專利名稱：一種環(huán)脂肽化合物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生物合成環(huán)脂肽化合物的方法，具體地說，涉及一種生物發(fā)酵，制備式I化合物的方法。
背景技術：
真菌感染已經成為免疫缺陷病人發(fā)病率和死亡率居高不下的主要原因。在過去的20年里，霉菌感染的發(fā)病率顯著增加。真菌感染的高危人群包括重癥病人，外科病人以及那些患有HIV感染，血癌和其它腫瘤疾病的病人。那些經過器官移植的病人同樣是真菌感染的聞危人群。棘球白素作為一類新的抗真菌藥物，在治療由念珠菌或曲霉引起的感染方面效果良好。這類藥物又以卡泊芬凈和米卡芬凈為代表。棘球白素類藥物通過抑制I，3-β糖苷鍵的形成來抑制真菌，從而更好地減小了對人體的傷害，在高效的同時盡可能的降低了副作用，因此它們在使用過程中比傳統抗真菌藥更安全。FK463(米卡芬凈)是如式III所示的化合物，它是以式I化合物FR901379為前體通過酶解除掉側鏈后得到式II化合物FR179642，然后經過化學修飾得到的?？梢姡玫矫卓ǚ覂?，式I化合物的發(fā)酵產量是關鍵。但長期以來式I化合物的發(fā)酵一直停留在一個很低的水平，盡管人們都在為尋找一個廉價，高產的培養(yǎng)基而努力，但收效甚微。這就使得式I化合物的制備難度加大，成本提高，從而間接使FK463長期處于一個較高的價位。因此人們迫切需要一種廉價高效合成式I化合物的方法。日本滕澤藤澤藥業(yè)品工業(yè)株式會社在Improvement of FR901379productionby mutant selection and medium optimization(Journal ofBioscience andBioengineering, VOL 107No. 5，530-534，2009)中以可溶性淀粉代替玉米淀粉降低滅菌后培養(yǎng)基的黏度，并加入硫酸鹽和磷酸鹽控制發(fā)酵過程中PH，得到了 A-3培養(yǎng)基。之后此公司又在 Scale-up fermentation ofechinocandin type antibiotic FR901379 (Journal ofBioscience andBioengineering, VOL 109 No. 2，138-144，2010)中對 A_3 培養(yǎng)基進行了進一步改進，在A-3培養(yǎng)基中加入了較高濃度的硫酸銨進一步降低黏度，并以玉米漿代替棉籽粉從而得到了一種使得式I化合物產量相對更高的培養(yǎng)基A-4。但式I化合物產量還需更進一步的提高，且上述培養(yǎng)基的黏度依舊很高，而且發(fā)酵過程中菌體生長呈球狀，不利于發(fā)酵過程中的溶氧控制及后續(xù)過濾操作。
本發(fā)明的作者通過創(chuàng)造性的思考和大量的試驗，逐漸探索出了一種可以使式I化合物高產的培養(yǎng)基，而且用此培養(yǎng)基發(fā)酵時黏度低，溶氧容易控制，菌絲體不呈球狀生長。
權利要求
1.一種制備如式I所示化合物或其鹽的方法，其特征在于，在含有氨基酸或其鹽、難溶性有機氮源、糖醇作碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌株Coleophomaempetri F-11899 (FERM BP2635)或及其誘變菌株，獲得式I化合物或其鹽；
2.如權利要求I所述的制備方法，其特征在于，所述氨基酸為谷氨酸、脯氨酸、鳥氨酸、蘇氨酸或其鹽中的ー種或ー種以上的混合物。
3.如權利要求I或2所述的制備方法，其特征在干，以培養(yǎng)基的總重量計，所述氨基酸或其鹽的濃度在O. 5-5. Owt%。
4.如權利要求I所述的制備方法，其特征在于，所述難溶性有機氮源為豆柏、大豆分離蛋白、花生粉、棉籽餅粉、黃豆餅粉中的ー種或ー種以上的的混合物。
5.如權利要求I或4所述的制備方法，其特征在干，以培養(yǎng)基的總重量計，所述難溶性有機氮源的濃度在O. 5-3. Owt %。
6.如權利要求I所述的制備方法，其特征在于，所述的糖醇為丙三醇(甘油)、赤蘚糖醇、木糖醇、核糖醇、阿拉伯糖醇、山梨醇、甘露醇和半乳糖醇中的ー種或ー種以上的混合物。
7.如權利要求I或2所述的制備方法，其特征在干，以培養(yǎng)基的總重量計，所述糖醇的濃度在 I. 0-10. Owt % O
8.如權利要求I所述的制備方法，其特征在于，所述菌株的培養(yǎng)是在20°C至30°C，pH5. 5至6. 5下進行。
9.如權利要求I所述的制備方法，其特征在于，所述的菌株培養(yǎng)過程中可以補加糖醇和氨基酸或其鹽。
10.如權利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述補加糖醇和氨基酸或其鹽的時間是在培養(yǎng)40-80小時左右。
11.如權利要求9或10所述的制備方法，其特征在干，所述補加糖醇的量為每天O.5% _3%，補加氨基酸或其鹽的量為每天O. 1% _1%，以初始培養(yǎng)液的體積計。
全文摘要
本發(fā)明公開一種發(fā)酵培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中含有氨基酸或其衍生物0.5％-5.0％、難溶性有機氮源0.5-3.0％、碳源1.0％-10.0％。使用本發(fā)明培養(yǎng)基進行式I化合物的生物發(fā)酵，可以使發(fā)酵水平穩(wěn)定地達到0.5g/L以上，最高可達到1.0g/l。采用Coleophoma empetri F-11899(FERM BP2635)的誘變后菌株，更是可達到1.5g/L。由于發(fā)酵水平高，在后處理過程中有機溶劑的用量相對減少，從而降低了生產成本，具有很高的經濟價值，更符合工業(yè)化生產的需要。
文檔編號C12P21/02GK102618604SQ20111003424
公開日2012年8月1日 申請日期2011年1月31日 優(yōu)先權日2011年1月31日
發(fā)明者劉石東, 周亮亮, 季曉銘, 張兆利, 王修勝, 陳懿 申請人:上海天偉生物制藥有限公司