專利名稱：無機(jī)磷的測(cè)定方法及其診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及測(cè)定無機(jī)磷的方法，以及應(yīng)用該方法配制而成的診斷試劑盒，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
人體內(nèi)部的磷元素約有87％存在于骨骼中，血液中的磷與骨骼中的磷保持動(dòng)態(tài)平衡關(guān)系。另一方面，血液中鈣和磷的濃度之間有一定關(guān)系，兩者的乘積保持在一定范圍之內(nèi)，以毫克為單位，大約每100毫升血漿中鈣和磷的含量之積為35～40。正常人血鈣升高則血磷降低，反之亦然。當(dāng)上述乘積大于40時(shí)，鈣和磷以骨鹽形式沉積在骨組織；大于70時(shí)，可發(fā)生轉(zhuǎn)移性鈣化；小于35時(shí)，則將妨礙骨組織的鈣化，甚至使骨鹽再溶解，影響成骨作用，引起佝僂病或軟骨病。一般地，可以通過維生素D、甲狀旁腺激素、降鈣素等來調(diào)節(jié)血漿中鈣和磷的濃度。
目前，人體的含磷總量還不能直接測(cè)定，大多是檢測(cè)血漿或血清中磷酸根離子濃度來反映。由于H2PO4-在血液等自然條件下最能穩(wěn)定存在，是無機(jī)磷的主要存在形式，因而測(cè)定H2PO4-的濃度便能間接代表或推知無機(jī)磷的總量。常用的檢測(cè)方法有磷鉬酸還原法/非還原法、染料結(jié)合法、酶法、同位素稀釋質(zhì)譜法、原子吸收分光光度法、流動(dòng)注射分析法等等。其中，決定性的方法是同位素稀釋質(zhì)譜法，中等實(shí)驗(yàn)室推薦使用的常規(guī)方法是磷鉬酸比色法。
磷鉬酸還原法又分“無蛋白血濾液法”和“不去蛋白法”，前者需將血液先去蛋白，后者需在試劑中加入非離子型表面活性劑以避免混濁。所用還原劑和表面活性劑的種類很多，性能比較穩(wěn)定的還原劑有硫酸亞鐵、硫酸亞鐵銨、硫酸肼、米吐爾等，表面活性劑則以聚乙二醇基苯基醚(TritonX-100)最理想。
磷鉬酸非還原法又稱“直接紫外法”，是在340nm或325nm波長直接測(cè)定磷鉬酸雜聚化合物，方法簡便，便于自動(dòng)化。但黃疸、溶血、脂濁血清在340nm有吸收，必須做標(biāo)本空白，否則結(jié)果偏高。
相比于其它檢測(cè)方法，酶法以其選擇性好、靈敏度高、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析等優(yōu)點(diǎn)而備受人們青睞，用酶法測(cè)定無機(jī)磷含量既是目前人們的研究熱點(diǎn)，也是將來的發(fā)展趨勢(shì)。但是，采用不同的試劑和測(cè)試路線，檢測(cè)的靈敏度、檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性會(huì)有很大的差別，直接影響到該方法的使用與推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種酶法測(cè)定無機(jī)磷含量的方法，以及應(yīng)用該方法配制而成的無機(jī)磷診斷試劑盒。采用該試劑盒中的試劑，能夠利用紫外/可見光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀對(duì)血漿、血清等樣品中無機(jī)磷的含量進(jìn)行快速、準(zhǔn)確測(cè)定，以便推廣使用該檢測(cè)方法和診斷試劑，使本領(lǐng)域內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測(cè)試手段得到豐富和發(fā)展。
為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，一種測(cè)定無機(jī)磷的方法，通過以下步驟進(jìn)行首先，將血漿、血清等需要測(cè)定的樣品與含有丙酮酸、丙酮酸氧化酶、過氧化物酶以及還原型色原體組合的試劑混勻，使之發(fā)生以下反應(yīng)，
然后，將反應(yīng)混合物置于紫外/可見光分析儀或者半、全自動(dòng)生化分析儀下，檢測(cè)主波長為400～600nm的吸光度的上升速度，進(jìn)而測(cè)算出樣品中無機(jī)磷的含量。
