專(zhuān)利名稱(chēng)：5'－核苷酸酶活性測(cè)定方法及5'－核苷酸酶診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測(cè)定5′-核苷酸酶活性的方法，同時(shí)本發(fā)明還涉及用于實(shí)現(xiàn)該方法的5′-核苷酸酶診斷試劑盒，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
醫(yī)學(xué)研究表明，5′-核苷酸酶(5NT)增高主要見(jiàn)于阻塞性黃膽，也可見(jiàn)于肝癌和肝炎。在膽汁淤積并發(fā)膽管炎、原發(fā)性和繼發(fā)性膽汁性肝硬化和慢性肝炎時(shí)，5NT升高率高于堿性磷酸酶；肝腫瘤和肝肉芽腫時(shí)5NT升高的敏感性高于堿性磷酸酶。因?yàn)?′-核苷酸酶活性無(wú)生理性升高，對(duì)于診斷嬰幼兒肝病和妊娠性肝功膽汁淤積較堿性磷酸酶不但敏感，而且有特異性。因此測(cè)定5′-核苷酸酶的活性對(duì)于疾病的診斷具有重要意義。
5′-核苷酸酶的活性測(cè)定方法很多，主要有同位素底物法、化學(xué)強(qiáng)酸測(cè)磷法(1925年)。據(jù)申請(qǐng)人了解，目前國(guó)際上普遍采用同位素底物測(cè)試法，方法為5′-核苷酸酶作用于H3-dUMP，終止反應(yīng)后，通過(guò)離子交換層析柱分析結(jié)果，求得5′-核苷酸酶活性?；蛘呃?′-核苷酸酶作用于單磷酸腺苷后產(chǎn)生無(wú)機(jī)磷，再用化學(xué)強(qiáng)酸法分析無(wú)機(jī)磷含量得以計(jì)算出5′-核苷酸酶的活性。
同位素底物法方法復(fù)雜還有同位素污染，而且需要同位素測(cè)定儀，因此難以切實(shí)推廣應(yīng)用。無(wú)機(jī)磷測(cè)定法是1925年發(fā)明的方法，準(zhǔn)確度不好，強(qiáng)酸污染環(huán)境等等，也不適合推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
提出一種可以克服以上現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn)的5′-核苷酸酶活性的測(cè)定方法，同時(shí)給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的5′-核苷酸酶診斷試劑盒。采用該試劑盒中的試劑不僅可以在紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半、全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行5′-核苷酸酶活性測(cè)定，而且測(cè)定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。
本發(fā)明測(cè)定5′-核苷酸酶活性的步驟如下1)、將樣品與主要由尿苷單磷酸、腺苷三磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、還原型輔酶、尿苷激酶、丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶組成的試劑混合，使之發(fā)生如下原理的反應(yīng)尿苷單磷酸+水5核苷酸酶尿苷+磷酸根腺苷三磷酸+尿苷尿苷激酶腺苷二磷酸+尿苷單磷酸腺苷二磷酸+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶腺苷三磷酸+丙酮酸丙酮酸+還原型輔酶乳酸脫氫酶乳酸+氧化型輔酶2)、檢測(cè)最終反應(yīng)物在主波長(zhǎng)340nm吸光度下降的速度，測(cè)算出5′-核苷酸酶的活性大小。
通常步驟2)將最終反應(yīng)物置于紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半、全自動(dòng)生化分析儀器下，檢測(cè)主波長(zhǎng)340nm吸光度下降的速度，測(cè)算出5′-核苷酸酶的活性大小。
以上樣品與試劑的混合比例按體積為1/10到1/250，以上過(guò)程的測(cè)定溫度控制在常規(guī)的20℃到50℃范圍，反應(yīng)時(shí)間控制在常規(guī)的2-30分鐘。
這種方法應(yīng)用5′-核苷酸酶偶聯(lián)尿苷激酶(EC 2.7.1.48)、丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)法。5′-核苷酸酶水解尿苷單磷酸產(chǎn)生尿苷，然后尿苷激酶催化尿苷和腺苷三磷酸產(chǎn)生腺苷二磷酸，丙酮酸激酶再催化腺苷二磷酸和磷酸烯醇式丙酮酸產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再通過(guò)偶聯(lián)乳酸脫氫酶的作用，將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒(méi)有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過(guò)測(cè)量340nm處吸光度下降的速度，可以測(cè)算5′-核苷酸酶的活性大小。