專利名稱：抗癌劑和治療癌癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及癌癥的治療和用于治療癌癥的組合物。
抗癌劑的探索是全世界的醫(yī)藥工業(yè)、科研院所和政府機構(gòu)一直并且仍然是一個主要努力的方向。伴隨眾多癌癥治療中的一個主要問題是它們對患者和非癌組織的嚴重的不良影響。
我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，擬莖點霉素真菌毒素(此后稱為擬莖點霉素類)和它們的衍生物表現(xiàn)出強的抗癌活性。此外，由于擬莖點霉素類特別靶向肝的趨勢，我們認為可用擬莖點霉素類來提供抗肝癌的選擇性活性。應(yīng)懂得，擬莖點霉素類在肝癌治療中的選擇性是一個有意義的優(yōu)點，因為它能靶向肝癌同時使對其它組織的影響減到最小。
然而，通過選擇配方或能提高藥物對特定類型癌細胞或特定類型的癌的選擇性的擬莖點霉素類衍生物，還可將擬莖點霉素類用于除肝癌以外的癌癥的治療?？梢孕纬膳c單克隆抗體綴合的擬莖點霉素類衍生物?？捎梢阎椒ㄉa(chǎn)單克隆抗體而提供對癌細胞的選擇性。
擬莖點霉素類(phomopsins)的特征在于通常具有式I的13-元環(huán)結(jié)構(gòu) 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是任選的取代基并且可獨立選自下組氫、脂族基、芳族基、肽鏈和鹵素。
X是脂族基、氫或鹵素(優(yōu)選是氫)；以及Y是脂族基、氫或鹵素(優(yōu)選是氯)；如果存在一個肽鏈的話，它可與單克隆抗體(Mab)綴合。擬莖點霉素類可以是式I化合物的衍生物(例如它的鹽類)。
優(yōu)選的擬莖點霉素類選自包含式Ia的基的化合物 及其衍生物。
在式I和Ia中，R1、R2、R3、R5、R6和R7可典型地獨立選自氫和脂族基，而R4通常是肽。在一個實施方案中，R4是與抗體(特別是單克隆抗體(Mab))綴合的肽。更優(yōu)選的是，R1、R2、R5和R6是低級脂族基，而R3和R7都是氫。甚至更優(yōu)選的是，R1、R2和R6是低級烷基，而R5是低級烷基或低級烯烴。最優(yōu)選的是，R1是乙基、R2是甲基，R3是氫，R5是異丙基或異丙烯基，而R6是甲基。本文所用的術(shù)語低級脂族基、低級烷基和低級烯烴包括含有至多6個碳原子、最優(yōu)選至多4個碳原子的基。
式Ia的化合物優(yōu)選的立體化學(xué)如式Ib所示
優(yōu)選地，至少60wt％的擬莖點霉素組分將具有立體化學(xué)Ib。
基R4是肽，優(yōu)選是二肽或三肽，它可任選地與抗體(如單克隆抗體)鍵合。優(yōu)選的基R4有式II的結(jié)構(gòu)且包括所有立體異構(gòu)體 其中點線代表任選的雙鍵；R8和R9獨立選自氫和低級烷基，更優(yōu)選地，R8是甲基，而R9是乙基，且R11和R10都是氫或一起形成一個雙鍵；R12選自下組氨基、一取代氨基、二取代氨基和氨基酸殘基，特別是式III的基 其中，R13和R14都是氫或一起形成一個雙鍵，而R15選自下組羥基、氨基、取代氨基或抗體(特別是Mab)。
當(dāng)R15是抗體或與抗體相連時，優(yōu)選的是，R13和R14形成雙鍵來提供脫氫天冬氨酸殘基。在此例中，式III殘基中的C-N鍵相對較弱，能使式Ia的活性擬莖點霉素(其中，式II的基中，R12是氨基)從MAb釋放(一旦它與癌細胞結(jié)合)。這樣，脫氫天冬氨酸殘基可望通過Mab綴合物促進擬莖點霉素類的送遞。
最優(yōu)選的擬莖點霉素化合物選自擬莖點霉素A、八氫擬莖點霉素A、異擬莖點霉素A和擬莖點霉素胺A(phomopsinamine A)。這些化合物具有下列化學(xué)式
患者可用擬莖點霉素類的混合物來治療，應(yīng)懂得，在說明書和權(quán)利要求書中涉及的擬莖點霉素包括擬莖點霉素類的混合物。
一方面，本發(fā)明提供了治療癌癥(優(yōu)選是肝癌)的藥物組合物，它包含擬莖點霉素化合物或其衍生物或者擬莖點霉素類或衍生物的藥物上可接受的鹽以及藥物上可接受的載體。
擬莖點霉素類的鹽類(如堿金屬鹽)合理地是水溶性的。水溶液可通過將擬莖點霉素類溶解在稀堿(如氫氧化鈉)中形成以提供中性溶液。
另一方面，本發(fā)明提供了治療癌癥患者的方法，它包括對患者施用擬莖點霉素化合物或其衍生物或者擬莖點霉素或衍生物的藥物上可接受的鹽。
擬莖點霉素化合物可通過各種方法施用，包括以糖漿、膠囊、片劑等形式口服，通過注射或者通過靜脈內(nèi)輸注。
優(yōu)選地，以靜脈內(nèi)輸注施用所述化合物。
在又一方面，本發(fā)明提供了前文描述的擬莖點霉素化合物在制備用于治療癌癥(特別是肝癌)的藥物組合物中的應(yīng)用。
擬莖點霉素化合物是由某些真菌生產(chǎn)，包括Diaportetoxicus(以前的Phomopsis leptostromiformis)和Phomopsis emicis，或者可從這些天然產(chǎn)物得到。
認為擬莖點霉素類的活性部分地是由于該化合物與微管蛋白的強結(jié)合的緣故。這可通過抑制微管蛋白形成而破壞細胞有絲分裂，并且使形成的微管解聚。在一些例子中，可優(yōu)選用擬莖點霉素類與一種或多種其它抗癌藥物或療法結(jié)合治療?？蛇x定與擬莖點霉素類聯(lián)用的藥物通過提供與微管結(jié)合的互補活性來增強結(jié)果。與擬莖點霉素類聯(lián)用的可能的藥物實例包括紫杉酚、長春堿和長春新堿。
