牛樟樹組織培養(yǎng)快速繁殖的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種牛精樹組織培養(yǎng)繁殖的方法。
【背景技術】
[0002] 牛精（Cinnamomumkanehirae化y)屬精科(Xauraceae)精屬植物，又名黑精，為 臺灣特有常綠闊葉大喬木，樹干通直，樹體高聳及初生葉顏色多變，深具觀賞價值，是極具 發(fā)展?jié)摿Φ木坝^樹種。因其具有特殊的香味，且不易腐朽，材質細致，紋理交錯，牛精一直是 雕刻神像的最佳素材。牛精樹葉中含有獨特的Ξ祗類，對治療癌癥有顯著功效。牛精備受 關注的另一個主要原因在于極具商業(yè)價值的珍貴藥用真菌-牛精芝僅寄生于牛精樹樹干。
[0003] 目前牛精天然林因過度開發(fā)W及人為盜伐已溯臨滅絕危機，常常一木難求。此外， 牛精樹體高大，種子采集困難，加上種子的發(fā)芽率低，人工繁育困難較大。因此，建立方法簡 單、生根率高的牛精樹組織培養(yǎng)快速繁殖體系，將對牛精的開發(fā)利用起到重要作用。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種種苗健壯，成活率高，滿足市場對牛精樹的種苗的大 量需求，有效解決牛精樹規(guī)?；鐔栴}的牛精樹組織培養(yǎng)快速繁殖的方法。
[0005] 本發(fā)明的技術解決方案是：
[0006] 一種牛精樹組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征是：包括下列步驟：
[0007] (1)外植體的采集和消毒：
[0008] 取帶蔽芽的莖段作為外植體，用質量百分數(shù)0. 05%的洗潔精浸泡5min，自來水沖 洗后，移置于超凈工作臺上；在75%乙醇中浸泡30秒，無菌水沖洗2遍后，用0. 1 %升隸消 毒lOmin，無菌水清洗3次后，再用無菌吸收紙去掉表面水分，切成0.8-lcm帶一個蔽芽的莖 段；
[0009] (2)無菌試管苗的獲得：
[0010] 將上述消毒過的外植體接種于芽分化培養(yǎng)基上30天誘導不定芽萌發(fā)，得到無菌 試管苗；培養(yǎng)溫度為26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h;分化培養(yǎng) 基WWPM為基本培養(yǎng)基，添加植物激素包括：6-芐基腺嚷嶺2. 〇111邑/1、嗎|噪下酸0. 1111邑/1、激 動素0. 2mg/L，薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L;培養(yǎng)基抑值為5.8;
[0011] (3)試管苗繁殖培養(yǎng)：
[0012] 將步驟（2)得到的無菌試管苗置于增殖培養(yǎng)基上得到大量不定芽；培養(yǎng)溫度為 26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h;增殖培養(yǎng)基是WWPM為基本培 養(yǎng)基，添加聚乙締化咯燒酬500mg/l、活性炭Ig/LW及植物激素6-芐基腺嚷嶺2. 5mg/lJ3| 噪下酸0. 3mg/l、靈發(fā)素0.Img/l，薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L;培養(yǎng)基抑值為 5. 8 ;
[0013] (4)試管苗的生根培養(yǎng)：
[0014] 將步驟（3)得到的不定芽，置于生根培養(yǎng)基中誘導生根；培養(yǎng)溫度為26-28°C，光 照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h;增殖培養(yǎng)基是WWPM為基本培養(yǎng)基，添 加聚乙締化咯燒酬0. 5g/L、活性炭1.Og/LW及植物激素：嗎I噪下酸0. 5-1.Omg/l、糞乙酸 0. 5mg/L、靈發(fā)素0.Img/L;薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L;培養(yǎng)基抑值為5.8; [001引巧）煉苗移栽：
[0016] 將步驟（4)獲得的帶根的3cm高試管苗煉苗5-7山用綴子取出試管苗，洗凈根部的 培養(yǎng)基，移栽置滅菌后的質量比：賠石：泥炭上為1:1的基質中生長2個月后，再移栽大棚 進行管理。
[0017] 所述WPM為木本植物用培養(yǎng)基，
[001引 配方：
[0019]
[0020]
[0021] 本發(fā)明得到的種苗健壯，成活率達到99. 2%，滿足市場對牛精樹的種苗的大量需 求，有效解決牛精樹規(guī)?；鐔栴}。
[0022] 下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
【具體實施方式】
[0023] -種牛精樹組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，包括下列步驟：
[0024] (1)外植體的采集和消毒：