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明方法的5′-核苷酸酶診斷試劑盒可以是單劑，包括緩沖液40——200mmol/l尿苷單磷酸0.5——50mmol/l腺苷三磷酸0.5——50mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸 0.5——50mmol/l還原型輔酶0.15——0.3mmol/l尿苷激酶 500——50000U/l丙酮酸激酶500——20000U/l乳酸脫氫酶500——50000U/l穩(wěn)定劑10——80％(總體積)也可以將以上單劑配成如下雙劑，更有利于消除內(nèi)、外源腺苷二磷酸、丙酮酸污染試劑I緩沖液40——200mmol/l腺苷三磷酸0.5——50mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸 0.5——50mmol/l還原型輔酶0.15——0.3mmol/l尿苷激酶 500——50000U/l丙酮酸激酶500——20000U/l乳酸脫氫酶500——50000U/l
穩(wěn)定劑10——80％(總體積)試劑II緩沖液40——200mmol/l尿苷單磷酸0.5——50mmol/l穩(wěn)定劑10——50mmol/l雙劑的配方不僅限于上述配方，其中的試劑I的成分，腺苷三磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、還原型輔酶、尿苷激酶、丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶等可以放在試劑II，試劑II其中的成分，尿苷單磷酸也可以放在試劑I，如此可以形成多種配方，不在此一一詳述。
還可以將試劑配成如下三試劑，不但更有利于消除內(nèi)、外源腺苷二磷酸、丙酮酸污染，還更有利于試劑的穩(wěn)定試劑I緩沖液40——200mmol/l腺苷三磷酸0.5——50mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸 0.5——50mmol/l還原型輔酶0.15——0.3mmol/l穩(wěn)定劑10——50mmol/l試劑II緩沖液40——200mmol/l尿苷激酶 500——50000U/l丙酮酸激酶500——20000U/l乳酸脫氫酶500——50000U/l穩(wěn)定劑10——80％(總體積)試劑III緩沖液40——200mmol/l
尿苷單磷酸0.5——50mmol/l穩(wěn)定劑10——50mmol/l三劑的配方不僅限于上述配方，其中的試劑I的成分，腺苷三磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、還原型輔酶等可以放在試劑II或試劑III中。試劑II其中的成分，尿苷激酶、丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶等也可以放在試劑I或試劑III中，試劑III其中的成分，尿苷單磷酸也可以放在試劑I或試劑II中，如此可以形成多種配方，不在此一一詳述。
緩沖劑的pH范圍可以是6.0-11.0。緩沖劑可以是三(羧甲基)氨基甲烷—鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、磷酸鹽(Phosphate)緩沖液、三乙醇胺(Triethanolamine)緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2-Amino-2-methyl-1-propanol)緩沖液、咪唑(Imidazole)緩沖液或雙甘氨肽(Glycylglycine)緩沖液等，但不僅限于這些緩沖液。(例如還可以是咪唑/鹽酸緩沖液6.2-7.8；磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液5.0-8.0；檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液5.0-6.6；磷酸鹽緩沖液6.0-8.0；磷酸氫二鈉—磷酸二氫鉀緩沖液6.0-8.0；磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液6.0-8.0；巴比妥鈉-鹽酸緩沖液6.8-9.6；Tris鹽酸緩沖液7.0-9.0；硼酸-硼砂緩沖液7.4-9.0；甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液8.6-10.6；砂-氫氧化鈉緩沖液9.2-10.0；碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液8.8-10.6(Ca2+、Mg2+存在時(shí)不得使用)；PBS緩沖液7.0-7.6等)。
以上還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH等還原型煙酰胺輔酶或其衍生物。
