專利名稱：納他霉素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于發(fā)酵生產(chǎn)納他霉素的方法，涉及以褐黃孢鏈霉菌為菌種，采用國內(nèi)培養(yǎng)基，通過控制條件發(fā)酵和蒸發(fā)去甲醇法提取納他霉素的制備技術(shù)。
背景技術(shù)：
納他霉素(或叫匹馬菌素或田納西菌素)是一種多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素，分子量約為666Dal，相應(yīng)的實驗分子式為C33H47NO13，為兩性物質(zhì)，等電點約為6.5。納他霉素對幾乎所有的真菌具有極強的抗生物活性，對細菌無效。目前，納他霉素被廣泛用做生物食品防腐劑，在醫(yī)藥等領(lǐng)域也有相關(guān)的應(yīng)用。雖然人們已經(jīng)認識到它有高價值的抗生素特性，但由于其生產(chǎn)成本太高，使國內(nèi)的相關(guān)商業(yè)運作受到限制。
早在1960年，英國專利846,933中就描述了生產(chǎn)納他霉素的傳統(tǒng)發(fā)酵方法，但生產(chǎn)效率不高。在中國專利CN1070688A、CN1071460A和CN1072959A中提供的生產(chǎn)納他霉素方法，他們所用的培養(yǎng)基商標(biāo)為Difco，在國內(nèi)難以買到，即使買到其價格也是較高的。
目前現(xiàn)有技術(shù)從發(fā)酵液中提取納他霉素的工藝，要求發(fā)酵液的濃度需大于2％。由于它在各種溶液里的溶解度都不高，特別是在國內(nèi)納他霉素的相關(guān)研究中其制備的納他霉素含量＜2g/L，所以納他霉素的提取過程沒有經(jīng)濟性，故當(dāng)前需要一種比較經(jīng)濟的納他霉素提取工藝。在美國專利846933中，描述了用甲醇提取納他霉素的方法，其步驟包括吸附和洗脫；美國專利3892850中，用酸性丁醇提取納他霉素，再蒸餾最后沉淀，其中還提出用CaCl2增大納他霉素在甲醇中的溶解度，但這些工藝均需昂貴的費用，(像吸附，洗脫，蒸餾和蒸發(fā)；)另外，在專利WO9507998中，公開了通過在發(fā)酵液中加入甲醇，然后將其pH值調(diào)至1.0至4.5以溶解已沉淀的納他霉素，除去其他固體后，再將pH值調(diào)至6.0-9.0，使納他霉素沉淀出來的方法，但是這種提取工藝會產(chǎn)生一種副產(chǎn)物—納他霉素甲酯。
綜上所述，不難看出，發(fā)酵生產(chǎn)及提取納他霉素中的問題是影響其推廣應(yīng)用的關(guān)鍵。為此，研究和開發(fā)一種經(jīng)濟、實用的納他霉素的制備、提取方法是當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決了發(fā)酵生產(chǎn)納他霉素使用國外培養(yǎng)基，在國內(nèi)難以買到，并且價格較高及從發(fā)酵液提取納他霉素工藝復(fù)雜、費用昂貴或者有副產(chǎn)物的問題；提供了一種經(jīng)濟、實用，采用國內(nèi)培養(yǎng)基，通過控制條件發(fā)酵和蒸發(fā)去甲醇法提取納他霉素的制備工藝。
技術(shù)方案本發(fā)明是利用發(fā)酵法生產(chǎn)納他霉素，其菌種采用褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces gilvosporeus)，經(jīng)孢子懸浮液的制備、種子培養(yǎng)、發(fā)酵、提取工序；通過控制pH值和溶解氧水平，以及在發(fā)酵期間分批次流加葡萄糖進行生產(chǎn)納他霉素，并采用低溫蒸發(fā)法去除甲醇提取納他霉素。具體步驟包括如下(一)制備納他霉素發(fā)酵液●孢子懸浮液的制備生產(chǎn)菌種為褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces gilvosporeus)其原始菌種是從美國典型培養(yǎng)物收集中心處獲得，其保藏號為ATCC 13326，通過DES和UV誘變，篩選高產(chǎn)菌株，將該生產(chǎn)菌株在瓊脂斜面上生長4-8天后，4℃保藏待用。需要指出，新長好的瓊脂斜面孢子可以經(jīng)4℃冰箱保藏5～15天后使用。其中，制作孢子懸浮液采用的液體為無菌水或新鮮種子培養(yǎng)基，滅菌條件為121℃，滅菌20～30min。孢子濃度選擇為108個/mL。這是因為不同孢子懸浮液濃度對種子生長狀態(tài)的影響不同，具體見下表。