上述“還原型色原體組合”是由還原型色原體A與另外一種組分B構(gòu)成。還原型色原體A為“3-甲基-2-苯噻唑酮腙”(英文簡稱MBTH，全稱是3-methyl-2-benzothiazolinone-hydrszone)或者“4-氨基抗砒呍”(英文全稱是4-aminoantipyrine)；另外一種組分B為以下15種物質(zhì)之一①石碳酸(phenol)，②N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺(N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-m-anisidine，簡稱ESPAS)，③N，N-雙乙基-m-甲苯胺(N，N-Diethyl-m-toluidine)，④2，4-雙氯石碳酸(2，4-Dichloriphenol)，⑤2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸(2，4，6-Tribromo-3-hydroxy-benzenesulfonic acid，簡稱TBHB)，⑥3，5-雙氯石碳酸磺酸(3，5-Dichlorophenolsulfonic acid)，⑦3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸(3，5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonicacid，簡稱DHBS)，⑧N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽(N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine sodium，簡稱TOOS)，⑨仨溴羥基苯甲酸(Tribromohydroxybenzoic acid)，⑩雙甲基苯胺(Dimethylaniline，簡稱DMA)，(11)N-乙基N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺(簡稱EHSPT，全稱為N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine)，(12)2，2′-聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(2，2′-azino-bis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)，簡稱ABTS)，(13)2，2′-連氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)，英文名稱為2，2′-azino-bis-(3-ethylbenztbiozoline-6-sulfonic acid)，(14)4-羥基-3-甲氧基苯甲酸(Vanillic acid(4-hydroxy-3-methoxybenzoicacid)，簡稱HMB)，(15)3-甲基-乙基-羥基苯胺(3-methyl-ethyl-hydroxyaniline，簡稱MEHA)。
測(cè)定過程中，被測(cè)樣品與試劑的使用比例按體積控制在1∶10～1∶500，反應(yīng)溫度控制在20℃～50℃，反應(yīng)時(shí)間控制在2～30分鐘，檢測(cè)時(shí)設(shè)定副波長在500～700nm以上。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明方法測(cè)定無機(jī)磷含量的診斷試劑盒可以是單劑，由以下成分組成緩沖液40～200mmol/l，丙酮酸1～20mmol/l，丙酮酸氧化酶 5000～50000U/l，過氧化物酶5000～50000U/l，還原型色原體組合 0.1～20mmol/l，穩(wěn)定劑/試劑總體積 10～80％。
其中“還原型色原體組合”的含義如前所述，兩種組分A和B的濃度均為0.1～20mmol/l。
也可以將以上單劑中的各種成分進(jìn)行組合，配制成雙劑，比如

其中，還原型色原體組合(一)可以是3-甲基-2-苯噻唑酮腙或者4-氨基抗砒呍；還原型色原體組合(二)可以是前述15種物質(zhì)之一。
雙劑的配方不僅僅限于上述配方，還原型色原體組合(一)和(二)可以互換位置，而且，試劑I的成分——丙酮酸氧化酶、過氧化物酶等，可以放在試劑II，試劑II中的成分——丙酮酸，也可以放在試劑I，如此可以形成多種配方，不一一列舉。
為使試劑更穩(wěn)定，還可以配制成三劑，比如

與雙劑類似，三劑中還原型色原體組合(一)可以是3-甲基-2-苯噻唑酮腙或者4-氨基抗砒呍，組合(二)可以是前述15種物質(zhì)之一。
三劑的配方也不僅僅限于上述配方，還原型色原體組合(一)和(二)可以分開來放在試劑I、II或III的任何位置，試劑I的成分——丙酮酸氧化酶，可以放在試劑II或試劑III中，試劑II中的成分——過氧化物酶，可以放在試劑I或試劑III中，試劑III中的成分——丙酮酸，也可以放在試劑I或者試劑II當(dāng)中，如此可以形成多種配方，不再一一列舉。