此外，為了減少各試劑成分之間的交叉影響、保持試劑的穩(wěn)定性，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存，以上單劑、雙劑的試劑I、試劑II或三劑的試劑I、試劑II、試劑III中通常加入穩(wěn)定劑10～80％或者10～50mmol/l，穩(wěn)定劑可以是乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸胺或鹽等中的一種或一種以上，還可以在硫基乙醇、腺苷二磷酸、牛血清白蛋白、碳酸鹽、膽酸鹽、葡聚糖、乙二胺四乙酸、黃素腺嘌呤二核苷酸、黃素單核苷酸、葡萄糖、谷氨酸鹽、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、丁二酸鹽等中選擇。
實(shí)驗(yàn)表明，從測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性?xún)煞矫婢C合考慮，無(wú)論是單劑、雙劑還是三劑，如下配方成分關(guān)系的本發(fā)明5′-核苷酸酶診斷試劑盒較為理想緩沖液80——120mmol/l尿苷單磷酸1——10mmol/l腺苷三磷酸2——8mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸 2——8mmol/l還原型輔酶0.2——0.3mmol/l尿苷激酶 4000——10000U/l丙酮酸激酶6000——10000U/l乳酸脫氫酶5000——20000U/l穩(wěn)定劑20——50％(總體積)由于本發(fā)明是完全利用酶學(xué)方法，酶解反應(yīng)具有特異性高的特點(diǎn)，不易受到內(nèi)、外源其他物質(zhì)的干擾。酶法方法簡(jiǎn)便、易于操作。酶解反應(yīng)的特異性促使測(cè)試結(jié)果精確。酶解反應(yīng)都是在緩沖液條件下進(jìn)行，沒(méi)有污染環(huán)境問(wèn)題。酶法方法不需要特殊、額外的儀器，測(cè)試成本低廉。因此可以保證具有較高的測(cè)試準(zhǔn)確性，更便于推廣應(yīng)用。
此外，本發(fā)明的顯著特色之一是可以消除內(nèi)、外源腺苷二磷酸、丙酮酸的污染，消除內(nèi)、外源腺苷二磷酸、丙酮酸的作用發(fā)生在整個(gè)反應(yīng)時(shí)間段的前半部分，在后半段時(shí)間受污染的內(nèi)、外源腺苷二磷酸、丙酮酸已經(jīng)被消耗殆盡，而在后半段時(shí)間測(cè)試5′-核苷酸酶活性所需要的腺苷二磷酸、丙酮酸都是產(chǎn)生于5′-核苷酸酶的活性。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例子對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
實(shí)施例一(單劑)本實(shí)施例的5′-核苷酸酶診斷試劑盒包括緩沖液80mmol/l尿苷單磷酸1mmol/l腺苷三磷酸2mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸 2mmol/l還原型輔酶0.2mmol/l尿苷激酶 4000U/l丙酮酸激酶6000U/l乳酸脫氫酶6000U/l穩(wěn)定劑50％(總體積)在全自動(dòng)生化分析儀上設(shè)定溫度37℃，反應(yīng)時(shí)間10分鐘，測(cè)試主波長(zhǎng)340nm，測(cè)試副波長(zhǎng)405nm以上，被測(cè)5′-核苷酸酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測(cè)時(shí)間2分鐘，理論K值-4180。
加入樣品和試劑后，使之混合，發(fā)生以下反應(yīng)尿苷單磷酸+水5核苷酸酶尿苷+磷酸根腺苷三磷酸+尿苷尿苷激酶腺苷二磷酸+尿苷單磷酸腺苷二磷酸+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶腺苷三磷酸+丙酮酸丙酮酸+還原型輔酶乳酸脫氫酶乳酸+氧化型輔酶將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測(cè)主波長(zhǎng)340nm吸光度下降的速度，從而測(cè)算出5′-核苷酸酶的活性大小。
本實(shí)施例應(yīng)用5′-核苷酸酶偶聯(lián)尿苷激酶、丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)法。5′-核苷酸酶水解尿苷單磷酸產(chǎn)生尿苷，然后尿苷激酶催化尿苷和腺苷三磷酸產(chǎn)生腺苷二磷酸，丙酮酸激酶再催化腺苷二磷酸和磷酸烯醇式丙酮酸產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再通過(guò)偶聯(lián)乳酸脫氫酶的作用，將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒(méi)有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過(guò)測(cè)量340nm處吸光度下降的速度，可以測(cè)算5′-核苷酸酶的活性大小。
實(shí)施例二(雙劑)本實(shí)施例的5′-核苷酸酶診斷試劑有試劑I緩沖液 100mmol/l腺苷三磷酸 5mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸5mmol/l還原型輔酶 0.25mmol/l尿苷激酶7000U/l丙酮酸激酶 8000U/l乳酸脫氫酶 13000U/l穩(wěn)定劑 50％(總體積)試劑II緩沖液 100mmol/l尿苷單磷酸 6mmol/l穩(wěn)定劑 20mmol/l