現(xiàn)在將參照如下實施例描述本發(fā)明。應(yīng)懂得，提供實施例只是為了闡述本發(fā)明，而決不是限制本發(fā)明的范圍。
實施例為了由美國國家癌癥研究所進行的抗癌活性的體外和體內(nèi)評價，通過下列文獻中描述的方法獲得了擬莖點霉素A、異擬莖點霉素A、擬莖點霉素胺A和八氫擬莖點霉素AC.Culvenor，J.Edgar和M.Mackay，四面體(Tetrahedron)，Vol.45，No.8 pp 2351(1989)；以及J.Edgar，J.Frahn，P.Cockrum和J.Culvenor在論文“羽扇豆中毒。擬莖點霉素類的化學(xué)和生物化學(xué)”，真菌毒素和藻毒素(Mycotoxins and Phycotoxins)，在第六屆國際IUPAC關(guān)于真菌菌素和藻毒素的討論會提交的邀請論文集，Pretoria，Rep.South Africa，1985年7月22～25日，或本文描述的方法。擬莖點霉素A的分離背景設(shè)計提取方法使困難和花費最小。用再循環(huán)15％甲醇∶水通過成一排的(in line)XAD(苯乙烯二乙烯基苯共聚體)柱連續(xù)提取已發(fā)酵的種子。擬莖點霉素A在XAD上吸附所需的時間非常長，但只需最少的操作員輸入(operator input)。該步操作的時間選擇并不是關(guān)鍵的，因此可以適應(yīng)操作條件。
擬莖點霉素A在15％的甲醇溶液中有比較低的溶解度。操作取決于擬莖點霉素A在XAD樹脂上的吸附，使在發(fā)酵的種子中的擬莖點霉素A從溶解平衡趨于分解。該操作減少了溶劑的用量、處理的體積和易燃災(zāi)難。提取的替換方法(不用再循環(huán))在初始提取時將用150+升純甲醇，涉及進一步濃縮步驟(或甲醇提取至900+L的稀釋)，然后在XAD上吸附?，F(xiàn)在的操作使用了12L甲醇，要求吸附相最小的操作輸入和用少得多的溶劑(總體積為85L而不是900+L)。
濃縮的擬莖點霉素A的從柱中洗脫是生產(chǎn)80～90％純度的結(jié)晶擬莖點霉素A的3步分離中的第一步。
初步用15％的甲醇水溶液洗滌后，可用100％的甲醇從柱中洗脫擬莖點霉素A?？蓱?yīng)用硅膠急驟柱色譜法來純化。應(yīng)用5∶95的氨∶異丙醇調(diào)節(jié)柱，將濃縮物溶于最小量的20∶65∶15氨∶異丙醇∶水中。用這種3溶劑混合物洗脫擬莖點霉素A。從沸騰的冰醋酸中重結(jié)晶提供了80～90％純度的擬莖點霉素A。異擬莖點霉素A的制備原料0.5M HgCl2將200mg HgCl2溶于2ml水中(+50μl 10M HCl)。0.01M擬莖點霉素A將18.3mg PhA溶于2ml水中(吹入NH3)。1M HCl方法將0.01M擬莖點霉素A(2.0ml)與0.5M HgCl2(1ml)和1MHCl(200μl)混合，總體積3.2ml，在室溫下放置5小時。用水稀釋該溶液至8ml，然后通過一個制備C18 Maxi-clean SPE柱(900mg)，用7～8ml水洗滌。再用8～9ml MeOH洗脫吸附的異擬莖點霉素A。來自第一個C18柱的水性洗脫液通過第二個C18柱再處理以檢驗第一個柱是否過載。來自第二個柱的MeOH洗脫液在干燥后具有很少的殘余物，所以不包括在進一步的處理中。
通過HPLC分析甲醇洗脫液(配成10ml)，然后蒸發(fā)至干，用制備HPLC純化。擬莖點霉素胺A的制備將擬莖點霉素A(15.3mg)溶于最小量的1M HCl中，在室溫下放置28小時。用水將反應(yīng)混合物稀釋到8ml，再通過一強陰離子交換柱(SAX，600mg)以移去任何未反應(yīng)的擬莖點霉素A(預(yù)計溶液pH值約為1.52)。然后，使未吸附的化合物的水溶液和SAX柱的水洗滌液都通過制備C18柱(900mg)。用水(10ml)洗滌C18柱，再用甲醇(10ml)洗脫擬莖點霉素胺A。
使甲醇洗脫液經(jīng)過HPLC分析，然后蒸發(fā)至干，用制備C18柱純化擬莖點霉素胺A。
該方法可通過在5～6小時，24小時和28～30小時后對反應(yīng)混合物取樣來改良?？赏ㄟ^HPLC分析所有的洗滌液和洗脫液來監(jiān)測擬莖點霉素A向擬莖點霉素胺A的轉(zhuǎn)化。擬莖點霉素類的抗癌活性體外篩查檢測在體外對60個人癌細胞系估測了擬莖點霉素A、八氫擬莖點霉素A、異擬莖點霉素A和擬莖點霉素胺A的抗癌活性。估測抗癌活性所用的方法是美國國家癌癥研究所作為初步篩查為發(fā)現(xiàn)具有抗癌潛能的化合物應(yīng)用的那些(Boyd和Paull，藥物開發(fā)研究(Drug DevelopmentResearch)，34，91～109，1995)。
現(xiàn)在根據(jù)下面兩種表達式中的一種或另一種來計算化合物對于細胞系生長百分數(shù)的測量效果如果(平均ODtest-平均ODtzero)≥0，那么PG＝100×(平均ODtest-平均ODtzero)/(平均ODctrl-平均ODtzero)如果(平均ODtest-平均ODtzero)＜0，那么PG＝100×(平均ODtest-平均ODtzero)/平均ODtzero其中平均ODtzero＝就在細胞接觸試驗化合物前，SRB產(chǎn)生的顏色的光密度測定平均值。平均ODtest＝在細胞接觸試驗化合物48小時后，SRB產(chǎn)生的顏色的光密度測定平均值。平均ODctrl＝細胞沒有接觸試驗化合物時，48小時后SRB產(chǎn)生的顏色的光密度測定平均值。結(jié)果表1a～4b中列出了關(guān)于不同濃度的試驗化合物對60個細胞系中的每一個計算的PGs。對每種化合物進行了兩次試驗，這些化合物擬莖點霉素A(表1a和1b)、八氫擬莖點霉素A(表2a和2b)、iso擬莖點霉素A(表3a和3b)和擬莖點霉素胺A(表4a和4b)的試驗結(jié)果表明，大多數(shù)測試的癌細胞系對擬莖點霉素A、異擬莖點霉素A、八氫擬莖點霉素A和擬莖點霉素胺A有劑量相關(guān)的響應(yīng)。特別是，這些數(shù)據(jù)支持了體內(nèi)試驗的估測操作的進展。
