基中，也就是說，在將器官或組織移植到哺乳動物體內(nèi)之前，將器官或組織浸泡在含有化合物的貯存培養(yǎng)基中。細胞死亡抑制劑還可以對動物給藥，以減少或預防供體器官/組織被移植后的細胞死亡，以保護它不受宿主免疫細胞的作用，后者通過觸發(fā)編程性細胞死亡殺死它們的靶。這類器官和組織的實例非限制性地包括腎、肝、心、胰腺、肺、角膜、手和胚胎黑質(zhì)組織。
細胞死亡抑制劑的細胞保護作用還可以用于預防用于體外受精程序的人或動物精子和卵子死亡。可以在收獲過程期間使用這些抑制劑，還可以在貯存培養(yǎng)基中包括它們。
哺乳動物細胞系、昆蟲細胞和酵母細胞常用于產(chǎn)生大量工業(yè)或醫(yī)藥用途的重組蛋白質(zhì)(例如抗體、酶或激素)。有些細胞系的壽命受到生長條件、被表達重組分子的本性(有些是有毒的)和其他未知因素的限制。通過在生長培養(yǎng)基中包括濃度為1-100μM的細胞死亡抑制劑，能夠延長工業(yè)細胞系的壽命。
支配毛發(fā)生長和脫落的因素多半是未知的。不過有一些證據(jù)表明，編程性細胞死亡至少部分可以引起毛囊退化(稱為毛發(fā)生長退化期)。因此，預期通過對動物毛發(fā)或毛囊給藥，本發(fā)明的細胞死亡抑制劑可以用于治療由各種條件引起的脫發(fā)，包括但不限于男性型禿發(fā)、輻射或化學療法誘發(fā)的脫發(fā)和由情緒緊張引起的脫發(fā)。還有證據(jù)表明，編程性細胞死亡可能在毛發(fā)褪色中起作用。因此，預期本發(fā)明的細胞死亡抑制劑還可以用于治療或預防毛發(fā)早白的情況。
皮膚上皮細胞在暴露于高水平輻射、熱或化學品之后可能發(fā)生死亡。預期本發(fā)明的細胞死亡抑制劑可以用于治療、減少或預防這種類型的皮膚損害。在一種特定的應用中，細胞死亡抑制劑作為局部制劑、例如軟膏劑的一部分，可以涂抹于動物皮膚上，治療急性曝曬過度，預防皮膚起皰和脫皮。
Goldberg等(Nature Genetics(自然遺傳學)13442-449(1996))最近報道了亨廷頓氏病(HD)基因的蛋白產(chǎn)物huntingtin能夠被CPP32而不是ICE裂解。作為HD基礎的突變是HD基因5’末端CAG三核苷酸的擴展。重復超過36次的三核苷酸擴展與HD的臨床表現(xiàn)有關。CAG擴展促進huntingtin被CPP32裂解，因而與CPP32在HD編程性細胞死亡中的角色聯(lián)系起來。具有CPP32抑制活性的本發(fā)明化合物可用于阻滯CPP32誘導的編程性細胞死亡，因而可用于預防和治療HD和其他以三核苷酸重復擴展為特征的障礙，例如肌強直性營養(yǎng)不良、脆弱性X精神發(fā)育遲緩、脊髓延髓肌萎縮、I型脊髓小腦性共濟失調(diào)和Dentato-Rubropallidoluysian萎縮。
通過在必要時對動物給藥，細胞死亡抑制劑還可以用于治療或改善腸缺血-再灌注后的小腸組織損傷。參見Farber，A.等，J.Vascular Surg.(血管外科學雜志)30752-760(1999)。
本發(fā)明涉及治療、改善或預防由癌癥化學療法或放射療法導致的動物口腔黏膜炎、胃腸黏膜炎、膀胱黏膜炎、直腸炎、骨髓細胞死亡、皮膚細胞死亡和脫發(fā)的方法，包含將有效量的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑對有此需要的動物給藥。
在用化學治療劑和/或輻射治療動物以殺死癌細胞時，所不需要的副作用是迅速分化中的非癌細胞的編程性細胞死亡。這類非癌細胞包括胃腸道、皮膚、毛發(fā)和骨髓的細胞。按照本發(fā)明，將天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑對這類非癌細胞給藥，以預防這類細胞的編程性細胞死亡。在優(yōu)選的實施方式中，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑是局部給藥的，例如對胃腸道、口腔、皮膚或頭皮，以預防胃腸、口腔、皮膚或毛發(fā)細胞的編程性細胞死亡，但不妨礙癌細胞的死亡。因而，在一種實例中，通過天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的局部給藥，有可能用化學療法或放射療法治療腦癌，并保護外部皮膚、毛發(fā)細胞、胃腸道和骨髓。在口腔黏膜炎的情況下，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的用藥形式例如可以是口腔洗液或漱口液、凝膠或口用緩釋錠劑，以預防由化學治療劑或輻射誘導的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶活化和編程性細胞死亡。在胃腸黏膜炎的情況下，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的用藥形式可以是這樣的，它不是被全身吸收的，或者覆蓋胃腸道的表面，或者是胃腸黏膜炎治療用栓劑。在直腸炎的情況下，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑在用藥時可以作為灌腸劑或栓劑的一部分。在膀胱黏膜炎的情況下，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑可以通過膀胱導管用藥。關于預防放射或化學療法誘發(fā)的脫發(fā)，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑在用于頭皮時可以是潤絲、發(fā)膠、香波或毛發(fā)護理劑的形式。重要的是，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑用藥可以在化學治療劑或輻射給藥之前，因而預防或減少化學治療劑或輻射對正常細胞的損害作用發(fā)生。
本發(fā)明范圍內(nèi)的組合物包括所有這樣的組合物，其中本發(fā)明化合物的含量對實現(xiàn)其預期目的來說是有效的。盡管個體的需要各不相同，不過確定每種組分的最佳有效量范圍屬于本領域技術(shù)范圍。通常，化合物可以對哺乳動物、例如人口服給藥的劑量為0.0025至50mg/kg體重的受治療編程性細胞死亡介導障礙的哺乳動物每天，或其藥學上可接受的鹽的等價量，例如神經(jīng)元細胞死亡、心臟病、視網(wǎng)膜障礙、多囊性腎疾病、免疫系統(tǒng)障礙和膿毒癥。優(yōu)選地，口服給藥約0.01至約10mg/kg，以治療或預防這類障礙。關于肌內(nèi)注射，劑量一般是口服劑量的大約一半。例如，關于治療或預防神經(jīng)元細胞死亡，適合的肌內(nèi)劑量將是約0.0025至約25mg/kg，最優(yōu)選地從約0.01至約5mg/kg。
單位口服劑量可以包含約0.01至約50mg、優(yōu)選為約0.1至約10mg化合物。單位劑量可以每日給藥一次或多次，分一片或多片，每片含有約0.1至約10、適宜為約0.25至50mg化合物或其溶劑化物。
在局部制劑中，化合物的濃度可以是約0.01至100mg每克載體。
