新型抗人il-23受體抗體的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供與現(xiàn)有的抗人IL-23R抗體相比活性和/或種屬交叉反應(yīng)性更優(yōu)良的抗人IL-23R抗體、以及使用該抗體預(yù)防或治療人IL-23R參與發(fā)病的各種疾病的方法。一種抗人IL-23R抗體，其分別包含由序列號(hào)5、9、13、17、21、25或29所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)7、11、15、19、23、27或31所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】新型抗人IL-23受體抗體
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及新型抗人IL-23受體抗體。詳細(xì)而言，本發(fā)明的新型抗人IL-23受體抗體為與現(xiàn)有的抗人IL-23受體抗體相比活性和/或種屬交叉反應(yīng)性更優(yōu)良的抗人IL-23受體抗體。
【背景技術(shù)】
[0002]白介素_23(也稱為IL-23)是由樹(shù)突細(xì)胞等產(chǎn)生的細(xì)胞因子，是由2個(gè)亞單位(即，IL-23特有的pl9亞單位和在IL-12中也成為其組成部分的p40亞單位)構(gòu)成的異二聚體細(xì)胞因子(非專(zhuān)利文獻(xiàn)I)。IL-23通過(guò)與IL-23受體(也稱為IL-23R)結(jié)合向細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入信號(hào)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)2)。IL-23R是由IL-23R亞單位和在IL-12受體中成為其組成部分的IL-12RP I亞單位構(gòu)成的異二聚體受體。另外，已知IL-12受體為IL-12RP I亞單位與IL-12Ri3 2亞單位的復(fù)合體，且IL-23不與IL-12受體結(jié)合(非專(zhuān)利文獻(xiàn)I)。
[0003]已知IL-23與銀屑病、克羅恩病(⑶)或潰瘍性結(jié)腸炎(UC)等炎癥性腸病(IBD)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、強(qiáng)直性脊柱炎(AS)、白塞氏病和葡萄膜炎等疾病密切相關(guān)。銀屑病為慢性皮膚角化疾病，患者皮膚中觀察到IL-23表達(dá)的亢進(jìn)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)3) ο
[0004]炎癥性腸病(IBD)是以克羅恩病(CD)、潰瘍性結(jié)腸炎(UC)為代表的慢性復(fù)發(fā)性疾病，會(huì)導(dǎo)致消化道的功能和結(jié)構(gòu)的變性。已知CD患者的腸道炎癥部位粘膜固有層巨噬細(xì)胞旺盛地產(chǎn)生IL-23(非專(zhuān)利文獻(xiàn)4)，認(rèn)為會(huì)誘導(dǎo)來(lái)自免疫細(xì)胞等的IL-21、IL-22、IL-17等細(xì)胞因子從而促進(jìn)IBD的炎癥的發(fā)病(非專(zhuān)利文獻(xiàn)5)。
[0005]系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是由于免疫系統(tǒng)的亢進(jìn)在全身的各個(gè)部位引起多樣的癥狀、同時(shí)或依次產(chǎn)生發(fā)熱、全身倦怠感等認(rèn)為是炎癥的癥狀和關(guān)節(jié)、皮膚、內(nèi)臟等中的各種癥狀的疾病。據(jù)報(bào)道，該SLE病狀與IL-23R陽(yáng)性T淋巴細(xì)胞數(shù)存在正相關(guān)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)6)。另外，已知SLE患者血中的IL-23與正常人相比顯著地亢進(jìn)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)7)，暗示IL-23與SLE相關(guān)。
[0006]強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是主要在脊柱和骶髂關(guān)節(jié)產(chǎn)生病變的慢性炎癥性疾病。已知AS患者血液中的IL-23與正常人相比顯著升高，這啟示了 AS的病因與IL-23有關(guān)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)8)。
[0007]白塞氏病是多發(fā)于各種大小的血管的炎癥、即以血管炎為特征的慢性炎癥性疾病，認(rèn)為免疫系的異常、嗜中性粒細(xì)胞活化與其發(fā)病相關(guān)。這種復(fù)發(fā)性的血管異常有時(shí)會(huì)持續(xù)數(shù)日至數(shù)月，有時(shí)一年會(huì)復(fù)發(fā)數(shù)次。這種白塞氏病患者體內(nèi)IL-23與疾病活動(dòng)性具有顯著的相關(guān)，另外，在作為相關(guān)病狀的葡萄膜炎患者的血清中確認(rèn)到IL-23表達(dá)的亢進(jìn)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)9),這也啟不了 IL-23助發(fā)這種病狀。
[0008]類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是慢性自身免疫性疾病，導(dǎo)致關(guān)節(jié)的變形、強(qiáng)烈的疼痛。RA患者的滑液和血清中IL-23增加(非專(zhuān)利文獻(xiàn)10)，給藥RA治療劑TNF阻斷劑的患者體內(nèi)血清中IL-23量與病狀程度相關(guān)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)11) ,RA患者的滑膜中抗IL-23R抗體會(huì)抑制TNF-α和IL-6的產(chǎn)生(非專(zhuān)利文獻(xiàn)12)，由此也啟示了與該病狀的關(guān)聯(lián)。
[0009]因此，如果能夠開(kāi)發(fā)出特異性地與IL-23受體結(jié)合、具有抑制由IL-23導(dǎo)致的各種作用的活性的單克隆抗體，則可望用于IL-23參與發(fā)病的各種疾病的治療、預(yù)防、診斷。
[0010]作為目前為止進(jìn)行研究的對(duì)人IL-23受體顯示功能抑制作用的抗體，報(bào)道了小鼠單克隆抗體m20D7 (專(zhuān)利文獻(xiàn)I)、其人源化單克隆抗體hum20D7 (專(zhuān)利文獻(xiàn)I)、大鼠單克隆抗體8B10 (專(zhuān)利文獻(xiàn)I)、其人源化單克隆抗體(專(zhuān)利文獻(xiàn)2)。其中，對(duì)hum20D7進(jìn)行了最詳細(xì)的研究，由使用表達(dá)IL-23受體的建立培養(yǎng)細(xì)胞KU225細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，在實(shí)際的細(xì)胞反應(yīng)中已經(jīng)明確了其效果。
[0011]但是，從有效性的觀點(diǎn)來(lái)看，現(xiàn)有的抗體對(duì)細(xì)胞中的IL-23信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的中和活性還不能稱為充分。
[0012]作為規(guī)定抗體藥物的有效給藥量的主要因素，可以列舉抗體所具有的抑制配體與受體結(jié)合的活性、存在于體內(nèi)的抗原量，提高結(jié)合抑制活性會(huì)減少給藥量，結(jié)果可稱為帶來(lái)減少了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和醫(yī)療成本的極為有益的改良。另外，即使抗體對(duì)抗原(配體、受體等)具有高結(jié)合活性，抗體也不一定能夠很強(qiáng)地發(fā)揮作為目標(biāo)的中和活性。原因在于，為了使抗體強(qiáng)力地抑制配體與受體的結(jié)合，抗體必須占據(jù)抗原中與之相適的部位。即，在評(píng)價(jià)抗體藥物的藥效方面，抗體所具有的中和活性的強(qiáng)度非常重要。
[0013]另外，在開(kāi)發(fā)藥品上，使用動(dòng)物的安全性評(píng)價(jià)極為重要。關(guān)于藥品開(kāi)發(fā)的國(guó)際指導(dǎo)方針I(yè)CH-S6中有如下記載:“安全性評(píng)價(jià)通常需要以使用兩種適當(dāng)?shù)膭?dòng)物物種的方式來(lái)計(jì)劃。但是，如果能示出正當(dāng)?shù)睦碛桑灿袃H使用一種適當(dāng)?shù)膭?dòng)物就足夠的情況(例如，僅確認(rèn)到一種適當(dāng)?shù)膭?dòng)物物種的情況或生物藥品的生物學(xué)特性已被充分闡明的情況)”。可見(jiàn)，藥品開(kāi)發(fā)除了人以外通常需要在一種以上的適當(dāng)?shù)膭?dòng)物物種中進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)于抗體藥物的開(kāi)發(fā)，為了在人以外的動(dòng)物物種中進(jìn)行試驗(yàn)，需要使該抗體對(duì)人以外的動(dòng)物物種來(lái)源的抗原也具有交叉反應(yīng)性。但是，一般而言，單克隆抗體的選擇性高，獲得保有高活性并且顯示出種屬交叉反應(yīng)性的抗體 并不容易。
[0014]基于上述情況，為了通過(guò)對(duì)人給藥來(lái)用于各種疾病的治療、預(yù)防、診斷，需要獲得與現(xiàn)有的抗體相比中和活性更強(qiáng)且具有種屬交叉反應(yīng)性的全人抗IL-23受體抗體。
[0015]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0016]專(zhuān)利文獻(xiàn)
[0017]專(zhuān)利文獻(xiàn)1:W02008/106134
[0018]專(zhuān)利文獻(xiàn)2:W02010/027767
[0019]非專(zhuān)利文獻(xiàn)
