專利名稱：：與fc受體結(jié)合的抗體藥物的藥效測定的制作方法與FC受體結(jié)合的抗體藥物的藥效測定發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及到一種鑒定抗體的方法，該方法適于用作包含抗體的藥物組合物批簽發(fā)的藥效測定方法，尤其適用于申請上述藥物的上市許可。發(fā)明背景當(dāng)生產(chǎn)一種藥物組合物時，僅把原料藥制成藥品是不夠的，得到使用該藥物組合物國家的藥物監(jiān)管機構(gòu)的批準(zhǔn)也很重要。美國的監(jiān)管機構(gòu)是美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)(http:〃www.fda.gov/)。歐洲例如歐洲藥品監(jiān)管局(EMEA)(http:〃www.emea.eu.int/)。評審過程受到嚴(yán)格控制，為了獲得批準(zhǔn)，監(jiān)管機構(gòu)要求藥物研發(fā)人員遞交大量藥物相關(guān)信息。這可能包括關(guān)于藥品藥效及其測定方法的信息。這些藥效測定可以鑒定該藥品、監(jiān)測批次之間的均一性并且確保藥物的穩(wěn)定性，因此這些測定方法應(yīng)該足夠靈敏，可以檢測出影響藥品機制與功能的差異，并因此具有潛的臨床重要性。另外，藥效測定方法與公認(rèn)的該藥品生理/藥理活性具有密切的關(guān)系。一種適當(dāng)?shù)乃幮y定方法應(yīng)該滿足以下基本標(biāo)準(zhǔn)-能再產(chǎn)品規(guī)格內(nèi)測定藥效-具有檢測潛在臨床重要性差異的高靈敏度-與該產(chǎn)品公認(rèn)的生理/藥理活性的作用機制具有密切聯(lián)系根據(jù)以上基本標(biāo)準(zhǔn)選定的藥效測定方法也要滿足以下二級標(biāo)準(zhǔn)-體外和體內(nèi)測定變異性足夠低(達到所需精密度以保證藥品規(guī)格)-具有足夠的穩(wěn)定性(robustness)-可應(yīng)用于高通量分析重組單克隆抗體制備技術(shù)的發(fā)展促進了大量針對疾病靶的單克隆抗體治療用途的研究。全球已有數(shù)個單克隆抗體藥物被批準(zhǔn)投放市場或正在進行臨床研究。一種抗體作為藥物的療效取決于該抗體結(jié)合抗原的能力，但常常抗體FC介導(dǎo)的活性在作用機制中也起著重要作用。確實，盡管一些抗體藥物只是通過該抗體結(jié)合抗原從而阻斷配體與抗原的結(jié)合，但是某些抗體藥物的作用可能還依賴于效應(yīng)器功能，例如FC受體的結(jié)合作用和/或補體激活的誘導(dǎo)作用。扎木單抗(zanolimumab)(也稱為HuMax-CD4)是一種完全人源單克隆抗體，它具有一條IgGl重鏈和一條靶向于人CD4(EP0854917)的kappa型(IgGlK)的輕鏈。在哺乳細(xì)胞(CHO)中生產(chǎn)扎木單抗并經(jīng)親和、離子交換和分子排阻純化。扎木單抗藥品是將該藥物以20mg/ml溶解在pH7.4磷酸鹽緩沖鹽水中制備而成。扎木單抗的作用機制之一是消除和/或滅活CD4+T細(xì)胞。這些可能通過(例如抗體)依賴的細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用、下調(diào)T細(xì)胞表面的CD4表達和/或干擾CD4信號傳導(dǎo)、T細(xì)胞激活和T細(xì)胞增殖完成。所有這些類型的作用機制均依賴于位于Fab片段的扎木單抗抗原結(jié)合部分對CD4抗原的結(jié)合。另外，ADCC和CD4下調(diào)需要扎木單抗的Fc區(qū)域與Fc受體結(jié)合。ADCC誘導(dǎo)已被確認(rèn)為扎木單抗一個重要的作用機制。Zalutumumab(也稱為HuMax-EGFr)是靶向于人EGFr的人源抗體，它有一條IgGl同型重鏈和一條kappa型(IgGlK)(WO02/100348)輕鏈。目前Zalutumumab在哺乳細(xì)胞(CHO)懸浮培養(yǎng)物中生產(chǎn)，使用GS載體系統(tǒng)表達Zalutumumab并用親和層析、離子交換(包括特異性病毒滅活和去除步驟)純化制得。藥品Zaltumumab(20mg/ml)是將該藥物以25mg/miZaltumumab稀釋在含有50mM磷酸鈉、50mM氯化鈉、3%(w/v)甘露醇、0.02%(w/v)聚山梨醇酯80和0.01%(w/v)EDTA的緩沖液中，并將pH調(diào)至6.0。在小鼠中少量HuMax-EGFr受體結(jié)合率也可觀察到抗腫瘤效果，這4艮可能是由于免疫效應(yīng)器機制尤其是ADCC的參與。所以，HuMax-EGFr的作用機制之一ADCC是通過FC.FCR相互作用發(fā)揮的。Fc結(jié)合Fc受體的抗體藥效起著重要作用，因為通常使用生物測定來判斷該作用機制，其中被檢測的作用取決于Fc-Fc受體的結(jié)合。這些測定包括ADCC,需要抗體交聯(lián)的T細(xì)胞激活誘導(dǎo)或抑制，或?qū)Ξa(chǎn)生細(xì)胞因子例如白細(xì)胞介素2(IL-2)的誘導(dǎo)或抑制。然而，這些測定是相對繁瑣的并且變異性高，這是由細(xì)胞培養(yǎng)物或原代細(xì)胞的預(yù)期變異造成的。尤其適原代細(xì)胞會引起變異性這是由供體的免疫狀態(tài)、表達基因的多態(tài)性和細(xì)胞型純度的差異引起的。因此這些生物測定法不是最優(yōu)選的測定批簽發(fā)的方法。因此我們需要一種快速、高效和靈敏的藥效測定方法，該方法與該抗體藥品的作用機制和公認(rèn)的生理/藥理活性密切相關(guān)，該抗體藥品用于藥物組合物生產(chǎn)尤其是包含抗體的藥物成份并且其作用機制依賴于與Fc受體的結(jié)合。發(fā)明概述本發(fā)明提供一種包含F(xiàn)cR結(jié)合肽的藥品的藥效測定方法，其中，藥品FcR結(jié)合肽至少有一種作用機制是通過藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合而介導(dǎo)，其中上述方法包括對藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合的測定。附圖簡述圖1:扎木單抗批產(chǎn)品非還原SDS-PAGE。MEV001、MEV005、MRS-CD4-001、BN078和BOU8是具有不同重鏈糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品。UNG-MRS-CD4是一個脫糖基化扎木單抗批產(chǎn)品(缺乏結(jié)合于抗體FcAsn297的糖類)，M0CK-MRS-CD4是一個偽脫糖基批產(chǎn)品，M90-MRS-CD4和M50-MRS-CD4為混合批產(chǎn)品，分別為90%重鏈糖基化和50%重鏈糖基化(脫糖基化和完全糖基化參比批產(chǎn)品的混合物)。圖2:扎木單抗批產(chǎn)品還原SDS-PAGE。MEVOOl、MEV004、MEV005、MRS-CD4-001、BN078和B0118是具有不同重鏈糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品。UNG-MRS-CD4是一個脫糖基化扎木單抗批產(chǎn)品(缺乏結(jié)合于抗體FcAsn297的糖類)，M0CK-MRS-CD4是一個偽脫糖基化批產(chǎn)品，M90-MRS-CD4和M50-MRS-CD4為混合批產(chǎn)品，分別為90%重鏈糖基化和50%重鏈糖基化(脫糖基化和完全糖基化參比批產(chǎn)品的混合物)。圖3:扎木單抗批產(chǎn)品誘導(dǎo)ADCC的能力。圖3顯示了相對于參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001的相對活性(源于基線(botom)固定曲線的ECso值)和95%置信區(qū)間的幾何均數(shù)。圖4:脫糖基化混合批產(chǎn)品誘導(dǎo)ADCC的能力。參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001、偽脫糖基化批產(chǎn)品M0CK-MRS-CD4和混合批產(chǎn)品(脫糖基化和糖基化GMP#3批產(chǎn)品的混合物)M50-GMP#3-CD4(50%脫糖基化GMP#3)、M70-GMP#3-CD4(30%脫糖基化GMP#3)和M90-GMP#3-CD4(10%脫糖基化GMP#3)。3組實-驗(或見表格2)中一個代表性實驗的結(jié)果顯示了在一定濃度(部分)脫糖基化批產(chǎn)品(單一數(shù)據(jù)點)存在下CD4+T細(xì)胞的特異性溶解。圖4A:將基線設(shè)定為一個固定值采用4參數(shù)對數(shù)擬合進行曲線擬合。圖4B:限定基底水平、頂點水平和坡度，采用4參數(shù)對數(shù)擬合進行曲線擬合。GMP#3是專利批產(chǎn)品。圖5:扎木單抗批產(chǎn)品與板結(jié)合的FcYRIIIaECD176Vhis的結(jié)合。圖5顯示了相對于參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001的相對藥效和95%置信區(qū)間的幾何均數(shù)。MEVOOl、MEV005、BN078和BOU8是具有不同重鏈糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品。M0CK-MRS-CD4是一個偽脫糖基化批產(chǎn)品，M卯-MRS-CD4和M50-MRS-CD4為混合批產(chǎn)品(脫糖基化和完全糖基化參比批產(chǎn)品的混合物)，分別為90%重鏈糖基化和50%重鏈糖基化的。圖6:扎木單抗脫糖基化混合批產(chǎn)品與板結(jié)合的FcyRIIIaECD176Vhis的結(jié)合。參比批產(chǎn)品為MRS-CD4-001,MOCK-MRS-CD4是一個偽脫糖基化批產(chǎn)品，M50-GMP#3-CD4、M70-GMP#3-CD4和M90-GMP#3是混合批產(chǎn)品(脫糖基化和糖基化GMP#3批產(chǎn)品的混合物)。2組實驗(也見表格3的數(shù)據(jù))中一個代表性實驗的結(jié)果顯示了在一定濃度(部分)脫糖基化批產(chǎn)品(三重測定數(shù)據(jù)點)存在下與FcYRHIaECD176V的結(jié)合情況。限定基底水平、頂點水平和坡度，采用4參數(shù)對數(shù)擬合進行曲線擬合。GMP#3是專利批產(chǎn)品。圖7:扎木單抗批產(chǎn)品的重鏈糖基化和與FcyRIIIaECD176VHis結(jié)合能力的關(guān)系。圖6和表格3描述的批產(chǎn)品(從左到右)才艮據(jù)它們的重鏈糖基化含量分類。結(jié)果顯示了相對于母體批產(chǎn)品GMP#3與FcyRIIIaECD176Vhis結(jié)合的相對藥效(2組實驗的平均值士SD)。圖8:扎木單抗批產(chǎn)品誘導(dǎo)ADCC能力與結(jié)合FcyRinaECD176VHis的關(guān)系。表2描述扎木單抗批產(chǎn)品誘導(dǎo)ADCC的相對藥效。圖6和表3顯示了扎木單抗批產(chǎn)品結(jié)合FcyRIIIaECD176VHis的相對藥效，以x-軸和y-軸繪制(相對于母體GMP弁3的藥效)。相關(guān)系數(shù)見曲線圖。圖9:扎木單抗批產(chǎn)品與板結(jié)合的CD4的結(jié)合。圖9顯示了相對于參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001的相對藥效和95%置信區(qū)間的幾何均數(shù)。MEVOOl、MEV005、BN078和BOU8是具有不同重鏈糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品，UNG-MRS-CD4是未糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品，MOCK-MRS-CD4是一個偽脫糖基化批產(chǎn)品，M90-MRS-CD4和M50-MRS-CD4為混合批產(chǎn)品，分別為90%重鏈糖基化和50%重鏈糖基化(脫糖基化和完全糖基化參比批產(chǎn)品的混合物)。圖10:扎木單抗脫糖基化混合批產(chǎn)品與板結(jié)合的CD4的結(jié)合。參比批產(chǎn)品為MRS-CD4-001,MOCK-MRS-CD4是一個偽脫糖基化批產(chǎn)品，混合批產(chǎn)品(脫糖基化和糖基化GMP#3批產(chǎn)品的混合物)M50-GMP#3-CD4(50%脫糖基化GMP#3),M70-GMP#3-CD4(30%脫糖基化GMP#3)和M90-GMP#3(10°/。脫糖基化GMP#3)。2組實驗(也見表格3的數(shù)據(jù))中一個代表性實驗的結(jié)果顯示了在一定濃度(部分)脫糖基化批產(chǎn)品(一式三份測定數(shù)據(jù)點)存在下與CD4的結(jié)合情況。限定基底水平、頂點水平和坡度，采用4參數(shù)對數(shù)擬合進行曲線擬合。GMP約是專利批產(chǎn)品。圖11:扎木單抗抑制IL-2產(chǎn)生的能力。MEV001、MEV005、MRS-CD4-001、BN078和B0118是具有不同重鏈糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品，M0CK-MRS-CD4是一個偽脫糖基化批產(chǎn)品，M90-MRS-CD4和M50-MRS-CD4為混合批產(chǎn)品，分別為90%重鏈糖基化和50%重鏈糖基化(脫糖基化和完全糖基化參比批產(chǎn)品的混合物)。圖12:通過基于AlphaScreenTM的測定進行對數(shù)個扎木單抗批產(chǎn)品FcYRIIIaECD176VHis結(jié)合和CD4結(jié)合的篩選。圖12顯示了相對于參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001的相對藥效和95%置信區(qū)間的幾何均數(shù)。MEV005、BN078和B0118是具有不同重鏈糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品，UNG-MRS-CD4是未糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品，MOCK-MRS-CD4是一個偽脫糖基化批產(chǎn)品，M90-MRS-CD4和M50-MRS-CD4為混合批產(chǎn)品，分別為90%重鏈糖基化和50%重鏈糖基化(脫糖基化和完全糖基化參比批產(chǎn)品的混合物)。圖13:扎木單抗結(jié)合細(xì)胞結(jié)合型FcYRI的能力。圖13顯示了相對于參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001的相對藥效和95%置信區(qū)間的幾何均數(shù)。MEV005、BN078和B0118是具有不同重鏈糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品，UNG-MRS-CD4是未糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品，MOCK-MRS-CD4是一個偽脫糖基化批產(chǎn)品，M90-MRS-CD4和M50-MRS-CD4為混合批產(chǎn)品，分別為90。/。重鏈糖基化和50%重鏈糖基化(脫糖基化和完全糖基化參比批產(chǎn)品的混合物)。圖14:扎木單抗與板結(jié)合的FcyRI的結(jié)合能力。圖14顯示了相對于參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001的相對藥效和95%置信區(qū)間的幾何均數(shù)。MEV001、MEV005、BN078和B0118是具有不同重鏈糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品,，UNG-MRS-CD4是未糖基化的扎木單抗批產(chǎn)品，MOCK-MRS-CD4是一個偽脫糖基化批產(chǎn)品，M90-MRS-CD4和M50-MRS-CD4為混合批產(chǎn)品，分別為90%重鏈糖基化和50%重鏈糖基化(脫糖基化和完全糖基化參比批產(chǎn)品的混合物)。圖15:數(shù)個檢測中扎木單抗批產(chǎn)品誘導(dǎo)ADCC的能力與相關(guān)藥效的關(guān)系。將扎木單抗批產(chǎn)品根據(jù)重鏈糖基化水平和與數(shù)個所列檢測結(jié)果的相關(guān)性進行分類。15A:ADCC測定(圖3)。15B:CD4結(jié)合測定(圖9)。15C:FcyRI結(jié)合測定(圖13和14)。15D:FcyRinaECD176VHis結(jié)合(圖5)。15E:sCD4和FcyRinaECD176VHis結(jié)合(圖12)。圖16:在板結(jié)合的YRHIaECD176VHisELISA中比較兩種FcyRIIIaECD176Vhis來源的CH0-K1SVFc。將兩種不同的Fc7RIIIaECDi76VHis批產(chǎn)品(646-005-EP和655-015-EP)包被到板上并比較這些批產(chǎn)品與HuMax-CD4的結(jié)合情況。圖17:如實施例18中描述的FcyRinaECD176VHis批產(chǎn)品646-005-EP和655-015-EP的非變性電泳。圖18:未處理和脫糖基化FcyRIIIal76V的還原4-10%NupageBis-Tris分析。泳道1:未處理FcYRIIIaECD176VHis批產(chǎn)品646-005-EP;泳道2:脫糖基化FcyRIIIaECD176VHis批產(chǎn)品646-005-EP;泳道3:未處理FcyRIIIaECD176VHis批產(chǎn)品655-015-EP;泳道4;脫糖基化FcyRIIIaECD176VHis批產(chǎn)品655-015-EP。Markers(kDa)的遷移情況顯示在左邊泳道。圖19:未處理和去唾液酸化FcyRinaECD176VHis的還原4-10。/。NupageBis-Tris分析。泳道1:未處理FcyRIIIaECD176VHis批產(chǎn)品655-015-EP;泳道2:去唾液酸化FcyRIIIaECD176VHis批產(chǎn)品403-041-EP。Markers(kDa)的遷移情況顯示在左邊泳道。圖20:未處理和去唾液酸化FcyRIIIaECD176FHis的非還原電泳。泳道l:去唾液酸化FcYRIIIaECD176VHis批產(chǎn)品655-015-EP;泳道2:未處理FcyRniaECD176VHis批產(chǎn)品403-041-EP。指示markers(kDa)的遷移情況顯示在左邊泳道。圖21:在板結(jié)合的FcYRIIIaECD176Vhis結(jié)合ELISA中比較去唾液酸化和未處理的FcyRIIIaECD176VHis。將相同濃度的去唾液酸化FcYRIIIaECD176VHis(批產(chǎn)品403-041-EP)和未處理FcyRinaECD176VHis(655-015-EP)包被到板上并比較扎木單抗與這些批產(chǎn)品的結(jié)合情況。圖22:比較去唾液酸化和未處理FcyRIIIal76V的包被效率。將去唾液酸化和未處理FcyRIIIal76V的系列稀釋物包被到板上，用鼠隱抗-CD16檢測結(jié)合受體。圖23:圖23顯示了抗體HuMax-EGFr的兩個批次產(chǎn)品與FcYRIIIaECD176VHis的結(jié)合曲線(數(shù)據(jù)以平均值士SD表示，n=3),用抗體直接(A)(上組)包被或經(jīng)過his-捕獲(抗-多聚組氨酸)抗體(B)(下組)包被FcyRinaECD176VHis。圖24:扎木單抗下調(diào)CD4+T細(xì)胞的CD4表達。A-CD4表達的劑量-反應(yīng)圖，該表達在與可溶性扎木單抗溫育(在存在或缺乏單核細(xì)胞，使用或不使用IFNy的情況下)18個小時的純化的血CD4+T細(xì)胞中進行。B-CD4表達的劑量反應(yīng)圖，該表達在與可溶性扎木單抗、扎木單抗的F(ab，)2片段或?qū)φ湛贵wHuMab-KLH在THP-1細(xì)胞存在或缺乏的情況溫育18h的CD4+CEM-NKr細(xì)胞中進行。用非竟?fàn)幙?CD4抗體MT-477測定CD4表達。圖25:序列表序列列表筒述SEQIDNo:1-FcyRIaECDHisSEQIDNo:2-Fcy腿aECD176VHisSEQIDNo:3-Fcy腿aECDl76FHisSEQIDNo:4-引物PlSEQIDNo:5-引物P2SEQIDNo:6-引物P3SEQIDNo7-引物P4SEQIDNo8-引物P5SEQIDNo9-引物P6SEQIDNo10-引物P7SEQIDNo11-引物P8縮寫列表ADCC抗體依賴的細(xì)胞毒性作用CHO中國倉鼠卵巢細(xì)胞ELISA酶聯(lián)免疫吸附測定F(ab')2抗體可變結(jié)構(gòu)域的二聚體Fc抗體恒定區(qū)FcRFc受體FcyRIa免疫球蛋白yFc受體I-AFcyRIaECDHis含有C末端His6標(biāo)簽的FcyRIa胞外結(jié)構(gòu)域FcYRIIIa免疫球蛋白yFc區(qū)受體III-AFcyRinal76VFcyRnia的176位是Val,從成熟、加工過的蛋白開始編號，它也被稱為FcyRIII158VFcyRinaECD176FHis具有C末端His6標(biāo)簽和176F多態(tài)性的FcyRIIIa細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域FcyRIIIaECD176VHis具有C末端His6標(biāo)簽和176V多態(tài)性的FcYRIIIa細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域FcyRIII158V見以上FcYRIIIal76V項下的內(nèi)容Fv抗體可變結(jié)構(gòu)域(抗原特異性)IgGl,k含有kappa輕鏈的免疫球蛋白GIL白細(xì)胞介素nk自然殺傷細(xì)胞PBMC外周血單核細(xì)胞PBS磷酸鹽緩沖鹽水PBSC含2。/。(v/v)雞血清的PBSPBST含0.05%(v/v)Tween-20的PBSPBSTC含0.05%(v/v)Tween-20和2%(v/v)雞血清PBSPMN多型核細(xì)胞RT室溫RZPDDeutschesResourcenzentrumfiirGenomforschungSDS-PAGESDS聚丙烯酰胺凝膠電泳TNF腫瘤壞死周子發(fā)明詳述本發(fā)明提供一種適于作為藥物組合物批簽發(fā)的藥效測定的方法，其中該藥物組合物包含可以結(jié)合Fc受體Fc結(jié)合區(qū)的肽。在本申請中這些小肽也可被稱為"Fc受體結(jié)合肽"或"FcR結(jié)合肽"。本發(fā)明提供了一種包含F(xiàn)cR結(jié)合肽的藥品的藥效測定方法，其中，藥品FcR結(jié)合肽至少有一種作用機制是通過藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合介導(dǎo)，其中上述方法包括測定藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。除非另外聲明或與申請相矛盾，本發(fā)明中的肽包括任何合適的肽，它們可以作為多肽和蛋白的同義詞，條件是讀者意識到每種含有各自的氨基酸多聚體的分子之間存在顯著差異，因此形成本發(fā)明的單個實施方案(例如，一個由多條多肽鏈組成的抗體多肽顯著不同于單鏈抗體、小肽免疫粘合素或單鏈免疫肽)。因此，本發(fā)明中的肽應(yīng)該被廣泛地理解為能結(jié)合Fc受體的任何適當(dāng)大小和組成的任何合適地肽(就蛋白質(zhì)分子的氨基酸數(shù)量和相關(guān)支鏈的數(shù)目而言)。另外，除非另外聲明或與申請相矛盾，這里所描述地發(fā)明方法中的肽可能包含非天然產(chǎn)生和/或非L型氨基酸殘基。除非另外聲明或與申請相矛盾，專利中的肽(如果作為多肽和/或蛋白的單個實施例討論)也包含衍生肽分子。簡單地說，本發(fā)明中的衍生物為一個或多個氨基酸殘基被化學(xué)修飾(例如烷化、?；?、酉旨化或酰胺形成物)或與一個或多個非氨基酸的有機和/或無機原子或分子取代基(例如聚乙二醇(PEG)基團)、親脂取代基(通過間隔區(qū)殘基選擇性地與肽的氨基^列或基團例如p-丙氨酸，Y-氨基丁酸(GABA)，L/D-谷氨酸，琥珀酸等相連)、焚光基團、生物素、放射性核素結(jié)合的肽，例如見專利US4766106,US4179337,US4495285和US4609546。除非另外聲明或與申請相矛盾，一個FcR結(jié)合肽也可能包括或替代性地包括非必需、非天然和/或非L型氨基酸殘基。這些氨基酸殘基的非限制實例包括例如2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、P-丙氨酸、|3-氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、2，4-二氨基丁酸、鎖鏈(賴氨)素、2,2'-二氨基庚二酸、2，3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、羥賴酸、別羥脯氨酸、3-羥脯氨酸、4-羥脯氨酸、鎖鏈(賴氨)素、別異亮氨酸、N-曱基甘氨酸、N-曱基異亮氨酸、6-N-曱基賴氨酸、N-甲基纈氨酸、戊氨酸、己氨酸、鳥氨酸和他汀類卣代氨基酸。因此本申請的FcR結(jié)合肽也包括融合蛋白，它可包含任何合適的氨基酸序列或組合序列，該序列能結(jié)合Fc受體的Fc結(jié)合區(qū)并且至少具有一個非同源性和典型的具有足夠非相性的氨基S^列，其中該序列具有一種可檢測生物功能并且/或是融合蛋白特有的，這一特性不僅僅屬于Fc受體特異序列(例如可能是這里描述的抗體)，例如體內(nèi)半衰期的延長、熒光強度的增加、附加表位標(biāo)簽、對某類型細(xì)胞的靶向性增強等等。這些融合蛋白的功能序列可被柔性鏈接肽分隔開。二級序列也可來自細(xì)胞毒素或凋亡小肽。二級序列也可具有"^斷特性。這些序列的實例包括那些來源于易顯色的酶的序列，例如辣根過氧化物酶。FcR結(jié)合肽也包括能結(jié)合Fc受體的Fc結(jié)合部分的肽，該肽與治療實體綴合。例如，這樣的治療實體包括細(xì)胞毒素、化療藥物、免疫抑制劑或放射性同位素。治療實體不必限定為傳統(tǒng)化學(xué)治療藥物，但可能也包括具有所需生物活性的蛋白或多肽。這些蛋白可能包括，例如，具有酶活的毒素或它的活性片段，例如相思豆毒素、蓖麻毒素A、假單胞菌外毒素或白喉毒素；蛋白例如胂瘤壞死因子或干擾素i;或生物反應(yīng)修飾劑例如淋巴因子、白介素-l(IL-l)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)或其它生長因子和分離自線粒體的凋亡誘導(dǎo)蛋白。它也可能是細(xì)胞表面具有活性的藥物，例如具有磷脂酶活性的磷脂酶C。FcR結(jié)合肽也包括與下列物質(zhì)綴合的FcR結(jié)合肽；例如放射性同位素、放射性核素、酶(例如用于檢測的酶、辣根過氧化物酶、P-半乳糖普酶、焚光素酶、堿性磷酸酶、葡萄糖過氧化物酶等)、酶的催化底物、輔因子、熒光標(biāo)記(例如熒光素、熒光異硫氰酸鹽、堿性蕊香紅、丹磧酰氯、鑭磷和類似的物質(zhì)等，還有^Eu標(biāo)記等、異硫氰酸鹽標(biāo)記、藻紅蛋白標(biāo)記、藻青蛋白標(biāo)記、鄰苯二醛標(biāo)記或熒光胺標(biāo)記或等)、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記(例如苯巴比妥標(biāo)記、異苯巴比妥、芳香吖啶酯標(biāo)記、。米唑標(biāo)記、吖"定鹽標(biāo)記、草酸酯標(biāo)記、熒光素標(biāo)記、焚光素酶標(biāo)記、水母發(fā)光蛋白標(biāo)記等)、肽標(biāo)簽(例如可被第二報告基因識別的預(yù)定多肽表位，例如亮氨酸拉鏈配對序列、融合抗體的結(jié)合位點、金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域、抗原決定表位標(biāo)簽等)、磁性珠、核酸或核酸相關(guān)分子(例如核糖核酸酶、反義核酸、抑制RNA分子(例如siRNA分子)、適體、核糖酶、三聯(lián)分子、外部引導(dǎo)序列、免疫抑制核酸、表達腫瘤抑制基因的表達盒、抗癌疫苗、抗癌細(xì)胞因子、凋亡因子或一個或多個細(xì)胞毒性蛋白)、核酸酶、激素、免疫調(diào)節(jié)劑、螯合劑、硼化合物、光敏試劑、染料等。FcR結(jié)合肽也包括含有一個或多個》文射標(biāo)記氨基酸或自旋標(biāo)記分子的FcR結(jié)合肽。多肽放射性標(biāo)記的非限制性實例包括3！1、"C、FcR結(jié)合肽也包括交聯(lián)FcR結(jié)合肽衍生物。例如，交聯(lián)衍生物可由兩個或多個抗體交聯(lián)產(chǎn)生，至少其中一個能結(jié)合到Fc受體的Fc結(jié)合區(qū)(同一種類型或不同類型，例如產(chǎn)生雙特異性抗體)。如果肽類似物能結(jié)合Fc受體的Fc結(jié)合區(qū)，本發(fā)明方法也能用于藥效測定。因此這些肽類似物也包括在FcR結(jié)合肽中。藥品是含有治療作用藥物的組合物，將該組合物給予需要藥物治療的病人。在一個實施方案中，所述藥品是含有抗體的藥品，例如重組生產(chǎn)的抗體藥物。對于重組抗體藥物而言，重組抗體藥物最初在宿主細(xì)胞中產(chǎn)生，經(jīng)過重組DNA技術(shù)的細(xì)胞融合、收獲、純化抗體并配制成抗體藥物。本