除了將化合物作為生化學品給藥以外，本發(fā)明的化合物可以作為藥物制劑的一部分給藥，制劑含有適合的藥學上可接受的載體，包含賦形劑和助劑，有利于化合物加工成能夠藥用的制劑。優(yōu)選地，制劑、特別是可以口服或局部給藥并且可以用于優(yōu)選的給藥類型的那些制劑，例如片劑、錠劑、緩釋錠劑與膠囊劑、漱口劑與口腔洗液、凝膠、液體懸液、潤絲、發(fā)膠、香波，和可以直腸給藥的制劑，例如栓劑，以及適合于通過注射、局部或口服給藥的溶液，含有約0.01至99％、優(yōu)選地從約0.25至75％活性化合物，以及賦形劑。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括本發(fā)明化合物的無毒性藥學上可接受的鹽。將特定的本發(fā)明細胞死亡抑制劑的溶液與藥學上可接受的無毒性酸的溶液混合，生成酸加成鹽，酸例如鹽酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、乙酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸、草酸等。將特定的本發(fā)明細胞死亡抑制劑的溶液與藥學上可接受的無毒性堿的溶液混合，生成堿鹽，堿例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化膽堿、碳酸鈉Tris等。
本發(fā)明的藥物組合物可以對任何可以體驗到本發(fā)明化合物有益效果的動物給藥。這類動物中最重要的是哺乳動物，例如人，不過本發(fā)明不會局限于此。
天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑及其藥物組合物可以通過任何達到預期目的的方式給藥。例如，給藥可以通過胃腸外、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、透皮、頰、鞘內(nèi)、顱內(nèi)、鼻內(nèi)或局部途徑。作為替代選擇或者與此同時，給藥可以通過口服途徑。給藥劑量將取決于受者的年齡、健康和體重、同時治療的種類(如果有的話)、治療的頻率和所需作用的本性。一般來說，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑是獨立于化學治療劑而對組織局部給藥的，保護該組織不發(fā)生編程性細胞死亡。例如，順鉑可以通過i.v.注射給藥，以治療癌癥，例如腦、肺、乳腺、肝、腎、胰腺、卵巢、前列腺的癌癥，而天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑可以局部給藥，以治療、改善或預防口腔或胃腸道中的編程性細胞死亡，例如用于治療口腔黏膜炎的口腔洗液；用于治療骨髓細胞死亡的可IV注射的水溶液；適合于覆蓋胃腸表面的口用制劑；或用于治療胃腸黏膜炎、包括直腸炎的灌腸劑或栓劑。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑還可以通過膀胱導管用藥，用于治療、改善或預防膀胱黏膜炎。作為替代選擇或者與此同時，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑可以對皮膚和/或頭皮局部用藥，以治療、改善或預防毛發(fā)與皮膚細胞中的編程性細胞死亡。在進一步的實施方式中，化學治療劑或輻射可以局部施用，以治療局部化癌癥，例如腦、肺、乳腺、肝、腎、胰腺、卵巢、前列腺的癌癥，而天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑可以全身給藥，例如通過i.v.注射，以治療、改善或預防胃腸道細胞、口腔上皮細胞、骨髓細胞、皮膚細胞和毛發(fā)細胞中的編程性細胞死亡。例如在腦癌治療中的口腔黏膜炎的情況下，不會穿過血-腦屏障的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑例如可以通過i.v.注射全身用藥，然后照射腦腫瘤。這將保護口腔黏膜不受輻射的有害作用，但是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑不會保護腦腫瘤不受輻射的治療作用。重要的是，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑可以在施用輻射之前用藥，因而預防輻射對正常黏膜細胞的損害作用發(fā)生。
本發(fā)明的藥物制劑是按照本身已知的方式生產(chǎn)的，例如借助于常規(guī)的混合、造粒、成型、溶解或冷凍干燥過程。因而，口用藥物制劑可以這樣獲得，混合活性化合物與固體賦形劑，可選地研磨所得混合物，加工顆?；旌衔?，如果需要或必要的話加入適合的助劑后，得到片劑或錠劑核心。
適合的賦形劑確切地是填充劑，例如糖類，如乳糖或蔗糖，甘露糖醇或山梨糖醇，纖維素制劑和/或磷酸鈣，如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘合劑，例如淀粉糊，如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉，明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要的話，可以加入崩解劑，例如上述淀粉，和羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或藻酸或其鹽，例如藻酸鈉。助劑尤其是流動調(diào)節(jié)劑和潤滑劑，例如二氧化硅，滑石，硬脂酸或其鹽、如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇。為錠劑核心提供適合的包衣，如果需要的話是耐受胃液的。為此，可以使用濃糖溶液，它可以可選地含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液和適合的有機溶劑或溶劑混合物。為了產(chǎn)生耐受胃液的包衣，使用適合的纖維素制劑的溶液，例如乙酸纖維素鄰苯二甲酸酯或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯。可以向片劑或錠劑包表中加入染料或色素，例如用于鑒別或者為了描繪活性化合物劑量的組合。
其他口服用藥物制劑包括由明膠制成的推入配合式膠囊劑以及由明膠和增塑劑、例如甘油或山梨糖醇制成的軟密封膠囊劑。推入配合式膠囊劑可以含有顆粒形式的活性化合物，并可以混合有填充劑，例如乳糖，粘合劑，例如淀粉，和/或潤滑劑，例如滑石或硬脂酸鎂，和可選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊劑中，活性化合物是優(yōu)選地溶解或懸浮在適合的液體中，例如脂肪油或液體石蠟。另外，可以加入穩(wěn)定劑。
可能的直腸用藥物制劑例如包括由一種或多種活性化合物與栓劑基質(zhì)的組合組成的栓劑。適合的栓劑基質(zhì)例如是天然或合成的甘油三酯、或石蠟烴。另外，還可能使用由活性化合物與基質(zhì)的組合組成的直腸用膠囊劑?？赡艿幕|(zhì)材料例如包括液體甘油三酯、聚乙二醇或石蠟烴。
適合于胃腸外給藥的制劑包括水溶性活性化合物的水溶液和堿性溶液，例如水溶性鹽。另外，可以將活性化合物的適當?shù)挠托宰⑸鋺乙航o藥。適合的親脂性溶劑或載體包括脂肪油，例如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，或聚乙二醇-400(這些化合物可溶于PEG-400)。水性注射懸液可以含有增加懸液粘度的物質(zhì)，例如包括羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖?？蛇x地，懸液還可以含有穩(wěn)定劑。
按照本發(fā)明的一個方面，在局部和胃腸外制劑中采用本發(fā)明的化合物，用于治療皮膚損害，例如由暴露于高水平輻射(包括紫外輻射)、熱或化學品所導致的皮膚損害。