[0020]非專(zhuān)利文獻(xiàn)1:Oppmann B et al, Immunity.2000Nov; 13 (5): 715-25.[0021]非專(zhuān)利文獻(xiàn)2:Parham C et al, J Immunol.2002Junl; 168 (I I): 5699-708.[0022]非專(zhuān)利文獻(xiàn)3:Lee E et al, J Exp Med.2004Jan5; 199 (I): 125-30.[0023]非專(zhuān)利文獻(xiàn)4:Kamada N et al, J Clin Invest.2008; 118:2269-2280.[0024]非專(zhuān)利文獻(xiàn)5:Sarra M et al, Inflamm Bowel Dis.20IOOct; 16 (10): 1808-1813.[0025]非專(zhuān)利文獻(xiàn)6:Puwipirom H et al, Arthritis Res Ther.2010Nov29; 12 (6): R215.[0026]非專(zhuān)利文獻(xiàn)7:Mok MY et al, J Rheumatol.20100ct; 37 (10):2046-52.[0027]非專(zhuān)利文獻(xiàn)8:Mei Y et al, Clin Rheumatol.201 IFeb; 30 (2):269-73.[0028]非專(zhuān)利文獻(xiàn)9:Habibagahi Z et al, Mod Rheumatol.2010Apr; 20 (2):154-9.[0029]非專(zhuān)利文獻(xiàn)10:Kim HR et al, Rheumatology (Oxford).2007Jan; 46 (I): 57-6
[0030]非專(zhuān)利文獻(xiàn)11:Kageyama Y et al, Rheumatol Int.2007Dec; 28 (2): 137-43
[0031]非專(zhuān)利文獻(xiàn)12:Hillyer P et al, Rheumatology (Oxford).2009Dec; 48 (12): 1581-9

【發(fā)明內(nèi)容】

[0032]發(fā)明所要解決的問(wèn)題
[0033]本發(fā)明的課題在于提供與現(xiàn)有的抗人IL-23R抗體相比活性和/或種屬交叉反應(yīng)性更優(yōu)良的抗人IL-23R抗體。
[0034]用于解決問(wèn)題的手段
[0035]即，本發(fā)明包含作為醫(yī)學(xué)上或產(chǎn)業(yè)上有用的物質(zhì)、方法的以下發(fā)明。
[0036](I) 一種抗人IL-23R抗體，其選自下述I)-7)中的任何一項(xiàng):
[0037]I)包含由序列號(hào)5所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)7所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體；
[0038]2)包含由序列號(hào)9所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)11所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體；
[0039]3)包含由序列號(hào)13所示`的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)15所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體；
[0040]4)包含由序列號(hào)17所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)19所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體；
[0041]5)包含由序列號(hào)21所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)23所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體；
[0042]6)包含由序列號(hào)25所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)27所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體；和
[0043]7)包含由序列號(hào)29所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)31所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體。
[0044](2)如上述⑴所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)5所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)7所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
[0045](3)如上述(I)所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)9所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)11所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
[0046](4)如上述(I)所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)13所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)15所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
[0047](5)如上述(I)所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)17所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)19所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
[0048](6)如上述(I)所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)21所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)23所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
[0049](7)如上述(I)所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)25所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)27所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。[0050](8)如上述(I)所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)29所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)31所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
[0051](9)如上述⑴-⑶中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體，其中，上述抗體的重鏈恒定區(qū)為人Ig Y I恒定區(qū)。
[0052](10)如上述⑴-⑶中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體，其中，上述抗體的輕鏈恒定區(qū)為人IgK恒定區(qū)。
[0053](11)如上述⑴-⑶中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體，其中，上述抗體的重鏈恒定區(qū)為人Ig Y I恒定區(qū)，上述抗體的輕鏈恒定區(qū)為人IgK恒定區(qū)。
[0054](12)如上述⑵所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)33所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)35所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
[0055](13)如上述(3)所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)37所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)39所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
[0056](14)如上述⑷所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)41所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)43所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
[0057](15)如上述(5)所述的抗人IL-23R 抗體，其包含由序列號(hào)45所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)47所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
[0058](16)如上述(6)所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)49所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)51所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
[0059](17)如上述(7)所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)53所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)55所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
[0060](18)如上述⑶所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)57所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)59所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
[0061](19) 一種多核苷酸，其包含編碼上述(I)-(18)中任一項(xiàng)所述的抗體的重鏈可變區(qū)的序列。