測(cè)定5′-核苷酸酶活性時(shí)，溫度控制在30℃，反應(yīng)時(shí)間15分鐘，測(cè)試主波長(zhǎng)340nm，測(cè)試副波長(zhǎng)405nm以上，被測(cè)5′-核苷酸酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測(cè)時(shí)間2分鐘，理論K值-4180。
具體測(cè)定步驟為尿苷單磷酸+水5核苷酸酶尿苷+磷酸根腺苷三磷酸+尿苷尿苷激酶腺苷二磷酸+尿苷單磷酸腺苷二磷酸+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶腺苷三磷酸+丙酮酸丙酮酸+還原型輔酶乳酸脫氫酶乳酸+氧化型輔酶將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測(cè)主波長(zhǎng)340nm吸光度下降的速度，從而測(cè)算出5′-核苷酸酶的活性大小。
各反應(yīng)步驟的反應(yīng)時(shí)間控制在15分鐘。
實(shí)施例三(三劑)本實(shí)施例的5′-核苷酸酶診斷試劑為三劑，有試劑I緩沖液120mmol/l腺苷三磷酸8mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸 8mmol/l還原型輔酶0.3mmol/l穩(wěn)定劑20mmol/l試劑II緩沖液120mmol/l尿苷激酶 10000U/l丙酮酸激酶10000U/l
乳酸脫氫酶20000U/l穩(wěn)定劑50％(總體積)試劑III緩沖液120mmol/l尿苷單磷酸10mmol/l穩(wěn)定劑20mmol/l在全自動(dòng)生化分析儀上設(shè)定溫度25℃，反應(yīng)時(shí)間20分鐘，測(cè)試主波長(zhǎng)340nm，測(cè)試副波長(zhǎng)405nm以上，被測(cè)5′-核苷酸酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測(cè)時(shí)間2分鐘，理論K值-4180。
具體測(cè)定步驟為尿苷單磷酸+水5核苷酸酶尿苷+磷酸根腺苷三磷酸+尿苷尿苷激酶腺苷二磷酸+尿苷單磷酸腺苷二磷酸+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶腺苷三磷酸+丙酮酸丙酮酸+還原型輔酶乳酸脫氫酶乳酸+氧化型輔酶將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測(cè)主波長(zhǎng)340nm吸光度下降的速度，從而測(cè)算出5′-核苷酸酶的活性大小。
各反應(yīng)步驟的反應(yīng)時(shí)間控制在20分鐘。
實(shí)施例四本實(shí)施例的5′-核苷酸酶診斷試劑有試劑I緩沖液100mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸 2mmol/l還原型輔酶0.3mmol/l
尿苷激酶8000U/l丙酮酸激酶 10000U/l乳酸脫氫酶 20000U/l穩(wěn)定劑 50％(總體積)試劑II緩沖液 100mmol/l尿苷單磷酸 3mmol/l腺苷三磷酸 4mmol/l穩(wěn)定劑 20mmol/l在生化分析儀上設(shè)定溫度37℃，反應(yīng)時(shí)間10分鐘，測(cè)試主波長(zhǎng)340nm，測(cè)試副波長(zhǎng)405nm以上，被測(cè)5′-核苷酸酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測(cè)時(shí)間2分鐘，理論K值-4180。
加入樣品和試劑后，使之混合，發(fā)生以下反應(yīng)尿苷單磷酸+水5核苷酸酶尿苷+磷酸根腺苷三磷酸+尿苷尿苷激酶腺苷二磷酸+尿苷單磷酸腺苷二磷酸+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶腺苷三磷酸+丙酮酸丙酮酸+還原型輔酶乳酸脫氫酶乳酸+氧化型輔酶將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測(cè)主波長(zhǎng)340nm吸光度下降的速度，從而測(cè)算出5′-核苷酸酶的活性大小。
總之，實(shí)驗(yàn)證明，采用本發(fā)明的測(cè)定方法完全可以通過(guò)紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半、全自動(dòng)生化分析儀器得出所需的測(cè)定結(jié)果，并且靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染。
權(quán)利要求