還可以在組合物中摻入另外一種或多種對皮膚具有治療作用的物質(zhì)。因而，組合物還可以含有一種或多種能夠增加皮膚環(huán)AMP水平的化合物。適合的化合物包括腺苷或核酸水解產(chǎn)物，含量為約0.1-1％，和罌粟堿，含量為約0.5-5％，二者均基于組合物的重量。還適合的是β-腎上腺素能激動劑，例如異丙腎上腺素，含量為約0.1-2％，或環(huán)AMP，含量為約0.1-1％，二者仍基于組合物的重量?？梢該饺氡景l(fā)明組合物中的其他適合類型的另外的活性成分包括任何已知對皮膚具有有益效果的化合物。這類化合物包括類視黃醇，例如維生素A，含量為約0.003-0.3重量％，和苯并二氫吡喃醇，例如維生素E或其衍生物，含量為約0.1-10重量％，二者均基于組合物的重量。另外，可以在美容組合物中摻入抗炎劑和角膜成形劑。典型的抗炎劑是皮質(zhì)甾類，例如氫化可的松或其乙酸鹽，含量為約0.25-5重量％，或皮質(zhì)甾類，例如地塞米松，含量為約0.025-0.5重量％，二者均基于組合物的重量。典型的角膜成形劑是煤焦油，含量為約0.1-20重量％，或蒽林，含量為約0.05-2重量％，二者均基于組合物的重量。
通過適當載體的選擇，本發(fā)明的局部組合物優(yōu)選地配制成油劑、霜劑、洗劑、軟膏劑等。適合的載體包括植物或礦物油、白礦脂(白軟石蠟)、支鏈脂肪或油、動物脂肪和大分子醇(大于C12)。優(yōu)選的載體是活性成分可溶于其中的那些。還可以包括乳化劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑和抗氧化劑，如果需要的話，以及賦予顏色或香味的試劑。另外，在這些局部制劑中可以采用透皮滲入增強劑。這類增強劑的實例可以在美國專利No.3,989,816和4,444,762中找到。
霜劑優(yōu)選地從礦物油、自乳化蜂蠟與水的混合物配制而成，在該混合物中混合有溶解在少量油、例如杏仁油中的活性成分。這樣一種霜劑的典型實例包括約40份水、約20份蜂蠟、約40份礦物油和約1份杏仁油。
軟膏劑可以這樣配制，將活性成分在植物油、例如杏仁油中的溶液與熱的軟石蠟混合，使混合物冷卻。這樣一種軟膏劑的典型實例包括約30重量％杏仁油和約70重量％白軟石蠟。
洗劑適宜這樣制備，將活性成分溶于適合的大分子醇，例如丙二醇或聚乙二醇。
另外，這些組合物可以包括其他藥物、生長因子、傷口密封劑、載體等，它們是為本領域技術(shù)人員已知的或顯而易見的。本發(fā)明的組合物對已經(jīng)患有皮膚損害、例如灼傷的溫血動物、例如人的給藥量足以使愈合過程比宿主未被治療時更快。可以根據(jù)需要調(diào)整長期階段的維持劑量。關于獸醫(yī)用途，可以根據(jù)需要給以更高水平的劑量。
在動物患有毛發(fā)生長減少的情況下，本發(fā)明組合物的給藥量足以增加毛發(fā)生長的速率。對該用途有效的量將取決于毛發(fā)生長減少的程度和所治療患者的一般健康狀態(tài)?？梢愿鶕?jù)需要調(diào)整長期階段的維持劑量。關于獸醫(yī)用途，可以根據(jù)需要給以更高水平的劑量。
當化合物對植物給藥時，例如可以噴灑于植物的葉和/或莖和/或花。所噴灑的化合物可以是顆粒形式或者溶解或懸浮在適當?shù)妮d體中，例如水或油-水乳劑?；衔镞€可以與植物的土壤混合。在這種實施方式中，化合物被植物的根吸收。
在優(yōu)選的實施方式中，將天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑配制成口腔洗液的一部分，用于治療、改善或預防口腔黏膜炎。這類口腔洗液是天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑的水溶液，其中還可以含有醇、甘油、合成甜味劑、表面活性劑、矯味劑和著色劑。它們還可以含有抗感染劑，例如?？颂驵ず吐然L蠟基吡啶鎓?？谇幌匆哼€可以含有局部麻醉劑(例如苯佐卡因、可卡因、鹽酸達克羅寧、利多卡因、鹽酸丙美卡因或鹽酸丁卡因)，例如減輕放射或化學療法誘發(fā)的瘡痛?？谇幌匆嚎梢跃哂兴嵝曰驂A性的pH。參見Remington’s PharmaceuticalSciences(Remington氏藥物科學)，A.R.Gennaro，ed.，MackPublishing Company(1990)，pp.1045，1046，1526和1965。
在另一種優(yōu)選的實施方式中，將天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑配制成能夠覆蓋胃腸表面的口服制劑，用于治療、改善或預防胃腸黏膜炎。胃腸黏膜炎的實例包括食管黏膜炎、胃黏膜炎和腸黏膜炎。這類制劑可以包含抗胃酸劑，例如碳酸鋁、氫氧化鋁凝膠、堿式硝酸鉍、堿式水楊酸鉍、碳酸鈣、碳酸二羥鋁鈉、鎂加鋁、碳酸鎂、氫氧化鎂、氧化鎂、碳酸氫鈉、鉍乳、氨基乙酸二羥鋁、磷酸鎂、三硅酸鎂和它們的混合物。其他添加劑非限制性地包括H2-受體拮抗劑、助消化劑、止吐劑、吸附劑和雜劑(miscellaneous agent)。參見Remington’sPharmaceutical Sciences(Remington氏藥物科學)，A.R.Gennaro，ed.，Mack Publishing Company(1990)，pp.774-778。
諸如順鉑等化學治療劑和放射療法經(jīng)常誘發(fā)患者發(fā)生早期與晚期嘔吐。因而，在一種實施方式中，將止吐劑與天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑一起給藥，以避免嘔吐，保持天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑與胃腸道的接觸。這類止吐劑的實例非限制性地包括阻滯多巴胺能嘔吐受體的化合物，例如甲氧氯普胺和曲美芐胺，和大麻素類。甲氧氯普胺可以在化學療法/放射療法/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑療法之前和/或期間口服給藥，以預防早期嘔吐反應，然后按照美國專利No.5,760,086和4,536,386進行鼻內(nèi)給藥，以預防遲發(fā)的嘔吐。在化學療法/放射療法后的期間，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑和止吐劑可以共同給藥，以治療、改善或預防胃腸黏膜炎。
在進一步的實施方式中，可以將天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑配制成可IV注射的溶液，用于治療、改善或預防骨髓細胞死亡。
本發(fā)明的組合物可以對已經(jīng)患有化學療法或放射療法誘導非癌細胞死亡的溫血動物、例如人給藥，或者更優(yōu)選地在化學療法或放射療法之前或期間給藥。
下列實施例是本發(fā)明方法和組合物的例證而非限制。常見于臨床療法中的各種條件和參數(shù)的其他適合的修改和調(diào)整屬于本發(fā)明的精神和范圍，它們對本領域技術(shù)人員來說是顯而易見的。