表1a化合物1擬莖點霉素AID No9502RM16Log10 濃度生長百分數(shù)細胞系-6 -7 -6 -5 -4白血病CCRF-CEM 99 106 98 34 -24HL-60(TB)101 101 76 -17 -43K-562 97 102 87 24 -23MOLT-499 103 95 43 29RPMI-8226111 109 103 36 -5SR 118 111 53 -16 -35非小細胞肺癌A549/ATCC102 103 69 31 17EKVX 102 106 85 40 11HOP-62 104 106 96 72 56HOP-92 114 116 110 91 90NCI-H226 107 121 67 -4 -26NCI-H23 105 102 101 74 36NCI-H322M102 98 94 308NCI-H460 103 111 83 169NCI-H522 103 105 100 18 -21結(jié)腸癌COLO 205 107 75 57 -54 -79HCC-2998 95 95 74 4 -46HCT-116 97 102 101 32 11HCT-1590 97 74 26 10HT29 95 97 91 145KM12 100 83 62 125SW-62096 107 101 62 44CNS癌SF-268 101 101 89 51 36SF-295 107 102 74 218SF-53994 94 69 -18 -54SNB-1993 97 92 44 22SNB-7593 77 48 -11 21U251 100 102 89 164黑素瘤LOX IMVI 90 97 82 43 20MALME-3M 101 92 65 32 25M14 98 83 64 0 -27SK-MEL-2 97 95 84 32 11SK-MEL28 94 83 68 44 37SK-MEL-5 100 87 48 30 23UACC-257 113 104 72 60 70UACC-62 101 95 79 38 26卵巢癌IGR-OV1 99 102 97 73 44OVCAR-3 102 97 64 114OVCAR-4 99 84 114 63 54OVCAR-5 101 102 78 20 27OVCAR-8 95 99 97 628SK-OV-3 104 97 70 19 11腎癌786-0105 90 86 26 18A498 96 91 67 60ACHN 101 91 89 48 36CAKI-190 88 63 37 28RXF-393 91 87 49 25 39SN12C104 104 92 64 38TK-10 94 101 85 68 53UO-31 98 94 91 64 48前列腺癌PC-3 100 89 66 20 10DU-145 108 102 66 8 -13乳腺癌MCF7 98 92 67 216MCF7/ADR-RES 99 99 90 48 13MDA-MB-231/Alcc 99 101 93 772HS 578T 104 107 101 71 75MDA-MB-43598 60 16 -46 -80MDA-N 93 71 -29 -86 -79BT-549 100 121 112 60 56T-47D 91 107 71 47 73
表1b化合物1擬莖點霉素AID No94O9SC89Log10濃度生長百分數(shù)細胞系-6 -7 -6 -5 -4白血病CCRF-CEM 84 86 80 -2 -47HL-60(TB) 75 88 76 -31 -65K-562105 121 93 33 11MOLT-498 93 90 28 28RPMI-8226103 94 87 9 -27SR90 88 88 25 19非小細胞肺癌A549/ATCC107 103 82 34 25EKVX 107 99 92 58 45HOP-62 100 114 99 57 35NCI-H226 87 85 96 34 -5NCI-H23 101 101 88 20 -2NCI-322M 93 93 80 27 44NCI-H460 101 95 80 12NCI-H522 102 102 93 9 -21結(jié)腸癌COLO 205 99 108 69 -27 -44HCC-2998 104 96 87 11 -37HCT-116 102 94 93 32 15HCT-15 102 99 103 35 15HT29 95 95 92 -14 -52KM12 92 87 61 -19 -52SW-620 104 104 93 34 22CNS癌SF-268 104 106 87 40 16SF-295 100 94 74 -45 -53SF-53999 102 98 32 -7SNB-19 101 98 94 56 33SNB-7583 55 28 15 16U251 103 98 91 26 9黑素瘤LOX IMVI 101 108 100 46 37M14 99 110 76 19 -31SK-MEL-2 87 92 74 32 16SK-MEL-28 96 98 69 37 51SK-MEL-5 106 101 54 22 10UACC-257 98 92 75 26 42卵巢癌IGROV1 104 119 109 57 27OVCAR-5 99 100 82 24 19OVCAR-8 105 133 104 59 30SK-OV-3 94 114 89 26 47腎癌786-0 91 97 98 38 17A498 99 100 83 17 -5ACHN 98 90 90 43 21SN12C105 100 103 59 28TK-10100 106 98 92 55前列腺癌PC-3 99 100 86 21 15DU-14599 105 83 22 20乳腺癌MCF7 98 100 76 23 12MCF7/ADR-RES 97 100 86MDA-MB-231/ATCC 99 98 96 66 30HS 578T 113 109 79 23 4MDA-MB-43590 81 34 1 -23MDA-N103 101 23 -75 -63BT-549 107 110 100 65 49T-47D 95 98 74 32 56
表2a化合物1八氫擬莖點霉素AID No9409SC89Log10濃度生長百分數(shù)細胞系 -6 -7 -6 -5 -4白血病CCRF-CEM 90 96 82 8 -3HL-60(TB) 106 95 88 -25 -49K-562 100 108 92 22 14MOLT-4 103 112 105 39 20RPMI-8226 110 99 84 7 -33SR 94 96 92 27 15非小細胞肺癌A549/ATCC 105 104 97 47 12EKVX 95 97 88 62 44HOP-62 103 96 105 72 43NCI-H226 85 75 85 33 -22NCI-H23 110 118 104 69 12NCI-H322M 100 99 91 49 26NCIH460 99 99 96 29 2NCIH522 99 99 88 5結(jié)腸癌COLO 205 97 100 70 1 -82HCC-2998135 -16HCT-116 104 103 100 41 14HCT-15 96 97 97 58 16HT29 93 91 90 30 6KM12108 124 139 63 -8SW-620 95 98 87 34 32CNS癌SF-268 101 100 86 43 22SF-295 88 88 72 -27 -65SF-539 101 95 95 27 -32SNB-19 100 97 99 59 38SNB-75 90 111 89 -7 27U251 96 99 90 20 -3黑素瘤LOX IMVI 97 100 92 52 39M14 101 70 94 24 -51SK-MEL-2111 109 106 38 60SK-MEL-28 105 94 69 29 41SK-MEL-5 93 105 45 3 -19UACC-257 98 97 85 36 37卵巢癌IGROV1 108 107 99 52 34OVCAR-5 102 94 96 57 24OVCAR-8 106 99 100 62 29SK-OV-3 85 98 79 27 -11腎癌786-0 104 110 127 95 54A498104 100 103 49 16ACHN 99 96 86 61 22SN12C99 96 92 63 28TK-1097 96 101 87 51前列腺癌PC-3 89 100 90 37 21DU-145 105 108 95 29 -4乳腺癌MCF7115 108 108 34 26MCF7/ADR-RES107 106 105 66 -15MDA-MB-231/ATCC 100 95 83 53 23HS 578T 90 90 72 13 -10MDA-MB-435 100 91 59 13 -14MDA-N 101 99 51 -9 -23BT-549 111 75 87 57 37T-47D95 122 89 45 48
表2b化合物1八氫擬莖點霉素AID No950RM16Log10濃度生長百分數(shù)細胞系 -6 -7 -6 -5 -4白血病CCRF-CEM 99 102 93 28 -33HL-60(TB) 100 81 932 -33K-S62 104 100 99 27 -21MOLT-4 104 99 103 46 26RPMI-822694 87 96 39 -3SR 78 92 54 -9 -35非小細胞肺癌A549/ATCC 104 93 101 57 21EKVX105 93 93 52 23HOP-62 89 90 85 55 21HOP9298 99 92 51 76NCI-H226108 104 102 23 -14NCI-H23 94 96 85 57 27NCI-H322M99 98 99 74 17NCI-H460105 101 104 45 15NCI-H522108 103 102 27 -13結(jié)腸癌COLO 205101 94 74 13 -13HCC-2998 97 100 104 48 -13HCT-116 105 100 101 42 17HCT-15 90 98 81 45 22HT29 97 96 101 618KM12101 96 99 40 20SW-620 100 93 92 58 36CNS癌SF-268 101 98 86 52 46SF-295 93 79 74 220SF-539 83 90 871 -55SNB-19 101 103 104 50 23SNB-75 99 102 52 -11 16U251103 96 97 309黑素瘤LOX IMVI 91 91 85 45 25MALME-3M 99 96 84 46 27M14 90 98 98 435SK-MEL-2101 96 93 40 12SK-MEL-28 106 90 76 48 43SK-MEL-5110 107 72 36 28UACC-257105 105 74 65 88UACC-62 104 96 87 31 18卵巢癌IGR-OV1 94 95 94 68 42OVCAR-3 103 99 87 31 13OVCAR-4 106 90 94 85 99OVCAR-5 107 104 105 62 26OVCAR-8 98 99 95 70 19SK-OV-3 104 90 98 43 10腎癌786-0 113 96 90 48 33A498104 96 100 51 20ACHN100 103 104 81 52CAKI-1 95 72 69 36 32RXF-393 95 93 81 52 42SN12C91 93 92 63 40TK-1092 98 83 91 59UO-31 100 92 99 75 52前列腺癌PC-3104 99 93 42 12DU-145 100 97 94 17 -1乳腺癌MCF7104 100 94 48 46MCF7/ADR-RES102 98 97 61 23MDA-MB-231/ATCC 97 67 72 64 22HS 578T 103 92 87 51 83MDA-MB-435 101 89 40 -25 -66MDA-N85 81 11 -77 -80BT-549 123 108 96 46 38T-47D99 100 86 59 77
表3a化合物1異擬莖點霉素AID No9409SC89Log10濃度生長百分數(shù)細胞系 -6 -7 -6 5 -4白血病CCRF-CEM103 97 92 7 -43HL-60(TB) 106 98 98-29 -59K-562 128 123 112 25 5MOLT-4 97 105 106 46 5RPMI-8226 106 104 87 0 -14SR 96 99 94 28 5非小細胞肺癌A549/ATCC 104 103 90 31 11EKVX103 101 98 64 58HOP-62 95 82 79 53 21NCI-H226 95 93 110 39 -15NCI-H23 99 105 93 37 16NCI-H322M95 100 85 34 51NCI-H460 95 96 85 7 -32NCI-H422100 99 95 10 -76結(jié)腸癌COLO 205102 106 76-45 -48HCC-2998 96 99 92 15 -35HCT-116 100 111 99 30 6HCT-15 100 102 102 40 16HT29 98 98 93-30 -26KM12116 98 62-33 -69SW-620 99 99 87 23 2CNS癌SF-268 102 94 87 46 31SF-295 100 93 88-36 -52SF-539 96 95 82 28 6SNB-19 100 98 89 57 37SNB-75 84 102 106 23 36U251 97 93 83 15 -20黑素瘤LOX IMVI 99 96 91 43 19M14 78 81 46 -6 -58SK-MEL-2100 95 80 18 0SK-MEL-2893 95 78 47 43SK-MEL-5117 110 41 -2 1UACC-257 98 96 85 20 27卵巢癌IGROV1 105 106 94 49 27OVCAR-5 102 100 95 30 25OVCAR-8 103 107 105 66 32SK-OV-3 105 106 86 24 35腎癌786＝0 93 94 99 40 24A498 97 93 95 21 3ACHN101 95 91 46 21SN12C 102 99 101 65 24TK10101 103 101 87 58前列腺癌PC-3101 106 85 28 18DU-145 106 111 97 16 5乳腺癌MCF7102 92 69 20 3MCF7/ADR-RES106 109 95 19 2MDA-MB-231/ATCC 102 100 107 64 26HS 578T 103 80 69 38 31MDA-MB-435 98 106 58-20 3MDA-N 103 92 42 -7 -37BT-549 116 108 123 71 32T-47D 104 96 103 42 42