上述診斷試劑盒的成分當(dāng)中，選擇緩沖液的基本要求是PH值在6.0～11.0范圍之內(nèi)，可以是“三羥甲基氨基甲烷～鹽酸(Tris-HCl)緩沖液”、“三乙醇胺(Triethanolamine)緩沖液”、“2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2-Amino-2-methyl-1-propanol)緩沖液”、“咪唑～鹽酸(Imidazole-HCl)緩沖液”、“雙甘氨肽(Glycylglycine)緩沖液”、“檸檬酸～檸檬酸鈉緩沖液”、“巴比妥鈉～鹽酸緩沖液”、“硼酸～硼砂緩沖液”、“甘氨酸～氫氧化鈉緩沖液”、“硼砂～氫氧化鈉緩沖液”或者“碳酸鈉～碳酸氫鈉緩沖液”中的至少一種，但選擇范圍并不受這些列舉所限制。
此外，為減少各試劑成分之間的交叉影響、保持試劑的穩(wěn)定性，以便長期儲(chǔ)存，以上單劑、雙劑的試劑I/試劑II、三劑的試劑I/試劑II/試劑III當(dāng)中通常加入穩(wěn)定劑，其用量約占所在試劑總體積的10～80％(或者濃度在10～50mmol/l范圍之內(nèi))。
用作穩(wěn)定劑的物質(zhì)可以是乙二醇、丙二醇、甘油、硫酸銨、硫基乙醇、腺苷二磷酸、牛血清白蛋白、碳酸鹽、膽酸鹽、葡聚糖、乙二胺四乙酸、黃素腺嘌呤二核苷酸、黃素單核苷酸、葡萄糖、谷氨酸鹽、還原型谷胱甘肽、乳糖、甘露醇、丁二酸鹽或者氯化鈉中的至少一種。
研究表明，從測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下配方成分關(guān)系的無機(jī)磷診斷試劑盒較為理想，也是本發(fā)明的優(yōu)選方案緩沖液 80～120mmol/l，丙酮酸 1～10mmol/l，丙酮酸氧化酶 5000～20000U/l，過氧化物酶 5000～20000U/l，還原型色原體組合 0.1～10mmol/l，穩(wěn)定劑/試劑總體積20～50％。
本發(fā)明應(yīng)用丙酮酸氧化酶，在血漿、血清等樣品中無機(jī)磷的存在下，與丙酮酸作用產(chǎn)生過氧化氫，再與過氧化物酶發(fā)生酶偶聯(lián)反應(yīng)，將無色的還原型色原體(Chromogen)組合系統(tǒng)氧化成有顏色的醌亞胺色原(Quioneimine)或者吲嗒胺色原(Indamine)染料。由于不同染料在400～600nm范圍內(nèi)的吸收波長不同，染料含量與吸光度之間有很好的定量對(duì)應(yīng)關(guān)系，因此，測(cè)量反應(yīng)期間的吸光度變化，便能很好地反映出被測(cè)樣品中無機(jī)磷的含量。
本發(fā)明技術(shù)方案的突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步主要表現(xiàn)在(1)本發(fā)明完全利用酶學(xué)方法，酶解反應(yīng)具有特異性高的特點(diǎn)，通過將無色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原或者吲嗒胺色原染料，定量反映出被測(cè)樣品中無機(jī)磷的含量，測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確；(2)參與酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)的反應(yīng)成分都是外加的，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染，測(cè)試過程精確度高；(3)該方法簡便、易操作，可快速得到檢測(cè)結(jié)果，而且反應(yīng)是在緩沖液條件下進(jìn)行，不會(huì)污染環(huán)境；(4)該方法在普通紫外/可見光分析儀或者半、全自動(dòng)生化分析儀上便可檢測(cè)，不需要特殊或額外儀器，測(cè)試成本低廉，便于行業(yè)內(nèi)推廣應(yīng)用；(5)應(yīng)用本發(fā)明提供的測(cè)定方法可以制成液態(tài)試劑、干粉試劑、干試劑等多種形式的試劑，主要用于測(cè)定人體和其它動(dòng)物體內(nèi)血磷的含量，也可以結(jié)合稀釋、濃縮等輔助手段來測(cè)定其它樣品中無機(jī)磷的含量；(6)本發(fā)明提供的液態(tài)無機(jī)磷診斷試劑盒，穩(wěn)定性好，存在于其中的各種酶的三維空間結(jié)構(gòu)保持完整，很好地保證了應(yīng)用測(cè)試效果。做成雙劑或者三劑以后，能夠進(jìn)一步減少各種成分之間的交叉影響，提高試劑的穩(wěn)定性，便于長期儲(chǔ)存。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案作進(jìn)一步說明。這些例子僅是一些應(yīng)用范例，不能理解為對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)范圍的一種限制。