1.一種5′-核苷酸酶活性測(cè)定方法，步驟如下1)、將樣品與主要由尿苷單磷酸、腺苷三磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、還原型輔酶、尿苷激酶、丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶組成的試劑混合，使之發(fā)生如下原理的反應(yīng)尿苷單磷酸+水5核苷酸酶尿苷+磷酸根腺苷三磷酸+尿苷尿苷激酶腺苷二磷酸+尿苷單磷酸腺苷二磷酸+磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶腺苷三磷酸+丙酮酸丙酮酸+還原型輔酶乳酸脫氫酶乳酸+氧化型輔酶2)、檢測(cè)最終反應(yīng)物在主波長(zhǎng)340nm吸光度下降的速度，測(cè)算出5′-核苷酸酶的活性大小。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述5′-核苷酸酶活性測(cè)定方法，其特征在于所述步驟2)為，將最終反應(yīng)物置于紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半、全自動(dòng)生化分析儀下，檢測(cè)主波長(zhǎng)340nm吸光度下降的速度，測(cè)算出5′-核苷酸酶的活性大小。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述測(cè)定5′-核苷酸酶活性的方法，其特征在于溫度控制在20℃到50℃范圍，反應(yīng)時(shí)間控制在2-30分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述測(cè)定5′-核苷酸酶活性的方法，其特征在于被測(cè)5′-核苷酸酶樣品與試劑的比例控制在1/10到1/250。
5.一種5′-核苷酸酶診斷試劑盒，由以下成分組成緩沖液 40--200mmol/l尿苷單磷酸 0.5--50mmol/l腺苷三磷酸 0.5--50mmol/l磷酸烯醇式丙酮酸0.5--50mmol/l還原型輔酶 0.15--0.3mmol/l尿苷激酶500--50000U/l丙酮酸激酶 500--20000U/l乳酸脫氫酶 500--50000U/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述5′-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于所述試劑配成單劑、雙劑或三劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述5′-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定劑為乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸銨或鹽中的至少一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述5′-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于所述緩沖劑的pH范圍是6.0～11.0，所述緩沖劑是三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液、三乙醇胺緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、咪唑緩沖液或雙甘氨肽緩沖液中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述5′-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于所述還原型輔酶是NADPH、NADH或thio-NADH還原型煙酰胺輔酶或其衍生物中的一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種測(cè)定5′－核苷酸酶活性的方法，同時(shí)本發(fā)明還涉及5′－核苷酸酶診斷試劑盒，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。該試劑盒包括緩沖液、尿苷單磷酸、腺苷三磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、還原型輔酶、尿苷激酶、丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶、穩(wěn)定劑，通過(guò)將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發(fā)生酶偶聯(lián)反應(yīng)，再將最終反應(yīng)物置于生化分析儀下，檢測(cè)主波長(zhǎng)吸光度變化的情況(速度)，從而測(cè)算出5′－核苷酸酶的活性大小。采用本發(fā)明完全可以通過(guò)生化分析儀器得出所需的測(cè)定結(jié)果，并且靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)外源物質(zhì)的污染，便于推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12Q1/48GK1778965SQ200410065568
公開(kāi)日2006年5月31日 申請(qǐng)日期2004年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月23日
發(fā)明者王爾中 申請(qǐng)人:蘇州艾杰生物科技有限公司