表3b化合物1異擬莖點霉素AID No9502RM16Log10濃度生長百分數(shù)細胞系-6 -7-6-5-4白血病CCRF-CEM 1031069725-21HL-60(TB) 9510083 -19-41K-562 1001049219-17MOLT-4102100 10144 24RPMI-8226 1101109719 6SR100 9641 -15-22非小細胞肺癌A549/ATCC 1041007733 19EKVX 941019644 22HOP-62 94 948954 26HOP-92 96 967666 86NC-H226 11411088-6-27NCI-H23 1041058348 39NCI-H322M 106 989632 14NCI-H460 931057920 4NCI-H522 101 978815 -4結(jié)腸癌COLO20590 7644 -34-70HCC-2998 98 9782-8-64HCT-11693 887921 4HCT-15 97 988529 14HT29 991008510 6KM12 91 874715 -6SW-620 97 998340 35CNS癌SF-268 94 928852 37SF-295 951007312-11SF-539101 9776 -29-68SNB-19 971008944 20SNB-75 9710484-3 60U251 98 967711 4黑素瘤LOX IMVI 981009245 30MALME-3M 100 896426 17M14 101 80695 -26SK-MEL-2 94 997523 17SK-MEL-28 93 887740 24SK-MEL-5 99 876029 35UACC-257 84 927846 58UACC-6296 968345 29卵巢癌IGR-OV198 979358 36OVCAR-397 90463 -17OVCAR-497 927962 47OVCAR-597 996815 21OVCAR-8 106106 10674 34SK-OV-395 927623 6腎癌786-0 94 847932 16A498 82 84870 -16ACHN 101108 10156 48CAKI-1 901048247 46RXF-393 1001027542 35SN12C 95 939361 28TK-10 1011059796 71U0-31 97 969667 48前列腺癌PC-3 100 946823 23DU-14510710072-5 -9乳腺癌MCF7 99 989032 12MCF7/ADR-RES 94 958744 7MDA-MB-231/ATCC971109273 18HS 578T99 707048 58MDA-MB-435103 8734 -35-69DMDA-N103 82 -16 -84-68BT-549102 989050 48T-47D 84 907641 52
表4a化合物1擬莖點霉素胺AID No9409SC89Log10濃度生長百分數(shù)細胞系 -6-7-6-5-4白血病CCRF-CEM 979349 -13 7HL-60(TB) 104 10356 -53 -55K-562 105 10053 6 2MOLT-4 9593912617RPMI-8226 106 10365 9SR10495712612非小細胞肺癌A549/ATCC 99 100531918EKVX 8996804438HOP-62105 101752934NCI-H226 828463 -12 -31NCI-H23 110 1127811-9NCI-H322M 9697613136NCI-H460 104 111374-35MNCI-H522 666240 -42 -54結(jié)腸癌COLO 205 109 10336 -22 -72HCC-2998 109 11360 -16 -59HCT-11699996314 1HCT-15 93947619 2HT29 101 10250 -53 -64KM12 110 123774740SW-620 93 100592124CNS癌SF-268101 100703213SF-295 878656 -22 -27SF-539 97 10277 -18 -44SNB-19 8694652720SNB-75 6378361122U251 878740 0 -39黑素瘤LOX IMVI 98 101733828SK-MEL-2 1029637-1-6SK-MEL-28 10093654249SK-MEL-5 10299321714UACC-257 9595663142卵巢癌IGROVI10098693719OVCAR-5 10293601115OVCAR-881 1038555 2SK-OV-3 101 107592714腎癌786-0 10098913115A498 111 101822-11ACHN 99 100774121SN12C 9693823313TK-10 98 100915031前列腺癌PC-3 9790401818DU-145 99994810 1乳腺癌MCF7 114 116381510MCF7/ADR-RES 1039987-7 -48MDA-MB-231/ATCC9596862915HS 578T878750 6-5MDA-MB-43512671 -15 -55 -32MDA-N 9387-6 -58 -49BT-549145855129 -25T-47D 99105 722668