孢子濃度 種子生長狀態(tài)(個/mL)菌體形態(tài)種子進入對數(shù)生長期的時間(h)105種子液澄清，有菌絲體結(jié)團現(xiàn)象 45106種子液較澄清，有大小不均勻的菌絲體顆粒形 39成107種子液變渾濁，有均勻大量的菌絲體顆粒，顆 29粒直徑約為1-1.5mm108種子液渾濁，有極細密的大小均一的菌絲體微 24粒，微粒直徑約0.1-0.5mm109種子液渾濁且非常粘稠，無菌絲體微粒21
由上表可見孢子濃度選擇109個/mL以上和107個/mL以下時不可取。
●種子培養(yǎng)種子培養(yǎng)基由碳源、氮源、無機離子和微量元素組成，即普通蛋白胨 4-8g/L酵母粉 4-8g/L葡萄糖 15-30g/LNaCl8-15g/LpH 7.0將制備好的孢子懸浮液加入到上述種子培養(yǎng)基中，其滅菌條件為120～125℃，滅菌15～25min；在搖床上200rpm轉(zhuǎn)速下，28～30℃培養(yǎng)20～28h。在培養(yǎng)過程中不需要攪拌和通氣，即可得到適合接種的種子培養(yǎng)物。
●發(fā)酵制取納他霉素發(fā)酵培養(yǎng)基組成大豆蛋白胨15-30g/L酵母粉3.6-5.1g/L葡萄糖32-48g/LpH7.5其中，大豆蛋白胨和酵母浸粉，采用北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠生產(chǎn)的產(chǎn)品，同樣獲得了可觀的納他霉素產(chǎn)量。發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌采取大豆蛋白胨和酵母粉一起滅菌，條件為120～125℃ 15～25min；葡萄糖單獨滅菌，條件為114～118℃ 15～25min。
將長好的種子接入到經(jīng)滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，按2％的體積比接種。接入的種子量對納他霉素的影響較大，當(dāng)按發(fā)酵液體積比＞4％接種時，發(fā)酵液比較粘稠，產(chǎn)量不高；而接種量＜1％時，延遲期較長，同時發(fā)酵液中菌絲球較大，不利于溶解氧的傳遞；因此經(jīng)考察后發(fā)現(xiàn)按發(fā)酵液體積比2％接種比較經(jīng)濟和利于納他霉素的生產(chǎn)。
在發(fā)酵過程中，因生產(chǎn)菌的繁殖與代謝，必然有泡沫產(chǎn)生，因此需要流加消泡劑，控制泡沫，常用的消泡劑為硅酮和聚醚類，任何一種消泡劑均可用來控制泡沫，只要流加的消泡劑不影響納他霉素的合成即可。其中優(yōu)選消泡劑為聚醚類。
發(fā)酵過程中，因生產(chǎn)菌的代謝，發(fā)酵液的pH不斷下降，經(jīng)對發(fā)酵過程中產(chǎn)酸分析，發(fā)現(xiàn)當(dāng)控制pH在5.5～6.0時更有利于納他霉素的合成。
同時還需不斷分批次流加50％的葡萄糖，(葡萄糖滅菌方法同上)。在流加葡萄糖的過程中，補料方式對納他霉素的合成也有一定影響。其補料的目的是使發(fā)酵培養(yǎng)基中維持一定量的葡萄糖，這樣即不影響納他霉素的代謝，同時有利于合成納他霉素。經(jīng)比較，多次少量的補料方式流加葡萄糖以維持葡萄糖濃度在2％水平比少次多量方式維持葡萄糖濃度在2％水平好。
因納他霉素的合成走的是脂肪酸合成途徑，TCA循環(huán)較弱，故需要氧不是很高，但在代謝和合成納他霉素的過程中仍需要一定的溶解氧存在。若溶解氧控制過高，使生產(chǎn)菌代謝過于旺盛，反而不利于納他霉素的合成；若溶解氧太低，也不利于納他霉素的代謝和合成，故在發(fā)酵過程中控制溶解氧水平尤為重要。本發(fā)明就是通過調(diào)節(jié)發(fā)酵罐的通氣量、轉(zhuǎn)速和罐壓，控制發(fā)酵液中溶解氧水平在10～30％，發(fā)酵96～168h后即可得到含4.0～5.6g/L納他霉素的發(fā)酵液。
