一種無需滅菌的植物組培培養(yǎng)基及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種無需滅菌的植物組培培養(yǎng)基及其制 備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)在工廠化生產(chǎn)的都要經(jīng)過滅菌處理才可進行組織培養(yǎng)的繼續(xù)生產(chǎn)。現(xiàn)行的滅菌 方法有2種，一種是高壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸饋水 的滅菌。培養(yǎng)基在制備過程中混入各種雜菌，分裝后應立即滅菌，至少應在24h內(nèi)完成滅菌 工作。滅菌時一般是在0.l〇5MPa壓力下，溫度12rC時，滅菌15~30min即可。消毒時間不 宜過長，也不能超過規(guī)定的壓力范圍，否則有機物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會在高溫下分 解，失去營養(yǎng)作用，也會使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色，甚至難W凝固。另一種是過濾滅菌：一些植物 生長調(diào)節(jié)劑及有機物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇熱容易分解，不能與培養(yǎng)基一起進行高溫滅 菌，而要使用細菌過濾器濾去其中的雜菌。細菌過濾器與濾膜訝L徑0.45微米)使用之前要 先進行高壓滅菌。過濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中，若為液體培養(yǎng)基，可在培養(yǎng)基冷卻至 3(TC時加入；若為固體培養(yǎng)基，必須在培養(yǎng)基凝固之前（50-6(TC)加入，振蕩使溶液與其他 成分混合均勻。
[0003] 目前組培工廠化生產(chǎn)用的培養(yǎng)基都是需要經(jīng)過滅菌處理后才可進行植物組培生 產(chǎn)的，大大增加了生產(chǎn)成本及時間。比如說，中國專利申請，申請?zhí)枮?01410528256.X的發(fā) 明專利申請公開了一種石解組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基，WMS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入的組分包 括α-糞乙酸、6-芐基腺嚷嶺、脯氨酸、糖、香蕉、瓊脂。通過上述方式，該發(fā)明申請的石解 組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基，WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入其余組分，所用組分簡單易得，成本低 廉，石解生長好，大大提高了產(chǎn)量和品質(zhì)，能應用于石解研究、開發(fā)和生產(chǎn)中的各個領(lǐng)域，尤 其適合進行大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。雖然，該培養(yǎng)基具有上述優(yōu)點，但是，用于實際生產(chǎn)的培 養(yǎng)基還是要進行滅菌處理的，運大大增加了生產(chǎn)實踐過程中的難度。
[0004] 綜上所述，現(xiàn)有的技術(shù)缺點是，用于實際生產(chǎn)的培養(yǎng)基都是要進行滅菌處理的，不 管是高壓滅菌處理還是過濾滅菌處理，都是生產(chǎn)環(huán)節(jié)必不可少的一步，運就帶來了一系列 的問題，大大增加了生產(chǎn)成本，因此如何克服現(xiàn)有技術(shù)的不足是目前植物生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域亟 需解決的問題。目前還沒有查到無需滅菌直接就可W使用的培養(yǎng)基的相關(guān)文獻。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種無需滅菌的植物組培培養(yǎng)基 及其制備方法。該培養(yǎng)基無需經(jīng)過高壓滅菌或過濾滅菌即可使用，所用組分簡單易得，成本 低廉，而且所培養(yǎng)的植物生長情況良好，培養(yǎng)基也不易污染，生長好，能應用植物組培研究、 開發(fā)和生產(chǎn)中的各個領(lǐng)域，適合進行大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下： 一種無需滅菌的植物組培培養(yǎng)基，包括按照如下組分： NH4NO31650mg/L、KH2PO4170mg/l、KN031 9 00mg/l、CaCl2*2H2〇 440mg/l、1拆〇4*7&0 370mg/X、ΚΙ0. 83mg/X、Na2Mo〇4*2H2〇 0. 25mg/X、H3BO36. 2mg/X、QiS〇4*5H2〇 0. 025mg/X、 MnSCVHzO16mg/l、CoCl2*6H2〇 0. 025mg/l、ZnS(V7H2〇8.6111邑/1、肌醇lOOmg/l、鹽酸硫 胺素0.Img/l、煙酸0. 5mg/l、甘氨酸2mg/l、鹽酸化唉醇0. 5mg/l、邸了人二鋼37. 3mg/L、 FeS〇4*7H2〇 27.8mg/L、生長素ΙΑΑ0. 1-0. 5mg/L、細胞分裂素6-BA0. 1-0. 5mg/L、玉米素 0. 1-0. 5mg/l、薦糖30g/l、碳粉10g/l、香蕉水母液5-lOg/l、異嚷挫嘟酬l-20mg/l、礦源煤 基黃腐酸l-20mg/l、尼泊金醋鋼l-20mg/l、巧樣酸l-20mg/l、瓊脂3-5旨/1，溶劑為蒸饋水， 抑為 5. 5-6. 5 ; 所述的香蕉水母液的制備方法是用成熟的水果香蕉剝皮煮水，按500-1000g已剝皮的 香蕉加入1L水的比例進行加料，然后加熱，待煮沸15-20分鐘后，過濾，即可制得香蕉水母 液。