表4b化合物1擬莖點霉素胺A Log10濃度ID No9502RM16 生長百分數(shù)細胞系 -8 -7-6-5-4白血病CCRF-CEM 1019967-7-34HL-60(TB)1069626 -37-47K-562100 10063-3-15MOLT-4 104998825 9RPMI-82261079961 6 4SR 104689-15-21非小細胞肺癌A549/ATCC 97814421 7EKVX997941 36HOP-6296 1018653 45HOP-92 128 120 10098 59NCI-H226 114 10447 -14-27NCI-H23 101947333 34NCI-H322M104 1017323 17NCI-H460 100 1023712 14NCI-H522 100 1027235-24結(jié)腸癌COLO 205 988228 -24-45HCC-2998 10343 -32-33HCT-116 93935016 8HCT-15 935922 6HT29 98 10140 4 4KM12 968126 9 1SW-62097937140 31CNS癌SF-26898946447 30SF-295 10381240SF-539 1029553 -45-60SNB-1998946130 21SNB-75 116 1103610 20U251 104894111 12黑素瘤LOX IMVI957537 21MALME-3M 100785529 25M14 999556 1 -1SK-MEL-2 99917017 16SK-MEL-28 866024 45SK-MEL-5 99683827 19UACC-257 103947364 73UACC-62 97935335 37卵巢癌IGR-OV1 95957947 30OVCAR-3 1017710 1 -6OVCAR-4 98 1028959 45OVCAR-5 99 1055025 35OVCAR-81029242 22SK-OV-3 1009751 0 4腎癌786-0108 1016926 20A498 11761-7-16ACHN 102 1017153 38CAKI-186827545 48RXF-393 88855611 50SN12C 86907948 30TK-10 100 11173 73UO-31102 1049753 53前列腺癌PC-3 102853820 10DU-145 1009335 -12 1乳腺癌MCF7 103 1064327 9MCF7/ADR-RES 97968546 21MDA-MB-231/ATCC 96907627 2HS 578T 102727062 77MDA-MB-435 6110-42 -27MDA-N 9451-58 -86 -65BT-549 1109652 4143T-47D 93 10077 5478
體內(nèi)，中空纖維篩查檢測發(fā)育治療程序的生物試驗分支(the Biological Testing Branchof the Developmental Therapeutics Program)已采用了一個初步的體內(nèi)篩查工具來估測通過大規(guī)模體外細胞篩查鑒定的化合物的潛在抗癌活性(Hollingshead，MG etal.，生命科學(xué)(Life Sciences)，57，131～141，1995)。就這些檢測來說，在聚偏1，1-二氟乙烯(PVDF)中空纖維中培養(yǎng)人腫瘤細胞，將每個細胞系的一個樣本移植到小鼠的兩個生理區(qū)室(腹膜內(nèi)和皮下)的每一個中。該方案鑒別具有中度至明顯抗癌活性的化合物，促進敏感性腫瘤系的鑒定和隨后在標(biāo)準(zhǔn)體內(nèi)實體瘤模型中測試合適的治療方案的鑒定。方法每個試驗小鼠接受代表3個不同癌細胞系的6個纖維(腹膜內(nèi)3個和皮下3個)。采用QD×4治療方案用潛在的抗癌化合物以2個試驗劑量的每個劑量通過腹膜內(nèi)途徑處理三個小鼠。6只載體對比小鼠只接受化合物稀釋劑。在處理的最后一天次日收集纖維培養(yǎng)物。為了估計抗癌效果，采用甲臘染料(MTT)轉(zhuǎn)化檢測法確定每個細胞系的存活細胞質(zhì)量。由此，可采用經(jīng)過化合物處理的樣本的平均光學(xué)密度除以載體對比物的平均光學(xué)密度來計算％T/C。此外，對每一個樣本可測定細胞質(zhì)量的凈增長，因為纖維培養(yǎng)物的樣本估測植入小鼠的那天的存活細胞質(zhì)量。這樣，可估測試驗化合物的抑制細胞能力和殺細胞能力。
通常，對最少12個人癌細胞系測試了每種化合物。這代表共4個實驗(由于每個實驗包括3個細胞系)。關(guān)于2個化合物劑量中的每一個對每個細胞系、分別用對于腹膜內(nèi)樣本和皮下樣本計算的值以％T/C報導(dǎo)了數(shù)據(jù)。評估基于幾個中空纖維檢測判據(jù)，用標(biāo)準(zhǔn)皮下異種移植模型選定了用于進一步進行體內(nèi)試驗的化合物。這些判據(jù)包括(1)在48個可能的試驗組合(12個細胞系×2個位點×2個化合物劑量)的10個中，％T/C為50或更??；(2)在24個可能的組合中，最少4個具有遠距離活性(腹膜內(nèi)藥物/皮下培養(yǎng)物)；和/或(3)在任一植入部位，1個或多個細胞系的凈細胞殺傷。為簡化評估，已經(jīng)采用了使得能快速觀測給定化合物活性的點系。