技術(shù)領(lǐng)域：
眾所周知生產(chǎn)抗體細(xì)胞類型的選才奪、修飾酶(例如糖類轉(zhuǎn)移酶)的共轉(zhuǎn)染和培養(yǎng)和/或工藝條件的不同可能影響所獲得抗體的藥效。重組肽的生產(chǎn)也同樣。重組抗體的收獲、純化和配方方法在工藝上是已知的，可能包含一步或更多步驟例如凈化、濃縮、過濾和色語層析(例如分子排阻和離子交換層析)。除了藥物以外，藥品還包含任何數(shù)量的其他例如在純化過程中添加的成份，這些成份應(yīng)當(dāng)是藥用上可接受的，例如載體、稀釋劑、佐劑和輔料。藥用載體或稀釋劑還有任何其他已知佐劑和輔料的實例都是本領(lǐng);或已^口的，例3口Remington(TheScienceandPracticeofPharmacy,19thEdition,Gennaro，Ed"MackPublishingCo"Eastern,PA，1995)中乂>開的物質(zhì)。本發(fā)明的抗體指的是免疫球蛋白分子，免疫球蛋白分子片段或它們的衍生物，它們能在特定的生理條件下特異性地與抗原結(jié)合顯著較長的時間，例如半衰期至少達到約30min，至少約45min，至少約lh，至少約2h，至少約4h,至少約8h，至少約12h，約24h或更多，約48h或更多，約3，4，5,6,7或更多天等或任何其他相關(guān)功能-確定期(例如足夠誘導(dǎo)、促進、增強和/或調(diào)節(jié)與抗體結(jié)合抗原相關(guān)的生理反應(yīng)的時間)和與Fc受體結(jié)合的能力。免疫球蛋白指一類結(jié)構(gòu)相關(guān)的糖蛋白，它包含兩對多肽鏈，一對低分子量輕鏈(L)和一對重鏈(H)，通常這四條鏈由二硫鍵聯(lián)接。免疫球蛋白結(jié)構(gòu)已經(jīng)被清楚地闡述，例如見《基礎(chǔ)免疫學(xué)》第7章(Paul，W.,ed.,第2版，Raven出版社,紐約(1989))。簡單地說，通常每條重鏈由一個重鏈可變區(qū)(這里簡稱為VH)和一個重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒定區(qū)通常由三個結(jié)構(gòu)域CH1、Ch2和CH3組成。每條輕鏈特通常由一個輕鏈可變區(qū)(這里簡稱為VJ和一個輕鏈恒定區(qū)組成。輕鏈恒定區(qū)通常由一個結(jié)構(gòu)域CL組成。VH和VL進一步細(xì)分為高度可變區(qū)(或者是在序列上高度可變和/或形成結(jié)構(gòu)限定環(huán)的高度可變區(qū))，也稱為互補決定區(qū)(CDRs)，與更保守的框架區(qū)(FRs)交替排列。每個VH和Vl通常由三個CDRs和四個FRs組成，從氨基端到羧基端按下列順序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4(見Chothia和Lesk的J.Mol.Biol.巡901-917(1987))。通常這個區(qū)域的氨基酸殘基的編號是按照以下文獻中的方法進行Kabat等，《免疫學(xué)相關(guān)關(guān)蛋白序歹寸(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest)》，第5版，公眾健康服務(wù)(PublicHealthService),國家健康研究所(NationalInstitutesofHealth),Bethesda，MD.(1991)(在Kabat中或根據(jù)Kabat例如"可變結(jié)構(gòu)域殘基的編號"這樣的術(shù)語指重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的編號系統(tǒng))。使用這種編號系統(tǒng)，與縮短或插入可變結(jié)構(gòu)域FR或CDR相對應(yīng)，一個肽的實際線性氨基酸序列可能包含更少或額外氨基酸。例如，重鏈可變結(jié)構(gòu)域可能包括VHCDR2第52位氨基酸殘基之后插入的單個氨基酸(根據(jù)Kabat命名為殘基52a)和在重鏈FR氨基酸殘基82之后插入的氨基酸(例如根據(jù)Kabat命名為殘基82a,82b和82c等)。可以使用"標(biāo)準(zhǔn)，，Kabat編號序列通過對該抗體同源序列區(qū)域進行調(diào)整來確定某一抗體的Kabat殘基編號。在一個抗體中，免疫球蛋白分子的重鏈、輕鏈可變區(qū)包含一個與抗原相互作用(Fv片段)的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)(.Abs)可能介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，包括通過Fc受體和經(jīng)典補體系統(tǒng)的第一補體(Clq)作用的各種免疫系統(tǒng)細(xì)胞(例如效應(yīng)器細(xì)胞)。本發(fā)明使用的抗體可能是雙特異性抗體或類似的分子。確實，雙特異性抗體和其類似物除了與原始抗原的一部分結(jié)合之外還可能與任何適當(dāng)?shù)陌悬c結(jié)合，只要它們保留了能與Fc受體結(jié)合的部分力。如上所述，除非另外說明或與本申請內(nèi)容相矛盾，這里的抗體包括保留了特異性結(jié)合抗原和Fc受體能力的一種抗體的片段、衍生物、變異體(包含缺失變異體)。此外，雖然Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域和VH是由兩個獨立的基因編碼，但可以通過重組方法使用可以將他們連接成單個蛋白鏈的合成連接肽將這兩個結(jié)構(gòu)域是融合，在該蛋白中VL和VH配對形成單價分子(稱作單鏈抗體或單鏈Fv(scFv),見Bird等，Science里，423-426(1988)和Huston等，PNASUSA並，5879-5883(1988))。除非另外說明或與本申請內(nèi)容相矛盾，這樣的單鏈抗體也屬于抗體范疇。單鏈抗體的其它形式例如專利WO2005037989中描述的分子也屬于抗體范疇，它們共同并且獨立地成為本發(fā)明地獨特之處，顯示出不同的生物特性和效用。應(yīng)當(dāng)理解地是抗體也廣泛地包括多抗、單抗、例如嵌合抗體、人源化抗體、人源抗體和抗體樣多肽?？贵w可以指特異性同型抗體，重鏈恒定區(qū)基因編碼的一類免疫球蛋白例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM。每個同型抗體具有獨特的氨基酸序列和具有一套可將它們彼此區(qū)別開來地的同型抗原表位。一種抗體的療效是通過抗體的高度可變區(qū)結(jié)合與抗原結(jié)合和抗體Fc區(qū)與Fc受體結(jié)合實現(xiàn)地。治療用肽可能也通過與Fc受體結(jié)合發(fā)揮治療作用。Fc受體屬于免疫球蛋白恒定區(qū)具有某些特定氨基酸的受體家族。每個細(xì)胞的受體表達情況依賴于受體類型。所有種類的免疫球蛋白受體已經(jīng):故闡明。它們凈皮稱為FcyR(IgG類)、FcaR(IgA類)和FcsR(IgE類)。根據(jù)與IgG結(jié)合的親和力和與IgG同型結(jié)合的相對親和力已經(jīng)鑒定出多種FcyRs;更多FcyR受體方面的信息見vanSorgeNM等，TissueAntigens,a(3)，189-202(2003)。本發(fā)明4吏用的Fc受體可能是全長Fc受體或保留了與Fc區(qū)結(jié)合能力的片段，如胞外結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明使用的Fc受體也可能是任何同種型免疫球蛋白或其突變體的野生型Fc受體，其功能與Fc受體的功能相關(guān)，F(xiàn)c受體結(jié)合肽在體內(nèi)與其結(jié)合。本發(fā)明使用的Fc受體也可能是一種肽，它可能不是天然Fc受體(或片段或其衍生物)，這種肽可以與抗體Fc部分的Fc受體結(jié)合區(qū)域結(jié)合，其中FcR結(jié)合肽與Fc結(jié)合肽的結(jié)合內(nèi)Fc受體的功能相關(guān)，在體內(nèi)FcR結(jié)合肽與其結(jié)合。本發(fā)明使用的Fc受體可能如實施例部分描述的由宿主細(xì)胞瞬時表達產(chǎn)生或由穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系或該
技術(shù)領(lǐng)域：
任何其它的已知方法生產(chǎn)。他們也可能存在于細(xì)胞表面，例如一種真核細(xì)胞，例如用表達具有穿膜結(jié)構(gòu)域Fc受體核酸轉(zhuǎn)染的酵母細(xì)胞或哺乳動物細(xì)胞。這里的"宿主細(xì)胞"(或重組"宿主細(xì)胞")意指轉(zhuǎn)入重組表達載體的細(xì)胞。應(yīng)當(dāng)理解的是這一術(shù)語不僅僅指特定受體細(xì)胞，也指這些細(xì)胞的子代。由于突變或環(huán)境影響后代細(xì)胞可能發(fā)生某些變異，這樣的子代細(xì)胞可能不與母細(xì)胞完全相同，但仍屬于這里使用的"宿主細(xì)胞"范疇。重組宿主細(xì)胞包括轉(zhuǎn)染哺乳細(xì)胞，例如CHO細(xì)胞、NS/0細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。如這里所示，含有肽(取決于其募集表達Fc受體細(xì)胞的作用機制)的藥品與Fc受體結(jié)合的能力與當(dāng)將該肽藥品給予需要的病人時的療效密切相關(guān)。一種藥品的藥效時在一種特異性檢測中活性的量度，該檢測與療效已^皮^r測的該藥品的參比標(biāo)準(zhǔn)的活性相關(guān)。對于肽，(例如抗體)，尤其是通過與Fc受體結(jié)合發(fā)揮作用，依據(jù)本發(fā)明的某種方法適于測定肽藥品藥效，因為肽與Fc受體的結(jié)合直接指明了該肽的作用機制。因此使用本發(fā)明提供的方法能在不使用繁瑣的測定方法的條件下測定FcR結(jié)合肽的藥效，例如在測定IL-2的產(chǎn)生或ADCC的i秀導(dǎo)作用時，對藥效的測定是根據(jù)基于細(xì)胞檢測的FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合效果而測定的，本發(fā)明使用的方法僅通過測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合作用來測定藥效。本發(fā)明也提供了包含F(xiàn)cR結(jié)合肽的藥品的一種藥效測定方法，本方法包括「i)測定參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合作用；ii)測定藥品FcR結(jié)合肽與上述Fc受體的結(jié)合作用；和iii)比較步驟ii)中的FcR結(jié)合與步驟i中的)FcR結(jié)合，使用比較得到的信息來評價藥品藥效。其中a)步驟ii)的Fc受體結(jié)合與步驟i)的Fc受體結(jié)合的測定方法相同，b)藥品FcR結(jié)合肽的至少有一種作用機制是通過FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合來介導(dǎo)，c)其中參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽和藥品FcR結(jié)合肽是相同F(xiàn)cR結(jié)合分子的兩種不同制劑。本方法適于分析不同批次特定FcR結(jié)合肽的生產(chǎn)。比較藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合與參考標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽和Fc受體的結(jié)合，藥品FcR結(jié)合肽的治療效果是通過其具有與參考標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽相同的或類似程度的與Fc受體的結(jié)合能力來評價的。參考標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽的藥效也可能通過使用其它方法檢測，例如用基于細(xì)胞的方法或?qū)L-2產(chǎn)生的抑制，以確定參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽確實具有期望的治療效果。根據(jù)本專利，參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽的FcR結(jié)合曲線適于指示該參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽核任何表現(xiàn)出與參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽相同的或大致相似的FcR結(jié)合曲線的任何FcR結(jié)合肽。藥品FcR結(jié)合肽的FcR結(jié)合曲線與參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽的FcR結(jié)合的相異程度可以在個案的基礎(chǔ)上確定，例如與適當(dāng)?shù)谋O(jiān)管機構(gòu)合作確定。為了FcR結(jié)合測定方法的可靠性和一致性，藥品FcR結(jié)合肽和參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽的FcR結(jié)合應(yīng)該在同一個測定中進行，例如本文其它地方描述的測定方法。參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽的結(jié)合測定一般是先建立一個之后的任何FcR結(jié)合肽批產(chǎn)品都可以與之比較的標(biāo)準(zhǔn)。然而，參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽的結(jié)合測定也可能與藥品FcR結(jié)合肽的FcR結(jié)合測定同時進行或之后進行。本發(fā)明也提供了一種生產(chǎn)包含F(xiàn)cR結(jié)合肽的藥物組合物的方法，該方法包括a)生產(chǎn)包含所述FcR結(jié)合肽的藥品b)用上述方法測定包含F(xiàn)cR結(jié)合肽的藥品的藥效；c)使用步驟b)獲得的信息作為評價藥品是否可以作為藥物組合物來使用的部分評價依據(jù)。藥品生產(chǎn)可以用任何方法，包括所需要的和/或適于藥品和/或相關(guān)小肽的方法。然后用^r測藥品肽與Fc受體結(jié)合的方法測定藥品。上述方法的測定結(jié)果應(yīng)作為藥品是否可以作為藥物組合物來使用的一個指標(biāo)，例如，當(dāng)需要注射藥品時，該藥品是否達到這一國家監(jiān)管機構(gòu)i殳定可以注射給病人的標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明也提供上述方法，其中上述方法是作為將某種藥品作為藥物組分銷售時進行上市許可申請中的一部分。本發(fā)明也提供一種申請包含F(xiàn)cR結(jié)合肽的藥品的上市許可的方法，該方法包括對上述測定藥品FcR結(jié)合肽藥效的方法進行描述。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明對包含F(xiàn)cR結(jié)合肽的藥品進行的藥效測定用于批簽發(fā)的藥效測定。對藥品的連續(xù)生產(chǎn)可以得到不同批次的作為藥品的產(chǎn)品。生產(chǎn)的一個關(guān)^:特征是確保不同批次藥品達到相同標(biāo)準(zhǔn)。通常這個標(biāo)準(zhǔn)一般與監(jiān)管機構(gòu)協(xié)作設(shè)定。一般對每批產(chǎn)品都進行檢測并用足夠數(shù)量的不同檢測方法檢驗來確保該批產(chǎn)品質(zhì)量足以被批準(zhǔn)上市。這些檢測方法之一可能是，而且經(jīng)常是測定藥品是否達到要求的藥效藥效測定。對于由重組肽組成的藥品，例如重組抗體，它們的藥效常依賴于重組生產(chǎn)肽的質(zhì)量。對于通過與Fc受體結(jié)合介導(dǎo)其作用的抗體，該抗體在這方面的質(zhì)量常依賴于抗體Fc部分的糖基化程度。然而，測定抗體Fc部分糖基化方法和其它已知的直接或間接的藥效測定方法都非常繁瑣或在生產(chǎn)過程中不能穩(wěn)定地有效可信地利用，例如測定藥品激發(fā)ADCC能力的方法或測定T細(xì)胞信號傳導(dǎo)的方法(例如測定活化標(biāo)記物的上調(diào)和/或自分泌因子的增殖和產(chǎn)生)。然而，如其它部分所述，本發(fā)明提供的方法適合用于測定抗體藥品的藥效，因此適合用于批簽發(fā)的藥效測定。在一個實施方案中，F(xiàn)cR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合用以下方法來測定(i)使藥品樣品與Fc受體接觸足夠長時間使FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合(ii)檢測FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合的數(shù)量在進一步的實施方案中，使用定向于FcR結(jié)合肽的檢測抗體來檢測，其中，檢測抗體是標(biāo)記抗體。在一個實施方案中，用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)檢測FcR結(jié)合肽((例如抗體))與Fc受體的結(jié)合，見MarguliesD.H.199.Inductionofimmuneresponses.InCurrentProtocolsinImmunology(Coligan，J.E.，Kruisbeek，A.M.,Margulies,D.H.,Shevach，E.M.,Strober,W"eds.pp2,1.2-2.1.20JohnWiley&Sons,NewYork)。在一個實施方案中，用AlphaScreenTM測定FcR結(jié)合肽((例如抗體))與Fc受體的結(jié)合。簡單地說，用受體珠固定FcR蛋白，用供體珠包被相關(guān)抗原(例如sCD4)?？梢允褂貌煌幌到y(tǒng)，受體珠和供體珠可以互換。受體珠和供體珠大小接近(約〈200nm)以使被檢測抗體與Fc受體和抗原生物性結(jié)合。在680nm處激發(fā)時供體珠的光每文劑將環(huán)境氧(ambientoxygen)轉(zhuǎn)換為單線態(tài)。單線態(tài)氧分子擴散出與受體珠上的二曱基瘞吩衍生物反應(yīng)形成化學(xué)發(fā)光。化學(xué)發(fā)光活化受體珠上的熒光基團，在520nm-620nm處產(chǎn)生光輻射。(http:〃www.perkinelmer.co.ip/tech/techIs/protocolcollection/asc-001.pdf)。在一個實施方案中，使用放射免疫測定FcR結(jié)合肽((例如抗體))與Fc受體的結(jié)合(Cooper,H.M.,andPaterson，Y.Determinationofthespecificantibodytiter.InCurrentProtocolsinMolecularBiology(Ausubel，RM.，Brent,R.，Kingston,R.E.，Moore,D.D.,Seidman,J.G.,Smith,J.A，andStruhl，K，eds.)ppll.17,1-11.17.13JohnWiley&Sons,NewYork,1993)。在一個實施方案中，使用BIAcore測定FcR結(jié)合肽((例如抗體))與Fc受體的結(jié)合。BIAcore的工作原理是表面等離子體共振(surfaceplasmonresonance,SPR)，它使得能夠測定表面折光指數(shù)的變化。簡單地說，將一種相互作用劑(配體例如Fc受體)固定于感受器芯片的表面。使含有潛在結(jié)合配偶體的溶液(藥品抗體)通過固定化的表面，可以通過表面折光指數(shù)隨時間的變化觀查結(jié)合情況(反應(yīng)單位(RU))(D.G.MyszkaandR.L.Rich,Implementingsurfaceplasmonresonancebiosensorsindrugdiscovery,Pharm.Sci.Technol.Today2,310"317(2000)。在一個實施方案中，使用Akubio聲學(xué)生物感受器測定FcR結(jié)合肽((例如抗體))與Fc受體的結(jié)合(更多信息見www.akubio.com/)。在一個實施方案中，使用FMAT測定FcR結(jié)合肽((例如抗體))與Fc受體的結(jié)合，例如FLISA(焚光連接免疫吸附測定)。簡單地說，用珠固定FcR蛋白(例如含有生物素化FcR的抗生物素蛋白鏈菌素珠)，再加入抗體，用Cy5綴合抗IgG檢測，用FMAT讀出數(shù)據(jù)?？梢?吏用不同的包^皮和;險測系統(tǒng)(Miraglia，S.etal,JBiomolScreen.4,193-204(1999)。在一個實施方案中，用DELFIA測定FcR結(jié)合肽((例如抗體))與Fc受體的結(jié)合。筒而言之，在DELFIA測定中，DELFIA也稱作時間-分辨(time-resolved)焚光免疫測定，將抗體(例如使用抗人IgG)結(jié)合在微量滴定板上，通過加入生物素化FcR測定FcR結(jié)合，例如用Eu-(銪)標(biāo)記地抗生物素蛋白鏈菌素檢測。在用DelfiaFluorometer例如VICTOR儀器計數(shù)前用強化溶液進行強化。VICTOR儀器采用非常廣泛的技術(shù)包括熒光、發(fā)光、時間-分辨熒光、焚光極化和UV吸收對蛋白進行直接定量?？梢允褂枚喾N選擇和組合。VICTOR3多標(biāo)記微量板讀數(shù)器用于定量測定細(xì)胞和微生物學(xué)測定、結(jié)合研究和DELFIA測定中的光發(fā)射或光吸收標(biāo)記(http:〃www.￡mi-inc.com/BioTechLab/Wallac%20Delfia%201234%20Fluorometer.htm)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽((例如抗體))的一種作用機制是誘導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)。ADCC是一個免疫反應(yīng)，其中FcR結(jié)合肽((例如抗體))通過包被華巴細(xì)胞，使它們易于被包括但不限于NK細(xì)胞、PMN或單細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的免疫細(xì)胞誘導(dǎo)裂解。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽((例如抗體))的一種作用機制是通過例如內(nèi)化、脫落，加帽或其它形式的可以影響FcR交聯(lián)地改變細(xì)胞表面上的受體重排誘導(dǎo)下調(diào)靶受體的表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽((例如抗體))的一種作用機制是通過募集自然殺傷細(xì)胞的介導(dǎo)來調(diào)節(jié)。自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)是對抗反應(yīng)和消滅另一種細(xì)胞的細(xì)胞，對該細(xì)胞沒有預(yù)先致敏作用，在某些下可能不必識別特異抗原。然而，NK細(xì)胞可能也通過抗體Fc區(qū)被活化來誘導(dǎo)ADCC，F(xiàn)c區(qū)的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域于細(xì)胞表面的抗體結(jié)合。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的作用機制是通過NK細(xì)胞誘導(dǎo)ADCC起作用的。