[0007] 上述無需滅菌的植物組培培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟： 步驟（1 )，5種大量元素母液的制備： 分別將NH4NO3、皿2?〇4、KN03、CaCl2'2H2〇、Μ拆0八&0分別加入蒸饋水中，混合均勻，得 到濃度為165g/L的ΝΗ4ΝΟ3大量元素母液、濃度為17g/L的ΚΗ2ΡΟ4大量元素母液、濃度為 190g/L的KN03大量元素母液、濃度為44g/L的化C12,2&0大量元素母液和濃度為37g/L的 Μ拆04·7Η20大量元素母液，然后將運5種大量元素母液置于4°C下，備用； 步驟（2)，微量元素母液的制備： 將KI、Ν32Μο〇4·2Η2〇、H3BO3、CuS(V5H2〇、MnSCVHzO、CoCl2*6H2〇 和ZnS(V7H2〇 -起加入 到蒸饋水中，混合均勻，得到微量元素母液，然后置于4°C下，備用；微量元素母液中ΚΙ的濃 度為 0. 083g/L，Ν32Μο〇4·2Η2〇 的濃度為 0. 025g/L，Η3ΒΟ3的濃度為 0. 62g/l，CuSO4,5&0 的濃 度為 0. 0025g/l，MnSCVHzO的濃度為 1. 69g/L，CoCl2*6H2〇 的濃度為 0. 0025g/L，Ζη5〇4·7Η2〇 的濃度為0.86g/L; 步驟（3)，有機母液的制備： 將肌醇、鹽酸硫胺素（VB1)、煙酸、甘氨酸和鹽酸化唉醇（VB6) -起加入到蒸饋水中，混 合均勻，得到有機母液，然后置于4°C下，備用；有機母液中肌醇的濃度為lOg/l，鹽酸硫胺 素的濃度為0.Olg/L煙酸的濃度為0. 〇5g/l，甘氨酸的濃度為0. 2g/l，和鹽酸化唉醇的濃 度為 0. 05g/L; 步驟（4)，鐵鹽母液的制備： 將邸TA二鋼和化S04,7H20 -起加入到蒸饋水中，混合均勻后，得到鐵鹽母液，然后置于 4°C下棟色玻璃瓶，備用；所述的鐵鹽母液中邸TA二鋼的濃度為3. 73gg/L，F(xiàn)eS〇4,7H2〇的濃 度為 2. 78/L; 步驟（5)，其它物質(zhì)母液的制備： 將生長素IAA先用體積分數(shù)為95%的酒精或lmol/1的化0H溶解，然后再加入蒸饋水 中，混合均勻，得到濃度為Img/ml生長素IAA母液，置于陰涼避光處，備用；所用蒸饋水的體 積為所用體積分數(shù)為95%的酒精或所用lmol/1的化0H的體積的18-20倍； 將玉米素先用體積分數(shù)為95%的酒精或ImoVI的化0H溶解，然后再加入蒸饋水中，混 合均勻，得到濃度為Img/ml玉米素母液，置于陰涼避光處，備用；所用蒸饋水的體積為所用 體積分數(shù)為95%的酒精或所用lmol/1的化0H的體積的18-20倍； 將細胞分裂素6-BA先用lmol/1的HCl溶解，然后再加入蒸饋水中，混合均勻，得到 濃度為Img/ml細胞分裂素6-BA母液，置于陰涼避光處，備用；所用蒸饋水的體積為所用 lmol/1的肥1的體積的18-20倍； 將異嚷挫嘟酬、礦源煤基黃腐酸、尼泊金醋鋼和巧樣酸分別用水溶解，配制成濃度為Img/ml的異嚷挫嘟酬母液、濃度為Img/ml的礦源煤基黃腐酸母液、濃度為Img/ml的尼泊金 醋鋼母液、濃度為Img/ml的巧樣酸母液； 步驟（6)，培養(yǎng)基的配制： 取等體積的NH4NO3大量元素母液、KH2PO4大量元素母液、KNO3大量元素母液XaCl2· 2&0 大量元素母液、Μ拆04·7Η20大量元素母液、微量元素母液、有機母液和鐵鹽母液加入到蒸饋 水中，然后向其中加入薦糖，攬拌至完全溶解后，再向其中加入碳粉，攬拌至混合均勻，之后 加入香蕉水母液，再加入瓊脂并加熱至沸騰，待瓊脂完全烙化后停止加熱，接著加入上述配 好的生長素ΙΑΑ母液、玉米素母液、細胞分裂素6-ΒΑ母液、異嚷挫嘟酬母液、礦源煤基黃腐 酸母液、尼泊金醋鋼母液和巧樣酸母液，之后加入蒸饋水定容至體積是所用ΝΗ4ΝΟ3大量元 素母液體積的100倍，最后調(diào)節(jié)抑至5. 5-6. 5,并用培養(yǎng)基分裝機分裝，待其自然降至室溫， 即得無需滅菌的植物組培培養(yǎng)基。
[0008] 所有母液的加入量均按照本發(fā)明最終產(chǎn)品所給的濃度進行常規(guī)計算即可。
[0009] 進一步，優(yōu)選的是采用lmol/1的肥1和/或lmol/1的化0Η調(diào)節(jié)抑值。
[0010] 進一步，優(yōu)選的是如果分裝至無蓋的無菌容器中，需要采用封口膜或牛皮紙封口， 再用橡皮筋或繩子扎緊。本發(fā)明培養(yǎng)基在進行組織培養(yǎng)時，使用期限為3個月。
[0011] 進一步，優(yōu)選的是所述的加入瓊脂并加熱至沸騰，lOmin后瓊脂完全烙化。
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