(二)從發(fā)酵液中提取納他霉素該步驟包括濃縮發(fā)酵液；加入甲醇，升高pH；去除菌絲體；再降低pH，蒸發(fā)甲醇；回收沉淀、進行干燥得到納他霉素固體；其具體方法是●濃縮發(fā)酵液本發(fā)明所需的提取液為任意濃度的納他霉素發(fā)酵液。納他霉素在提取液中的溶解度隨著水的增加而減少，故發(fā)酵液體積的減少有利于減少甲醇的用量。濃縮發(fā)酵液可任選一種濃縮液體的方法，如蒸發(fā)、過濾、離心或離心過濾法。
采用蒸發(fā)法濃縮發(fā)酵液時，使發(fā)酵液濃縮到原體積的1/2以下；采用過濾法濃縮發(fā)酵液時，其濾布孔徑不應(yīng)太大，盡量減少發(fā)酵液中的懸浮物透過濾布；采用重力離心處理時，檢測離心上清液中納他霉素的含量，選擇一個合適的轉(zhuǎn)速使發(fā)酵液中的懸浮物離心下來；采用離心過濾法處理時，可將離心和過濾結(jié)合起來，在離心的過程中，同時完成過濾。
●加入甲醇、升高pH納他霉素在甲醇中有較好的溶解度，且隨著pH的升高其溶解度增大，故當(dāng)發(fā)酵液濃縮之后可向上述濃縮的發(fā)酵液中加入甲醇，并加堿調(diào)節(jié)pH到10～11，使?jié)饪s液中的納他霉素完全溶解。需要說明的是，所加甲醇的量也可以為濃縮前發(fā)酵液體積的1/2。因納他霉素是兩性物質(zhì)，等電點為6.5，故將加入甲醇的濃縮液的pH降低或升高均可使納他霉素的溶解度升高，使納他霉素能夠完全溶解。本發(fā)明采用加堿的方法(所用堿為氫氧化物，如氫氧化鉀或氫氧化鈉)調(diào)節(jié)pH到10～11，此時，濃縮液從勻質(zhì)狀態(tài)變?yōu)楣桃悍蛛x狀態(tài)，其中固體為菌絲體，懸浮于處理液中。
●去除菌絲體可采用任何固液分離的方法除去固體懸浮物，如采用重力離心或過濾的方法除去菌絲體；●降低pH、蒸發(fā)去甲醇加酸調(diào)節(jié)pH到6.5～7.5，使溶解的納他霉素部分沉淀下來。為保持納他霉素的活性，采用低溫蒸發(fā)去除甲醇，降低納他霉素的溶解度，加速納他霉素的沉淀；即任選一種蒸發(fā)液體的方法，如自然揮發(fā)、加熱蒸發(fā)、真空蒸發(fā)或薄膜蒸發(fā)，將甲醇從處理液中除去。蒸發(fā)溫度一般控制在20～80℃。其蒸發(fā)溫度也可控制在35℃～45℃。在該溫度下，蒸發(fā)速度較快，同時也能較好的保持納他霉素的活性。將甲醇蒸發(fā)后，可見處理液中厚厚的白色沉淀。
●固液分離和干燥將上述結(jié)晶的納他霉素，任選一種固液分離的方法，如過濾或離心得到沉淀；再經(jīng)水多次洗滌，使獲得的固體顏色成為白色；或者通過以上的方法再次對獲得的納他霉素進行重結(jié)晶，或用活性炭脫色處理，提高納他霉素的純度；最后進行干燥。任何干燥的方法均是可行的，其方法如常溫干燥、真空干燥、噴霧干燥或真空冷凍干燥等。需要指出，進行干燥易采用真空干燥法，其溫度控制在＜80℃；即可得到純度不小于80％的納他霉素。
有益效果本發(fā)明包括納他霉素的發(fā)酵法生產(chǎn)和納他霉素的提取兩方面技術(shù)。本技術(shù)提供了制備、提取納他霉素的新工藝技術(shù)。解決了生產(chǎn)納他霉素使用國外培養(yǎng)基，在國內(nèi)難以買到，并且價格較高及從發(fā)酵液提取納他霉素工藝復(fù)雜、費用昂貴或有副產(chǎn)物的問題。其生產(chǎn)方法顯著特點是在一級種子培養(yǎng)中不需要往種子液中通氣和攪拌，且發(fā)酵中納他霉素的含量達到4-5.6g/L。這樣，不僅簡化了工藝，而且提高了產(chǎn)率，降低了生產(chǎn)成本。其提取方法適于任意濃度的納他霉素發(fā)酵液，所得到的納他霉素純度達到80％以上。該提取納他霉素的方法同樣適用于本發(fā)明之外的發(fā)酵液的提取。本發(fā)明經(jīng)濟、實用、促進其生產(chǎn)的工業(yè)化進程；為納他霉素的廣泛應(yīng)用提供了先決條件；既有經(jīng)濟效益又有社會效益。