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一個與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)結(jié)合的Fc受體在NK細(xì)胞上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一個作用^U制是通過募集多形核白細(xì)胞(PMN)介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一個作用機制是通過經(jīng)PMNs誘導(dǎo)ADCC介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一個作用機制是通過PMN脫粒誘導(dǎo)調(diào)節(jié)的。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一個作用機制是通過經(jīng)PMN誘導(dǎo)的吞噬作用介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一個在體內(nèi)與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)結(jié)合的Fc受體在PMNs上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的作用機制是誘導(dǎo)血小板的聚集。在本發(fā)明的一個實施方案中，F(xiàn)cR結(jié)合肽的作用機制是通過募集血小板介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一個在體內(nèi)與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)結(jié)合Fc的受體在血小板上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的治療活性是通過募集自然殺傷細(xì)胞和/或T細(xì)胞介導(dǎo)的。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一種在體內(nèi)與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)結(jié)合Fc的受體在自然殺傷細(xì)胞和/或T細(xì)胞中表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是通過誘導(dǎo)免疫負(fù)荷物的清除。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是通過募集單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞來介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一種與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)在體內(nèi)結(jié)合的Fc受體在單細(xì)胞或巨噬細(xì)胞上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是誘導(dǎo)抗體應(yīng)答的下調(diào)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是通過募集B細(xì)胞介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一個與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)在體內(nèi)體內(nèi)結(jié)合的Fc受體在B細(xì)胞上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是誘導(dǎo)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞效應(yīng)器功能的抑制。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是通過募集單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)的。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一種在體內(nèi)與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)結(jié)合的Fc受體在單細(xì)胞或巨噬細(xì)胞上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一種在體內(nèi)與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)結(jié)合的Fc受體在單細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是誘導(dǎo)吞噬作用。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是通過募集多形核白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一個在體內(nèi)與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)結(jié)合的Fc受體在多形核白細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是通過單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞對吞噬作用的誘導(dǎo)來調(diào)節(jié)的。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一種在體內(nèi)與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)結(jié)合的Fc受體在單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一個作用機制是誘導(dǎo)交聯(lián)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一個作用機制是通過細(xì)胞和/或抗體的交聯(lián)作用來介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一個作用機制是誘導(dǎo)免疫受體基于酪氨酸的活化基序的正向信號傳導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一個作用機制是通過募集骨髓細(xì)胞、T細(xì)胞和/或血小板介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一種與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)在體內(nèi)結(jié)合的Fc受體在骨髓細(xì)胞，T細(xì)胞和/或血小板上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是誘導(dǎo)經(jīng)普通y,p,;鏈的正向信號傳導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是通過募集骨髓瘤細(xì)胞，多形核單細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞或T細(xì)胞介導(dǎo)。在本發(fā)明的一個實施方案中，至少有一種在體內(nèi)與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)結(jié)合的Fc受體在骨髓瘤細(xì)胞，多形核細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞或T細(xì)胞上表達。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是誘導(dǎo)免疫受體基于酪氨酸的抑制基序的反向信號傳導(dǎo)。在一個實施方案中，藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)的一種作用機制是通過募集B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和/或單核細(xì)胞介導(dǎo)。在一個實施方案中，至少有一種與藥品FcR結(jié)合肽(例如抗體)在體內(nèi)結(jié)合的Fc受體在B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和/或單核細(xì)胞上表達。在一個實施方案中，F(xiàn)c受體是FcrRIa受體或及其保留與Fc區(qū)域結(jié)合能力的片段，例如胞外結(jié)構(gòu)域。網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和單核巨噬細(xì)胞包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞組成性地表達FqRIa受體，多形核中性白細(xì)胞能誘導(dǎo)FcYRIa受體的表達。在一個實施方案中，F(xiàn)c受體是FcyRIIa受體或及其保留與Fc區(qū)域結(jié)合能力的片段，如胞外結(jié)構(gòu)域。FcyRIIa受體是數(shù)個已知的FcYRIIa受體的亞型之一，F(xiàn)cyRIIa是分布最廣泛的同型受體，它幾乎表達在所有骨髓瘤細(xì)胞上包括血小板。在一個實施方案中，F(xiàn)c受體是FcYRIIb受體或及其保留了與Fc區(qū)域結(jié)合能力的片段，例如胞外結(jié)構(gòu)域。FcYRIIb受體的表達限制于巨嗟細(xì)月包和B細(xì)月包上。在一個實施方案中，F(xiàn)c受體是FcyRIIc受體或及其保留了與Fc區(qū)域結(jié)合能力的片段，例如胞外結(jié)構(gòu)域。Fc7RIIc受體表達在NK細(xì)胞上。在一個實施方案中，F(xiàn)c受體是FcyRIIIa受體或及其保留了與Fc區(qū)域結(jié)合能力的片段，例如胞外結(jié)構(gòu)域。在進一步的實施方案中，F(xiàn)c丫RIII受體是一種FcyRinal76V受體或及其保留了與Fc區(qū)域結(jié)合能力的片段，例如胞外結(jié)構(gòu)域。FcyRIIIa受體是兩個已知的FcyRIII受體的亞型之一。FcYRIIIa存在于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞和Y/ST細(xì)胞上。FcYRIIIa在176位存在遺傳多態(tài)性(Phe或Val)。這種變異體Fc7RIIIal76V(也稱為FcyRini58V，從成熟，加工蛋白的預(yù)期起點編號)見KoeneHR等.，Blood1109-1114(1997)和WuJ,等,，JClinInvest.巡，1059-1070(1997)。在一個實施方案中，F(xiàn)c受體是FcYRIIIbNA1受體或及其保留了與Fc區(qū)域結(jié)合能力的片段例如胞外結(jié)構(gòu)域。在一個實施方案中，F(xiàn)c受體是FcYRIIIbNA2受體或及其保留了與Fc區(qū)域結(jié)合能力的片段例如胞外結(jié)構(gòu)域。中性白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞組成性地表達FcyRIIIb受體。在一個實施方案中，F(xiàn)c受體是FcyRii受體或及其保留了與Fc區(qū)域結(jié)合能力的片段例如胞外結(jié)構(gòu)域。FcyRii受體廣泛地分布表達在內(nèi)皮細(xì)胞上。在本發(fā)明的一個實施方案中，依據(jù)發(fā)明的方法中應(yīng)用的Fc受體是由一種制備方法制備得到的，該制備方法中包括的制備步驟可以得到與不包含這一步驟的制備方法制備得到的類似FC受體相比N連接糖基化上的唾液酸減少的Fc受體?？捎枚喾N方法進行脫唾液酸化。例如該Fc受體可以由唾液酸化機制缺陷的宿主細(xì)胞重組表達制備。在這種唾液酸缺陷細(xì)胞進行多肽表達(一般具有一定程度唾液酸糖基化)可以得到比同種類型的非唾液酸化缺陷細(xì)胞(非缺陷唾液酸化機制細(xì)胞)產(chǎn)生的多肽N連接糖基化上唾液酸更少的多肽產(chǎn)品。唾液酸缺陷細(xì)胞實例包括例如唾液酸轉(zhuǎn)移酶缺陷表達細(xì)胞(例如CHOLec2細(xì)胞)、唾液酸化的受體單糖如半乳糖表達缺陷細(xì)胞(例如CHOLecl和CHOLecl9細(xì)胞)或唾液酸合成酶例如UDP-GlcNAc-2差向異構(gòu)酶表達缺陷的細(xì)胞(例如CHOLec3細(xì)胞)。其它干擾技術(shù)例如RNAi也能用于產(chǎn)生與唾液酸合成相關(guān)酶表達缺陷(例如UDP-GlcNAc-2表異構(gòu)酶)，唾液酸化本身缺陷(例如2,3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶或2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶)或含有唾液酸受體半乳糖(例如N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶I)的復(fù)合型N連接多聚糖合成缺陷的細(xì)胞。這些技術(shù)已經(jīng)用于多種細(xì)胞，包括SP2/0、CHO、BHK、HEK-293、NSO、JURKAT等。作為替代方法，細(xì)菌、酵母或真菌細(xì)胞也表達該蛋白，這些細(xì)胞不會在在N-連接多糖上添加入N-連接多糖(細(xì)菌)或唾液酸，例如真菌或酵母表達。N-連接糖基化具有唾液酸的Fc受體，例如非唾液酸化缺陷細(xì)胞重組表達產(chǎn)生的，可以使用減少唾液酸含量的方法進行脫唾液酸化處理，例如是在使用上述方法前用唾液酸酶進行處理。這些唾液酸酶的實例例如來自Arhrobacterureafaciens、鼠傷寒沙門氏菌、霍亂弧菌、Newcastle病病毒，HitchnerBl菌、肺炎鏈球菌或才炎狀芽孑包桿菌(Clostridiumperfringens)的神經(jīng)氨酸酶。這些酶可以從它們的內(nèi)源性宿主菌或其它宿主例如大腸桿菌重組表達得到。受體在非唾液酸缺陷細(xì)胞中表達后例如在純化前可以直接進行脫唾液酸處理。作為替代方法，可以在受體與用于純化的樹脂結(jié)合時或受體被純化后進行脫唾液酸化處理。作為替代方法，含有唾液酸酶DNA序列的表達質(zhì)粒可以與編碼受體的表達質(zhì)粒進行共轉(zhuǎn)染，這種情況下轉(zhuǎn)染細(xì)胞將分泌大量神經(jīng)氨酸酶和受體，通過重組產(chǎn)生的唾液酸酶原位進行受體的脫唾液酸化。非唾液酸化缺陷細(xì)胞重組表達的Fc受體也可以在純化成含有唾液酸的流分和不含唾液酸的流分時被分離出來。分離過程可采用唾液酸特異性外源凝集素例如MAA(Maackiaamurensis凝集素)和SNA(SambucusnigraIagglutinin,接骨木花黑質(zhì)凝集素)進行分離。分離中也可以采用陰離子交換色譜，例如DEAE瓊脂糖、瓊脂糖Q或ResourceQ。也可以通過培養(yǎng)表達受體的細(xì)胞和加入一種鏈烷酸例如專利WO9639488中描述的丁酸鈉到細(xì)胞培養(yǎng)物中進行Fc受體脫唾液酸化處理。在本發(fā)明的一個實施方案中，F(xiàn)cR結(jié)合肽是一種抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，F(xiàn)cR結(jié)合肽是一種單克隆抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，抗體是一種雙特異性二價抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，抗體是至少含有一個Fc-結(jié)合部分的IgG-樣分子。這里使用的單克隆抗體指的是單分子組成的抗體分子制備物。單克隆抗體組成顯示特定表位的單一結(jié)合特異性和親和性。因此，術(shù)語"人單克隆抗體，，指的是表現(xiàn)出單一結(jié)合特異性的抗體，它們具有來自于人種系的免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)。人單克隆抗體可以通過雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生，包括來自轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體非人類動物例如轉(zhuǎn)基因小鼠的B細(xì)胞，該細(xì)胞具有包含人類重鏈轉(zhuǎn)基因和輕鏈轉(zhuǎn)基因的基因組并與無限增殖細(xì)胞融合。在一個實施方案中，藥品抗體是人源抗體。這里使用的人源抗體意指包括具有來自于人種系免疫球蛋白序列可變.區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人源抗體可以包括不是由人種系免疫球蛋白基因序列編碼的氨基酸殘基(例如體外隨機或定點突變或體內(nèi)體細(xì)胞突變引入的突變)。然而，這里使用的術(shù)語"人源抗體，，并不包括來自另一哺乳動物種系的CDR序列移植到人骨架序列的抗體。如本專利所指，如果抗體來自使用人免疫球蛋白序列的體系，人源抗體就來自于特定的微生物種系序列，例如通過免疫攜帶人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠或通過篩選人免疫球蛋白基因庫，其中所選擇的人抗體的氨基酸序列至少90%,例如至少95%,例如至少96%,例如至少97%，例如至少98°/?；蛑辽?9%與微生物VL或VH可變區(qū)域基因片段編碼的氨基酸序列相同。通常來自于某種人種系的VH或VL可變區(qū)基因片段序列編碼的氨基酸序列與微生物免疫球蛋白基因編碼的氨基酸序列的差別不超過10個氨基酸，例如不超過5個，例如不超過4、3、2或1個氨基酸差異。在一個實施方案中，藥品抗體是人源化抗體。人源化抗體是源自非人種的抗體，其中骨架區(qū)和重鏈輕鏈恒定區(qū)的某些氨基酸已被突變從而避免或消除人類的免疫反應(yīng)。非人(例如鼠類)抗體的人源化形式含有源自非人免疫球蛋白的基本序列。人源化抗體大部分是人免疫球蛋白(接受抗體)，其中受體高變區(qū)氨基酸殘基被替換成非人種系(供體抗體)例如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類的氨基酸殘基，這些殘基具有所需要的抗原結(jié)合特性例如特異性和親和性。在一些例子中，人免疫球蛋白的Fv骨架區(qū)(FR)氨基酸殘基被替換成相應(yīng)的非人源氨基酸殘基。另外，人源化抗體可能包括在受體抗體或供體抗體未種發(fā)現(xiàn)的氨基酸殘基。這些^奮飾是為了進一步優(yōu)化抗原結(jié)合能力。一般而言，人源化抗體總共含有至少一種，一般是兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中所有的或幾乎所有的高變環(huán)是非人源免疫球蛋白一致，所有或幾乎所有的FR結(jié)構(gòu)域是人免疫球蛋白序列。人源化抗體也可以至少含有已部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc),通常是人免疫球蛋白上Fc區(qū)域。進一步的細(xì)節(jié)見Jones等.，Nature里，522-525(1986),Riechmann等.，Nature巡，323-329(1988)和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2,593-596(1992)。人源化抗體也包括這樣的抗體，其中采用CDR修復(fù)進行CDR移植，將非人類來源的CDRs移植到人FR上(MarkDennis,Genentech,presentedattheTwelvthInternationalconferenceonHumanAntibodiesandHybridomas，10-12May2006，SanDiego,USA).在一個實施方案中，藥品抗體是嵌合抗體。通常嵌合抗體指的是部分重鏈和/或輕鏈與來源于特定物種的抗體的對應(yīng)序列相同或同源或?qū)儆谀骋活惢蚰骋粊嗩惖目贵w，而其它氨基酸與來源于另一種屬的抗體的對應(yīng)序列相同或同源或?qū)儆诹硪活惢蛄硪粊嗩惖目贵w，也可以是這些抗體的片段，只要它們表現(xiàn)出所需要的生物活性(見US4,816，567和Morrisonetal.,PNASUSAM,6851-6855(1984)。嵌合抗體可由本
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已知的重組方法生產(chǎn)(見Cabillyetal.，PNASUSA虹，3273-3277(1984)，Morrisonetal.，PNASUSAM，6851-6855(1984),Boulianneetal.,Nature643-646(1984),EP125023,Neubergeretal.，Nature314,268-270(1985),EP171496,EP173494,WO86/01533,EP184187,Sahaganetal.，J.Immunol.HI,1066-1074(1986),WO87/02671，Liuetal.，PNASUSA3439-3443(1987)，Sunetal，PNASUSAM,214-218(1987),Betteretal.，Science證，1041-1043(1988)和Harlowetal.，Antibodies:ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor,N.Y.,(1988)).。在一個實施方案中，抗體包含單價或多價抗體形式。這個抗體形式可以是由H鏈與L鏈以二硫鍵橋連接而成的二聚體(HL)。一個普通抗體是由兩個HL二聚體至少由一個二硫鍵連接形成的的二價四聚體(H2L2)。也可以產(chǎn)生多〗介抗體，例如使用CH區(qū)聚集(例如來自IgM的H鏈或p鏈)。這樣抗體可以是嵌合的或來自同一物種。在一個實施方案中，抗體具有Fc區(qū)骨架的改變，這些改變是為了獲得有益的特性，例如改變抗體的功能或藥代特性。例如，骨架區(qū)或恒定區(qū)的替換或其它改變(插入、缺失、加入終止序列或任意組合)可能使突變抗體的半衰期比親本抗體更長或與親本抗體相比改變突變抗體的免疫原性，提供共價或非共價結(jié)合于另一分子的位點，或改變例如補體固定物這樣的性質(zhì)，例如減弱或增強Clq結(jié)合和CDC或FcyR結(jié)合和抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)。可以在重鏈恒定區(qū)的一個或多個氨基酸殘基上例如234、235、236、237、297、318、320和322進行替換，因此與未修飾抗體相比改變了效應(yīng)器功能但是保留了抗原結(jié)合能力，見專利US5624821和US5648260。更多信息可參考WO94/29351,WO99/54342,WO00/42072,WO03/011878,WO03/085119，WO04/29207，WO04/063351，WO04/065540，WO04/99249，WO05/018669，WO05/044859，US6121022和US6737056。另夕卜，Shields等.，J.Biol.Chem.里，6591-6604(2001)描述了提高FcyRIII結(jié)合能力的組合突變體，例如T256A/S298A，S298A/E333A，andS298A/E333A/K334A。在一個實施方案中，所述抗體含有突變的Fc區(qū)，這一突變可以優(yōu)化與Fc受體的以增強某些效應(yīng)器的功能。在一個實施方案中，抗體含有Fc糖基，它是由經(jīng)過修飾的特定糖類轉(zhuǎn)移酶缺乏或活力降低的(例如FUT-8)或額外或過表達糖類轉(zhuǎn)移酶的細(xì)胞;f朱產(chǎn)生的。在本發(fā)明的一個實施方案中，抗體藥品是一種IgGl抗體。在一個實施方案中，抗體是IgGl,K抗體。在一個實施方案中，抗體是IgGl,X抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述肽是一種抗體，測定藥品抗體與Fc受體的結(jié)合與測定藥品抗體與其抗原結(jié)合的方法聯(lián)合使用。在一個實施方案中，使用下列方法測定所述藥品抗體與抗原的結(jié)合(i)使藥品樣品與抗原接觸一段足夠長的時間使抗體結(jié)合抗原，(ii)檢測與抗原結(jié)合的抗體含量。在進一步的實施方案中，通過使用針對藥品抗體的檢測抗體進行上述檢測。在進一步的實施方案中，上述檢測抗體是標(biāo)記抗體。在一個實施方案中，使用ELISA檢測抗體與抗原的結(jié)合。在一個實施方案中檢測抗體與Fc受體結(jié)合的ELISA也應(yīng)用于檢測該抗體與其抗原的結(jié)合。在一個實施方案中，使用AlphaScreenTM檢測測定抗體與抗原的結(jié)合。在一個實施方案中，用于抗體與Fc受體結(jié)合測定的AlphaScreenTM^r測也應(yīng)用于測定該抗體與其抗原的結(jié)合。在一個實施方案中，使用放射免疫測定法測定抗體與抗原的結(jié)合。在一個實施方案中，用于抗體與Fc受體結(jié)合測定的放射免疫測定法也應(yīng)用于測定該抗體與其抗原的結(jié)合，在進一步的實施方案中，放射免疫測定使用與Fc受體綴合的珠和可溶性貢獻放射性的(radioiodonated)抗原。如之前所述，依據(jù)本發(fā)明的方法所使用的抗體抗原特異性不影響抗體與Fc受體的結(jié)合能力。因此本發(fā)明方法適用于所有抗體(和其它FcR結(jié)合肽)，其中至少一種抗體作用機制是通過抗體與Fc受體的結(jié)合介導(dǎo)，與抗體的抗原特異性無關(guān)。然而，一些實施方案中使用特定抗原特異性的抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人CD4結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，抗體是如W09713852中描述的人與CD4結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，抗體是如US5871732中描述的與人CD4結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，抗體是如US6309880或WO9012868中描述的與人CD4結(jié)的合抗體。