[0062](20) 一種多核苷酸，其包含編碼上述(I)-(18)中任一項(xiàng)所述的抗體的輕鏈可變區(qū)的序列。
[0063](21) 一種表達(dá)載體,其包含上述(19)和/或(20)所述的多核苷酸。
[0064](22) 一種用上述(21)所述的表達(dá)載體進(jìn)行了轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
[0065](23)如上述(22)所述的宿主細(xì)胞，其選自由下述(a)和(b)構(gòu)成的組:
[0066](a)用含有包含編碼上述(I)-(18)中任一項(xiàng)所述的抗體的重鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸和包含編碼該抗體的輕鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸的表達(dá)載體進(jìn)行了轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞；和
[0067](b)用含有包含編碼上述(I)-(18)中任一項(xiàng)所述的抗體的重鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸的表達(dá)載體和含有包含編碼該抗體的輕鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸的表達(dá)載體進(jìn)行了轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
[0068](24)生產(chǎn)上述(I)-(18)中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體的方法，其包括:對(duì)上述(22)或(23)所述的宿主細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)而使其表達(dá)抗人IL-23R抗體的步驟。
[0069](25) 一種銀屑病治療藥，其包含上述(I)-(18)中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體。[0070](26) 一種用于預(yù)防或處置銀屑病的方法，其包括給藥治療有效量的上述(I)~
(18)中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體的步驟。
[0071](27)上述(I)~(18)中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體在銀屑病的預(yù)防或處置中的使用。
[0072]發(fā)明效果
[0073]根據(jù)本發(fā)明，提供與現(xiàn)有的抗人IL-23R抗體相比活性和/或種屬交叉反應(yīng)性更優(yōu)良的抗人IL-23R抗體。本發(fā)明的抗人IL-23R抗體通過(guò)抑制人IL-23R的功能而具有強(qiáng)力的免疫細(xì)胞抑制作用，對(duì)于人IL-23參與發(fā)病的各種疾病的預(yù)防或治療有用。而且，這種本發(fā)明的抗人IL-23R抗體會(huì)帶來(lái)給藥量的減少、給藥間隔的擴(kuò)大、給藥方法的改善(例如，皮下注射劑)等臨床應(yīng)用中的優(yōu)良的改善，大大有助于治療有效性和患者依從性的改善。另外，抗體對(duì)人以外的動(dòng)物(特別是藥品開(kāi)發(fā)中使用的動(dòng)物)來(lái)源的抗原具有種屬交叉反應(yīng)性，這一點(diǎn)使得將該抗體作為藥品進(jìn)行開(kāi)發(fā)時(shí)所必需的使用動(dòng)物的安全性試驗(yàn)成為可能，因此，也大大有助于確保作為給藥對(duì)象的人的安全性。
【具體實(shí)施方式】
[0074]以下，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0075]本發(fā)明人在抗人IL-23R抗體的制作方面反復(fù)進(jìn)行了相當(dāng)獨(dú)創(chuàng)性的研究，結(jié)果成功地制作了與現(xiàn)有的抗人IL-23R抗體相比活性和/或種屬交叉反應(yīng)性更優(yōu)良的抗人IL-23R 抗體。
[0076]抗體分子的基本結(jié)構(gòu)在各類(lèi)中共通地由分子量5萬(wàn)~7萬(wàn)的重鏈和2~3萬(wàn)的輕鏈構(gòu)成。重鏈通常由包含約440個(gè)氨基酸的多肽鏈構(gòu)成，每類(lèi)具有特征性的結(jié)構(gòu)，對(duì)應(yīng)于 IgG, IgM, IgA、IgD, IgE 稱為 Y、μ、α、δ、ε 鏈。進(jìn)而，IgG 中存在 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4,分別稱為y 1、y 2> Y 3> Y 4o輕鏈通常由包含約220個(gè)氨基酸的多肽鏈構(gòu)成，已知L型和K型這兩種，分別稱為λ、κ鏈?？贵w分子的基本結(jié)構(gòu)中的肽構(gòu)成，為分別同源的兩條重鏈和兩條輕鏈通過(guò)二硫鍵(S-S鍵)和非共價(jià)鍵鍵合，分子量為15萬(wàn)~19萬(wàn)。兩種輕鏈可以與任何一種重鏈成對(duì)。各個(gè)抗體分子經(jīng)常由相同的兩條輕鏈與相同的兩條重鏈形成。
[0077]鏈內(nèi)S-S鍵在重鏈中有四個(gè)(μ、ε鏈中有五個(gè))、在輕鏈中有兩個(gè)，每100~110個(gè)氨基酸殘基形成一個(gè)環(huán)，該立體結(jié)構(gòu)在各環(huán)間類(lèi)似，被稱為結(jié)構(gòu)單元或結(jié)構(gòu)域。對(duì)于重鏈、輕鏈中均位于N末端的結(jié)構(gòu)域而言，即使是來(lái)自于同種動(dòng)物的同一類(lèi)(亞類(lèi))的標(biāo)準(zhǔn)品，其氨基酸序列也并非恒定，稱為可變區(qū)，各結(jié)構(gòu)域分別稱為重鏈可變區(qū)(Vh)和輕鏈可變區(qū)(\)。由此向C末端側(cè)的氨基酸序列在各類(lèi)或亞類(lèi)中基本恒定，稱為恒定區(qū)(各結(jié)構(gòu)域分別表示為CH1、Ch2、Ch3或Q)。
[0078]抗體的抗原決定部位由Vh和\構(gòu)成，結(jié)合的特異性由該部位的氨基酸序列決定。另一方面，與補(bǔ)體或各種細(xì)胞的結(jié)合等生物學(xué)活性反映了各類(lèi)Ig的恒定區(qū)結(jié)構(gòu)的差異。輕鏈和重鏈的可變區(qū)的可變性大致限于兩種鏈中均存在的3個(gè)小的高變區(qū)，將這些區(qū)域稱為互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R ;從N末端側(cè)起分別為⑶R1、⑶R2、⑶R3)?？勺儏^(qū)的其余部分稱為框架區(qū)(FR)，較為恒定。
[0079]本發(fā)明人成功制作的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體為具有以下任意一個(gè)特征的抗人IL-23R 抗體。[0080]I)包含由序列號(hào)5所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)7所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體。
[0081]2)包含由序列號(hào)9所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)11所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體。
[0082]3)包含由序列號(hào)13所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)15所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體。
[0083]4)包含由序列號(hào)17所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)19所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體。
[0084]5)包含由序列號(hào)21所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)23所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體。
[0085]6)包含由序列號(hào)25所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)27所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體。
[0086]7)包含由序列號(hào)29所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)31所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體。
[0087]具體而言，本發(fā)明人使用人單克隆抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)“Veloclmmune” (VelocImmuneantibody technology ;Regeneron公司(美國(guó)專(zhuān)利6596541號(hào)))小鼠來(lái)制作抗體，通過(guò)使用各種生物學(xué)活性試驗(yàn)和物性試驗(yàn)的抗體篩選，成功地鑒定了本發(fā)明的抗人IL-23R抗體。Velocimmune技術(shù)中，用目標(biāo)抗原(例如，人IL-23R)對(duì)內(nèi)源性的免疫球蛋白重鏈和輕鏈的可變區(qū)被對(duì)應(yīng)的人可變區(qū)置換后的轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行免疫，然后，獲取表達(dá)抗體的小鼠的淋巴系細(xì)胞，通過(guò)與小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合而制作雜交瘤。接著，針對(duì)是否產(chǎn)生特異性地與目標(biāo)抗原結(jié)合的抗體對(duì)將該雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選。在此，產(chǎn)生的抗體為具有人抗體的可變區(qū)和小鼠抗體的恒定區(qū)的抗體(也稱為嵌合抗體)。接著，在鑒定出特異性地與目標(biāo)抗原結(jié)合的抗體的情況下，從 該雜交瘤細(xì)胞中分離出編碼抗體的重鏈和輕鏈的可變區(qū)的DNA，將該DNA分別與編碼期望的類(lèi)的人抗體重鏈和輕鏈的恒定區(qū)的DNA連接。使這樣得到的編碼重鏈和輕鏈的基因在細(xì)胞內(nèi)(例如，CHO細(xì)胞)表達(dá)而產(chǎn)生抗體分子。利用該方法制作的抗體的重鏈和輕鏈?zhǔn)莵?lái)源于人免疫球蛋白基因的“全人”抗體的重鏈和輕鏈。