為此，賦予每種化合物劑量2個值，它可導(dǎo)致存活細胞質(zhì)量減小50％或更多。對腹膜內(nèi)樣本和皮下樣本單獨記分以便可評估判據(jù)(1)和(2)。將組合IP+SC分≥20，SC分≥8或者一個或多個細胞系的凈細胞殺傷的化合物用來進行異種移植試驗。通過比較在中空纖維檢測和異種移植試驗中隨意選定的化合物＞80的活性結(jié)果，這些判據(jù)是統(tǒng)計有效的。該比較表明，如果將中空纖維檢測用作最初的體內(nèi)篩查工具，遺漏活性化合物的可能性極低。除了這些判據(jù)之外，其它因素(如獨特的結(jié)構(gòu)、作用機制)可導(dǎo)致安排某化合物進行標(biāo)準(zhǔn)異種移植試驗而沒有化合物符合這些判據(jù)。結(jié)果得到的關(guān)于擬莖點霉素A的數(shù)據(jù)闡明了顯著的細胞生長抑制和殺細胞活性，由表5中所示的各種細胞系的％T/C結(jié)果證明了這一點。
表5對于擬莖點霉素A的中空纖維檢測(％試驗/對比，％T/C)
數(shù)據(jù)來自對植入細胞系的重復(fù)估側(cè)IP＝腹膜內(nèi)SC＝皮下最后，應(yīng)懂得，可對前文描述的組合物和/或步驟安排進行各種改變、修飾和/或添加而不偏離本發(fā)明的精神或范圍。
權(quán)利要求
1.一種治療癌癥患者的方法，它包括對患者施用有效量的擬莖點霉素。
2.權(quán)利要求1的方法，其中，用選自式I化合物及其衍生物的化合物來治療患者 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是任選取代基；X選自下組脂族基、氫和鹵素；以及Y選自下組脂族基、氫和鹵素。
3.權(quán)利要求2的方法，其中，用選自式I化合物及其衍生物和鹽的化合物來治療患者，其中，在所述的式I化合物中，取代基X是氫，Y是氯，而R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7獨立選自下組氫、脂族基、芳族基、肽鏈和鹵素，并且其中，可在肽鏈和單克隆抗體之間形成綴合物。
4.權(quán)利要求1的方法，其中，對患者施用有效量的式Ia化合物或其衍生物或鹽 其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7獨立選自氫和脂族基，而R4則是任選與抗體綴合的肽。
5.權(quán)利要求4的方法，其中，R1、R2、R5和R6是低級脂族基，而R3和R7都是氫。
6.權(quán)利要求4的方法，其中，R1是乙基，R2是甲基，R3是氫，R5是異丙基或異丙烯基，R6甲基，而R7則是氫。
7.權(quán)利要求4～6任一項的方法，其中，式Ia的擬莖點霉素包括立體化學(xué)Ib化合物
8.權(quán)利要求7的方法，其中，存在的至少60wt％的擬莖點霉素類是立體化學(xué)Ib。
9.權(quán)利要求2～7任一項的方法，其中，R4是任選與抗體鍵合的二肽或三肽。
10.權(quán)利要求8的方法，其中，R4具有所有可能的立體化學(xué)排列的式II 其中，點線表示任選的雙鍵；R8和R9獨立地選自氫和低級烷基；而R10和R11是氫，或者一起形成一個雙鍵；R12選自氨基、一取代氨基、二取代氨基和氨基酸殘基。
11.權(quán)利要求10的方法，其中，R12具有式III 其中，R13和R14都是氫或一起形成一個雙鍵，而R15選自羥基、氨基、取代氨基和單克隆抗體。
12.權(quán)利要求1的方法，其中，用選自下組的擬莖點霉素治療患者擬莖點霉素A、八氫擬莖點霉素A、異擬莖點霉素A、擬莖點霉素胺A、其鹽類和它們中的兩個或多個的混合物。
13.權(quán)利要求1～12任一項的方法，其中，所述患者患有肝癌。
14.權(quán)利要求1～13任一項的方法，其中，以含有藥物上可接受的載體的藥物組合物形式施用所述擬莖點霉素或其衍生物。
15.權(quán)利要求1～14任一項的方法，其中，還用一種或多種其它的抗癌藥物與擬莖點霉素結(jié)合治療患者。
16.權(quán)利要求1～15任一項的方法，其中，以產(chǎn)生抗癌活性但對正常細胞無不利的細胞毒性作用的劑量施用擬莖點霉素。
17.一種治療癌癥的藥物組合物，它包含式I的化合物或其衍生物和藥物上可接受的載體，于是 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是任選的取代基；X選自下組脂族基、氫和鹵素；以及Y選自下組脂族基、氫和鹵素。
18.一種治療癌癥的藥物組合物，它包含式Ia的化合物或其鹽 其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7獨立選自氫和脂族基，而R4則是任選與抗體綴合的肽。
19.權(quán)利要求17的藥物組合物，其中，擬莖點霉素或其衍生物選自下組擬莖點霉素A、八氫擬莖點霉素A、異擬莖點霉素A、擬莖點霉素胺A、其鹽類和它們中的兩個或多個的混合物。
全文摘要
一種治療癌癥患者的方法,它包括對患者施用有效量的擬莖點霉素。
文檔編號A61K38/08GK1376071SQ00813444
公開日2002年10月23日 申請日期2000年9月29日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月29日
發(fā)明者J·A·愛德加 申請人:聯(lián)邦科學(xué)和工業(yè)研究組織