在一個實施方案中，抗體是溶液WO02102853中描述的與人CD4結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，抗體是如US2001051709或WO9110722中描述的與人CD4結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，抗體是如US6056956或US5670150中描述的與人CD4結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，抗體是扎木單抗。在一個實施方案中，抗體是凱利昔單抗(IDEC-CE9.1，BiogenlDEC)。在一個實施方案中，抗體是克立昔單抗(IDEC-151,BiogenlDEC)。在一個實施方案中，抗體是TNX-355(Hu-5A8，Tanox/BiogenlDEC)。在一個實施方案中，抗體是TRX-1(TolerRx/Genentech)。在一個實施方案中，抗體是IOT4a(13B8.2,Immunotech),priliximab(cM-T412,Centocor)。在一個實施方案中，抗體是4162W94(GlaxoWellcome)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人EGFR結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是如WO9640210中描述的與人EGFR結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是如WO04056847或WO02100348中描述的與人EGFR結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是西妥昔單抗(￡]:1^1^@)。在一個實施方案中，所述抗體是Zalutumumab(HuMax-EGFR)(GenmabA/S)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人CD20結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是如WO94/11026中描述的與人CD20結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是如WO04/035607中描述或在WO申請PCT/DK2005/00270中描述的與人CD20結(jié)合的抗體。在進一步的實施方案中，所述抗體是替伊莫單抗(Zevalir^)。在一個實施方案中，所述抗體是托西莫單抗(Bexxa產(chǎn))。在一個實施方案中，所述抗體是HuMax-CD20(ofatumumab)(GenmabA/S)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人TAC(CD25)結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是如WO04/045512中描述的與人TAC結(jié)合抗體。在一個實施方案中，所述抗體是HuMax-TAC(AB12)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是人CD3結(jié)合抗體。在一個實施方案中，抗體是莫羅單抗(OrthocloneOJC^3)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人CD3結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是莫羅單抗(OrthocloneOKT3)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人GPIIb/IIIa結(jié)合的抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人CD25(IL-2R)結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是達克珠單抗(Zenapax⑧)。在一個實施方案中，所述抗體是巴利昔單抗(Simulec^)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是人TNF-a結(jié)合抗體。在一個實施方案中，所述抗體是英利昔單抗(1^11^&(^@)。在一個實施方案中，所述抗體是阿達木單抗(Humira⑧)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人RSV結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是帕利珠單抗(3乂113^3@)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人HER-2/neu結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是曲司珠單抗(Hercepti,)。在一個實施方案中，所述抗體是培妥珠單抗(OmnitargTM)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人CD33結(jié)合的抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人CD52結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是阿侖珠單抗(Campath-lH)。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥品抗體是與人CTLA4結(jié)合的抗體。在一個實施方案中，所述抗體是MDX-010(Medarex,Inc.)。本發(fā)明也提供了應(yīng)用于FcR結(jié)合肽與上述Fc受體結(jié)合的測定方法中的一種Fc受體的制備方法，其中上述Fc受體是用含有制備步驟的方法制備，與使用不包括本步驟的方法制備得到的類似Fc受體相比，所述步驟可產(chǎn)生N-連接糖基化唾液酸減少的Fc受體。在一個實施方案中，使用以下方法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合(i)使FcR結(jié)合肽與Fc受體接觸足夠長時間使FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合(ii)檢測與Fc受體結(jié)合的FcR結(jié)合肽的量在一個實施方案中，使用針對FcR結(jié)合肽的檢測抗體進行檢觀'J。在進一步的實施方案中，所述檢測抗體是標(biāo)記抗體。在一個實施方案中，使用ELISAFcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合測定。在一個實施方案中，使用AlphaScreenTM檢測測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。在一個實施方案中，使用放射免疫測定測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。在一個實施方案中，使用Biacore4企測法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。在一個實施方案中，使用FMAT測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。在一個實施方案中，使用FDELFIA測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。本發(fā)明也提供適于一種適于包被多肽分子的塑料部件，其中多肽分子與塑料部件的粘合至少部分是依賴于多肽分子與塑料部件表面之間的靜電相互作用，其中塑料部件表面已經(jīng)包被脫唾液酸化多肽。在一個實施方案中，多肽分子是Fc受體。本專利其它內(nèi)容描述了Fc受體的實例。在一個實施方案中，塑料部件是微孔滴定板，例如96孔微孔滴定板或類似的板子，例如Greiner板，這些都是該
技術(shù)領(lǐng)域：
人員熟知的。在一個實施方案中，所述涂層塑料部件適用于依據(jù)本發(fā)明的一種測定FcR結(jié)合肽藥品藥效的方法。以下是本發(fā)明選擇列出的實施方案列表實施方案1一種測定含有FcR結(jié)合肽藥品藥效的方法，其中藥品FcR結(jié)合肽的至少有一個作用機制是通過藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合介導(dǎo)，其中所述方法包括測定藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案2根據(jù)實施方案1用于測定含有FcR結(jié)合肽的藥品藥效的方法包括i)測定參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合ii)測定藥品FcR結(jié)合肽與上述Fc受體的結(jié)合iii)比較步驟ii)FcR與步驟i)FcR的結(jié)合情況，使用比較所得信息評價藥品的藥效。其中a)步驟ii)中Fc受體結(jié)合的測定方法與步驟i)中Fc受體結(jié)合的測定方法相同。b)藥品FcR結(jié)合肽的至少一種作用機制是通過FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合介導(dǎo)。c)其中所述參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽和藥品FcR結(jié)合肽是同種FcR結(jié)合分子的兩種制劑。實施方案3—種生產(chǎn)包含F(xiàn)cR結(jié)合肽的藥物組合物的方法，該方法包括a)該藥品含有所述FcR結(jié)合肽；b)將實施方案l或?qū)嵤┓桨?的方法應(yīng)用于所述藥品以測定含有FcR結(jié)合肽藥品的藥效；c)使用步驟b)得到的信息作為該藥品是否可以作為藥物組合物來使用的部分評價依據(jù)。實施方案4一種根據(jù)實施方案1-3中任一項的方法，其中該方法是所述藥品作為藥物組合物上市銷售許可申請的一部分。實施方案5—種申請含有FcR結(jié)合肽藥品上市許可證的方法，該方法包括對根據(jù)實施方案1-4任一項用于測定藥品FcR結(jié)合肽藥效方法的描述。實施方案6—種根據(jù)實施方案1-5中任一項的方法，其中用于測定含有FcR結(jié)合肽的藥品藥效的方法被用于批簽發(fā)的藥效測定。實施方案7—種根據(jù)實施方案1-6中任一項的方法，其中用以下方法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合(i)將藥品樣本與Fc受體充分作用使FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合，(ii)檢測與Fc受體結(jié)合的FcR結(jié)合肽的量。實施方案8—種根據(jù)實施方案7的方法，使用針對FcR結(jié)合肽的檢測抗體進行檢測。實施方案9一種根據(jù)實施方案8的方法，其中檢測抗體是標(biāo)記抗體。實施方案10—種根據(jù)實施方案1-9中任一項的方法，其中用ELISA測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案11一種根據(jù)實施方案1-6中任一項的方法，其中用AlphaScreenTM檢測法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案12—種根據(jù)實施方案1-6中任一項的方法，其中用放射免疫測定法檢測FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案13—種根據(jù)實施方案1-6中任一項的方法，其中用Biacore測定法檢測FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案14一種根據(jù)實施方案1-6中任一項的方法，其中用FMAT測定法檢測FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案15—種根據(jù)實施方案1-6中任一項的方法，其中用DELFIA測定法4企測FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案16—種根據(jù)實施方案1-15中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用(ADCC)，或下調(diào)把受體的表達。實施方案17—根據(jù)實施方案1-15中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)ADCC介導(dǎo)。實施方案18—種如才艮據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過自然殺傷細(xì)胞的補充介導(dǎo)。實施方案19一種根據(jù)實施方案l-18任中一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過自然殺傷細(xì)胞的補充介導(dǎo)。實施方案20—種才艮據(jù)實施方案l-19任中一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的至少一種體內(nèi)結(jié)合Fc受體表達在自然殺傷細(xì)胞上。實施方案21—種根據(jù)實施方案17-20中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIIa受體或及其保留Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案22—種才艮據(jù)實施方案21中任一項的方法，其中Fc^Rin受體是一種FcYRIIIal76V受體或及其保留Fc區(qū)結(jié)合能力的片段，例如胞外結(jié)構(gòu)域。實施方案23—種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集多形核白細(xì)胞介導(dǎo)。實施方案24—種根據(jù)實施方案1-23中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過多形核白細(xì)胞對ADCC的誘導(dǎo)介導(dǎo)。實施方案25—種根據(jù)實施方案1-24中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)PMN脫顆粒介導(dǎo)。實施方案26—種根據(jù)實施方案1-25中任一項的方法，F(xiàn)cR結(jié)合肽的一個作用機制是通過多形核白細(xì)胞的誘導(dǎo)吞噬作用介導(dǎo)。實施方案27—種才艮據(jù)實施方案1-17或23-26中任一項的方法，其中其中至少由一個與FcR結(jié)合肽在體內(nèi)結(jié)合的Fc受體在多形核白細(xì)胞上表達。實施方案28—種根據(jù)實施方案23-27中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIa受體或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案29—種#4居實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的ADCC作用介導(dǎo)。實施方案30—種根據(jù)實施方案1-17或29中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞上表達。實施方案31—種根據(jù)實施方案1-17、29或30中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案32—種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)血小板聚集。實施方案33—種根據(jù)實施方案1-17,或32中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集血小板介導(dǎo)。實施方案34—種根據(jù)實施方案1-17、32或33中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在血小板上表達。實施方案35—種如1-17或32-34中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案36—種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生。實施方案37—種才艮據(jù)實施方案l-17或36中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集自然殺傷細(xì)胞和/或T細(xì)胞介導(dǎo)。實施方案38—種根據(jù)實施方案1-17、36或37中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在自然殺傷細(xì)胞和/或T細(xì)胞上表達。實施方案39—種如1-17或36-38中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案40—種才艮據(jù)實施方案1-17或36-38中任一項的方法，其中Fc受體是FcYRIIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案41一種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)清除免疫復(fù)合物。實施方案42—種根據(jù)實施方案1-17或41中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞介導(dǎo)。實施方案43—種4艮據(jù)實施方案1-17，41或42中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在單核細(xì)胞或巨噬細(xì)月包上表達。實施方案44一種根據(jù)實施方案1-17或41-43中任一項的方法，其中Fc受體是FcyRIII或及其保留Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案45—種根據(jù)實施方案1-17或41-43中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案46—種根據(jù)實施方案1-17或41-43中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案47—種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)抗體應(yīng)答下調(diào)。實施方案48—種^^據(jù)實施方案1-17或47中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集B細(xì)胞介導(dǎo)。實施方案49一種根據(jù)實施方案1-17，47或48中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在B細(xì)胞上表達。實施方案50—種#4居實施方案1-17或47-49中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案51—種沖艮據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞效應(yīng)器功能抑制作用。實施方案52—種根據(jù)實施方案1-17或51中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞的補充來調(diào)節(jié)。實施方案53—種#4居實施方案1-17，51或52中4壬一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的至少一種體內(nèi)結(jié)合Fc受體表達在單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞上。實施方案54—種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)吞噬作用。實施方案55—種才艮據(jù)實施方案1-17或54中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過，募集多形核白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)。實施方案56—種才艮據(jù)實施方案1-17、54或55中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在多形核白細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞上表達。實施方案57—種根據(jù)實施方案1-17或54-56中任一項的方法，其中Fc受體是FcYRIIIb或及其保留Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案58—種根據(jù)實施方案1-17或54-56中任一項的方法，其中Fc受體是一種FqRIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案59—種根據(jù)實施方案1-17或54中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的吞噬作用介導(dǎo)。實施方案60—種#4居實施方案1-17或59中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞上表達。實施方案61—種根據(jù)實施方案1-17、59或60中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案62—種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)交聯(lián)作用。實施方案63—種根據(jù)實施方案1-17、或62中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過細(xì)胞和/或抗體的交聯(lián)作用介導(dǎo)。實施方案64—種根據(jù)實施方案1-17、54或63中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案65—種才艮據(jù)實施方案1-17，54或63中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRII或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案66—種如1-17、54或63中任一項的方法，其中Fc受體一種FcyRffl或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案67—種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過一種免疫受體基于酪氨酸的活化基序來誘導(dǎo)正向信號傳導(dǎo)。實施方案68—種根據(jù)實施方案1-17，或67中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集骨髓細(xì)胞、T細(xì)胞和/或血小板介導(dǎo)。實施方案69—種根據(jù)實施方案1-17或67或68中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合Fc受體在骨髓細(xì)胞，T細(xì)胞和/或血小板上表達。實施方案70—種根據(jù)實施方案1-17、或67-69中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案71—種#4居實施方案1-17、或67-69中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIc或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案72—種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過普通Y，(3，；鏈來誘導(dǎo)正向信號傳導(dǎo)。實施方案73—種根據(jù)實施方案1-17、或72中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集骨髓細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞或T細(xì)胞介導(dǎo)。實施方案74—種根據(jù)實施方案1-17,72或73中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在骨髓細(xì)胞，多形核白細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞或T細(xì)胞上表達。實施方案75—種才艮據(jù)實施方案1-17、或72-74中任一項的方法，其中Fc受體是FqRIa或其保留Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案76—種根據(jù)實施方案1-17,或72-74中任一項的方法，其中Fc受體是FcYRIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案77—種才艮據(jù)實施方案1-17、或72-74中任一項的方法，其中Fc受體是FcYRIIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案78—種才艮據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過免疫受體基于酪氨酸的抑制基序來誘導(dǎo)負(fù)向信號傳導(dǎo)。