具體實施例方式
實施例1生產(chǎn)菌種為褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces gilvosporeus)，其原始菌種是從美國典型培養(yǎng)物收集中心處獲得，其保藏號為ATCC 13326，通過DES和UV誘變，篩選高產(chǎn)菌株。將該生產(chǎn)菌株在瓊脂斜面上生長5天后，經(jīng)4℃冰箱保藏10天后使用。其中，制作孢子懸浮液采用的液體為無菌水或新鮮種子培養(yǎng)基。滅菌條件為121℃，滅菌20～30min。孢子濃度選擇108個/mL。
種子培養(yǎng)基由碳源、氮源、無機離子和微量元素組成，即普通蛋白胨 6g/L酵母粉 6g/L葡萄糖 20g/LNaCl10g/LpH 7.0將制備好的孢子懸浮液加入到上述種子培養(yǎng)基中。滅菌條件為120～125℃，滅菌15～25min；在搖床上200rpm轉(zhuǎn)速下，28～30℃培養(yǎng)24h。在培養(yǎng)過程中不需要攪拌和通氣，即可得到適合接種的種子培養(yǎng)物。
發(fā)酵培養(yǎng)基組成大豆蛋白胨 20g/L酵母粉 4.5g/L葡萄糖 40g/LpH 7.5其中，大豆蛋白胨和酵母浸粉，采用北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠生產(chǎn)的產(chǎn)品。發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌采取大豆蛋白胨和酵母粉一起滅菌，條件為120～125℃ 15～25min；葡萄糖單獨滅菌，條件為114～118℃ 15～25min。
將長好的種子按照2％的接種量接入到5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵初始通風(fēng)量為0.4v/v-min(單位體積培養(yǎng)基每分鐘通氣量)，轉(zhuǎn)速為200rpm。在發(fā)酵過程中，通過流加氫氧化鈉維持發(fā)酵液pH為5.6。以多次少量法(按30g/次補加4次)補加50％葡萄糖以維持發(fā)酵液中葡萄糖含量為2％，同時加入聚醚類消泡劑以控制發(fā)酵液的泡沫水平。隨著發(fā)酵的進行，不斷提高通風(fēng)量和攪拌轉(zhuǎn)速以維持發(fā)酵液中溶解氧水平在10～20％；最高通風(fēng)量達到1.2v/v-min，最高轉(zhuǎn)速達到600rpm。在28-30℃下，發(fā)酵142h，共消耗葡萄糖80g/L。納他霉素產(chǎn)量達到4.8g/L。
取2.5L上述發(fā)酵液，在3500rpm轉(zhuǎn)速下，離心20min，獲得納他霉素和菌絲體固體混合物。加入1.25L甲醇，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH到10.5，使納他霉素完全溶解；之后離心除去菌絲體，再用鹽酸調(diào)節(jié)pH到7，在45℃下薄膜蒸發(fā)除去甲醇；離心；-50℃真空冷凍干燥。獲得10.2g納他霉素；純度達到82％。
實施例2生產(chǎn)菌株在瓊脂斜面上生長8天后，經(jīng)4℃冰箱保藏15天后使用，發(fā)酵過程中控制pH為6，發(fā)酵過程控制溶氧水平20-30％，發(fā)酵111h，共消耗葡萄糖72g/L，最終納他霉素產(chǎn)量達到4.0g/L。提取中，發(fā)酵液濃縮采用蒸發(fā)法，22℃真空蒸發(fā)法除去甲醇，加酸調(diào)pH到6.5以沉淀溶解的納他霉素，其它按實施例1中所述進行。獲得納他霉素沉淀的純度達到81％。
實施例3發(fā)酵罐為200L，裝液量為130L，種子培養(yǎng)為二級培養(yǎng)。二級種子在50L種子罐中進行，培養(yǎng)過程中恒定通氣0.5v/v-min，恒定攪拌速度，培養(yǎng)21h。其它同實施例1，發(fā)酵168h，共消耗葡萄糖18kg。納他霉素產(chǎn)量為5.4g/L，獲得的納他霉素純度達到85％。