實施例1S-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯步驟A.叔丁基5-氟-3-[S-2-(苯氨基)羰基氧基丙酰氨基]-4-羥基戊酸酯將S-(-)-2-[(苯氨基)羰基氧基]丙酸(201mg，0.96mmol)、EDCI(98mg，0.51mmol)、HOBT(74mg，0.48mmol)、DMAP(28mg，0.23mmol)與叔丁基3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸酯(101mg，0.49mmol)在THF(6ml)中的混合物在室溫下攪拌17小時。將其用1∶1己烷/EtOAc(80ml)稀釋，用水、2N HCl、水、飽和NaHCO3、鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶液，殘余物經(jīng)過快速色譜純化(己烷/EtOAc 3/2)，得到標題化合物，為白色固體(80mg，0.21mmol，43％)。1H NMR(CDCl3)7.40-7.05(m，6H)，5.18(q，J＝6.9，1H)，4.54-3.95(m，4H)，2.75-2.51(m，2H)，1.51(d，J＝6.9，3H)，1.42(m，9H).
步驟B.1-(羰基-Asp(O-Bu-t)-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯將periodinane(0.49g，1.16mmol)與叔丁基5-氟-3-[S-2-(苯氨基)羰基氧基丙酰氨基]-4-羥基戊酸酯(80mg，0.21mmol)在二氯甲烷(6ml)中的混合物回流20小時。冷卻至室溫后，加入含有0.5g Na2S2O3的飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)。將所得混合物攪拌1小時，用1∶1己烷/EtOAc(80ml)萃取。有機相用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空中濃縮，得到標題化合物，為吸濕性白色固體(69mg，0.18mmol，85％)。
1H NMR(CDCl3)7.40-7.25(m，5H)，7.13-7.00(m，2H)，5.30-4.87(m，4H)，3.05-2.71(m，2H)，1.56-1.53(m，3H)，1.42(s，9H).
步驟C.1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯向1-(羰基-Asp(O-Bu-t)-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯(69mg，0.18mmol)的3ml CH2Cl2溶液中加入1ml TFA。將所得溶液在室溫下攪拌1小時，用EtOAc(80ml)稀釋，用飽和Na2HPO4中和至pH~5，用水和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在真空中濃縮，得到標題化合物，為白色固體(26mg，0.078mmol，44％)。1H NMR(DMSO-d6)9.86(br s，1H)，8.67(br s，1H)，7.45-7.27(m，4H)，6.99(br s，1H)，5.30-4.80(m，4H)，4.59(br s，1H)，2.72(br s，2H)，1.37(br s，3H).
實施例22-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯步驟A.2-苯氨基羰基氧基-3-甲基丁酸向2-羥基-3-甲基丁酸(0.20g，1.7mmol)的吡啶(8ml)溶液中加入異氰酸苯基酯(0.184ml)。將所得溶液在室溫下攪拌4小時，用2N HCl酸化至pH~2，用EtOAc(30ml)稀釋。分離有機相，用水和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在真空中濃縮。殘余物經(jīng)過色譜純化(3∶2己烷/EtOAc，然后是EtOAc)，得到標題化合物，為無色的油(200mg，0.85mmol，50％)。
1H NMR(DMSO-d6)9.80(s，1H)，7.47(d，J＝7.8，2H)，7.28(t，J＝7.8，2H)，7.00(t，J＝7.8，1H)，4.71(d，J＝4.2，1H)，2.17(m，1H)，1.02-0.97(m，6H).
如實施例1所述，從2-苯氨基羰基氧基-3-甲基丁酸和叔丁基3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸酯分三步制備標題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)9.79(s，1H)，8.62(s，1H)，7.47(d，J＝7.8，2H)，7.28(t，J＝7.8，2H)，7.00(t，J＝7.8，1H)，5.14-4.60(m，4H)，2.80-2.60(m，2H)，2.10(m，1H)，0.97-0.93(m，6H).
實施例3S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從S-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸和異氰酸苯基酯分四步制備標題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)9.79(s，1H)，8.60(s，1H)，7.47(d，J＝7.5，2H)，7.28(t，J＝8.2，2H)，7.00(t，J＝7.2，1H)，5.14-4.58(m，4H)，2.80-2.71(m，2H)，2.10(m，1H)，0.98-0.93(m，6H).
實施例4S-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-芐基氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從L-(+)-乳酸和異氰酸芐基酯分四步制備標題化合物。1H NMR(丙酮-d6)7.81-7.00(m，7H)，5.37-4.33(m，6H)，2.89-2.67(m，2H)，1.40(d，J＝6.9，3H).
實施例52-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-芐基氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從2-羥基-3-甲基丁酸和異氰酸芐基酯分四步制備標題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)12.48(s，1H)，8.59-8.51(m，1H)，7.90-7.80(m，1H)，7.33-7.24(m，5H)，5.34-4.99(m，2H)，4.70-4.29(m，3H)，4.18(d，J＝6.0，2H)，2.85-2.53(m，2H)，2.01(m，1H)，0.92-0.87(m，6H).
實施例6S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-芐基氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從S-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸和異氰酸芐基酯分四步制備標題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)8.46(s，1H)，7.86(t，J＝6.3，1H)，7.34-7.21(m，5H)，4.97-4.56(m，4H)，4.18(d，J＝6.0，2H)，2.68(m，2H)，2.02(m，1H)，0.91-0.86(m，6H).