實施方案79—種4艮據(jù)實施方案1-17或78中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的至少一種作用機制是通過B細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和/或單核細(xì)胞的補充來調(diào)節(jié)。實施方案80—種根據(jù)實施方案1-17、78或79中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在B細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，和/或單核細(xì)胞上表達。實施方案81—種#4居實施方案1-17、或78-80中任一項的方法，其中Fc受體是FcyRIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案82—種根據(jù)實施方案1-17中任一項的方法，其中Fc受體是FcyRn或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。實施方案83—種根據(jù)實施方案1-82中任一項的方法，其中上述方法使用的Fc受體是用含有制備步驟的方法制備的，與使用不包括所述步驟的方法制備得到的相似Fc受體相比，所述步驟可產(chǎn)生N-連接糖基化上唾液酸數(shù)量減少的Fc受體。實施方案84—種根據(jù)實施方案83的方法，其中所述Fc受體在唾液酸化機制缺陷的宿主細(xì)胞中表達。實施方案85—種根據(jù)實施方案83的方法，其中所述Fc受體在用于上述方法前先用唾液酸酶進行處理。實施方案86—種根據(jù)實施方案1-85中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種抗體。實施方案87—種#4居實施方案86的方法，其中所述FcR結(jié)合肽是一種單克隆抗體。實施方案88—種根據(jù)實施方案86或?qū)嵤┓桨?7的方法，其中所述FcR結(jié)合肽是一種人抗體。實施方案89—種根據(jù)實施方案86或?qū)嵤┓桨?7的方法，其中所述FcR結(jié)合肽是一種人源化抗體。實施方案90—種才艮據(jù)實施方案86或?qū)嵤┓桨?7的方法，其中所述FcR結(jié)合肽是一種嵌合抗體。實施方案91一種根據(jù)實施方案86-90中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是含有Fc結(jié)合部分的抗體片段。實施方案92—種根據(jù)實施方案86-91中任一項的抗體，其中FcR結(jié)合肽是一種IgGl抗體。實施方案93—種根據(jù)實施方案92的方法，其中FcR結(jié)合肽是IgGl,X抗體。實施方案94一種才艮據(jù)實施方案92的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種IgGl，K抗體。實施方案95—種沖艮據(jù)實施方案86-94中任一項的方法，其中抗體與Fc受體結(jié)合的測定與一種測定抗體抗原結(jié)合的方法聯(lián)合使用。實施方案96—種根據(jù)實施方案95的方法，其中使用以下方法測定抗體抗原的結(jié)合(i)使抗體樣品與抗原接觸足夠長時間以使抗體與抗原的結(jié)合，(ii)檢測結(jié)合抗原的抗體量。實施方案97—種根據(jù)實施方案96的方法，其中用針對藥品抗體的檢測抗體來檢測。實施方案98—種4艮據(jù)實施方案97的方法，其中^r測抗體是標(biāo)記抗體。實施方案99一種根據(jù)實施方案95-98的方法，其中使用ELISA測定抗體與抗原的結(jié)合。實施方案100—種根據(jù)實施方案99的方法，其中上述ELISA也用于測定抗體與Fc受體的結(jié)合。實施方案101—種根據(jù)實施方案95的方法，其中使用AlphaScreenTM檢測法測定抗體與Fc受體的結(jié)合。實施方案102—種根據(jù)實施方案101的方法，其中也使用AlphaScreenTM檢測法測定抗體與Fc受體的結(jié)合。實施方案103—種根據(jù)實施方案95的方法，其中使用放射免疫測定法測定抗體與抗原的結(jié)合。實施方案104—種根據(jù)實施方案103的方法，其中也使用放射免疫測定法測定抗體與抗原的結(jié)合。實施方案105—種根據(jù)實施方案104的方法，其中放射免疫測定法使用與Fc受體和貢獻放射性的抗原綴合的珠。實施方案106—種根據(jù)實施方案86-105中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人CD4結(jié)合的抗體。實施方案107—種根據(jù)實施方案106的方法，其中FcR結(jié)合肽是扎木單抗。實施方案108—種根據(jù)實施方案106的方法，其中FcR結(jié)合肽是凱利昔單抗。實施方案109—種根據(jù)實施方案106的方法，其中FcR結(jié)合肽是克立昔單抗。實施方案110—種根據(jù)實施方案106的方法，其中FcR結(jié)合肽是TNX355。實施方案111一種根據(jù)實施方案106的方法，其中FcR結(jié)合肽是TRX畫1。實施方案112—種根據(jù)實施方案106的方法，其中FcR結(jié)合肽是IOT4a。實施方案113—種根據(jù)實施方案106的方法，其中FcR結(jié)合肽是4162W94。實施方案114一種^f艮據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人EGFR結(jié)合的抗體。實施方案115—種根據(jù)實施方案114的方法，其中FcR結(jié)合肽是西妥昔單抗。實施方案116—種根據(jù)實施方案114的方法，其中FcR結(jié)合肽是HuMax-EGFR,zalutumumab。實施方案117—種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人CD20結(jié)合的抗體。實施方案118—種根據(jù)實施方案117的方法，其中FcR結(jié)合肽是人利妥昔單抗。實施方案119一種根據(jù)實施方案117的方法，其中FcR結(jié)合肽是替伊莫單抗。實施方案120—種根據(jù)實施方案117的方法，其中FcR結(jié)合肽是托西莫單抗。實施方案121—種根據(jù)實施方案117的方法，其中FcR結(jié)合肽是HuMax-CD20,ofatumumab。實施方案122—種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人TAC結(jié)合的抗體。實施方案123—種根據(jù)實施方案122的方法，其中FcR結(jié)合肽是HuMax-TAC。實施方案124—種4艮據(jù)實施方案i-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人CD3結(jié)合的抗體。實施方案125—種根據(jù)實施方案124的方法，其中FcR結(jié)合肽是莫羅單抗。實施方案126—種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人GPIIb/IIIa結(jié)合的抗體。實施方案127—種才艮據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人CD25結(jié)合的抗體。實施方案128—種根據(jù)實施方案127的方法，其中FcR結(jié)合肽是達克珠單抗。實施方案129—種^^艮據(jù)實施方案127的方法，其中FcR結(jié)合肽是巴利昔單抗。實施方案130—種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人TNF-a結(jié)合的抗體。實施方案131—種才艮據(jù)實施方案130的方法，其中FcR結(jié)合肽是英利昔單抗。實施方案132—種根據(jù)實施方案130的方法，其中FcR結(jié)合肽是阿達木單抗。實施方案133—種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人RSV結(jié)合的抗體。實施方案134—種根據(jù)實施方案133的方法，其中FcR結(jié)合肽是帕利珠單抗。實施方案135—種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是人HER-2/neu結(jié)合抗體。實施方案136—種#4居實施方案135的方法，其中FcR結(jié)合肽是曲司珠單抗。實施方案137—種根據(jù)實施方案135的方法，其中FcR結(jié)合肽是培妥珠單抗。實施方案138—種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人CD33的結(jié)合的抗體。實施方案139—種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人CD52的結(jié)合的抗體。實施方案140—種根據(jù)實施方案139的方法，其中FcR結(jié)合肽是阿侖珠單抗。實施方案141一種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是人VEGF的結(jié)合抗體。實施方案142—種根據(jù)實施方案141的方法，其中FcR結(jié)合肽是貝伐珠單抗。實施方案143—種根據(jù)實施方案1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是人CTLA4的結(jié)合抗體。實施方案144一種根據(jù)實施方案143的方法，其中FcR結(jié)合肽是MDX-010。實施方案145—種批準(zhǔn)作為藥物組合物使用的含有FcR結(jié)合肽的藥品，其中根據(jù)實施方案l至144中任一項的一種方法適上市批準(zhǔn)申請的一部分。實施方案146—種用于測定FcR結(jié)合肽與上述Fc受體結(jié)合的Fc受體的制備方法，其中所述方法使用的Fc受體是用含有制備步驟的方法制備的，與用不包括所述步驟的方法制備得到的相似Fc受體相比，所述步驟可產(chǎn)生N-連接糖基化上唾液酸數(shù)量減少的Fc受體。實施方案147—種#4居實施方案146的方法，其中用以下方法測定FcR結(jié)合肽與上述Fc受體的結(jié)合(i)使FcR結(jié)合肽與Fc受體的接觸足夠長時間以使抗體與抗原的結(jié)合，(ii)檢測結(jié)合抗原的抗體量實施方案148—種根據(jù)實施方案147的方法，其中使用針對FcR結(jié)合肽的檢測抗體進行檢測。實施方案149一種根據(jù)實施方案148的方法，其中檢測抗體是標(biāo)記抗體。實施方案150—種才艮據(jù)實施方案146-149中任一項的方法，其中使用ELISA測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案151—種根據(jù)實施方案146-149中任一項的方法，其中使用AlphaScreenTM檢測法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案152—種根據(jù)實施方案146-149中任一項的方法，其中使用放射免疫檢測法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案153—種根據(jù)實施方案146-149中任一項的方法，其中使用Biacore檢測法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案154—種才艮據(jù)實施方案146-149中任一項的方法，其中使用FMAT測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案155—種根據(jù)實施方案146-149中任一項的方法，其中使用DELFIA測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。實施方案156—種^f艮據(jù)本發(fā)明或?qū)嵤┓桨?-155中任一項的方法，其中使用包被在ELISA板上的His捕獲抗體來捕獲his標(biāo)記的FcR或FcR片革爻。實施方案157—種適用于包被多肽分子的塑料部件，其中多肽分子與塑料部件的粘合至少部分依賴多肽分子與塑料部件表面之間的靜電相互作用，其中塑料部件表面已經(jīng)包被脫唾液酸化多肽。實施方案158—種根據(jù)實施方案157的塑料部件，其中所住多肽分子是一種Fc受體。實施方案159—種根據(jù)實施方案157或158的塑料部件，其中所述塑料部件是微量滴定板。實施方案160—種根據(jù)實施方案157-159中任一項的塑料部件，其中塑料部件適用于根據(jù)權(quán)利要求1_144中任一項的方法。實施方案161—種根據(jù)實施方案157-159中任一項的塑料部件，其中塑料部件用于根據(jù)權(quán)利要求1-144中任一項的方法。通過以下實施例進一步闡述本發(fā)明，這些事實力并不會限制本發(fā)明。實施例實施例1寡聚核苷酸引物和PCR擴增將指定引物溶解在H20中使其濃度達到100pmol/|il并貯存于-20。C。對于PCR，按照廠商的使用說明使用PfUTurbo⑧熱啟動DNA聚合酶(Stratagene,Amsterdam,TheNetherlands;產(chǎn)品#600322)。每個反應(yīng)混合物的總體積是20|al，含有200jaM混合dNTPs(RocheDiagnostics,Almere，TheNetherlands;產(chǎn)品#1814362)、6.7pmol正向和反向引物、約lng模板DNA和1個單位PfuTurboHotstartDNA聚合酶，均溶解在PCR反應(yīng)緩沖液(與聚合酶一起提供)中。PCR反應(yīng)在TGradientThermocycler96(WhatmanBiometra,Goettingen,Germany;產(chǎn)品#050-801)上進行，使用30個循環(huán)的程序95。C變性2min;30個循環(huán)的95。C變性30s、45-65。C梯度(或使用另一特定的退火溫度)退火30s和72。C延伸2min;最終72°C延伸10min。如果合適的話，可將PCR反應(yīng)混合物貯存在4。C用于進一步分析或處理。實施例2PCR篩選細(xì)菌菌落使用HotStarTaqMaster混合試劑盒(Qiagen;產(chǎn)品#203445)和特定正向反向引物通過菌落PCR篩選含有預(yù)期序列載體的細(xì)菌菌落。用20pl吸管頭輕觸選出的菌落，并簡單地接種于2mlLB中(Luriabroth)進行小量培養(yǎng)，然后重懸于PCR混合物中。PCR反應(yīng)在儀器TGradientThermocycler96(WhatmanBiometra，Goettingen，Germany;產(chǎn)品弁050-801)上進行，使用具有35個循環(huán)地程序95。C變性15min,35個循環(huán)的94。C變性30s，55。C退火30s，72。C延伸2min;最終72。C延伸10min。如果合適的話，將PCR反應(yīng)混合物貯存在4°C用于瓊脂糖凝膠電泳分析。實施例3FcrRIaECDHis的生產(chǎn)pEE13.4Fc丫RIaECDHis的構(gòu)建分離RZPD菌4朱IRATp970F1154D6(DeutscheRessourcenzentrumfiirGenomforschung(RZPD,柏林，德國)的質(zhì)粒DNA并用作PCR中的模版，該PCR按照實施例1所描述的程序使用引物P1(SEQIDNo:4)和P2(SEQIDNo:5),PCR擴增人FcyRIa的胞外編碼結(jié)構(gòu)域(氨基酸序列1-292)并引入適當(dāng)?shù)挠糜诳寺〉捷d體pEE13.4(LonzaBiologies,Slough，UK)的限制酶切位點、一個理想的Kozak序列(GCCGCCACC)和C末端His6標(biāo)簽。用凝膠純化PCR片l殳并克隆到pEE13.4。其中，用限制酶尸y723n和Zmal消化PCR產(chǎn)物并純化。用限制酶尸j23n和消化pEE13.4載體并純化載體片段。將FcyRIa片段和pEE13.4尸y23II-Zmal載體連接并轉(zhuǎn)化入感受態(tài)DH5a-TlR細(xì)胞(Invitrogen)。根據(jù)實施例2所描述的程序，使用菌落PCR(使用引物P3(SEQIDNo:6)和P4(SEQIDNo:7))驗證8個克隆，結(jié)果得到2個插入片段大小正確的克隆。將這兩個陽性克隆在2ml培養(yǎng)基中培養(yǎng)。分離質(zhì)粒DNA，對其中1個構(gòu)建菌抹的插入序列進行測序分析后發(fā)現(xiàn)是正確的。最后構(gòu)建的重組載體命名為pEE13.4FcyRIaECDHis。FcrRIaECDHis在Hek-293F細(xì)胞中的瞬時表達Freestyle293-F(—種已適應(yīng)懸浮生長和化學(xué)限定Freestyle培養(yǎng)基的HEK-293亞克隆，例如HEK-293F)細(xì)胞購自Invitrogen，并按照廠商的操作規(guī)程使用293fectin(Invitrogen)用pEE13.4FqRIaECDVHis轉(zhuǎn)染細(xì)胞。根據(jù)廠商的操作規(guī)程培養(yǎng)轉(zhuǎn)染子，按照以下描述的方法取1升細(xì)胞培養(yǎng)上清進行純化。在BDTALONspin(0.5ml)Talon柱上進行FcyRIaECDVHis的純必BDTALONspin柱購自Clontech(MountainView,CA,USA)。將珠從柱子中取出，用pH7.0的lx平衡/洗滌緩沖液(50mM磷酸鈉和300mMNaCl)平衡珠。與1升細(xì)胞培養(yǎng)上清液于4。C孵育過夜。在洗脫FcyRIaECDVHis(用pH5,0的lx洗脫緩沖液(SOmM磷酸鈉、300mMNaCl和150mM咪唑)后，重新平衡樹脂并加入前期純化的流出物中。繼續(xù)孵育過夜，再次洗脫FcyRIaECDVHis。收集第1和第2次的洗脫流分，收集的FcyRIaECDVHis在PD-10柱上脫鹽，將緩沖液換成PBS。終產(chǎn)物的體積為3.7ml。通過280nm處的吸光度來測定濃度，結(jié)果為117jag/ml,得到433嗎FcYRIaECDHis(SEQIDNo:l)。經(jīng)SDS-PAGE判定終產(chǎn)物的純度約為95%。實施例4FcyRIHaECD176VHis的生產(chǎn)pEE13.4FcYRIIIaECD176His的構(gòu)建分離RZPD菌才朱IRAKp961H1749Q2(DeutscheRessourcenzentrumflirGenomforschung(RZPD，Berlin,Germany))的質(zhì)粒DNA并用作PCR中的模版，該PCR按照實施例1所描述的程序使用引物P5(SEQIDNo:8)和P6(SEQIDNo:9)，PCR擴增人Fc丫RIIIa的胞外編碼結(jié)構(gòu)域(氨基酸序列1-200)并引入適當(dāng)?shù)挠糜诳寺〉捷d體pEE13.4的限制酶切位點、一個理想的Kozak序列(GCCGCCACC)和C末端His6標(biāo)簽。用凝膠純化PCR片段并克隆到pEE13.4。其中，用限制酶&oRI和消化PCR產(chǎn)物并純化。用限制酶五coRI和A7nal消化pEE13.4載體并純化載體片段。將FqRIa片段和pEE13.4五coRI載體連接并轉(zhuǎn)化入感受態(tài)DH5a-TlR細(xì)胞(Invitrogen)。根據(jù)實施例2所描述的程序，使用菌落PCR(使用引物P3和P4)驗證4個克隆，結(jié)果得到2個插入片段大小正確的克隆。將這兩個陽性克隆在2ml培養(yǎng)基中培養(yǎng)。分離質(zhì)粒DNA，對其中1個構(gòu)建菌林的插入序列進行測序分析后發(fā)現(xiàn)是正確的。插入片段為FcYRIIIa的176V同種異型體。最后構(gòu)建的重組載體命名為pEE13.4FcyRIIIaECD176His。FcYRIIIaECD176His在Hek-293F細(xì)胞中的瞬時表達Freestyle293-F(—種已適應(yīng)懸浮生長和化學(xué)限定Freestyle培養(yǎng)基的HEK-293亞克隆，例如HEK-293F)細(xì)胞購自Invitrogen，并按照廠商的操作規(guī)程使用293fectin(Invitrogen)用pEE13.4FcyRinaECD176VHis轉(zhuǎn)染細(xì)胞。根據(jù)廠商的操作規(guī)程培養(yǎng)轉(zhuǎn)染子，按照以下描述的方法取200ml細(xì)胞培養(yǎng)上清進行純化。在BDTALONspin(0.5ml)Talon柱上進行Fc丫RJIIaECD176VHis的純化BDTALONspin柱購自Clontech(MountainView,CA，USA)。將珠從柱子中取出，用pH7.0的lx平衡/洗滌緩沖液(50mM磷酸鈉和300mMNaCl)平衡珠，與200ml細(xì)胞培養(yǎng)上清液孵育。用lx平衡/洗滌緩沖液洗滌珠以除去非特異性吸附蛋白，用pH5.0的lx洗脫緩沖液(50mM磷酸鈉，300mMNaCl和150mM咪哇)洗脫His標(biāo)記蛋白。在洗脫FcyRIIIaECD176VHis(用pH5.0的lx洗脫緩沖液(50mM磷酸鈉、300mMNaCl和150mM咪哇)后，重新平衡樹脂并加入前期純化的流出物中。收集第1和第2次的洗脫流分。在PD-1.0柱上用PBS將收集的流分脫鹽。通過測定280nrn處的吸光度4吏用由FcYRIIIaECD176VHis(SEQIDNo:2)氨基酸序列計算得到的理論吸光系數(shù)測定純化蛋白的產(chǎn)率。純化之后的產(chǎn)率為2.5mg/200ml，濃度為771pg/ml。SDS-PAGE顯示了一條4艮寬的蛋白遷移帶(表明一種非常異質(zhì)的糖基化蛋白)和兩條更高分子量的小帶。純度估計約為90%。實施例5FcYRIIIaECD176FHis的生產(chǎn)將。EE13.4Fc7RIIIaECD176VHis進行突變構(gòu)建pEE13.4Fcy畫aECD176FHis使用定點突變使載體pEE13.4FcyRinaECD176VHis上編碼FcyRIIIal76V的Val176的密碼子突變?yōu)榫幋aPhe的密碼子。使用QuickChangeIIXL定點突變試劑盒(Stratagene,Amsterdam,TheNetherlands)根據(jù)廠商說明書進行定點突變。該方法包括引入一個silentextrai^yl88III位點篩選成功突變的突變子。簡而言之，將5pl10x反應(yīng)液、1.25pi寡聚核苷酸P7(100ng/pl)(SEQIDNo:10)、1.25(il寡聚核苷酸P8(125ng/pl)(SEQIDNo:11)、1jildNTP混合物、3plQuicksolution、1(il質(zhì)粒pEE13.4FcyRIIIaECD176VHis(50ng/(al)和1(ilPfuUltraHFDNA聚合酶混合至終體積50pl并在TGradientThermocycler96(WhatmanBiometra，Goettingen，Germany;產(chǎn)品#050-801)上進行PCR反應(yīng)，使用18個循環(huán)的程序95。C變性1min;18個循環(huán)的程序是95。C50s、60°C50s、68。Cl0min。將PCR混合物貯存在4。C用于進一步處理。然后，將PCR反應(yīng)混合物與1pi在37。C溫育60min以酶切載體，貯存于4。C用于進一步處理。根據(jù)廠商說明書(Invitrogen)將2|il反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)化到OneShotDH5a-T1R感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞中。用菌落PCR和//pyl88in酶切(突變過程中引入silentextra///^18811I位點)篩選出16個克隆，其中15個克隆顯示含有正確的核苷酸變化。將兩個陽性克隆過夜培養(yǎng)，分離質(zhì)粒DNA并測序以驗證是否引入正確的突變。結(jié)果兩個克隆都含有正確的序列，將其中一個進一步持續(xù)培養(yǎng)，并命名為pEE13.4FcyRIHaECD176FHis。為了排除在突變過程中？)入額外的突變，對pEE13.4FcyRIIIaECD176FHis的完整FcYRIIIa編碼區(qū)基因進行重新測序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無額外突變。最終獲得的重組載體命名為pEE13.4Fc7RIIIaECD176FHis。FcyRHIaECD176FHis在Hek-293F細(xì)胞的瞬時表達Freestyle293-F(—種已適應(yīng)懸浮生長和化學(xué)限定Freestyle培養(yǎng)基的HEK-293亞克隆，例如HEK-293F)細(xì)胞購自Invitrogen，并使用293fectin(Invitrogen)按照廠商的操作規(guī)程用pEE13.4FcyRniaECD176FHis轉(zhuǎn)染細(xì)胞。根據(jù)廠商的操作規(guī)程培養(yǎng)轉(zhuǎn)染子，根據(jù)以下描述的方法取200ml細(xì)胞培養(yǎng)上清液進行純化。在BDTALONspin(0.5ml)Talon柱上進行FcYRIIIaECD176FHis的純化BDTALONspin柱購自Clontech。將珠從柱子中取出，用pH7.0.的lx平衡/洗滌緩沖液(50mM磷酸鈉和300mMNaCl)平衡，將珠與200ml細(xì)胞培養(yǎng)上清液孵育。用lx平衡/洗滌緩沖液洗滌珠以除去非特異性結(jié)合蛋白，用pH5.0.的lx洗脫緩沖液(50mM磷酸鈉，300mMNaCl和150mM咪唑)洗脫His標(biāo)記蛋白。在洗脫FcyRIIIaECD176FHis(用lx洗脫緩沖液)后，將樹脂重新平衡并加入到前期純化的流出物中。收集第l和第2次的洗脫流分。在PD-IO柱上用PBS將收集的流分脫鹽。通過測定280nm處的吸光度使用由FcyRinaECD176FHis(SEQIDNo:3)氨基酸序列計算得到的理論吸光系數(shù)測定純化蛋白的產(chǎn)率。純化后的產(chǎn)率為1.5mg/200ml濃度為613|Lig/ml。SDS-PAGE顯示是一條寬帶，表明它是它是單一、純的糖基化蛋白。實施例6不同扎木單抗批產(chǎn)品的糖基化水平重鏈糖基化水平為了研究重鏈CH2結(jié)構(gòu)域N連接糖基化基團的存在，用SDS-PAGE和高pH陰離子交換劑脈沖電流計檢測(HPAEC-PAD)對幾批具有潛在重鏈糖基化差異的扎木單抗批產(chǎn)品(MEV001，MEV004,MEV005,MRS-CD4-001,BN078,B0118)進行分析。