[0088]對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，本發(fā)明的抗人IL-23R抗體可以基于本申請(qǐng)說(shuō)明書(shū)中公開(kāi)的其重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的序列信息，使用本領(lǐng)域中公知的方法容易地制作。優(yōu)選的是，本發(fā)明的抗人IL-23R抗體可以通過(guò)將其重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)分別與人抗體的重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)連接而制作成全人抗體。具體而言，制作具有編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸(序列號(hào)5、序列號(hào)9、序列號(hào)13、序列號(hào)17、序列號(hào)21、序列號(hào)25或序列號(hào)29)的堿基序列的重鏈可變區(qū)基因片段和具有編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸(序列號(hào)7、序列號(hào)11、序列號(hào)15、序列號(hào)19、序列號(hào)23、序列號(hào)27或序列號(hào)31)的堿基序列的輕鏈可變區(qū)基因片段。然后，使該可變區(qū)基因與人抗體的適當(dāng)類(lèi)的恒定區(qū)基因連接而制作全人抗體基因。接著，將該抗體基因連接到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中，并導(dǎo)入培養(yǎng)細(xì)胞中。最后，對(duì)該培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，可以從培養(yǎng)上清中得到單克隆抗體。
[0089]編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸的基因片段，例如可以基于依據(jù)該重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列而設(shè)計(jì)的堿基序列，利用本領(lǐng)域中公知的基因合成方法來(lái)合成。作為這樣的基因合成方法，可以使用W090/07861中記載的抗體基因的合成方法等本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種方法。另外，一旦獲得了本發(fā)明的抗體的可變區(qū)基因片段，也可以通過(guò)向該基因片段的預(yù)定部位導(dǎo)入突變來(lái)獲得本發(fā)明的其他抗體。作為這樣的突變導(dǎo)入方法，可以使用定點(diǎn)突變法(Current Protocols in Molecular Biologyedit.Ausubel et al.(1987)Publish.John ffiley&Sons Section8.1-8.5)等本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種方法。
[0090]接著，使上述的可變區(qū)基因片段與人抗體的恒定區(qū)基因連接而制作全人抗體基因。使用的人抗體的恒定區(qū)可以選擇任何亞類(lèi)的恒定區(qū)(例如，重鏈為Yl、Y2、Y3或Y4的恒定區(qū)，輕鏈為λ或κ鏈的恒定區(qū))，作為重鏈恒定區(qū)，可以優(yōu)選使用人IgYl，另外，作為輕鏈恒定區(qū)，可以優(yōu)選使用人IgK。
[0091]在制作該全人抗體基因之后，可以使用本領(lǐng)域中公知的各種方法進(jìn)行抗體基因向表達(dá)載體中的導(dǎo)入、表達(dá)載體向培養(yǎng)細(xì)胞中的導(dǎo)入、培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)、抗體的純化等。
[0092]作為與以上述方式得到的抗體基因連接的表達(dá)載體，可以列舉例如GS載體pEE6.4、pEE12.4(Lonza Biologies公司)，只要能夠表達(dá)抗體基因則沒(méi)有特別限制。另外，也可以使用AG-Y 1、AG-K (例如，參考W094/20632)等預(yù)先具有人Ig恒定區(qū)基因的表達(dá)載體。
[0093]上述表達(dá)載體通過(guò)例如磷酸鈣法、電穿孔法等導(dǎo)入培養(yǎng)細(xì)胞中。
[0094]作為導(dǎo)入表達(dá)載體的培養(yǎng)細(xì)胞，可以使用例如CH0-K1SV細(xì)胞、CH0-DG44細(xì)胞、293細(xì)胞等培養(yǎng)細(xì)胞，利用常規(guī)方法對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)即可。
[0095]上述培養(yǎng)后，可以通過(guò)各種柱層析、例如使用蛋白A或蛋白G柱的各種層析對(duì)培養(yǎng)上清中蓄積的抗體進(jìn)行純化。
[0096]本發(fā)明的抗人IL-23R抗體為與人IL-23R結(jié)合的抗體。作為測(cè)定所得到的抗人IL-23R抗體對(duì)人IL-23R的結(jié)合活性的方法，有ELISA、FACS等方法。例如，在使用ELISA的情況下，將人IL-23R(序列號(hào)I)的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域與免疫球蛋白Fe的融合蛋白固定到ELISA板上，對(duì)其添加抗人IL-23R抗體進(jìn)行反應(yīng)后，使由辣根過(guò)氧化物酶(HRP)等酶標(biāo)記的抗IgG抗體等第二抗體反應(yīng)，洗滌后，通過(guò)使用檢測(cè)其活性的試劑(例如，HRP標(biāo)記的情況下為 BM-Chemiluminescence ELISA substrate (POD) (Roche Diagnostics 公司))等的活性測(cè)定，對(duì)第二抗體的結(jié)合進(jìn)行鑒定。另外，本發(fā)明的抗體也包含與猴IL-23R結(jié)合的抗體，可以測(cè)定對(duì)這些蛋白質(zhì)的結(jié)合活性。
[0097]另外，本發(fā)明的抗人IL-23R抗體對(duì)人IL-23R具有中和活性。在本說(shuō)明書(shū)中使用的情況下，抗體的“中和活性”是指通過(guò)對(duì)IL-23R的結(jié)合來(lái)抑制經(jīng)由IL-23R帶來(lái)的任意的生物活性的活性，可以將IL-23R的一種或多種生物活性作為指標(biāo)來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。作為這樣的中和活性，可以列舉例如IL-23R應(yīng)答性細(xì)胞KU225細(xì)胞的增殖抑制活性、人IL-23刺激STAT3磷酸化抑制活性，可以通過(guò)使用后述實(shí)施例中記載的方法來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
[0098]作為評(píng)價(jià)抗人IL-23R抗體的各種穩(wěn)定性(例如，熱穩(wěn)定性、長(zhǎng)期保存穩(wěn)定性、高濃度穩(wěn)定性)的方法，可以列舉例如利用差示掃描量熱測(cè)定或抗體保存中的聚集體形成的測(cè)定的方法。
[0099]本發(fā)明的抗人IL-23R抗體可以優(yōu)選通過(guò)下述方法容易地獲得:使用本領(lǐng)域中公知的方法，合成包含編碼序列號(hào)5、9、13、17、21、25或29所示的重鏈可變區(qū)氨基酸序列的堿基序列的DNA和包含編碼序列號(hào)7、11、15、19、23、27或31所示的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列的堿基序列的DNA，將它們與適當(dāng)類(lèi)的人抗體恒定區(qū)基因連接，對(duì)于重鏈而言優(yōu)選人Ig Y I恒定區(qū)基因、對(duì)于輕鏈而言優(yōu)選人IgK恒定區(qū)基因，構(gòu)建全人抗體基因，使用本領(lǐng)域中公知的各種方法，將該抗體基因?qū)氡磉_(dá)載體，將該表達(dá)載體導(dǎo)入培養(yǎng)細(xì)胞并對(duì)該培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，從得到的培養(yǎng)物中純化抗體。包含編碼序列號(hào)5、9、13、17、21、25或29所示的重鏈可變區(qū)氨基酸序列的堿基序列的DNA優(yōu)選分別包含序列號(hào)4、8、12、16、20、24或28所示的堿基序列。包含編碼序列號(hào)7、11、15、19、23、27或31所示的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列的堿基序列的DNA優(yōu)選分別包含序列號(hào)6、10、14、18、22、26或30所示的堿基序列。
[0100]包含序列號(hào)5所示的重鏈可變區(qū)和人Ig Y I恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體重鏈為由序列號(hào)33所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈。包含序列號(hào)7所示的輕鏈可變區(qū)和人IgK恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體輕鏈為由序列號(hào)35所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。包含編碼由序列號(hào)33所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體重鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)32所示的堿基序列。包含編碼由序列號(hào)35所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體輕鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)34所示的堿基序列。作為包含由序列號(hào)33所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)35所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體，可以列舉后述實(shí)施例中記載的全人25-3抗體。