實施例7S，S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯步驟A.S，S-1-羧基-2-甲基丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯向S-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸(0.2g，1.69mmol)的吡啶(10ml)溶液中加入甲基(S)-(-)-2-異氰基-3-甲基丁酸酯(0.243ml，1.69mmol)。然后將所得溶液在室溫下攪拌24小時，用2N HCl酸化至pH~2，用EtOAc(30ml)稀釋。分離有機相，用水和鹽水洗滌，在真空中濃縮。將殘余物溶于飽和NaHCO3，用4∶1己烷∶EtOAc洗滌。將含水相用2N HCl酸化至pH~2，用乙酸乙酯萃取(2×30ml)。合并有機層，用水和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在真空中濃縮，得到標題化合物，為無色的油(92mg，0.334mmol，20％)。1H NMR(DMSO-d6)6.42(d，J＝8.7，1H)，4.08-3.99(m，2H)，3.62(d，J＝0.9，3H)，2.04-1.93(m，2H)，0.94-0.83(m，12H).
步驟B.S，S-2-甲基-1-(氨基甲?；?N-(叔丁基5-氟-4-羥基戊酸酯-3-基)丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯將S，S-1-羧基-2-甲基丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯(92mg，0.335mmol)、EDCI(66mg，0.335mmol)、HOBt(45mg，0.335mmol)、DMAP(20mg，0.17mmol)與叔丁基3-氨基-5-氟-4-羥基戊酸酯(69mg，0.335mmol)在THF(10ml)中的混合物在室溫下攪拌20小時，過濾，在真空中濃縮。殘余物經(jīng)過色譜純化(3∶2己烷/EtOAc)，得到標題化合物，為無色的油(20mg，0.043mmol，13％)。
1H NMR(CDCl3)6.98-6.86(m，1H)，5.50(d，J＝9.3，1H)，5.10-5.05(m，1H)，4.90(d，J＝4.2，1H)，4.50-4.00(m，5H)，3.76(s，3H)，2.74-2.48(m，2H)，2.33-2.13(m，2H)，1.44(s，9H)，0.99-0.93(m，12H).
步驟C.S，S-2-甲基-1-(羰基-Asp(OBu-t)-CH2F)丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯將Dess-Martin試劑(0.2g，0.47mmol)與S，S-2-甲基-1-(氨基甲酰基-N-(叔丁基5-氟-4-羥基戊酸酯-3-基)丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯(20mg，0.043mmol)在二氯甲烷(10ml)中的混合物回流20小時，冷卻至室溫，加入含有0.2g Na2S2O3的25ml飽和碳酸氫鈉水溶液。將所得混合物攪拌2天，用EtOAc(50ml)稀釋，用水和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在真空中濃縮。殘余物經(jīng)過色譜純化(3∶1己烷/EtOAc)，得到標題化合物，為無色的油(12mg，0.026mmol，60％)。1H NMR(CDCl3)7.25-7.10(m，1H)，5.52-5.44(m，1H)，5.31-4.84(m，4H)，4.34-4.25(m，1H)，3.77(d，J＝1.2，3H)，3.09-2.66(m，2H)，2.34-2.12(m，2H)，1.42(d，J＝1.8，9H)，1.00-0.88(m，12H).
步驟D.S，S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯向S，S-2-甲基-1-(羰基-Asp(OBu-t)-CH2F)丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯(12mg，0.026mmol)的1.5ml CH2Cl2溶液中加入0.5ml TFA。將所得溶液在室溫下攪拌4小時，用CHCl3稀釋(3×15ml)，在真空中濃縮，得到標題化合物，為淺黃色固體(10.25mg，0.025mmol，96％)。1HNMR(丙酮-d6)
7.75-7.40(m，1H)，6.85-6.82(m，1H)，5.34-5.12(m，1H)，4.84-4.80(m，2H)，4.58-4.43(m，1H)，4.18-4.11(m，1H)，3.71(s，3H)，2.88-2.60(m，2H)，2.16-2.05(m，2H)，0.98-0.86(m，12H).
實施例8S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DCB)丙基N-苯基氨基甲酸酯步驟A.芐氧羰基-Asp(OBu-t)-CH2DCB向芐氧羰基-Asp(OBu-t)-CH2Br(300mg，0.75mmol)、2，6-二氯苯甲酸(215mg，1.12mmol)與KF(217mg，3.75mmol)的混合物中加入無水DMF(5ml)。將混合物在室溫Ar下攪拌12小時，然后用乙酸乙酯(30ml)稀釋。將溶液用飽和氯化銨水溶液、鹽水洗滌，然后經(jīng)Na2SO4干燥。除去溶劑，殘余物用快速柱色譜純化(己烷∶EtOAc，2∶1)。得到標題化合物，為無色的油(296mg，0.67mmol，89％)。1HNMR(CDCl3)7.34(m，8H)，5.97(d，J＝8.7，1H)，5.21(d，J＝6.6，2H)，5.16(s，2H)，4.70(m，1H)，2.90(m，2H)，1.28(s，9H).
步驟B.S-2-甲基-1-(羰基-Asp(OBu-t)-CH2DCB)丙基N-苯基氨基甲酸酯向芐氧羰基-Asp(OBu-t)-CH2DCB(150mg，0.34mmol)的乙醇(20ml)溶液中加入Pd/C(30mg)和含水HCl(0.2ml，6N)。將混合物在H2下攪拌3小時，然后過濾除去Pd/C。濃縮乙醇溶液，殘余物用于下面的反應。將S-2-苯氨基-1-羰氧基-3-甲基丁酸(81mg，0.34mmol)、EDCI(65mg，0.34mmol)、HOBt(52mg，0.34mmol)、DMAP(24mg，0.20mmol)與NH2-Asp(OBu-t)-CH2DCB-HCl在THF(10ml)中的混合物在室溫下攪拌16小時，然后用乙酸乙酯(30ml)稀釋。將溶液用含水NaOH(1N)、含水HCl(1N)、鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。濃縮溶液，殘余物經(jīng)過快速柱色譜純化，得到標題化合物，為淡黃色固體(41mg，0.07mmol，22％)。
1H NMR(CDCl3)7.28(m，8H)，5.05(m，3H)，4.67(m，1H)，2.88(m，2H)，2.31(m，1H)，1.42(s，9H)，0.91(m，6H).