實施例4-7為任意濃度(＜4g/L)的納他霉素發(fā)酵液提取例實施例4取3L含有2.8g/L納他霉素的發(fā)酵液，采用薄膜蒸發(fā)除去V/2的水后；加入1.5L甲醇，后用20％的氫氧化鈉調(diào)pH值到10；然后在3500rpm轉(zhuǎn)速下離心20min，除去菌絲體，得到上清液；之后用鹽酸調(diào)pH到7.0，在35℃下薄膜蒸發(fā)除去甲醇；后再在3500rpm轉(zhuǎn)速下離心20min；用蒸餾水洗滌沉淀3次后，-50℃冷凍干燥，獲得6.66g納他霉素。用HPLC檢測純度為85.1％。
實施例5方法同實施例4，不同之處在于用氫氧化鈉調(diào)pH為10.5，最后獲得了8.76g納他霉素，純度為82.1％。
實施例6方法同實施例4，不同之處在于用氫氧化鈉調(diào)pH為11，37℃自然蒸發(fā)除去甲醇，最后獲得了5.96g納他霉素，純度為84.4％。
實施例7取180mL含有1.86g/L的發(fā)酵液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去V/2的水后加入V/2的甲醇，調(diào)節(jié)pH到10.5，離心除去菌絲體，用活性炭處理上清液后過濾除去活性炭，調(diào)節(jié)pH到7.5，65℃薄膜蒸發(fā)除去甲醇，離心獲得沉淀，用蒸餾水洗滌沉淀3次，真空干燥獲得0.3g納他霉素，純度達到91.5％。
權(quán)利要求
1.納他霉素的制備方法，其特征是發(fā)酵法生產(chǎn)納他霉素，采用褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces gilvosporeus)，經(jīng)孢子懸浮液的制備、種子培養(yǎng)、發(fā)酵、提取工序；通過控制pH值和溶解氧水平，以及在發(fā)酵期間分批次流加葡萄糖進行生產(chǎn)納他霉素，并采用低溫蒸發(fā)法去除甲醇提取納他霉素；具體步驟包括如下(一)制備納他霉素發(fā)酵液●孢子懸浮液的制備生產(chǎn)菌種為褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces gilvosporeus)，其原始菌種是從美國典型培養(yǎng)物收集中心處獲得，其保藏號為ATCC 13326，通過DES和UV誘變，篩選高產(chǎn)菌株，將該生產(chǎn)菌株在瓊脂斜面上生長4-8天后，4℃保藏待用；其中，制作孢子懸浮液采用的液體為無菌水或新鮮種子培養(yǎng)基，滅菌條件為121℃，滅菌15～25min，孢子濃度選擇為108個/mL；●種子培養(yǎng)將上述制備好的孢子懸浮液加入到含碳源、氮源、無機離子和微量元素組成的種子培養(yǎng)基中，滅菌條件為120～125℃，滅菌15～25min；在搖床上200rpm轉(zhuǎn)速下，28～30℃培養(yǎng)20～28h，在培養(yǎng)過程中不需要攪拌和通氣，即可得到適合接種的種子培養(yǎng)物；●發(fā)酵生產(chǎn)納他霉素將長好的種子接入到經(jīng)滅菌的含有大豆蛋白胨、酵母粉和葡萄糖的發(fā)酵培養(yǎng)基中，按2％的體積比接種，在發(fā)酵過程中，需要流加消泡劑控制泡沫，同時還需不斷分批流加50％的葡萄糖溶液，并通過調(diào)節(jié)發(fā)酵罐的通氣量、轉(zhuǎn)速和罐壓來控制發(fā)酵液中溶解氧水平在10～30％，pH5.5～6.0，發(fā)酵96～168h后即可得到含4.0～5.6g/L納他霉素的發(fā)酵液；(二)從發(fā)酵液中提取納他霉素該步驟包括濃縮發(fā)酵液；加入甲醇，升高pH；去除菌絲體；再降低pH，蒸發(fā)甲醇；回收沉淀、進行干燥得到納他霉素固體；其具體方法是●濃縮發(fā)酵液任選一種濃縮液體的方法均可，如蒸發(fā)、過濾、離心或離心過濾法；采用蒸發(fā)法濃縮發(fā)酵液時，使發(fā)酵液濃縮到原體積的1/2以下；采用過濾法濃縮發(fā)酵液時，其濾