[0101]包含序列號(hào)9所 示的重鏈可變區(qū)和人Ig Y I恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體重鏈為由序列號(hào)37所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈。包含序列號(hào)11所示的輕鏈可變區(qū)和人IgK恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體輕鏈為由序列號(hào)39所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。包含編碼由序列號(hào)37所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體重鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)36所示的堿基序列。包含編碼由序列號(hào)39所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體輕鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)38所示的堿基序列。作為包含由序列號(hào)37所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)39所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體，可以列舉后述實(shí)施例中記載的全人30-15抗體。
[0102]包含序列號(hào)13所示的重鏈可變區(qū)和人IgY I恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體重鏈為由序列號(hào)41所不的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈。包含序列號(hào)15所不的輕鏈可變區(qū)和人IgK恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體輕鏈為由序列號(hào)43所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。包含編碼由序列號(hào)41所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體重鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)40所示的堿基序列。包含編碼由序列號(hào)43所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體輕鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)42所示的堿基序列。作為包含由序列號(hào)41所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)43所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體，可以列舉后述實(shí)施例中記載的全人30-16抗體。
[0103]包含序列號(hào)17所示的重鏈可變區(qū)和人IgY I恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體重鏈為由序列號(hào)45所不的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈。包含序列號(hào)19所不的輕鏈可變區(qū)和人IgK恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體輕鏈為由序列號(hào)47所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。包含編碼由序列號(hào)45所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體重鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)44所示的堿基序列。包含編碼由序列號(hào)47所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體輕鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)46所示的堿基序列。作為包含由序列號(hào)45所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)47所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體，可以列舉后述實(shí)施例中記載的全人30-18抗體。[0104]包含序列號(hào)21所示的重鏈可變區(qū)和人IgY I恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體重鏈為由序列號(hào)49所不的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈。包含序列號(hào)23所不的輕鏈可變區(qū)和人IgK恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體輕鏈為由序列號(hào)51所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。包含編碼由序列號(hào)49所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體重鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)48所示的堿基序列。包含編碼由序列號(hào)51所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體輕鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)50所示的堿基序列。作為包含由序列號(hào)49所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)51所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體，可以列舉后述實(shí)施例中記載的全人32-28抗體。
[0105]包含序列號(hào)25所示的重鏈可變區(qū)和人IgY I恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體重鏈為由序列號(hào)53所不的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈。包含序列號(hào)27所不的輕鏈可變區(qū)和人IgK恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體輕鏈為由序列號(hào)55所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。包含編碼由序列號(hào)53所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體重鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)52所示的堿基序列。包含編碼由序列號(hào)55所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體輕鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)54所示的堿基序列。作為包含由序列號(hào)53所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)55所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體，可以列舉后述實(shí)施例中記載的全人34-58抗體。
[0106]包含序列號(hào)29所示的重鏈可變區(qū)和人IgY I恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體重鏈為由序列號(hào)57所不的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈。包含序列號(hào)31所不的輕鏈可變區(qū)和人IgK恒定區(qū)的本發(fā)明的優(yōu)選的抗人IL-23R抗體輕鏈為由序列號(hào)59所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。包含編碼由序列號(hào)57所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體重鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)56所示的堿基序列。包含編碼由序列號(hào)59所示的氨基酸序列構(gòu)成的抗人IL-23R抗體輕鏈的堿基序列的DNA優(yōu)選包含序列號(hào)58所示的堿基序列。作為包含由序列號(hào)57所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)59所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體，可以列舉后述實(shí)施例中記載的全人32-36抗體。
[0107]本發(fā)明也包括包含本`發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)且保有活性的單鏈可變區(qū)片段(scFv)、Fab、Fab’、F(ab’)2等抗人IL-23R抗體片段。另外,本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以基于本發(fā)明來(lái)制作該抗人IL-23R抗體或抗體片段與其他肽或蛋白質(zhì)的融合抗體或者制作結(jié)合有修飾劑的修飾抗體。用于融合的其他肽或蛋白質(zhì)只要不使抗體的結(jié)合活性降低則沒(méi)有特別限定，可以列舉例如人血清白蛋白、各種標(biāo)簽肽、人工螺旋基序肽、麥芽糖結(jié)合蛋白質(zhì)、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶、各種毒素、其他能夠促進(jìn)多聚體化的肽或蛋白質(zhì)等。用于修飾的修飾劑只要不使抗體的結(jié)合活性降低則沒(méi)有特別限定，可以列舉例如聚乙二醇、糖鏈、磷脂、核糖體、低分子化合物等。