制備對照批產(chǎn)品進行比較脫糖基化扎木單抗批產(chǎn)品UNG-MRS-CD4、偽脫糖基化扎木單抗批產(chǎn)品MOCK-MRS-CD4(直接來自MRS-CD4-001)和混合批產(chǎn)品(脫糖基化和完全糖基化參比批產(chǎn)品的混合物)M90-MRS-CD4[90°/。重鏈糖基化]和M50-MRS-CD4[50%重鏈糖基化]。非還原SDS-PAGE(圖1)檢測顯示所有批產(chǎn)品包括UNG-MRS-CD4是完整的。還原SDS-PAGE(圖2)證實批產(chǎn)品UNG-MRS-CD4是完全脫糖基化的。批產(chǎn)品MRS-CD4-001和BN078含有少量未糖基化重鏈(<10%)，批產(chǎn)品B0118含有約10%未糖基化的重鏈。MEV001含有少量未糖基化重鏈。MEV004和MEV005含有未糖基化重鏈，其中MEV004的含量最高(約30%)，其次是MEV005(約15%)。重鏈糖基化類型為了研究重鏈糖基化類型，用HPAEC-PAD分析扎木單抗批產(chǎn)品(表1)。這些批產(chǎn)品都沒有大量的帶電多聚糖。幾乎檢測不到含有兩個半乳糖(G2或G2F)的復(fù)合型多聚糖。MRS-CD4-001(作為參比批產(chǎn)品)和MEV005具有相似數(shù)量的寡聚甘露糖-5型多聚糖(M5)，但MEV005比MRS-CD4-001具有更少的非核心巖藻糖基化多聚糖。在所有批產(chǎn)品中，MEV005無半乳糖的核心巖藻糖基化多聚糖(GOF)含量最高，比參考批產(chǎn)品MRS-CD4-001約高20°/。。糸匕產(chǎn)品BN078與參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001具有可比性，它們的具有相似含量的GOF、含有一個半乳糖(GIF)的核心巖藻糖基化多聚糖和非核心巖藻糖基化多聚糖，盡管BN078含有更多的M5。BO11869的特征是與MRS-CD4-001相比G0F含量增加，非核心巖藻糖基化多聚糖含量減少。不出所料，MRS-CD4-001于MOCK-MRS-CD4具有高度可比性(MOCK-MRS-CD4直接來自參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001)。批產(chǎn)品UNG-MRS-CD4被確認(rèn)不含有多聚糖(數(shù)據(jù)未顯示)。表1用HPAEC-PAD測定扎木單抗批產(chǎn)品多聚糖含量一覽<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>A:中性多聚糖百分比B:無半乳糖的核心巖藻糖基化多聚糖百分比(GOF;總峰面積百分比)C:含有一個半乳糖的核心巖藻糖基化多聚糖百分比(GIF;總峰面積百分比)D:寡聚甘露糖5型結(jié)構(gòu)百分比(M5，總峰面積百分比)E:非核心巖藻糖基化多聚糖百分比(總峰面積百分比)。根據(jù)公式計算非核心巖藻糖基化多聚糖+GOF'X)"OO，其中GO是非核心巖藻糖基化多聚糖百分比，GOF'是經(jīng)過(3-半乳糖苦酶處理后的核心巖藻糖基化多聚糖百分比(G0F+G1F)。Ns未顯示Nt未檢測實施例7糖基化差異與ADCC活性的關(guān)系I用流式細(xì)胞術(shù)研究數(shù)個扎木單抗批產(chǎn)品(見實施例6)對原代CD4+T細(xì)胞的由NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC的誘導(dǎo)能力(圖3)。通過靜脈穿刺收集健康志愿者(知情同意后)的外周人血并以暗黃層(Sanquin，Utrecht,TheNetherlands)的形式提供。在人血中加入無菌PBS，采用淋巴細(xì)胞制備密度離心(淋巴細(xì)胞分離介質(zhì)，BioWMttaker，viaCambrexVenders,比利時；產(chǎn)品#17-829E)分離夕卜周血單核細(xì)胞(PBMC),800xg20min(制動0次)離心分離20min。除去梯度介面的PBMC并在重懸于RPMI前用PBS洗滌3次(400xg7min,制動3次)。根據(jù)廠商的操作規(guī)程使用DynalCD4+T細(xì)胞陰性分離試劑盒(DynalBiotechGmbH，漢堡，Germany;產(chǎn)品#113.11)分離CD4+T細(xì)胞。根據(jù)廠商的操作規(guī)程使用DynalCD4+T細(xì)胞陰性分離試劑盒(DynalBiotechGmbH,漢堡，Germany;產(chǎn)品#113.15)分離NK細(xì)胞。根據(jù)廠商的操作規(guī)程用焚光細(xì)胞膜標(biāo)記PKH26(PKH26才示i己i式劑盒,Sigma-AldrichChemie,Zwijndrecht,TheNetherlands;產(chǎn)品#PKH26-GL)標(biāo)記分離的CD4+T細(xì)胞。然后將PKH26標(biāo)記的CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)移至96孔圓底板，2.5-5xl04個細(xì)胞/孔，每孔50^(根據(jù)分離后NK細(xì)胞的產(chǎn)率，調(diào)整每孔的T細(xì)胞數(shù)量使效應(yīng)器細(xì)胞革巴細(xì)胞達到10:1)。然后，將稀釋的扎木單抗批產(chǎn)品(稀釋范圍據(jù)圖表所示)加到50(il中，于4。C溫育10min。之后，將100(JNK細(xì)胞以2.5-5xl()S個細(xì)胞/孔加入，使細(xì)胞旋轉(zhuǎn)下沉，然后將沉降細(xì)胞在37。C溫育4h。為了達到自發(fā)裂解，在無NK細(xì)胞的情況下將靶細(xì)胞于培養(yǎng)基溫育。然后在進行分析前用TO-PRO-3對細(xì)胞染色(染色滲透細(xì)胞；分子探針，萊頓，荷蘭；產(chǎn)品弁T3605;最終稀釋度為1:100000)。使用流式細(xì)胞儀，用FACSCalibur和具有適當(dāng)補償設(shè)置的CellQuestPro軟件(BectonDickinson)測定細(xì)胞相關(guān)熒光。用PKH26+細(xì)胞群中TO-PRC^-3+細(xì)胞數(shù)除以PKH26+細(xì)胞總數(shù)計算細(xì)胞裂解百分率。由于允許頂點水平可變的四參數(shù)對數(shù)分析顯示并不是所有的曲線達到相似的頂點水平，所以用基線固定曲線的ECso值來計算批產(chǎn)品的活性和相對活性(而不是藥效)。就ADCC誘導(dǎo)活性而言，BN078、B0118、MOCK-MRS-CD4和M90-MRS-CD4顯示出與MRS-CD4-001(作為參考批產(chǎn)品)的可比性。MEV005和M50-MRS-CD4顯示出比參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001更低的NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC的誘導(dǎo)效率。對參比和對照批產(chǎn)品的研究結(jié)果顯示重鏈糖基化水平和誘導(dǎo)ADCC能力存在明顯聯(lián)系。完全糖基化參比批產(chǎn)品顯示出最大的ADCC活性，然而批產(chǎn)品M50-MRS-CD4(含有50%非糖基化的扎木單抗)顯示出的ADCC誘導(dǎo)活性顯著減少。批產(chǎn)品M90-MRS-CD4(含有10%非糖基化的扎木單抗)與參比批產(chǎn)品具有相似的誘導(dǎo)ADCC的能力。對批產(chǎn)品的檢測結(jié)果與以下內(nèi)容符合含有一定數(shù)量未糖基化重鏈的批產(chǎn)品MEV005和B0118顯示出減弱的誘導(dǎo)ADCC能力。對批產(chǎn)品MEV005和B0118分析顯示這些批產(chǎn)品還具有增加的巖藻糖基化，這可能說明巖藻糖基化引起這些批產(chǎn)品的ADCC誘導(dǎo)能力減弱(Shields,R.L.etal.,JBiolChem277,26733(2002),andOkazaki,A.etal.,JMolBiol1^，1239(2004))。實施例8糖基化差別與ADCC活性的關(guān)系II用流式細(xì)胞術(shù)研究數(shù)個脫糖基化混合批產(chǎn)品對原代CD4+T細(xì)胞的由NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC的誘導(dǎo)能力(見實施例7)。3個實驗中的一個代表性實驗的結(jié)果(見圖4的數(shù)據(jù))以一定濃度范圍(部分)脫糖基化批產(chǎn)品(單個數(shù)據(jù)點)存在下的CD4+T細(xì)胞的特異性裂解表示。將基線固定于一個共同值(commonvalue)(圖4A)，用4參數(shù)對數(shù)擬合進行曲線擬合。此外，在限制基線水平、頂點水平和坡度的情況下使用4參數(shù)對數(shù)擬合進行曲線擬合(圖4B)。使用頂點、基線和坡度固定曲線的EC5o值計算相對于MRS-CD4-001的藥效。此外，計算相對于母體GMP#3批產(chǎn)品(該批產(chǎn)品用于制備脫糖基化和混合批產(chǎn)品)的相對藥效(表2)。與MRS-CD4-001相比，GMP#3批產(chǎn)品和MOCK-GMP#3-CD4,偽脫糖基化GMP#3的ADCC活性《叛弱增加。M50-GMP#3-CD4、M70-GMP#3-CD4和M90-GMP#3混合批產(chǎn)品(脫糖基化和未脫糖基化GMP#3批產(chǎn)品的混合物)分別具有50%、30%和10%的脫糖基化GMP#3，相對于GMP#3的藥效為0.31、0.59和0.87，顯示出ADCC活性隨著重鏈糖基化的增加而減少?？傊劓溙腔胶驼T導(dǎo)ADCC能力存在著明顯的關(guān)系。表2脫糖基化混合批產(chǎn)品誘導(dǎo)ADCC的能力扎木單抗批產(chǎn)品相對藥效(ADCC)Exp1Exp2Exp平均值±SDMRS-CD4-001/GMP#11.001.001.001.00GMP#30.981.301.451.24±0.24(1.00)*MOCK-GMP#3-CD41.381.551,421.45±0.09(1.17)*M50-GMP#3-CD40.140,640.390.39±0.25(0.31)*M70-GMP#3-CD40.371.030.790.73±0.33(0.59)*M90-GMP#3-CD40.74U81.331.08±0.31(0.87)**相對于GMP#3批產(chǎn)品的藥效，被檢測批產(chǎn)。17。均來自于GMP#3顯示了相對參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001的相對藥效(由限制了基線水平、頂點水平和坡度時的曲線EC50值計算得到)和平均值±SD(標(biāo)準(zhǔn)偏差)。括號內(nèi)為相對于母體GMP#3的相對藥效。實施例9FcrRIHal76V結(jié)合ELISA和與ADCC的關(guān)系I檢測數(shù)個扎木單抗批產(chǎn)品(見實施例6)與Fc丫RIIIal76V的結(jié)合情況。用100pl2.5pg/mlFcyRinal76V(按照實施例4制備)包被Greiner板，于4。C溫育過夜。用200plPBST(含有0.05%Tween-20(Sigma-AldrichChemieB.V.，Zwijndrecht，，NL;產(chǎn)品目錄號63158)的PBS)和100pl系列稀釋的扎木單抗樣品(扎木單抗的濃度為300、75、18.75、4.69、0.29、1.17、0.07和0.02ng/ml)將板洗涂3次。將板置于RT振蕩溫育60min,然后用200plPBST洗滌3次，再加入綴合物，即1:4000稀釋的與過氧化物酶偶聯(lián)的親和純F(ab，)2片,殳G-a-Hu-IgQF(ab，)2特異性片4殳((JacksonImmunoResearch，BrunschwigChemieB,V.，阿姆斯特丹，荷蘭)。將板子再次置于RT振蕩溫育60min,然后用200plPBST洗滌3次，加入100(ilABTS(Roche,catnr1112597)，將板子在振蕩條件下溫育30min。加入100pl2%草酸終止反應(yīng)，在405nm處測定吸光值。結(jié)果如圖5所示。由于使頂點水平可變的四參數(shù)對數(shù)分析顯示所有曲線達到相似的頂點水平，使用固定基線水平、頂點水平和坡度固定的曲線EC5()值計算批產(chǎn)品的藥效合相對藥效。BN078和MOCK-MRS-CD4與參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001相比具有相似的與板結(jié)合的FcyRIIIal76V結(jié)合的能力。批產(chǎn)品MEVOOl、MEV005、B0118、M50-MRS-CD4和M90-MRS-CD4顯示出更低的與板結(jié)合的FcYRHIal76V的結(jié)合藥效。就與板結(jié)合的Fc7RIIIai76V的結(jié)合而言，批產(chǎn)品MEV001、MEV005、、B0118和M50-MRS-CD4具有可比性，相對藥效為0.4-0.5。M90-MRS-CD4與預(yù)期的不同，相對結(jié)合藥效約0.7(預(yù)期值為0.9)。對參比和對照批產(chǎn)品的研究發(fā)現(xiàn)重鏈糖基化水平與FcyRinal76V結(jié)合能力之間存在明顯的關(guān)系。完全糖基化參比批產(chǎn)品顯示出最大FcYRIIIal76V結(jié)合力，而M50-MRS-CD4的結(jié)合能力顯著降低，M90-MRS-CD4顯示了中等的結(jié)合能力。檢測批產(chǎn)品的結(jié)果與以下內(nèi)容符合具有30%和10%未糖基化重鏈的MEV005和B0118顯示出顯著降低的Fc了RIIIal76V結(jié)合能力。出乎意料的是批產(chǎn)品MEV001也顯示出顯著降^f氐的Fcyinal76V結(jié)合能力，雖然SDS-PAGE并未檢測出MEV001含有未糖基化重鏈。從以上內(nèi)容可以得出ADCC誘導(dǎo)(圖3)和與純化FcYRIIIal76V(圖5)的結(jié)合力之間存在聯(lián)系。實施例10FcYRJIIal76V結(jié)合ELISA和與ADCC的關(guān)系II檢測數(shù)個扎木單抗脫糖基化混合批產(chǎn)品(見實施例8)與FcyRIIIal76V的結(jié)合能力。用100pl2.5ng/mlFc/腿al76V(按照實施例4制備)包被Greiner板，于4。C溫育過夜。用200jilPBST(含有0,05%Tween-20(Sigma-AldrichChemieB.V.，Zwijndrecht,,NL;產(chǎn)品目錄號63158)的PBS)和100^tl系列稀釋扎木單抗樣品(扎木單抗的濃度是300，75，18.75,4.69，0.29，1.17，0.07和0.02jag/ml)將板洗滌3次。將板在RT上振蕩溫育60min,然后用200(alPBST洗滌3次，再加入綴合物，即1:4000稀釋的過氧化物酶偶聯(lián)親和純F(ab，)2片段G-a-Hu-IgQF(ab，)2特異性片段((JacksonImmunoResearch,BrunschwigChemieB.V.，阿姆斯特丹，荷蘭)。將板又在振蕩條件下溫育60min，然后用200|ilPBST洗滌3次，加入100|ilABTS(Roche,catnr1112597)，將板在振蕩條件下溫育30min。加入100pi2%草酸終止反應(yīng)，在405nm處測定吸光值。結(jié)果如圖6所示。限制基線水平、頂點水平和坡度，使用四參數(shù)對數(shù)擬合進行曲線擬合(圖6)。使用固定頂點、基線水平和坡度的曲線的ECso值計算相對于MRS-CD4-001的相對藥效。此外，計算相對于母體GMP#3批產(chǎn)品(用于制備脫糖基批產(chǎn)品和混合批產(chǎn)品)的相對藥效(表3)。扎木單抗批產(chǎn)品與板結(jié)合的FcYRIIIal76V的結(jié)合扎木單抗批產(chǎn)品相對藥效(FcyRinal76V結(jié)合)Exp1Exp2平均值±SDMRS-CD4-001/GMP#1LOO1.00LOOGMP#31.121.121.12±0.00(1.00)*UNG-GMP#3-CD4Nd雨-MOCK-GMP#3-CD41.231.231.23±0.00(1.09)*M50-GMP#3-CD40.500.600.55±0.07(0.49)*M70-GMP#3-CD40.710.880.80±0.12(0.71)*M^-GMP#3-CD40.911.161.04±0.18(0.93)*顯示了相對于參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001(來自基線水平、頂點水平和坡度受限的曲線的EC50值)的相對藥效和平均值士SD，括號內(nèi)是相對于給定母體GMP#3的相對藥效與MRS-CD4-001批產(chǎn)品、GMP#3批產(chǎn)品和MOCK-GMP#3-CD4批產(chǎn)品相比，偽脫糖基化GMP#3批產(chǎn)品與FcyRinal76V的結(jié)合能力略有增加。M50-GMP#3-CD4、M70-GMP#3-CD4和M90-GMP#3混合批產(chǎn)品(脫糖基化和糖基化GMP#3批產(chǎn)品的混合物)分別含有50%、30%和10%脫糖基化GMP#3，相對于GMP#3的結(jié)合藥效分別為0.49、0.71和0.93,顯示出隨著重4連糖基化含量的減少與FcyRIIIal76V的結(jié)合能力也減弱?？傊劓溙腔胶虵cYRIIIal76V結(jié)合能力之間存在明顯的關(guān)系(圖7)。又一次表明ADCC和FcyRIIIal76V結(jié)合之間確實存在明顯的關(guān)系(圖8)。實施例11與抗原結(jié)合I用ELISA研究扎木單抗批產(chǎn)品與純化的CD4蛋白的結(jié)合(圖9)。通過4。C溫育過夜將sCD4(《免疫診斷學(xué)(ImmunoDiagnostics)》，Woburn，MA，USA,catnr7001-10)以PBS中0.5pg/ml(100pl/孔)的濃度包被平底96孔板(Greiner,Alphena/dRijn,NL,catnr655092。棄去板中溶液，用200jil/孔PBSC(含有2%(v/v)雞血清的PBS(Invitrogen,Breda，NL,catnr16110-082))在RT振蕩器lh封閉殘余的非特異結(jié)合位點。制備扎木單抗批產(chǎn)品稀釋物，在PBSTC(含有0.05%(v/v)Tween-20(Sigma-AldrichChemieB.V"Zwijndrecht，NL;cat。158的PBS)和2%(v/v)雞血清)中進行系列4倍稀釋，濃度范圍從2000ng/ml到0.49ng/ml。棄去板中溶液，加入100pl稀釋液到包被板中，在RT振蕩溫育2h。棄去板中溶液并用PBSTlx(200p1/孔)洗滌3次。將綴合物羊抗HulgGF(ab，)2特定HRP(JacksonImmunoResearch)在PBSTClx中按1:10.000進行稀釋，每孔加入100pl。將板在RT上振蕩溫育lh。棄去板中溶液并用PBSTlx(200^d/孔)洗滌3次。在吸水紙上拍板以除去所有殘余液體。將一片ABTS底物(50mg羅氏診斷學(xué)NL,Almere,NL，catnr1122422)溶解在50mlABTS緩沖液中(羅氏，catnr1112597),每孔加入100pl。用鋁箔包裹板子在RT振蕩溫育30min。用100(il/孔2%草酸(Sigma-AldrichChemieB.V.)終止反應(yīng)。用分光光度計在405nrn處讀取吸光度(ELISA-EL808，BeundeRonde,Abcoude，NL)。由于使頂點水平可變的四參數(shù)對數(shù)分析顯示所有曲線達到相似的頂點水平，使用固定基線水平、頂點水平和坡度固定的曲線EC50值計算批產(chǎn)品的藥效合相對藥效。與參考MRS-CD4-001相比，盡管所有其它批產(chǎn)品的糖基化程度明顯不同，但是它們具有與板結(jié)合的sCD4相似的結(jié)合力。應(yīng)該注意的是該測定方法具有相對較高的可變性。實施例12抗原結(jié)合n用EUSA研究扎木單抗混合批產(chǎn)品(見實施例8)與純化CD4蛋白的研究(圖10)。用100pi2.0|ig/mlsCD4(免疫診斷學(xué)((ImmunoDiagnostics)，Woburn，MA,USA，產(chǎn)品#7001-10)包被Greiner板并于4。C溫育過夜。用200jilPBST和100pl系列稀釋的扎木單抗樣品(扎木單抗的濃度為1000、250、62.5、15.62、3.9、0.98、0.24和0.06ng/ml)洗板3次。將板子于RT振蕩溫育60min,然后用200plPBST洗滌3次，再加入以1:20000稀釋的過氧化物酶偶聯(lián)親和純G-a-Hu-IgG，F(xiàn)(ab，)2特異片段(JacksonImmunoResearch，BrunschwigChemieB.V,，阿姆斯特丹，荷蘭)綴合物。再次將板子于RT振蕩溫育60min，然后用200nlPBST洗滌3次。加入lOOiilABTS(羅氏，catnr1112597),將板子振蕩溫育30min。用100^12%草酸終止反應(yīng)，在405nm讀取吸光值。由于使頂點水平可變的四參數(shù)對數(shù)分析顯示所有曲線達到相似的頂點水平，使用固定基線水平、頂點水平和坡度固定的曲線EC50值計算批產(chǎn)品的藥效合相對藥效(表4)。表4扎木單抗脫糖基化混合批產(chǎn)品與板結(jié)合的CD4的結(jié)合<table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table>顯示了相對于參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001(來自基線水平、頂點水平和坡度受限的曲線的EC50值)的相對藥效和平均值士SD。GMP弁3是專利批產(chǎn)品與參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001相比，盡管所有其它批產(chǎn)品的糖基化程度具有明顯差異，但它們與板結(jié)合的sCD4具有相似的結(jié)合能力。實施例13IL-2生產(chǎn)的抑制通過嵌套測定法(T細(xì)胞活化測定，然后進行IL-2ELISA)研究扎木單抗批產(chǎn)品(見實施例6)通過活化的PBMC抑制IL-2產(chǎn)生的能力，在嵌套測定法中按照廠商說明書使用來自U-CyTech(烏德勒支，荷蘭；產(chǎn)品CT202)或來自BD生物科學(xué)(AlphenaandeRijn，荷蘭，產(chǎn)品#55061l)的人IL-2細(xì)胞因子ELISA試劑盒。在系列稀釋(或所選系列)的參比抗體或檢測樣品存在下，用板結(jié)合的抗-CD3(100ng/ml)和可溶性抗-CD28(100ng/ml)在平底96孔板中激活PBMC(每孔105個細(xì)胞)。38-42h以后，收獲細(xì)胞懸浮液，在稀釋液中稀釋并轉(zhuǎn)移到96孔ELISA板中。使用含有IL-2標(biāo)準(zhǔn)品的人IL-2ELISA試劑盒通過ELISA測定pg/ml水平的IL-2濃度。由于使頂點水平可變的四參數(shù)對數(shù)分析顯示所有曲線達到相似的頂點水平，使用固定基線水平、頂點水平和坡度固定的曲線EC50值計算批產(chǎn)品的藥效合相對藥效；由于UNG-MRS-CD4沒達到相同的基線水平，將該批產(chǎn)品排除此分析之外。使用兩個MRS-CD4-001曲線的平均ECs。值計算相對藥效。對每個板分別進行計算。如上所述測定扎木單抗批產(chǎn)品抑制IL-2產(chǎn)生的能力。結(jié)果顯示了一式兩份樣品上清液中IL-2的濃度。用四塊板子一全測全組扎木單抗批產(chǎn)品，每個實驗測定兩次。圖11顯示兩個實驗中的其中一個。如上所述測定扎木單抗批產(chǎn)品抑制IL-2產(chǎn)生的能力。表5顯示了兩組實驗相對于參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001(2條MRS-CD4-001曲線的平均EC5o值)的相對活性(由基線固定曲線的ECM)值計算得到)。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table>所有被檢測的扎木單抗批產(chǎn)品，除了對照批產(chǎn)品UNG-MRS-CD4，都可抑制IL-2的產(chǎn)生。批產(chǎn)品MOCK-MRS-CD4、M90-MRS-CD4、BN078和MEV005與參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001的抑制方式相似。B0118抑制程度更高，批產(chǎn)品M50-MRS-CD4和MEVOOl抑制程度較低。不同實驗之間和實驗中存在高度變異性。當(dāng)用參比和對照批產(chǎn)品的結(jié)果進行研究時，重鏈糖基化水平顯示出在一定程度上與通過活化T細(xì)胞抑制IL-2產(chǎn)生的能力相關(guān)。完全糖基化參比批產(chǎn)品顯示出最大活性，然而M50-MRS-CD4抑制IL-2產(chǎn)生的能力顯著降低。M90-MRS-CD4具有與參比物相似的抑制IL-2產(chǎn)生的能力。含有30%未糖基化重鏈的被檢測批產(chǎn)品MEV005抑制IL-2產(chǎn)生的能力降低。然而未顯示含有未糖基化重鏈的批產(chǎn)品MEVOOl抑制IL-2產(chǎn)生的能力也降低，而含有10%未糖基化重鏈的批產(chǎn)品B0118可以很好地抑制IL-2的產(chǎn)生，即使略高于參比查品。實施例14通過基于AlphaScreenTM的分析法篩選數(shù)個扎木單抗批產(chǎn)品的FcR結(jié)合和CD4結(jié)合使用單一基于Al。haScreenTM的分析法檢測數(shù)個扎木單抗批產(chǎn)品(見實施例8)與FcyRIIIal76V和CD4的結(jié)合。將His標(biāo)記FcYRIIIal76V偶聯(lián)到Ni受體珠上。洗滌珠除去未結(jié)合的His標(biāo)記FcyRIIIal76V。將sCD4-生物素偶聯(lián)到SA供體珠上。洗滌i朱除去未結(jié)合的sCD4-生物素。制備參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001和H-IgG的稀釋樣品(范圍90、30、3、1、0.3、0.03和0jig/ml)。將可變體積的His標(biāo)記FcyRIIIal76V-Ni-受體珠加入384孔光學(xué)板(optiplate)的孔中，然后加入固定體積的扎木單抗或H-IgG和固定體積的sCD4-生物素-SA-供體珠。在暗處于室溫溫育lh后，用帶有"a篩選標(biāo)記"的EnVisionTM儀器分析珠/抗體混合物。圖12證明兩個實驗具有相似的相對結(jié)合能力趨勢。根據(jù)預(yù)期值，M50-MRS-CD4的平均結(jié)合能力為參比批產(chǎn)品的53%。