步驟C.S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DCB)丙基N-苯基氨基甲酸酯向S-2-甲基-1-(羰基-Asp(OBu-t)-CH2DCB)丙基N-苯基氨基甲酸酯的CH2Cl2(2ml)溶液中加入TFA(1ml)。將混合物在25℃Ar下攪拌12小時，然后用乙酸乙酯(30ml)稀釋。將溶液用飽和含水Na2HPO4洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。蒸發(fā)之，在真空下干燥殘余物。得到標題化合物，為黃色固體(18mg，0.03mmol，47％)。
1H NMR(CDCl3)7.29(m，8H)，5.00(m，3H)，4.21(m，1H)，2.91(m，2H)，2.35(m，1H)，0.97(m，6H).
實施例9S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(3-氟苯基)氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從S-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸和3-氟苯基異氰酸酯分四步制備標題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)10.09(bs，1H)，8.73(m，1H)，8.29(m，1H)，7.35(m，3H)，6.83(s，1H)，5.18(m，1H)，4.69(m，3H)，2.60(m，2H)，2.11(m，1H)，0.96(m，6H).
實施例10S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(4-氟苯基)氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從S-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸和4-氟苯基異氰酸酯分四步制備標題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)9.73(bs，1H)，8.56(bs，1H)，7.33(s，2H)，7.00(s，2H)，5.05(m，1H)，4.55(m，3H)，2.52(m，2H)，1.97(m，1H)，0.81(m，6H).
實施例11S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(3，4-二氟苯基)氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從S-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸和3，4-二氟苯基異氰酸酯分四步制備標題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)10.09(bs，1H)，8.65(bs，1H)，7.56(m，1H)，7.37(m，1H)，7.24(m，1H)，5.05(m，1H)，4.65(m，3H)，2.73(m，2H)，2.11(m，1H)，0.95(m，6H).
實施例12S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(4-苯氧基苯基)氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從S-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸和4-苯氧基苯基異氰酸酯分四步制備標題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)12.45(bs，1H)，9.84(bs，1H)，8.65(m，1H)，7.48(d，J＝8.7Hz，2H)，7.35(dd，J＝7.5，8.4Hz，2H)，7.08(dd，J＝7.2，7.5Hz，2H)，6.95(m，3H)，5.22(m，1H)，4.69(m，3H)，2.62(m，2H)，2.09(m，1H)，0.93(m，6H).
實施例13S-1-環(huán)己基-1-(羰基-Asp-CH2F)甲基N-苯基氨基甲酸酯通過實施例1和2所述方法，從S-(+)-六氫扁桃酸和異氰酸苯基酯制備標題化合物，為白色固體。1H NMR(DMSO-d6)9.76(bs，1H)，8.68(bs，1H)，7.44-7.27(m，4H)，6.99(bs，1H)，5.30-4.80(m，4H)，1.80-1.45(m，6H)，1.14(bs，5H).
實施例14S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2，5-二氯苯基)氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從S-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸和2，5-二氯苯基異氰酸酯分四步制備標題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)9.39(s，1H)，8.69(bs，1H)，7.75(d，J＝6.6Hz，1H)，7.52(d，J＝8.4Hz，1H)，7.24(d，J＝8.7Hz，1H)，5.19(m，1H)，4.72(m，3H)，2.75(m，2H)，2.10(m，1H)，0.93(m，6H).
實施例15
S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2，4-二氯苯基)氨基甲酸酯如實施例1和2所述，從S-(+)-2-羥基-3-甲基丁酸和2，4-二氯苯基異氰酸酯分四步制備標題化合物。
1H NMR(CDCl3)8.10(dd，J＝8.7，3.9Hz，1H)，7.39(m，1H)，7.26(m，3H)，5.12(m，2H)，4.88(m，2H)，2.87(m，2H)，2.32(m，1H)，0.97(m，6H).
實施例16S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2PTP)丙基N-苯基氨基甲酸酯如實施例8所述，從芐氧羰基-Asp(OBu-t)-CH2Br和5-羥基-1-苯基-3-(三氟甲基)吡唑分3步制備標題化合物。
1H NMR(CDCl3)7.72(m，1H)，7.32(m，10H)，7.17(m，2H)，5.08(m，3H)，4.86(m，1H)，2.81(m，2H)，2.31(m，1H)，1.03(m，6H).
實施例17酶活性在熒光酶測定法中測量S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯作為天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3抑制劑的活性。利用連接有熒光離去基團的合成肽底物測量酶活性。合成底物被酶裂解產(chǎn)生熒光信號，在分光熒光計或熒光微量滴定板讀數(shù)器中讀取該信號。
在酶測定法中試驗從30pM至10μM不等的12種濃度供試化合物。在2ng(rCaspase 3)天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3(購自Becton分公司PharMingen，San Diego，CA)、各種濃度供試化合物、10μM天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3底物Ac-DEVD-AMC(SEQ ID NO1，購自Quality Controlled Biochemicals，Inc.Hopkinton，MA)和天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶緩沖液(20mM PIPES、100mM NaCl、10mM DTT、1mM EDTA、0.1％ CHAPS和10％蔗糖，pH7.2)的存在下進行酶反應，總體積為100μl。在96孔平板中進行酶反應，在37℃下培養(yǎng)30分鐘。然后利用355nm激發(fā)濾光器/460nm發(fā)射濾光器，用熒光平板讀數(shù)器(EG&GWALLAG 1420-002)讀數(shù)。利用GraphPrism軟件分析數(shù)據(jù)，得到關于S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯的IC50值為17nM。
實施例18細胞保護活性通過檢查S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯阻滯TNF-α誘導HeLa細胞死亡的能力，測定細胞保護活性。該測定法中，在試驗前24小時將25,000個HeLa細胞接種在96孔平板中。在測定當天，將細胞與八種不同濃度的供試化合物預培養(yǎng)30分鐘，然后用TNF-α(25ng/ml)和環(huán)己酰亞胺(30μg/ml)攻擊細胞，進一步培養(yǎng)24小時。然后通過兩次PBS洗滌除去死亡的細胞，加入100μl細胞群指示溶液(鈣黃綠素AM，最終濃度8μM)。培養(yǎng)20分鐘后，在485/510nm下測量熒光信號，數(shù)據(jù)以對照百分比表示，對照培養(yǎng)物僅用環(huán)己酰亞胺處理。在這些實驗中，S-2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯關于細胞保護作用的EC50為150nM。