[0108]這樣得到的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體可以在根據(jù)需要進(jìn)一步純化后，通過(guò)常規(guī)方法制劑化而用于銀屑病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎等炎癥性腸病(IBD)、強(qiáng)直性脊柱炎(AS)、白塞氏病、葡萄膜炎、癌等IL-23R參與發(fā)病的疾病的治療。
[0109]本發(fā)明的抗人IL-23R抗體可以優(yōu)選作為銀屑病治療劑使用。作為這些治療劑等的劑型的例子，可以制成注射劑、點(diǎn)滴用劑等非口服劑，優(yōu)選通過(guò)靜脈內(nèi)給藥、皮下給藥等來(lái)給藥。另外，制劑化時(shí)，可以在藥學(xué)上容許的范圍內(nèi)使用與這些劑型相應(yīng)的載體、添加劑。[0110]上述制劑化時(shí)的本發(fā)明的抗人IL-23R抗體的添加量根據(jù)患者的癥狀的程度和年齡、使用的制劑的劑型或抗體的結(jié)合效價(jià)等而不同，使用例如約0.0Olmg/kg至約100mg/kg即可。
[0111]本發(fā)明還提供包含編碼本發(fā)明的抗人IL-23R抗體的序列的多核苷酸及包含該多核苷酸的表達(dá)載體。本發(fā)明還提供包含編碼本發(fā)明的抗人IL-23R抗體的重鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸、包含編碼本發(fā)明的抗人IL-23R抗體的輕鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸以及包含上述任何一種多核苷酸或兩種多核苷酸的表達(dá)載體。本發(fā)明的表達(dá)載體只要是在原核細(xì)胞和/或真核細(xì)胞的各種宿主細(xì)胞中表達(dá)編碼本發(fā)明的抗體或其重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)的基因并能夠產(chǎn)生這些多肽的表達(dá)載體則沒(méi)有特別限制。可以列舉例如質(zhì)粒載體、病毒載體(例如，腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒)等。本發(fā)明的表達(dá)載體優(yōu)選含有前述的包含編碼本發(fā)明的抗體的重鏈或輕鏈的序列的多核苷酸，或者含有包含編碼本發(fā)明的抗體的重鏈的序列的多核苷酸和包含編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈的序列的多核苷酸。
[0112]本發(fā)明的表達(dá)載體可以含有編碼本發(fā)明的抗人IL-23R抗體的基因、或者編碼本發(fā)明的抗人IL-23R抗體的重鏈可變區(qū)的基因和/或編碼本發(fā)明的抗人IL-23R抗體的輕鏈可變區(qū)的基因、以及可與該基因功能性連接的啟動(dòng)子。作為用于在細(xì)菌中表達(dá)編碼本發(fā)明的抗體的基因或編碼其重鏈可變區(qū)的基因和/或編碼輕鏈可變區(qū)的基因的啟動(dòng)子，在宿主為埃希氏菌屬細(xì)菌的情況下，可以列舉例如Trp啟動(dòng)子、Iac啟動(dòng)子、recA啟動(dòng)子、XPL啟動(dòng)子、Ipp啟動(dòng)子、tac啟動(dòng)子等。作為酵母中的表達(dá)用啟動(dòng)子，可以列舉例如PH05啟動(dòng)子、PGK啟動(dòng)子、GAP啟動(dòng)子、ADH啟動(dòng)子，作為芽孢桿菌屬細(xì)菌中的表達(dá)用啟動(dòng)子，可以列舉SLOl啟動(dòng)子、SP02啟動(dòng)子、penP啟動(dòng)子等。另外，在宿主為哺乳動(dòng)物細(xì)胞等真核細(xì)胞的情況下，可以列舉SV40來(lái)源的啟動(dòng)子、逆轉(zhuǎn)錄病毒的啟動(dòng)子、熱激啟動(dòng)子等。
[0113]使用細(xì)菌、特別是大腸桿菌作為宿主細(xì)胞的情況下，本發(fā)明的表達(dá)載體可以進(jìn)一步含有起始密碼子、終止密碼子、終止子區(qū)和可復(fù)制單元。另一方面，使用酵母、動(dòng)物細(xì)胞或昆蟲(chóng)細(xì)胞作為宿主的情況下，本發(fā)明的表達(dá)載體可以含有起始密碼子、終止密碼子。另外，這種情況下，可以含有增強(qiáng)子序列、編碼本發(fā)明的抗體或其重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)的基因的5’側(cè)和3’側(cè)的非翻譯區(qū) 、分泌信號(hào)序列、剪接位點(diǎn)、多聚腺苷酸化位點(diǎn)或可復(fù)制單元等。另外，可以根據(jù)目的含有通常使用的選擇標(biāo)記(例如，四環(huán)素耐性基因、氨芐青霉素耐性基因、卡那霉素耐性基因、新霉素耐性基因、二氫葉酸還原酶基因)。
[0114]本發(fā)明還提供導(dǎo)入有編碼本發(fā)明的抗體的基因或編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)的基因和/或編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈可變區(qū)的基因的轉(zhuǎn)化體。這樣的轉(zhuǎn)化體例如可以通過(guò)用本發(fā)明的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞來(lái)制作。作為轉(zhuǎn)化體的制作中使用的宿主細(xì)胞，只要是適合前述的表達(dá)載體且能夠進(jìn)行轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞則沒(méi)有特別限定，可以例示本發(fā)明的【技術(shù)領(lǐng)域】中通常使用的天然細(xì)胞或人工建立的細(xì)胞等各種細(xì)胞(例如，細(xì)菌(埃希氏菌屬細(xì)菌、芽孢桿菌屬細(xì)菌)、酵母(酵母菌屬、畢赤酵母菌屬等)、動(dòng)物細(xì)胞或昆蟲(chóng)細(xì)胞(例如，Sf9)等)。轉(zhuǎn)化可以通過(guò)本身公知的方法進(jìn)行。
[0115]優(yōu)選的是，本發(fā)明的轉(zhuǎn)化體為使用含有包含編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸和包含編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后的宿主細(xì)胞，或者為使用含有包含編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸的表達(dá)載體和含有包含編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后的宿主細(xì)胞。更優(yōu)選的是，本發(fā)明的轉(zhuǎn)化體為使用含有包含編碼前述本發(fā)明的抗體的重鏈的序列的多核苷酸和包含編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈的序列的多核苷酸的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后的宿主細(xì)胞，或者為使用含有包含編碼前述本發(fā)明的抗體的重鏈的序列的多核苷酸的表達(dá)載體和含有包含編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈的序列的多核苷酸的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后的宿主細(xì)胞。
[0116]本發(fā)明還提供本發(fā)明的抗人IL-23R抗體的生產(chǎn)方法，包括使編碼本發(fā)明的抗體的基因或編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)的基因和/或編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈可變區(qū)的基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)的步驟、即包括使用上述轉(zhuǎn)化體的步驟。優(yōu)選的是，該方法中使用的宿主細(xì)胞為使用前述本發(fā)明的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后的宿主細(xì)胞，該表達(dá)載體可以分別含有或者同時(shí)含有包含編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸和包含編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸。
[0117]本發(fā)明的抗人IL-23R抗體的生產(chǎn)中,轉(zhuǎn)化體可以在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基優(yōu)選含有轉(zhuǎn)化體的生長(zhǎng)所需的碳源、無(wú)機(jī)氮源或有機(jī)氮源。作為碳源，可以例示例如葡萄糖、葡聚糖、可溶性 淀粉、蔗糖等，作為無(wú)機(jī)氮源或有機(jī)氮源，可以例示例如銨鹽類(lèi)、硝酸鹽類(lèi)、氨基酸、玉米漿、蛋白胨、酪蛋白、肉膏、大豆柏、馬鈴薯提取液等。另外，也可以根據(jù)需要含有其他營(yíng)養(yǎng)素(例如，無(wú)機(jī)鹽(例如，氯化鈣、磷酸二氫鈉、氯化鎂)、維生素類(lèi)、抗生素(例如，四環(huán)素、新霉素、氨芐青霉素、卡那霉素等)等)。
[0118]轉(zhuǎn)化體的培養(yǎng)通過(guò)本身公知的方法進(jìn)行。培養(yǎng)條例如溫度、培養(yǎng)基的pH和培養(yǎng)時(shí)間可適當(dāng)選擇。例如，在宿主為動(dòng)物細(xì)胞的情況下，作為培養(yǎng)基，可以使用含有約5-20%的胎牛血清的MEM培養(yǎng)基(Science, Vol.122，p.501, 1952)、DMEM 培養(yǎng)基(Virology, Vol.8，p.396，1959)、RPMI1640 培養(yǎng)基(J.Am.Med.Assoc.，Vol.199，p.519，1967)、199 培養(yǎng)基(proc.Soc.Exp.Biol.Med.，Vol.73，p.1, 1950)等。培養(yǎng)基的pH優(yōu)選為約6-8，培養(yǎng)通常在約30-40°C下進(jìn)行約15-72小時(shí)，也可以根據(jù)需要進(jìn)行通氣、攪拌。在宿主為昆蟲(chóng)細(xì)胞的情況下，可以列舉例如含有胎牛血清的Grace’s 培養(yǎng)基(Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, Vol.82，p.8404，1985)等，其 pH 優(yōu)選為約 5 -