實(shí)施例一(單劑)按以下成分和用量配制血清中無機(jī)磷診斷試劑盒
雙甘氨肽緩沖液80mmol/l，丙酮酸1mmol/l，丙酮酸氧化酶 5000U/I，過氧化物酶5000U/l，4-氨基抗砒呍 2mmol/l，石碳酸10mmol/l，乙二醇50％(占試劑總體積)。
在全自動(dòng)生化分析儀(日立-7080)上設(shè)定溫度37℃、反應(yīng)時(shí)間10分鐘、測(cè)試主波長495～505nm、測(cè)試副波長600nm以上，被測(cè)樣品與試劑的體積比例為1∶25，反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)(吸光度上升，下同)。
加入血清樣品和配成的單劑，兩者在分析儀內(nèi)部自動(dòng)混勻，檢測(cè)、記錄495～505nm吸光度的上升情況。一共檢測(cè)讀點(diǎn)31次，大約每隔20秒記錄一次數(shù)據(jù)，根據(jù)速率法、終點(diǎn)法等方法，對(duì)照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)算出血清樣品中無機(jī)磷的含量。對(duì)同一批樣品多次重復(fù)以上過程，測(cè)試結(jié)果重復(fù)性好、精確度高。
實(shí)施例二(雙劑)按以下成分和用量配制血清中無機(jī)磷診斷試劑盒試劑I——咪唑～鹽酸緩沖液100mmol/l，丙酮酸氧化酶12000U/l，過氧化物酶 12000U/l，4-氨基抗砒呍1mmol/l，甘油50％(占試劑I總體積)；試劑II——咪唑～鹽酸緩沖液100mmol/l，丙酮酸 5mmol/l，
2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸1mmol/l，葡聚糖30mmol/l。
在全自動(dòng)生化分析儀(日立-7080)上設(shè)定溫度30℃、反應(yīng)時(shí)間15分鐘、測(cè)試主波長546nm、測(cè)試副波長630nm以上，被測(cè)樣品與試劑I和試劑II的總體積之比為1∶25，試劑I與試劑II的用量之比為4∶1，反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)。
先加入血清樣品和試劑I，5分鐘之后加入試劑II，三者在分析儀內(nèi)部自動(dòng)混勻，檢測(cè)、記錄546nm吸光度的上升情況。根據(jù)速率法、終點(diǎn)法等方法，對(duì)照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)算出血清樣品中無機(jī)磷的含量。對(duì)同一批樣品多次重復(fù)以上過程，測(cè)試結(jié)果重復(fù)性好、精確度高。
實(shí)施例三(三劑)按以下成分和用量配制血清中無機(jī)磷診斷試劑盒試劑I——三乙醇胺緩沖液 120mmol/l，丙酮酸氧化酶20000U/l，3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2mmol/l，丙二醇 50％(占試劑I總體積)；試劑II——三乙醇胺緩沖液 120mmol/l，過氧化物酶 20000U/l，丙二醇 50％(占試劑II總體積)；試劑III——三乙醇胺緩沖液 120mmol/l，丙酮酸 10mmol/l，雙甲基苯胺 2mmol/l，甘露醇 50mmol/l。
在全自動(dòng)生化分析儀(日立-7080)上設(shè)定溫度25℃、反應(yīng)時(shí)間20分鐘、測(cè)試主波長578nm、測(cè)試副波長700nm以上，被測(cè)樣品與試劑I、試劑II和試劑III的總體積之比為1∶25，試劑I、試劑II和試劑III的用量為8∶1∶1，反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)。
先加入血清樣品和試劑I、試劑II，5分鐘之后加入試劑III，它們?cè)诜治鰞x內(nèi)部自動(dòng)混勻，檢測(cè)、記錄578nm吸光度的上升情況。根據(jù)速率法、終點(diǎn)法等方法，對(duì)照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)算出血清樣品中無機(jī)磷的含量。對(duì)同一批樣品多次重復(fù)以上過程，測(cè)試結(jié)果重復(fù)性好、精確度高。