M90-MRS-CD4顯示出約75%的結(jié)合能力，略低于預(yù)期值。批產(chǎn)品B0118和BN078顯示相似的結(jié)合能力(88%和89%)。批產(chǎn)品MEV005和MOCK-MRS-CD4的結(jié)合能力略低(84%和81%)。實施例15與細(xì)胞結(jié)合的FcyRI的結(jié)合檢測數(shù)個扎木單抗批產(chǎn)品(見實施例8)與細(xì)胞結(jié)合的FcyRI的結(jié)合。收獲IIA1.6和1IA1.6-FcyRI纟田月包(由L.Bevaart女生(免疫治療部門，烏德勒支醫(yī)療中心大學(xué)，烏德勒支，荷蘭)惠贈)并用臺盼藍排除法計數(shù)。在RT中將細(xì)胞于500g旋轉(zhuǎn)5min，棄去上清,3夸細(xì)月包以lx106個/ml重懸于染色液(含有1。/。v/vBSA(羅氏，Almere，NL)的PBS)和0.01%v/v疊氮化合物(Sigma-AldrichChemieB.V.))并以100fil/孑Li專爭詳多至96孑LV形底斧反(Greiner,Frickenhausen,Germany,cat#651101)。在染色液中以2倍系列稀釋制備扎木單抗批產(chǎn)品稀釋液，濃度范圍從10000ng/ml到9.8ng/ml。向細(xì)胞加入100pl樣品、陰性對照IgG2(結(jié)合位點，伯明翰，英國，cat弁BP080)或染色液，于4°C溫育30min。用150pl染色^7孔洗滌細(xì)胞3次，RT旋轉(zhuǎn)500g5min。向細(xì)胞沉淀物加入100孔的F(ab，)2抗人-IgG-F(ab，)rFITC(Jackson，賓夕法尼亞，美國，產(chǎn)品#109-096-097;1:IOO染色液稀釋)，于4。C溫育30min。用150pl染色液洗滌細(xì)胞3次，RT旋轉(zhuǎn)500g5min。將細(xì)胞重懸于150pl染色緩沖液中并轉(zhuǎn)移至1.3ml的試管中。用FACSCalibur(BD)或FACScan(BD)分析細(xì)胞。與參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001相比，大部分批產(chǎn)品與細(xì)胞結(jié)合Fc7RI的結(jié)合數(shù)量略低，盡管批產(chǎn)品之間的糖基化存在差異。應(yīng)該注意的是這種測定方法的變異相對較高。而且含有50%糖基化重鏈的批產(chǎn)品M50-MRS-CD4的結(jié)合力更低。批產(chǎn)品UNG-MRS-CD4很難與板結(jié)合的FqRI結(jié)合(圖13)。實施例16與板結(jié)合的FcYRI的結(jié)合檢測數(shù)個扎木單抗批產(chǎn)品(見實施例8)與板結(jié)合的FcyRI的結(jié)合。用His標(biāo)記的重組FcyRI(GenmabB.V.，trecht,NL，批產(chǎn)品#EX2005-0403-016-TVE)以1.5jig/ml(100)il)包被平底％孔板，在PBS中于4。C溫育過夜。用PBS洗板3次，倒空并用200(ji/孔的PBSC在RT封閉非特異性結(jié)合位點1h。制備扎木單抗批產(chǎn)品稀釋液，用PBSTC進行2倍系列稀釋，濃度范圍從4000ng/ml到31.25ng/ml。加入100^1稀釋樣品，在RT溫育2h。棄去板中溶液，用PBSTlx(200jil/孔)洗滌3次。用lxPBSTC以1:10.000稀釋的羊[F(ab，)2片段]抗人IgGF(ab，)2特異HRP綴合物(Jackson,catnr109-096-097)(在EX2005-0505-008-MVO中使用羊抗人IgGF(ab，)2特異HRPJacksoncatnr109-035-097綴合物)，每孔加入100|al綴合物。將板子在RT溫育lh。棄去板中溶液，用PBSTlx(200pl/孔)洗滌3次。在吸水紙上拍板除去殘余液體。將一片ABTS底物(50mg(羅氏i貪斷學(xué)(RocheDiagnostics)NL,Almere，NL，catnr1122422)》容解在50mlABTS;容液中(羅氏，catnr1112597),每孔加入100p!。用鋁箔包裹板子在RT溫育30min。用100pl/孔2。/。草酸[Sigma-AldrichChemieB.V.]終止反應(yīng)。用分光光度計在405nm處讀取吸光值[ELISA-EL808，BeundeRonde，Abcoude，NL]。與參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001相比，大部分批產(chǎn)品與細(xì)胞結(jié)合FcyRI的結(jié)合能力略低，盡管批產(chǎn)品之間存在糖基化差異。應(yīng)該注意的是這個測定方法的變異相對較高。而且僅含有50°/。糖基化重鏈的批產(chǎn)品M50-MRS-CD4底結(jié)合能力顯著降低。UNG-MRS-CD4未顯示與FqRI包被板很強的結(jié)合能力(圖14)。實施例17扎木單抗批產(chǎn)品誘導(dǎo)ADCC的能力和與CD4、FcyRI、FcYRIIIal76V或CD4和FcrRIIIal76V聯(lián)合結(jié)合中測定的相對藥效的關(guān)系檢測數(shù)批扎木單抗(見實施例8)與板結(jié)合的FcyRI的結(jié)合。根據(jù)重鏈糖基化水平和與數(shù)個測定方法的潛在聯(lián)系將參比產(chǎn)品和扎木單抗混合批產(chǎn)品(不同重鏈糖基化)分類。與參比批產(chǎn)品MRS-CD4-001相比，批產(chǎn)品UNG-MRS-CD4、M50-MRS-CD4和M90-MRS-CD4都與CD4的結(jié)合能力類似(圖15B;也見圖9)，然而與FcyRI(圖15C;也見圖13和14)和FcYRIIIal76V(圖15D;也見圖5)的結(jié)合能力不同，這與重鏈糖基化水平相關(guān)。在AlphaScreen測定法(圖15E;圖12)和功能ADCC(圖15A;也見圖3)中也確實存在這種關(guān)系。這些數(shù)據(jù)顯示與Fc丫R的結(jié)合確實與抗體Fc介導(dǎo)的活性相關(guān)，該活性在作用機制發(fā)揮關(guān)鍵作用。實施例18FcYRIIIal76V脫唾液酸化可提高FcYRIIIal76V結(jié)合ELISA的性能檢測源自CHO-K1SV細(xì)胞的兩個FcyRIIIal76V批產(chǎn)品是否適用于板結(jié)合的FcyRIIIal76V結(jié)合ELISA(如上所述)。用100pl2.5jig/mlFcyRinal76V批產(chǎn)品646-005-EP或655-015-EP包被Greiner板，于4。C溫育過夜。用200plPBST(含有0.05%Tween-20的PBS)洗板3次，加入100pl系列稀釋扎木單抗樣品(扎木單抗的濃度為300、75、18.75、4.69、0.29、1.17、0.07和0.02pg/ml)。將板子在RT振蕩溫育60min，加入200plPBST洗滌3次，再加入以1:4000稀釋的綴合物過氧化酶親和純F(ab，)2片段G抗人IgG,F(ab，)2特異性片段((JacksonImmunoResearch，BrunschwigChemieB.V.,阿姆斯特丹,荷蘭)。再次將板子在RT振蕩溫育60min,然后用200plPBST洗滌3次。加入100jilABTS(羅氏，catnr1112597)并將板子在振蕩條件下溫育30min。用100pl/孔2。/。草酸[Sigma-AldrichChemieB.V.]終止反應(yīng)，測定405nm處的吸光值。結(jié)果如圖16所示。批產(chǎn)品646-005-EP表現(xiàn)出較好的劑量反應(yīng)曲線，頂點值較高，然而批產(chǎn)品655-015-EP的曲線更加平緩，頂點值較低。先前已注意到非變性電泳顯示這些批產(chǎn)品帶有不同的負(fù)電荷，例如批產(chǎn)品655-015-EP比批產(chǎn)品646-005-EP含有更多的負(fù)電荷(圖17)。此外，這兩個批產(chǎn)品在還原SDS-PAGE上遷移行為不同，但在用酶脫糖基化后它們遷移到相同位置(圖18)。這表明分子量差異是由N連接糖基化的差異造成的。將批產(chǎn)品655-015-EP去唾液酸，在Fc丫RIIIal76V結(jié)合ELISA中比較脫唾液酸受體與未處理受體。為了除去唾液酸，將批產(chǎn)品655-015-EP(在磷酸鹽緩沖液中)與產(chǎn)脲節(jié)4干菌(JW/zraZ^c&rwea/ac/era義唾液酸酶(羅氏，目錄號10269611001;約1mgFcyRinal76V中含有80mU唾液酸酶)于37。C溫育72h。溫育后，用TALONTM珠純化脫唾液酸受體并使用實施例5描述的PD-10柱子將緩沖液交換成磷酸緩沖液，得到1.2ml濃度為0.45mg/ml(batch403-041-EP)的純化脫唾液酸FcYRIIIal76V。然后用SDS-PAGE(圖19)和非變性凝膠電泳(圖20)分析未處理655-015-EP和脫唾液酸批產(chǎn)品403-041-EP。與未處理FcYRIIIal76V相比，脫唾液酸批產(chǎn)品的負(fù)電荷顯著較少，分子量略小。這表明受體已被成功地脫唾液酸。在板結(jié)合的FcYRIIIal76V結(jié)合ELISA中比較脫唾液酸和未處理FcyRIIIal76V。兩種制備物都以2.5|ig/ml包被到板上，按上述方法與扎木單抗結(jié)合。圖21清楚地顯示了受體脫唾液酸化顯著提高了板結(jié)合測定的性能。為了確定這是否由脫唾液酸FcYRIIIal76V與板結(jié)合能力提高引起的，將兩倍系列稀釋脫唾液酸FcYRIIIal76V(批產(chǎn)品403-041-EP)和未處理FcyRinal76V(655-015-EP)包被到板上。起始濃度為10^g/ml。用PBTS洗板，用羊-抗-CD16-FITC(BD生物科學(xué)，目錄號555406)然后用羊-抗-FITC-HRP(羅氏，目錄號11426356910)檢測結(jié)合的FcyRnial76V。用ABTS顯示反應(yīng)結(jié)果。圖22顯示了與未處理FcYRIIIal76V相比，脫唾液酸FcYRIIIal76V與板的結(jié)合能力確實有所提高。實施例19用包被于ELISA板上的his捕獲抗體捕獲his標(biāo)記FcyRIIIal76V可以l是高ELISA的壽文感性。比較將his標(biāo)記FcyyRinaECD176VHis直接包被于ELISA板和用his捕獲抗體捕獲his標(biāo)記FcyRIIIaECD176VHis。用100pilpg/mlFcyRIIIal76V批產(chǎn)品弁0646-005-EP或用抗多聚組氨酸mAb(羊-抗-多聚組氨酸IgGlmAb克隆AD1.1.10,R&D,產(chǎn)品#MAB050,0.5mg/mlPBS/5o/。海藻糖,批號弁AEJ175(B1)包被Greiner板，于4。C溫育過夜。用200plPBST(含0.05%Tween-20的PBS)洗板3次，用含有1%BSA的PBS封閉60min。將抗多聚組氨酸mAb包被板與100pil^ig/mlFcYRIIIal58V批產(chǎn)品進一步在RT振蕩溫育60min,然后用200)ilPBST洗滌3次。將兩種類型的包被板與100jul系列稀釋的HuMax-EGFr樣品(HuMax-EGFr的濃度是300、75、18.75、4.69、0.29、1.17、0.07和0.02|ig/ml;批產(chǎn)品1#095-03-01F和批產(chǎn)品2#P247740)在RT振蕩溫育60min，然后用200jalPBST洗滌3次，再加入綴合物以1:10，000稀釋的過氧化物酶偶聯(lián)親和純F(ab，)2片#殳G抗人'IgG，F(xiàn)(ab，)2特異片I5:(JacksonImmunoResearch,BrunschwigChemieB.V.，阿姆斯特丹，荷蘭)。將板子在RT振蕩溫育60min,用200plPBST洗滌3次。加入100plABTS并在振蕩條件將板子溫育20min。加入100(il2%草酸終止反應(yīng)，測定405nm處的吸光值。圖23顯示了兩批抗體HuMax-EGFr與FcyRIIIa176V的結(jié)合曲線(數(shù)據(jù)以平均值士SD,n=3顯示)，直接包被(上組圖)或使用his捕獲mAb(下組圖)。使用his捕獲的包被可以使HuMax-EGFr—FcYRIIIa176V相互作用的親和力更高，約比直接包被FcYRIIIal76V的親和力高4倍。由于解離得更慢，所以更高親和力也是有利的。因此，使用his捕獲抗體來捕獲his標(biāo)記FcyRIIIal76V的方法可以提高結(jié)合ELISA的敏感性。顯著地，兩個被檢測HuMax-EGFr批產(chǎn)品的EC50比率對于兩種ELISA形式都是相同的(平均約2),這表明這個測定形式與測定相對藥效相當(dāng)。實施例20扎木單抗對CD4+T細(xì)胞CD4受體的Fc依賴性下調(diào)用源自PBMC的CD4+T細(xì)胞(純化見實施例7)或SUP-T1細(xì)胞，在加入或不加入源自PBMC的單核細(xì)胞(根據(jù)Dynal單核細(xì)胞陰性分離試劑盒進行分離)或TPH-1細(xì)胞的條件下研究效應(yīng)器細(xì)胞存在時扎木單抗下調(diào)CD4的能力。將PBMC或SUP-T1細(xì)胞與一定濃度范圍的扎木單抗、扎木單抗-F(ab，)2片段(SUP-T1)、扎木單抗-Fab(SUP-T1)或陰性對照HuMab-KLH溫育。在適當(dāng)?shù)臅r候?qū)⑿?yīng)器細(xì)胞以效應(yīng)器細(xì)胞和耙細(xì)胞比率為10:1、5:l或4:1力。入。加入IFN-y(濃度范圍125-1000嗎/ml)，將細(xì)胞溫育過夜。然后，將細(xì)胞染色用焚光標(biāo)記M-T477(來自BD的非竟?fàn)嶢b)檢測細(xì)胞CD4和靶細(xì)胞篩選標(biāo)記(區(qū)分靶細(xì)胞和其它細(xì)胞)。用流式細(xì)胞儀評價細(xì)胞相聯(lián)焚光強度。圖24顯示了使用新鮮分離的CD4+T細(xì)胞或SUP-T1T細(xì)胞用帶有非竟?fàn)嶤D4單克隆抗體的流式細(xì)胞儀檢測的扎木單抗誘導(dǎo)CD4下調(diào)的能力。純化的原代CD4+T細(xì)胞(圖4A)或SUP-T1T細(xì)胞(圖4B)中對CD4表達的扎木單抗劑量依賴型下調(diào)分別需要單核細(xì)胞或單核細(xì)胞的存在。結(jié)果顯示18-24h后CD4表達水平減少了50-80%。由于不論在有無輔助細(xì)胞的情況下與F(ab，)2片段溫育不會引起CD4表達減少(圖4B)所以下調(diào)為Fc依賴性的。在高mAb濃度下，可溶扎木單抗不能下調(diào)CD4，可能由于單體結(jié)合導(dǎo)致交聯(lián)減少。通過固定化聯(lián)也下調(diào)CD4(數(shù)據(jù)未顯示)。所有這里引用的參考文獻，包括出版物、專利應(yīng)用和專利都以參考文獻的形式被完整引用，與每一篇參考文獻被單獨和特別指出以參考文獻被引用的程度相同。這里使用的所有標(biāo)題和副標(biāo)題僅僅是為了方便起見，不應(yīng)該以任何形式限制本發(fā)明。除非這里另外說明或與專利內(nèi)容相互矛盾，以上所述內(nèi)容的任何可能變體的任何組合都包括在本發(fā)明中。除非這里另外說明或與專利內(nèi)容相互矛盾，在描述本發(fā)明的內(nèi)容中所使用的術(shù)語"一"、"該"和類似指示代詞包括單數(shù)和復(fù)數(shù)形式。除非這里另外說明，這里列舉的數(shù)值范圍僅為指出在這一范圍內(nèi)的每一個單獨數(shù)值的簡便方法，每個單獨的數(shù)值都包含在規(guī)格中，就像它們在這里被單獨引用。除非另有說明，這里提供的所有精確數(shù)值代表相應(yīng)的近似數(shù)值(例如也可認(rèn)為這里提供的與某一具體因素或測定相關(guān)的精確示例數(shù)值也提供了相應(yīng)的近似測定，適當(dāng)時用"約"來修飾)。除非這里另外說明或與專利內(nèi)容相互矛盾，這里描述的所有方法可以按任何合適的順序進行。這里提供的所有實施例或示例性語言(例如"例如")僅僅是為了更好地闡明本專利，除非特別指出，不會限制本專利的范圍。規(guī)格里的語言都不應(yīng)該指明任何一個元素對于實施本發(fā)明是必須的。這里對專利文件的引用僅僅是為了方便起見，不反應(yīng)出任何對這些專利文件的有效性、可專利性和/或強制性的觀點。本發(fā)明使用的與一元素或許多元素相關(guān)的例如"組成"、"具有"、"包括"或"含有"這樣的術(shù)語對任何實施方案的描述意在支持由這一元素或許多元素"組成的""主要組成的"或"被包括在內(nèi)的"本發(fā)明的相似實施方案。(例如，這里描述的包含某一元素的一種組合物應(yīng)理解為描述了由該種元素組成的一種組合物，除非另外說明或與專利內(nèi)容明顯矛盾)。本發(fā)明在法律允許的最大范圍內(nèi)包括這里的實施方案中引用的主題的所有變體和等價物。這里引用的所有專利、待審批專利應(yīng)用和其它出版物均以參考文獻的形式被完整引用。權(quán)利要求1.一種測定含有FcR結(jié)合肽藥品藥效的方法，其中藥品FcR結(jié)合肽的至少一種作用機制是通過藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合介導(dǎo)，其中所述方法包括測定藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合的方法。2.—種根據(jù)權(quán)利要求1的用于測定含有FcR結(jié)合肽藥品藥效的方法，該方法包括-i)測定參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合ii)測定藥品FcR結(jié)合肽與上述Fc受體的結(jié)合iii)比較步驟ii)FcR與步驟i)FcR的結(jié)合情況，使用比較得到的信息評1介藥物的藥效；其中a)步驟ii)中與Fc受體的結(jié)合與步驟i)中與Fc受體的結(jié)合以相同的方式測定，b)藥品FcR結(jié)合肽的至少一種作用機制是通過FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合介導(dǎo)，c)其中參比標(biāo)準(zhǔn)FcR結(jié)合肽和藥品FcR結(jié)合肽是同種FcR結(jié)合分子的兩種不同制劑。3.—種生產(chǎn)含有FcR結(jié)合肽藥物組合物的方法，該方法包括a)生產(chǎn)含有上述FcR結(jié)合肽的藥品；b)將權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中的方法應(yīng)用于上述藥品，測定含有FcR結(jié)合肽藥品的藥效；c)使用步驟b)得到的信息作為該藥品是否可以作為藥物組合物來使用的部分評價依據(jù)。4.一種根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的方法，其中所述方法是所述藥品作為藥物組合物銷售的上市許可申請的一部分。5.—種申請含有FcR結(jié)合肽藥品上市許可的方法，該方法包括對根據(jù)權(quán)利要求l-4任一項中用于測定藥品FcR結(jié)合肽藥效測定方法的描述。6.—種根據(jù)權(quán)利要求l-5任一項的方法，其中用于測定含有FcR結(jié)合肽藥品藥效的方法被用于批簽發(fā)的藥效測定。7.—種根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項的方法，其中用以下方法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合(i)使藥品樣品與Fc受體接觸足夠長的時間以使FcR結(jié)合肽與Fc受體結(jié)合，(ii)檢測與Fc受體結(jié)合的FcR結(jié)合肽的量。8.—種根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中用針對FcR結(jié)合肽的檢測抗體進^f于^r測。9.一種根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中檢測抗體是標(biāo)記抗體。10.—種根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項的方法，其中用ELISA測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。11.一種根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項的方法，其中用AlphaScreenTM測定法檢測FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。12.—種根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項的方法，其中用放射免疫測定法檢測FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。13.—種根據(jù)4又利要求1-6中任一項的方法，其中用Biacore測定法檢測FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。14.一種根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項的方法，其中用FMAT測定法檢測FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。15.—種根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項的方法，其中用DELFIA測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。16.—種根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)。17.—種根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)ADCC或靶受體的下調(diào)介導(dǎo)。18.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)。19.一種根據(jù)權(quán)利要求1-18中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞的ADCC介導(dǎo)。20.—種根據(jù)權(quán)利要求1-19中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)結(jié)合FcR結(jié)合肽的Fc受體在自然殺傷細(xì)胞上表達。21.—種根據(jù)權(quán)利要求17-20中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRina受體或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。22.—種根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中FcyRIII受體是一種FcYRIIIal76V受體或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段，例如胞外結(jié)構(gòu)域。23.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集多形核白細(xì)胞介導(dǎo)。24.—種根據(jù)權(quán)利要求1-23中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)多形核白細(xì)胞的ADCC介導(dǎo)。25.—種根據(jù)權(quán)利要求1-24中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)PMN脫顆粒作用介導(dǎo)。26.—種根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)多形核白細(xì)胞的吞噬作用介導(dǎo)。27.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或23-26中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在多形核白細(xì)胞上表達。28.—種根據(jù)權(quán)利要求23-27中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIa受體或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。29.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)單核細(xì)胞或巨p藍細(xì)胞的ADCC介導(dǎo)。30.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或29中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞上表達。31.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、29或30中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。32.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)血小板聚集。33.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或32中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集血小板介導(dǎo)。34.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、32或33中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在血小板上表達。35.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或32-34中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。36.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生。37.