8。培養(yǎng)通常在約20-40°C下進(jìn)行15-100小時(shí)，也可以根據(jù)需要進(jìn)行通氣、攪拌。在宿主為細(xì)菌、放線菌、酵母、絲狀真菌的情況下，例如含有上述營(yíng)養(yǎng)源的液體培養(yǎng)基是適當(dāng)?shù)摹?yōu)選PH為5-8的培養(yǎng)基。在宿主為大腸桿菌的情況下，作為優(yōu)選的培養(yǎng)基，可以例示LB培養(yǎng)基、M9培養(yǎng)基(Miller等、Exp.Mol.Genet,冷泉港實(shí)驗(yàn)室，p.431，1972)等。該情況下，培養(yǎng)通常可以在14-43°C下進(jìn)行約3-24小時(shí)，根據(jù)需要同時(shí)可進(jìn)行通氣、攪拌。在宿主為芽孢桿菌屬細(xì)菌的情況下，通?？稍?0-40°C下進(jìn)行約16-96小時(shí)，根據(jù)需要可同時(shí)進(jìn)行通氣、攪拌。在宿主為酵母的情況下，作為培養(yǎng)基，可以列舉例如Burkho I der基本培養(yǎng)基(Bostian, Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, Vol.77，p.4505，1980)，pH 優(yōu)選為 5 -8。培養(yǎng)通常在約20-35°C下進(jìn)行約14-144小時(shí)，也可以根據(jù)需要進(jìn)行通氣、攪拌。
[0119]本發(fā)明的抗人IL-23R抗體可以通過(guò)對(duì)如上所述的轉(zhuǎn)化體進(jìn)行培養(yǎng)而從該轉(zhuǎn)化體中回收，優(yōu)選進(jìn)行分離、純化。作為分離、純化方法，可以列舉例如鹽析、溶劑沉淀法等利用溶解度的方法、透析、超濾、凝膠過(guò)濾、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳等利用分子量差異的方法、離子交換層析、羥基磷灰石層析等利用帶電的方法、親和層析等利用特異的親和性的方法、反相高效液相色譜等利用疏水性差異的方法、等電聚焦等利用等電點(diǎn)差異的方法等。
[0120]以上對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了全面記載，在此提供用于深化理解而參照的特定實(shí)施例，但這些實(shí)施例的目的在于例示，并不限定本發(fā)明。
[0121]實(shí)施例
[0122]關(guān)于使用市售的試劑盒或試劑等的部分，只要沒(méi)有特別說(shuō)明，則依照隨附的操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0123](實(shí)施例1:人和猴IL-23R-小鼠Fe融合蛋白的獲取)
[0124]為了作為用于制作抗IL-23R抗體的抗原和篩選系統(tǒng)材料使用，本發(fā)明人制作了人IL-23R序列的細(xì)胞外部分序列(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1、序列號(hào)I的第24位至第353位氨基酸)與小鼠免疫球蛋白Fe段的融合蛋白。具體而言，通過(guò)PCR法使用引物ED14-1(序列號(hào)2)和ED14-2 (序列號(hào)3)擴(kuò)增人IL-23R的細(xì)胞外部分序列，將其插入到小鼠Fe融合蛋白表達(dá)用載體pFUSE-mIgG2A-Fc2 (InvivoGen公司)的EcoRI和BglII位點(diǎn)，制成小鼠Fe融合IL-23R表達(dá)載體。在此，通過(guò)PCR法擴(kuò)增得到的基因內(nèi)存在引物ED14-1序列內(nèi)和人IL-23R基因序列內(nèi)的兩處EcoRI位點(diǎn)，通過(guò)部分酶切和瓊脂糖凝膠切出得到人IL-23R基因序列內(nèi)的EcoRI位點(diǎn)未被切斷的基因片段，將其插入該表達(dá)載體中。使用基因?qū)朐噭?93fectin(Invitrogen公司)將制作好的載體基因?qū)氲紽reeStyle293細(xì)胞(Invitrogen公司)中，將該細(xì)胞在使用FreeStyle293表達(dá)培養(yǎng)基(Invitrogen公司)的無(wú)血清培養(yǎng)體系中培養(yǎng)后，獲取含有人IL-23R-小鼠Fe融合蛋白的培養(yǎng)上清。使用HiTrapA柱(GE Healthcare Japan公司)和蛋白純化裝置AKTA系統(tǒng)(GE Healthcare Japan公司)從獲取的培養(yǎng)上清中純化出蛋白質(zhì)，用于以下的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于猴IL-23R-小鼠Fe融合蛋白，也使用同樣的方法來(lái)獲取。
[0125](實(shí)施例2:人IL-23R表達(dá)2`93細(xì)胞的獲取)
[0126]為了作為用于抗IL-23R抗體的結(jié)合性試驗(yàn)和抗體獲取的細(xì)胞抗原使用，本發(fā)明人獲取了全長(zhǎng)人IL-23R表達(dá)細(xì)胞。通過(guò)PCR法使用引物AA26-Fw(序列號(hào)60)和引物AA10-4(序列號(hào)61)擴(kuò)增人IL-23R基因全長(zhǎng)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1、序列號(hào)I的全長(zhǎng))，將該基因片段插入克隆載體PCR2.1-T0P0載體(Invitrogen公司)中。確認(rèn)序列后，將該基因片段重組到哺乳類(lèi)細(xì)胞表達(dá)用載體pcDNA3.1載體(Invitrogen公司)中。使用Lipofectamine2000 (Invitrogen公司)將該載體基因?qū)氲饺私⑴囵B(yǎng)細(xì)胞293細(xì)胞中。將該細(xì)胞用含有G418的RPMI1640培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)后，利用有限稀釋法進(jìn)行單克隆化。然后，通過(guò)利用使用熒光色素標(biāo)記的抗人IL-23R抗體(R&D system公司)的流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定篩選出顯示高蛋白表達(dá)的克隆來(lái)獲取人IL-23R表達(dá)細(xì)胞。
[0127](實(shí)施例3-M IL-23R抗體產(chǎn)生雜交瘤的制作)
[0128]為了獲取抗人IL-23R抗體，本發(fā)明人將實(shí)施例1和2中分別獲取的人IL_23R_Fc融合蛋白或人IL-23R表達(dá)細(xì)胞與激起免疫反應(yīng)的佐劑一起對(duì)Veloclmmune小鼠進(jìn)行免疫。對(duì)小鼠進(jìn)行數(shù)次免疫，確認(rèn)血中抗體效價(jià)的升高，進(jìn)行最終免疫。依照常規(guī)方法摘除免疫后的小鼠的脾臟、淋巴結(jié)等來(lái)收集淋巴細(xì)胞，將其與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行細(xì)胞融合，由此制作雜交瘤。制作雜交瘤的有限稀釋樣品，進(jìn)行單克隆化。對(duì)各克隆進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)后，將培養(yǎng)基變更成作為無(wú)血清培養(yǎng)基的CD雜交瘤培養(yǎng)基(Invitrogen公司)，培養(yǎng)約5天。使用蛋白G離心柱(Pro-Chem公司)從所得到的培養(yǎng)上清中純化抗體。[0129](實(shí)施例4=ELISA分析)
[0130]為了測(cè)定抗體的抗原特異結(jié)合活性，本發(fā)明人使用了抗原ELISA。將人或猴IL-23R-Fc融合蛋白以500ng/mL的濃度固相化到Nunc Maxisorp白色384孔板(Maxisorp384plate ；Nunc 公司)上。添加封閉劑(Blocking One ；Nacalai Tesque 公司)并在室溫下靜置I小時(shí)后，用洗滌液(TPBS ;含有0.05%Tween-20的磷酸緩沖生理鹽水(PBS))洗滌2次，制作純化抗體樣品的適當(dāng)稀釋系列并進(jìn)行添加。在室溫下孵育I小時(shí)后，用TPBS洗滌4次，添加用稀釋液稀釋至2000倍的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗小鼠Ig抗體(HRP-rabbit ant1-mouse Ig antibody ;DAK0公司)。在室溫下孵育I小時(shí)后，用洗漆液洗漆 4 次。加入化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑 BM-Chemiluminescence ELISA substrate (POD) (RocheDiagnostics公司),使用EnVision計(jì)數(shù)儀(Perkin Elmer公司)測(cè)定其化學(xué)發(fā)光量。以復(fù)孔對(duì)各抗體進(jìn)行試驗(yàn)，通過(guò)曲線擬合分析EC50。本試驗(yàn)中，作為比較抗體，使用將公知的人源化抗人IL-23R抗體hum20D7 (專(zhuān)利文獻(xiàn)I)的Fe段用小鼠Fe段置換而得到的融合抗體(以下，稱為hum20D7-mFc)。需要說(shuō)明的是，在此將hum20D7制成與小鼠Fe段的融合抗體是因?yàn)楸驹u(píng)價(jià)體系中使用抗小鼠Ig抗體作為第二抗體，通過(guò)抗小鼠Ig抗體識(shí)別小鼠Fe段能夠進(jìn)行活性測(cè)定。
[0131]結(jié)果，確認(rèn)到命名為25-3、30-15、30-16、30-18、32-28、34-58、32-36 的抗體(嵌合抗體)與hum20D7-mFc同樣地具有對(duì)人IL-23R的高結(jié)合活性(表I)。另外，關(guān)于對(duì)猴IL-23R的結(jié)合，hum20D7-mFc不顯示對(duì)猴IL-23R的結(jié)合活性，與此相對(duì)，確認(rèn)到上述7種抗體均對(duì)猴IL-23R具有高結(jié)合活性(表2)。
[0132]表1:抗人IL-23R抗體對(duì)人IL-23R的結(jié)合活性
[0133]
【權(quán)利要求】