實(shí)施例四(雙劑優(yōu)選例)按以下成分和用量配制血磷診斷試劑盒試劑I——Tris-HCl緩沖液 120mmol/l，丙酮酸氧化酶 12000U/l，過氧化物酶12000U/l，4-氨基抗砒呍 1mmol/l，甘油 50％(占試劑I總體積)；試劑II——Tris-HCl緩沖液 120mmol/l，丙酮酸6mmol/l，雙甲基苯胺2mmol/l，甘油 20mmol/l。
在全自動(dòng)生化分析儀(日立-7080)上設(shè)定溫度30℃、反應(yīng)時(shí)間10分鐘、測(cè)試主波長578nm、測(cè)試副波長700nm以上，被測(cè)樣品與試劑I和試劑II的總體積之比為1∶25，試劑I與試劑II的用量之比為4∶1，反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)。
先加入血清樣品和試劑I，5分鐘之后加入試劑II，三者在分析儀內(nèi)部自動(dòng)混勻，發(fā)生以下原理性反應(yīng)
檢測(cè)、記錄578nm吸光度的上升情況。根據(jù)速率法、終點(diǎn)法等方法，對(duì)照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)算出血清樣品中無機(jī)磷的含量。對(duì)同一批樣品多次重復(fù)以上過程，測(cè)試結(jié)果重復(fù)性好、精確度高。
總之，實(shí)驗(yàn)證明采用本發(fā)明的測(cè)定方法，完全可以通過紫外/可見光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀器，測(cè)定出血漿、血清等樣品中無機(jī)磷的含量，測(cè)試靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染。而且，本發(fā)明提供的無機(jī)磷診斷試劑盒，穩(wěn)定性好，長時(shí)間存放之后仍然能夠準(zhǔn)確檢測(cè)各種類型樣品中的無機(jī)磷含量。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定無機(jī)磷的方法，包括以下步驟①將待測(cè)樣品與含有丙酮酸、丙酮酸氧化酶、過氧化物酶以及還原型色原體組合的試劑混勻，使之發(fā)生以下反應(yīng)，②將反應(yīng)混合物置于紫外/可見光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀下，檢測(cè)主波長為400～600nm的吸光度的上升幅度，測(cè)算出樣品中無機(jī)磷的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定無機(jī)磷的方法，其特征在于所述“還原型色原體組合”是由還原型色原體A與另外一種組分B構(gòu)成，還原型色原體A為“3-甲基-2-苯噻唑酮腙”或者“4-氨基抗砒呍”，另外一種組分B為以下15種物質(zhì)之一石碳酸，N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺，N，N-雙乙基-m-甲苯胺，2，4-雙氯石碳酸，2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸，3，5-雙氯石碳酸磺酸，3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸，N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽，仨溴羥基苯甲酸，雙甲基苯胺，N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺，2，2′-聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽，2，2′-連氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)，4-羥基-3-甲氧基苯甲酸，3-甲基-乙基-羥基苯胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測(cè)定無機(jī)磷的方法，其特征在于待測(cè)樣品與試劑的使用比例按體積控制在1∶10～1∶500，反應(yīng)溫度控制在20℃～50℃，反應(yīng)時(shí)間控制在2～30分鐘，檢測(cè)時(shí)設(shè)定副波長在500～700nm以上。