布孔徑不應(yīng)太大，盡量減少發(fā)酵液中的懸浮物透過濾布；采用重力離心處理時，檢測離心上清液中納他霉素的含量，選擇一個合適的轉(zhuǎn)速使發(fā)酵液中的懸浮物離心下來；采用離心過濾法處理時，可將離心和過濾結(jié)合起來，在離心的過程中，同時完成過濾；●加入甲醇、升高pH向上述濃縮的發(fā)酵液中加入甲醇，并加堿調(diào)節(jié)pH到10～11，使?jié)饪s液中的納他霉素完全溶解；●去除菌絲體采用重力離心、過濾或離心過濾法除去菌絲體；●降低pH、蒸發(fā)除甲醇加酸調(diào)節(jié)pH到6.5～7.5，使溶解的納他霉素部分沉淀下來；為保持納他霉素的活性，采用低溫蒸發(fā)去除甲醇，降低納他霉素的溶解度，加速納他霉素的沉淀；●固液分離和干燥。將上述結(jié)晶的納他霉素，任選一種固液分離的方法，如過濾或離心得到沉淀，再經(jīng)水多次洗滌，使獲得的固體顏色成為白色或者通過以上的方法再次對獲得的納他霉素進行重結(jié)晶，或用活性炭脫色處理，提高納他霉素的純度，最后干燥，其方法如常溫干燥、真空干燥、噴霧干燥或真空冷凍干燥等，即得到純度不小于80％的納他霉素。
2.按照權(quán)利要求1所述的納他霉素的制備方法，其特征是在孢子懸浮液制備時，新長好的瓊脂斜面孢子需經(jīng)4℃冰箱保藏5～15天后使用。
3.按照權(quán)利要求1所述的納他霉素的制備方法，其特征是發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌時采取大豆蛋白胨和酵母粉一起滅菌，條件為120～125℃，15～25min；葡萄糖單獨滅菌，條件為114～118℃，15～25min。
4.按照權(quán)利要求1所述的納他霉素的制備方法，其特征是在發(fā)酵過程中，所加消泡劑為聚醚類。
5.按照權(quán)利要求1所述的納他霉素的制備方法，其特征是在發(fā)酵過程中，采取多次少量的補料方式，分批次流加50％的葡萄糖溶液以維持葡萄糖濃度在2％水平。
6.按照權(quán)利要求1所述的納他霉素的制備方法，其特征是提取液為任意濃度的納他霉素發(fā)酵液。
7.按照權(quán)利要求1所述的納他霉素的制備方法，其特征是發(fā)酵液濃縮之后所加甲醇量為濃縮前發(fā)酵液體積的1/2。
8.按照權(quán)利要求1所述的納他霉素的制備方法，其特征是采用低溫蒸發(fā)法去除甲醇，即采用自然揮發(fā)，加熱蒸發(fā)、真空蒸發(fā)或薄膜蒸發(fā)將處理液中的甲醇除去，其蒸發(fā)溫度控制在20～80℃。
9.按照權(quán)利要求1或8所述的納他霉素的制備方法，其特征是低溫蒸發(fā)法采用低溫真空蒸發(fā)法，其蒸發(fā)溫度控制在35～45℃。
全文摘要
納他霉素的制備方法屬于以褐黃孢鏈霉菌為菌種，發(fā)酵法生產(chǎn)、提取納他霉素的技術(shù)。本發(fā)明解決了生產(chǎn)納他霉素使用國外培養(yǎng)基、在國內(nèi)難以買到、并且價格較高及從發(fā)酵液提取納他霉素工藝復(fù)雜、費用昂貴或有副產(chǎn)物的問題。提供了制備、提取納他霉素的新工藝技術(shù)。其技術(shù)方案是采用褐黃孢鏈霉菌，經(jīng)孢子懸浮液的制備、種子培養(yǎng)、發(fā)酵、提取工序；通過控制pH值和溶解氧水平，及在發(fā)酵期間分批次流加葡萄糖的方式制備納他霉素，提高其產(chǎn)量并采用低溫蒸發(fā)去除甲醇法提取納他霉素。本發(fā)明工藝簡單、經(jīng)濟、實用、提高了納他霉素的產(chǎn)量和純度、降低了生產(chǎn)成本，促進其生產(chǎn)的工業(yè)化進程。為納他霉素的廣泛應(yīng)用提供了先決條件。既有經(jīng)濟效益又有社會效益。
文檔編號C12P19/62GK1515678SQ0314413
公開日2004年7月28日 申請日期2003年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月25日
發(fā)明者杜連祥, 王敏, 路福平, 王建玲, 鄔建國 申請人:天津科技大學(xué)