在充分描述本發(fā)明的基礎上，本領域技術(shù)人員將領會到，在廣泛而等價的條件、制劑和其他參數(shù)范圍內(nèi)可以實施相同的發(fā)明，而不影響本發(fā)明或其任意實施方式的范圍。本文引用的所有專利、專利申請和公開出版物均全文結(jié)合在此作為參考文獻。
序列表<110>Cytovia Inc.Wang，YanCai，SuiWeber，EckardMills，GordonGreen，DouglasGuan，Lufeng<120>取代的α-羥基酸天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制劑及其用途<130>1735.040PC02<140>待指定<141>待指定<150>60/157，077<151>1999-08-27<150>60/158，373<151>1999-10-12<160>1<170>PatentIn 3.0版<210>1<211>7<212>PRT<213>不確定<400>1Asp Glu Val Asp權(quán)利要求
1.式I化合物 或其藥學上可接受的鹽或前體藥物，其中R1是可選被取代的烷基或氫；R2是氫或可選被取代的烷基；R3和R4獨立地是氫、可選被取代的芳基、可選被取代的雜環(huán)基、可選被取代的碳環(huán)、可選被取代的雜芳基、可選被取代的烷基、可選被取代的烯基或可選被取代的炔基；R5是可選被取代的烷基、可選被取代的碳環(huán)、可選被取代的雜環(huán)基、可選被取代的芳基或可選被取代的雜芳基；Z是O、S、NR8或(CR9R10)n，其中R8、R9和R10獨立地是氫、烷基或環(huán)烷基，n是0、1、2或3；X是1-2個氨基酸的肽或一條鍵。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R3和R4獨立地是氫、芳基、雜環(huán)基、雜芳基、C1-10烷基、烯基、炔基、或被一個或多個羥基、鹵素、羧基、氨基、酰胺、酯、胍基、巰基、烷基巰基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基取代的C1-10烷基；R5是可選被取代的烷基、C4-C7環(huán)烷基、飽和或不飽和的雜環(huán)基、芳基或雜芳基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是H、Me、Et或乙酰氧基甲基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R2是氫、氟甲基、酰氧基甲基、芳酰氧基甲基、芳氧基甲基、雜芳氧基甲基或氨基甲基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X是一條鍵。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Z是O、S、NH或CH2。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R3是氫，R4是直鏈或支鏈C1-6烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R3是氫，R4是直鏈或支鏈C1-6烷基，它可選地被羥基、鹵素、羧基、氨基、酰胺、酯、胍基、巰基、烷基巰基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基取代。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R5是可選被取代的芐基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R5是可選被取代的苯基、萘基或雜芳基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有式II結(jié)構(gòu) 或其藥學上可接受的鹽，其中R6和R7獨立地是氫、烷基、可選被取代的烷基、C4-C7環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基，或者R6和R7聯(lián)合氮一起構(gòu)成雜環(huán)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R2是氫、氟甲基、酰氧基甲基、芳酰氧基甲基、芳氧基甲基、雜芳氧基甲基或氨基甲基。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R1是H、Me、Et或乙酰氧基甲基。
14.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R3是氫，R4是直鏈或支鏈C1-6烷基、環(huán)烷基、芳基或雜芳基。
15.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R3是氫，R4是直鏈或支鏈C1-6烷基，它可選地被羥基、鹵素、羧基、氨基、酰胺、酯、胍基、巰基、烷基巰基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基取代。
16.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R6是氫，R7是可選被取代的苯基、萘基、雜芳基或芐基。
17.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，其中R6是氫，R7是可選被取代的烷基。
18.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自下組1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯，1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-芐基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-芐基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2，6-二氯苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2，5-二氯苯基)-氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2，4-二氯苯基)-氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DCB)丙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DCB)丙基N-(2，6-二氯苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2PTP)丙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2PTP)丙基N-(2，6-二氯苯基)-氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DPP)丙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2DPP)丙基N-(2，6-二氯苯基)-氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(2-甲基-1-甲氧羰基丙基)氨基甲酸酯，和Z-纈氨酸2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基酯。
19.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自下組2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(3-氟苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(4-氟苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(3，4-二氟苯基)氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-(4-苯氧基苯基)氨基甲酸酯，1-(羰基-Asp-CH2F)丙基N-苯基氨基甲酸酯，1-(羰基-Asp-CH2F)丁基N-苯基氨基甲酸酯，1-(羰基-Asp-CH2F)-2-丙烯基N-苯基氨基甲酸酯，2-(4-咪唑基)-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯，2-苯基-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯，2-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丁基N-苯基氨基甲酸酯，3-甲基-1-(羰基-Asp-CH2F)丁基N-苯基氨基甲酸酯，1-苯基-1-(羰基-Asp-CH2F)甲基N-苯基氨基甲酸酯，1-(2-氯苯基)-1-(羰基-Asp-CH2F)甲基N-苯基氨基甲酸酯，1-(4-氯苯基)-1-(羰基-Asp-CH2F)甲基N-苯基氨基甲酸酯，1-環(huán)己基-1-(羰基-Asp-CH2F)甲基N-苯基氨基甲酸酯，2-氯-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯，和2，2，2-三氟-1-(羰基-Asp-CH2F)乙基N-苯基氨基甲酸酯。
20.藥物組合物，包含權(quán)利要求1的化合物和藥學上可接受的載體。