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或36中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集自然殺傷細(xì)胞和/或T細(xì)胞介導(dǎo)。38.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、36或37中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在自然殺傷細(xì)胞和/或T細(xì)胞上表達。39.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或36-38中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。40.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或36-38中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。41.一種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)清除免疫復(fù)合物。42.—種根據(jù)斥又利要求1-17或41中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞介導(dǎo)。43.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、41或42中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體表達在單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞上。44.一種根據(jù)權(quán)利要求1-17或41-43中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIII或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。45.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或41-43中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRina或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。46.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或41-43中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。47.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)抗體應(yīng)答下調(diào)。48.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或47中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集B細(xì)胞介導(dǎo)。49.一種根據(jù)權(quán)利要求1-17、47或48中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在B細(xì)胞上表達。50.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或47-49中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。51.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞效應(yīng)器功能抑制作用。52.—種根據(jù)權(quán)利要求l-17或51的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞介導(dǎo)。53.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、51或52中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞上表達。54.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)吞噬作用。55.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或54中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集多形核白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)。56.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、54或55中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在多形核白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞上表達。57.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或54-56中4壬一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。58.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或54-56中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。59.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或54中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過誘導(dǎo)單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的吞噬作用介導(dǎo)。60.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或59中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞上表達。61.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、59或60中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。62.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是誘導(dǎo)交聯(lián)作用。63.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或62中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過細(xì)胞和/或抗體的交聯(lián)作用介導(dǎo)。64.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、權(quán)利要求54或權(quán)利要求63中任一項的方法，其中Fc受體是一種FqRIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。65.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、54或63中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRII或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。66.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、54或63中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIII或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。67.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過免疫受體基于酪氨酸的活化基序來誘導(dǎo)正向信號傳導(dǎo)。68.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或67中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集骨髓細(xì)胞、T細(xì)胞和/或血小板介導(dǎo)。69.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或67或68的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在骨髓細(xì)胞、T細(xì)胞和/或血小板上表達。70.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、或67-69中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。71.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、或67-69中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIc或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。72.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用^L制是通過普通Y、(3、；鏈來誘導(dǎo)正向信號傳導(dǎo)。73.—種根據(jù)權(quán)利要求1到17、或72中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過募集骨髓細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞或T細(xì)胞介導(dǎo)。74.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、72或73中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽的Fc受體在骨髓細(xì)胞，多形核白細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞或T細(xì)胞上表達。75.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或72-74中任一項的方法，其中Fc受體是一種FqRIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。76.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或72-74中任一項的方法，其中Fc受體是一種FqRIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。77.—種根據(jù)，K利要求1-17或72-74中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRIIIa或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。78.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一個作用機制是通過免疫受體基于酪氨酸的抑制基序來誘導(dǎo)負(fù)向信號傳導(dǎo)。79.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17或78中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽的一種作用機制是通過募集B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和/或單核細(xì)胞介導(dǎo)。80.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、78或79中任一項的方法，其中至少一種在體內(nèi)與FcR結(jié)合肽結(jié)合的Fc受體在B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和/或單核細(xì)力包上表達。81.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17、或78-80中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcyRIIb或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。82.—種根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的方法，其中Fc受體是一種FcYRn或其保留了Fc區(qū)結(jié)合能力的片段。83.—種根據(jù)權(quán)利要求1-82中任一項的方法，其中上述方法使用的Fc受體是用含有制備步驟的方法制備，與使用不包括所述步驟的方法制備得到的相似Fc受體相比，所述步驟可產(chǎn)生N-連接糖基化上唾液酸數(shù)量減少的Fc受體。84.—種根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中Fc受體在唾液酸化機制缺陷的宿主細(xì)胞中表達。85.—種根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中Fc受體在用于上述方法之前用唾液酸酶處理。86.—種根據(jù)權(quán)利要求1-85中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種抗體。87.—種根據(jù)權(quán)利要求86的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種單克隆抗體。88.—種根據(jù)權(quán)利要求86或87的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種人抗體。89.—種根據(jù)權(quán)利要求86或87的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種人源化抗體。90.—種根據(jù)權(quán)利要求86或87的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種嵌合抗體。91.一種根據(jù)權(quán)利要求86-90中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是含有Fc結(jié)合部分的抗體片段。92.—種根據(jù)4又利要求86-91中任一項的抗體，其中FcR結(jié)合肽是一種IgGl抗體。93.—種根據(jù)權(quán)利要求92的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種IgGl，X抗體。94.一種根據(jù)權(quán)利要求92的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種IgGl,K抗體。95.—種根據(jù)權(quán)利要求86-94中任一項的方法，其中所述抗體與96.—種根據(jù)權(quán)利要求95的方法，其中使用以下方法測定抗體與其抗原的結(jié)合(i)使抗體樣品與抗原接觸足夠長的時間以使抗體與抗原結(jié)合，(ii)檢測結(jié)合抗原的抗體量。97.—種根據(jù)權(quán)利要求96的方法，其中使用針對藥品抗體的檢測抗體進行檢測。98.—種根據(jù)權(quán)利要求97的方法，其中所述檢測抗體是一種標(biāo)記抗體。99.一種根據(jù)權(quán)利要求95-98中任一項的方法，其中使用ELISA測定抗體與其抗原的結(jié)合。100.—種根據(jù)權(quán)利要求99的方法，其中上述ELISA也用于測定抗體與Fc受體的結(jié)合。101.—種根據(jù)權(quán)利要求95的方法，其中使用AlphaScreenTM檢測法測定抗體與其抗原的結(jié)合。102.—種根據(jù)權(quán)利要求101的方法，其中也使用AlphaScreen檢測法測定抗體與Fc受體的結(jié)合。103.—種根據(jù)權(quán)利要求95的方法，其中使用放射免疫檢測法測定抗體與其抗原的結(jié)合。104.—種根據(jù)權(quán)利要求103的方法，其中也使用放射免疫檢測法測定抗體與Fc受體的結(jié)合。105.—種根據(jù)權(quán)利要求104的方法，其中放射免疫測定法使用與Fc受體和貢獻放射性的抗原綴合的珠。106.—種根據(jù)權(quán)利要求86-105中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人CD4結(jié)合的抗體。107.—種根據(jù)權(quán)利要求106的方法，其中FcR結(jié)合肽是扎木單抗。108.—種根據(jù)權(quán)利要求106的方法，其中FcR結(jié)合肽是凱利昔單抗。109.—種根據(jù)權(quán)利要求106的方法，其中FcR結(jié)合肽是克立昔單抗。110.—種根據(jù)權(quán)利要求106的方法，其中FcR結(jié)合肽是TNX355。111.一種根據(jù)權(quán)利要求106的方法，其中FcR結(jié)合肽是TRX-l。112.—種根據(jù)權(quán)利要求106的方法，其中FcR結(jié)合肽是IOT4a。113.—種根據(jù)權(quán)利要求106的方法，其中FcR結(jié)合肽是4162W94。114.一種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人EGFR結(jié)合的抗體。115.—種根據(jù)權(quán)利要求114的方法，其中FcR結(jié)合肽是西妥昔單抗。116.—種根據(jù)權(quán)利要求114的方法，其中FcR結(jié)合肽是HuMax-EGFR。117.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與人CD20結(jié)合的抗體。118.—種根據(jù)權(quán)利要求117的方法，其中FcR結(jié)合肽是人利妥昔單抗。119.一種根據(jù)權(quán)利要求117的方法，其中FcR結(jié)合肽是替伊莫單抗。120.—種根據(jù)權(quán)利要求117的方法，其中FcR結(jié)合肽是托西莫單抗。121.—種根據(jù)權(quán)利要求117的方法，其中FcR結(jié)合肽是HuMax-CD20。122.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是與一種人TAC結(jié)合的抗體。123.—種根據(jù)權(quán)利要求122的方法，其中FcR結(jié)合肽是HuMax-TAC。124.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人CD3結(jié)合的抗體。125.—種根據(jù)權(quán)利要求124的方法，其中FcR結(jié)合肽是莫羅單抗。126.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人GPIIb/IIIa結(jié)合的抗體。127.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人CD25結(jié)合的抗體。128.—種根據(jù)權(quán)利要求127的方法，其中FcR結(jié)合肽是達克珠單抗。129.—種根據(jù)權(quán)利要求127的方法，其中FcR結(jié)合肽是巴利昔單抗。130.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人TNF-a結(jié)合的抗體。131.—種根據(jù)權(quán)利要求130的方法，其中FcR結(jié)合肽是英利昔單抗。132.—種根據(jù)權(quán)利要求130的方法，其中FcR結(jié)合肽是阿達木單抗。133.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人RSV結(jié)合的抗體。134.—種根據(jù)權(quán)利要求133的方法，其中FcR結(jié)合肽是帕利珠單抗。135.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人HER-2/neu結(jié)合的抗體。136.—種根據(jù)權(quán)利要求135的方法，其中FcR結(jié)合肽是曲司珠單抗。137.—種根據(jù)權(quán)利要求135的方法，其中FcR結(jié)合肽是培妥珠單抗。138.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人CD33的結(jié)合的抗體。139.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人CD52結(jié)合的抗體。140.—種根據(jù)權(quán)利要求139的方法，其中FcR結(jié)合肽是阿侖珠單抗。141.一種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人VEGF的結(jié)合的抗體。142.—種根據(jù)權(quán)利要求141的方法，其中FcR結(jié)合肽是貝伐珠單抗。143.—種根據(jù)權(quán)利要求1-94中任一項的方法，其中FcR結(jié)合肽是一種與人CTLA4結(jié)合的抗體。144.一種根據(jù)權(quán)利要求143的方法，其中FcR結(jié)合肽是MDX-010。145.—種被批準(zhǔn)作為藥物組合物使用的含有FcR結(jié)合肽的藥品，其中一種根據(jù)權(quán)利要求1-144任一項的方法是上市許可申請中的一部分。146.—種在測定FcR結(jié)合肽與上述Fc受體結(jié)合的方法中使用的Fc受體的制備方法，其中上述Fc受體是用含有制備步驟的方法制備的，與使用不包括所述步驟的方法制備得到相似Fc受體相比，所述步驟可產(chǎn)生N-連接糖基化唾液酸it量減少的Fc受體。147.—種根據(jù)權(quán)利要求146的方法，其中用以下方法測定FcR結(jié)合肽與上述Fc受體的結(jié)合(i)使FcR結(jié)合肽與Fc受體接觸足夠長的時間以使抗體與抗原結(jié)合，(ii)檢測與Fc受體結(jié)合的FcR結(jié)合肽的量。148.—種根椐權(quán)利要求147的方法，其中使用針對FcR結(jié)合肽的才企測抗體進行纟企測。149.一種根據(jù)權(quán)利要求148的方法，其中所述檢測抗體是一種標(biāo)記抗體。150.—種根據(jù)權(quán)利要求146-149中任一項的方法，其中使用ELISA測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。151.—種根據(jù)權(quán)利要求146-149中任一項的方法，其中使用AlphaScreenTM檢測法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。152.—種根據(jù)權(quán)利要求146-149中任一項的方法，其中使用放射免疫檢測法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。153.—種根據(jù)權(quán)利要求146-149中任一項的方法，其中使用Biacore;險測法測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。154.—種根據(jù)權(quán)利要求146-149中任一項的方法，其中使用FMAT測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。155.—種根據(jù)權(quán)利要求146-149中任一項的方法，其中使用DELFIA測定FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。156.—種根據(jù)本發(fā)明或權(quán)利要求1-155中任一項的方法，其中使用包一皮在ELISA板上的His捕獲抗體來捕獲his標(biāo)記的FcR或FcR片段。157.—種適用于用多肽分子包被的塑料部件，其中多肽分子與塑料部件的粘附至少部分依賴于多肽分子與塑料部件表面之間的靜電相互作用，其中塑料部件表面已經(jīng)包凈皮脫唾液酸化多肽。158.—種根據(jù)權(quán)利要求157的塑料部件，其中所述多肽分子是一種Fc受體。159.—種根據(jù)權(quán)利要求157或158的塑料部件，其中所述塑料部件是微量滴定板。160.—種根據(jù)權(quán)利要求157-159中任一項的塑料部件，其中所述塑料部件適用于權(quán)利要求1-144中任一項的方法。161.—種根據(jù)權(quán)利要求157-159中任一項的塑料部件，其中所述塑料部件可用于權(quán)利要求1-144中任一項的方法。全文摘要本發(fā)明涉及一種鑒定抗體的方法，該方法適于用作包含抗體的藥物組合物批簽發(fā)的藥效測定法，尤其適用于所述藥物組合物上市許可的申請。所提供的測定法是一種測定含有FcR結(jié)合肽藥品藥效的方法，其中藥品FcR結(jié)合肽的至少一種作用機制是通過藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合介導(dǎo)，其中上述方法包括測定藥品FcR結(jié)合肽與Fc受體的結(jié)合。文檔編號G01N33/566GK101268372SQ200680034421公開日2008年9月17日申請日期2006年7月21日優(yōu)先權(quán)日2005年7月21日發(fā)明者C·E·G·哈夫尼思,P·帕倫,P·范伯克爾,T·文克申請人:根馬布股份公司