4.一種無機(jī)磷診斷試劑盒，盒中試劑由以下成分組成緩沖液40～200mmol/l，丙酮酸1～20mmol/l，丙酮酸氧化酶 5000～50000U/l，過氧化物酶5000～50000U/l，還原型色原體組合 0.1～20mmol/l，穩(wěn)定劑/試劑總體積 10～80％。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的無機(jī)磷診斷試劑盒，其特征在于所述“還原型色原體組合”是由還原型色原體A與另外一種組分B構(gòu)成，A和B的濃度均為0.1～20mmol/l；還原型色原體A為“3-甲基-2-苯噻唑酮腙”或者“4-氨基抗砒呍”；另外一種組分B為以下15種物質(zhì)之一石碳酸，N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺，N，N-雙乙基-m-甲苯胺，2，4-雙氯石碳酸，2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸，3，5-雙氯石碳酸磺酸，3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸，N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽，仨溴羥基苯甲酸，雙甲基苯胺，N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺，2，2′-聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽，2，2′-連氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)，4-羥基-3-甲氧基苯甲酸，3-甲基-乙基-羥基苯胺。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的無機(jī)磷診斷試劑盒，其特征在于所述緩沖液的PH范圍是6.0～11.0。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的無機(jī)磷診斷試劑盒，其特征在于所述緩沖液是“三羥甲基氨基甲烷～鹽酸緩沖液”、“三乙醇胺緩沖液”、“2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液”、“咪唑～鹽酸緩沖液”、“雙甘氨肽緩沖液”、“檸檬酸～檸檬酸鈉緩沖液”、“巴比妥鈉～鹽酸緩沖液”、“硼酸～硼砂緩沖液”、“甘氨酸～氫氧化鈉緩沖液”、“硼砂～氫氧化鈉緩沖液”或者“碳酸鈉～碳酸氫鈉緩沖液”中的至少一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的無機(jī)磷診斷試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定劑為乙二醇、丙二醇、甘油、硫酸銨、硫基乙醇、腺苷二磷酸、牛血清白蛋白、碳酸鹽、膽酸鹽、葡聚糖、乙二胺四乙酸、黃素腺嘌呤二核苷酸、黃素單核苷酸、葡萄糖、谷氨酸鹽、還原型谷胱甘肽、乳糖、甘露醇、丁二酸鹽或者氯化鈉中的至少一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的無機(jī)磷診斷試劑盒，其特征在于所述試劑配成單劑、雙劑或者三劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及測(cè)定無機(jī)磷的方法及其診斷試劑盒。利用丙酮酸氧化酶在無機(jī)磷的存在下與丙酮酸作用產(chǎn)生過氧化氫，再與過氧化物酶發(fā)生酶偶聯(lián)反應(yīng)，將無色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原或者吲嗒胺色原染料，檢測(cè)反應(yīng)期間主波長400～600nm吸光度的變化，從而測(cè)算出無機(jī)磷的含量。該方法特異性高，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染，測(cè)試結(jié)果精確、準(zhǔn)確性好。將診斷試劑盒制成雙劑或三劑可減少各成分的交叉影響，保持試劑的穩(wěn)定性，便于長期儲(chǔ)存。該方法在普通紫外/可見光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀上便可快速檢測(cè)，不需要特殊或額外儀器，測(cè)試成本低廉，便于行業(yè)內(nèi)推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12Q1/28GK1778941SQ200410065569
公開日2006年5月31日 申請(qǐng)日期2004年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月23日
發(fā)明者王爾中 申請(qǐng)人:蘇州艾杰生物科技有限公司