21.抑制細胞或組織的細胞死亡的方法，包含使所述細胞或組織與有效量的權(quán)利要求1化合物接觸。
22.治療或改善動物中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)、視網(wǎng)膜神經(jīng)元、心肌或免疫系統(tǒng)細胞中的細胞死亡的方法，包含將有效量的權(quán)利要求1化合物對需要接受這種治療或改善的動物給藥。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述細胞死亡位于中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)，是由下列之一引起的(a)缺血性與興奮毒性疾病，選自由中風引起的局灶性缺血和由心搏停止引起的普遍性缺血；(b)創(chuàng)傷性損傷；(c)病毒感染；(d)輻射誘導的神經(jīng)細胞死亡；(e)神經(jīng)變性性障礙，選自阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、蛋白感染病毒病、多發(fā)性硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化和脊髓延髓萎縮；(f)脊髓損傷；或(g)急性細菌性腦膜炎。
24.權(quán)利要求22的方法，其中所述細胞死亡位于中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)，是由亨廷頓氏病基因的三核苷酸重復擴展引起的。
25.權(quán)利要求22的方法，其中所述細胞死亡是由亨廷頓氏病引起的。
26.權(quán)利要求22的方法，其中所述細胞死亡位于心肌組織，是由心肌梗塞、充血性心力衰竭、心肌病或心臟的病毒感染引起的。
27.權(quán)利要求22的方法，其中所述細胞死亡位于視網(wǎng)膜神經(jīng)元，是由眼內(nèi)壓力增加、與衰老有關的黃斑變性或色素性視網(wǎng)膜炎引起的。
28.權(quán)利要求22的方法，其中所述細胞死亡位于免疫系統(tǒng)，是由免疫缺陷障礙引起的，選自獲得性免疫缺陷綜合征、嚴重聯(lián)合免疫缺陷綜合征和輻射誘導免疫抑制。
29.權(quán)利要求22的方法，其中所述細胞死亡是由自體免疫障礙引起的，選自紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎和I型糖尿病。
30.權(quán)利要求22的方法，其中所述細胞死亡是由I型糖尿病引起的。
31.治療或預防動物多囊性腎疾病、腎淀粉樣變性、急性腎衰、環(huán)孢菌素A誘導鼠管狀上皮細胞死亡、HIV誘導腎病或貧血/紅細胞生成的方法，包含將有效量的權(quán)利要求1化合物對需要接受這種治療或預防的動物給藥。
32.保護哺乳動物器官或組織不由正常血液供應缺乏引起細胞死亡的方法，包含使所述器官或組織與有效量的權(quán)利要求1化合物接觸。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述器官或組織在移植到哺乳動物體內(nèi)之前存在于貯存培養(yǎng)基中。
34.權(quán)利要求32的方法，其中所述組織是胚胎黑質(zhì)組織。
35.權(quán)利要求32的方法，其中所述接觸包含所述化合物輸注給器官或組織，或者所述器官或組織浸泡在包含所述化合物的貯存培養(yǎng)基中。
36.減少或預防供體器官或組織在被移植到宿主內(nèi)后由宿主免疫細胞的作用引起的細胞死亡的方法，包含在必要時將有效量的式I化合物對所述宿主給藥。
37.減少或預防用于體外受精程序的哺乳動物精子或卵子死亡的方法，包含使所述精子或卵子與有效量的權(quán)利要求1化合物接觸。
38.延長哺乳動物或酵母細胞系的壽命的方法，包含使所述細胞系與權(quán)利要求1化合物接觸。
39.權(quán)利要求38的方法，其中所述接觸包含在細胞生長培養(yǎng)基中包括所述化合物。
40.治療或改善哺乳動物脫發(fā)或毛發(fā)早白的方法，包含在必要時使哺乳動物毛發(fā)或毛囊與權(quán)利要求1化合物接觸。
41.權(quán)利要求40的方法，其中所治療的是脫發(fā)，所述脫發(fā)是由男性禿發(fā)、輻射、化學療法或情緒緊張引起的。
42.治療或改善哺乳動物由暴露于高水平輻射、熱或化學品引起的皮膚損害的方法，包含在必要時對哺乳動物皮膚施用權(quán)利要求1化合物。
43.權(quán)利要求42的方法，其中所述化合物是作為軟膏劑的一部分而用藥的。
44.權(quán)利要求42的方法，其中所述皮膚損害是由急性過度曝曬引起的，其中所述治療減少皮膚起皰和脫皮。
45.治療或改善動物膿毒癥的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對該動物給藥。
46.治療或改善動物肝炎的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對該動物給藥。
47.治療或改善動物1型遺傳性酪氨酸血癥的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對該動物給藥。
48.治療或改善動物慢性酒精攝入誘導的動物頰黏膜細胞死亡的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對該動物給藥。
49.治療或改善植物或花卉細胞死亡的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對該植物或花卉給藥。
50.治療或改善輻射或紫外照射誘導的動物細胞死亡的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對該動物給藥。
51.治療或改善脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)中的骨髓細胞編程性細胞死亡的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對動物給藥。
52.治療或改善急性胰腺炎中的編程性細胞死亡的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對動物給藥。
53.治療或預防牛皮癬或炎性腸疾病中的炎性反應的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對動物給藥。
54.治療或改善灼傷后的器官編程性細胞死亡的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對動物給藥。
55.治療或改善腸缺血-再灌注后的小腸組織損傷的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對動物給藥。
56.治療、改善或預防由癌癥化學療法或放射療法導致的動物口腔黏膜炎、胃腸黏膜炎、膀胱黏膜炎、直腸炎、骨髓細胞死亡、皮膚細胞死亡或脫發(fā)的方法，包含在必要時將有效量的權(quán)利要求1化合物對該動物給藥。
57.權(quán)利要求56的方法，其中所述化合物是局部或口服給藥的。
58.權(quán)利要求57的方法，其中將所述化合物配制成口腔洗液的一部分，用于治療、改善或預防口腔黏膜炎。
59.權(quán)利要求57的方法，其中將所述化合物配制成緩釋頰用錠劑的一部分。
60.權(quán)利要求57的方法，其中將所述化合物配制成栓劑的一部分。
61.權(quán)利要求57的方法，其中將所述化合物配制成凝膠劑的一部分。
62.權(quán)利要求56的方法，其中所述化合物是通過膀胱導管給藥的，用于治療、改善或預防膀胱黏膜炎。
63.權(quán)利要求56的方法，其中所述化合物是作為灌腸劑的一部分給藥的，用于治療、改善或預防直腸炎。
64.權(quán)利要求56的方法，其中將所述化合物配制成能夠覆蓋胃腸表面的口服制劑，用于治療、改善或預防胃腸黏膜炎。
65.權(quán)利要求64的方法，其中所述胃腸黏膜炎是食管黏膜炎、胃黏膜炎或腸黏膜炎。
66.權(quán)利要求56的方法，其中所述化合物是通過i.v.注射給藥的，用于治療、改善或預防骨髓細胞死亡。
67.權(quán)利要求56的方法，其中所述化合物是作為藥物組合物的一部分給藥的，該組合物還包含藥學上可接受的載體。
68.權(quán)利要求56的方法，其中所述化合物是在所述動物癌癥的化學療法或放射療法之后給藥的。
69.權(quán)利要求56的方法，其中所述化合物是在所述動物癌癥的化學療法或放射療法期間給藥的。
70.權(quán)利要求56的方法，其中所述化合物是在所述動物癌癥的化學療法或放射療法之前給藥的。
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的取代的α－羥基酸,由通式(I)所代表,其中R1－R5、X和Z是如本文所定義的。本發(fā)明還涉及式(I)化合物是有力的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶與編程性細胞死亡的抑制劑這一發(fā)現(xiàn)。因此,本發(fā)明的抑制劑能夠延緩或阻滯各種臨床疾病中的細胞死亡,其中發(fā)生細胞、組織或整個器官的損失。
文檔編號A61P25/28GK1382119SQ00813446
公開日2002年11月27日 申請日期2000年8月28日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月27日
發(fā)明者王炎, 蔡遂雄, E·維比爾, G·B·米勒斯, D·R·格林, L·古安 申請人:西托維亞公司