1.一種抗人IL-23R抗體，其選自下述(I)-(7)中的任何一項(xiàng): (1)包含由序列號(hào)5所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)7所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體； (2)包含由序列號(hào)9所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)11所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體； (3)包含由序列號(hào)13所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)15所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體； (4)包含由序列號(hào)17所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)19所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體； (5)包含由序列號(hào)21所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)23所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體； (6)包含由序列號(hào)25所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)27所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體；和 (7)包含由序列號(hào)29所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)31所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)的抗人IL-23R抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)5所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)7所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
3.如權(quán)利要求1所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)9所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)11所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
4.如權(quán)利要求1所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)13所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)15所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
5.如權(quán)利要求1所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)17所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)19所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
6.如權(quán)利要求1所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)21所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)23所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
7.如權(quán)利要求1所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)25所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)27所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
8.如權(quán)利要求1所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)29所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈可變區(qū)和由序列號(hào)31所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈可變區(qū)。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體，其中，所述抗體的重鏈恒定區(qū)為人Ig Y I恒定區(qū)。
10.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體，其中，所述抗體的輕鏈恒定區(qū)為人Ig K恒定區(qū)。
11.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體，其中，所述抗體的重鏈恒定區(qū)為人Ig Y I恒定區(qū)，所述抗體的輕鏈恒定區(qū)為人IgK恒定區(qū)。
12.如權(quán)利要求2所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)33所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)35所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
13.如權(quán)利要求3所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)37所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)39所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
14.如權(quán)利要求4所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)41所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)43所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
15.如權(quán)利要求5所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)45所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)47所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
16.如權(quán)利要求6所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)49所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)51所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
17.如權(quán)利要求7所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)53所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)55所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
18.如權(quán)利要求8所述的抗人IL-23R抗體，其包含由序列號(hào)57所示的氨基酸序列構(gòu)成的重鏈和由序列號(hào)59所示的氨基酸序列構(gòu)成的輕鏈。
19.一種多核苷酸，其包含編碼權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗體的重鏈可變區(qū)的序列。
20.一種多核苷酸，其包含編碼權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗體的輕鏈可變區(qū)的序列。
21.—種表達(dá)載體,其包含權(quán)利要求19和/或20所述的多核苷酸。
22.—種用權(quán)利要求21所述的表達(dá)載體進(jìn)行了轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
23.如權(quán)利要求22所述的宿主細(xì)胞，其選自由下述(a)和(b)構(gòu)成的組: (a)用含有包含編碼權(quán)利 要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗體的重鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸和包含編碼該抗體的輕鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸的表達(dá)載體進(jìn)行了轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞；和 (b)用含有包含編碼權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗體的重鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸的表達(dá)載體和含有包含編碼該抗體的輕鏈可變區(qū)的序列的多核苷酸的表達(dá)載體進(jìn)行了轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
24.生產(chǎn)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的抗人IL-23R抗體的方法，其包括:對(duì)權(quán)利要求22或23所述的宿主細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)而使其表達(dá)抗人IL-23R抗體的步驟。
【文檔編號(hào)】C12N15/09GK103459426SQ201280016918
【公開(kāi)日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2012年3月30日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月1日
【發(fā)明者】大堀誠(chéng), 佐佐木孝則, 佐藤照, 田口克成 申請(qǐng)人:安斯泰來(lái)制藥株式會(huì)社