[00巧]取帶蔽芽的莖段作為外植體，用質量百分數(shù)0. 05%的洗潔精浸泡5min，自來水沖 洗后，移置于超凈工作臺上。在75%乙醇中浸泡30秒，無菌水沖洗2遍后，用0. 1 %升隸消 毒lOmin，無菌水清洗3次后，再用無菌吸收紙去掉表面水分，切成0.8-lcm帶一個蔽芽的莖 段。
[0026] (2)無菌試管苗的獲得：
[0027] 將上述消毒過的外植體接種于芽分化培養(yǎng)基上30天誘導不定芽萌發(fā)，得到無菌 試管苗。培養(yǎng)溫度為26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期為12h/12h(光/暗）。分化 培養(yǎng)基WWPM為基本培養(yǎng)基，添加植物激素包括：6-芐基腺嚷嶺化-BA) 2. 〇111邑/1、嗎|噪下酸 (IBA)O.Img/L、激動素化Τ)0. 2mg/L。薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L。培養(yǎng)基抑 值為5.8。
[0028] (3)試管苗繁殖培養(yǎng)：
[0029] 將步驟（2)得到的無菌試管苗置于增殖培養(yǎng)基上得到大量不定芽。培養(yǎng)溫度為 26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期為12h/12h(光/暗）。增殖培養(yǎng)基是WWPM為基 本培養(yǎng)基，添加聚乙締化咯燒酬（PVP)500mg/L、活性炭Ig/LW及植物激素6-芐基腺嚷嶺 化-BA)2. 5111邑/1、嗎|噪下酸（IBA)O. 3mg/L、靈發(fā)素（LF巧0.Img/L。薦糖和瓊脂濃度分別是 20g/L和6. 5g/L。培養(yǎng)基抑值為5.8。
[0030] (4)試管苗的生根培養(yǎng)：
[003。 將步驟做得到的不定芽，置于生根培養(yǎng)基中誘導生根。培養(yǎng)溫度為26-28。光 照強度為15001UX，光照周期為12h/12h(光/暗）。增殖培養(yǎng)基是WWPM為基本培養(yǎng)基，添 加聚乙締化咯燒酬（PVP)O. 5g/l、活性炭1.Og/LW及植物激素：嗎I噪下酸（IBA)O. 5-1.Omg/ L糞乙酸（NAA)O. 5mg/l、靈發(fā)素（LF巧0.Img/L。薦糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L。 培養(yǎng)基抑值為5.8。
[003引 妨煉苗移栽：
[0033] 將步驟（4)獲得的帶根的長勢良好的試管苗（約3cm高）煉苗5-7山用綴子取出 試管苗，洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽置滅菌后的賠石：泥炭±為1:1的基質中生長2個月后，再 移栽大棚進行管理。
[0034] 所述WPM為木本植物用培養(yǎng)基，
[0035] 配方：
[0036]
[0037]
[003引得到的種苗健壯，成活率達到99. 2%。
【主權項】
1. 一種牛樟樹組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征是：包括下列步驟： (1) 外植體的采集和消毒： 取帶腋芽的莖段作為外植體，用質量百分數(shù)0. 05%的洗潔精浸泡5min，自來水沖洗 后，移置于超凈工作臺上；在75 %乙醇中浸泡30秒，無菌水沖洗2遍后，用0. 1 %升汞消毒 lOmin，無菌水清洗3次后，再用無菌吸收紙去掉表面水分，切成0. 8-lcm帶一個腋芽的莖 段； (2) 無菌試管苗的獲得： 將上述消毒過的外植體接種于芽分化培養(yǎng)基上30天誘導不定芽萌發(fā)，得到無菌試管 苗；培養(yǎng)溫度為26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h ;分化培養(yǎng)基以 WPM為基本培養(yǎng)基，添加植物激素包括：6_芐基腺嘌呤2. Omg/L、吲哚丁酸0. lmg/L、激動素 0. 2mg/L，蔗糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L ;培養(yǎng)基pH值為5. 8 ; (3) 試管苗繁殖培養(yǎng)： 將步驟⑵得到的無菌試管苗置于增殖培養(yǎng)基上得到大量不定芽；培養(yǎng)溫度為 26-28°C，光照強度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h ;增殖培養(yǎng)基是以WPM為基本培 養(yǎng)基，添加聚乙烯吡咯烷酮500mg/L、活性炭lg/L以及植物激素6-芐基腺嘌呤2. 5mg/L、吲 哚丁酸〇. 3mg/L、靈發(fā)素0. lmg/L，蔗糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L ;培養(yǎng)基pH值為 5. 8 ； (4) 試管苗的生根培養(yǎng)： 將步驟（3)得到的不定芽，置于生根培養(yǎng)基中誘導生根；培養(yǎng)溫度為26-28Γ，光照強 度為15001UX，光照周期：光/暗為12h/12h ;增殖培養(yǎng)基是以WPM為基本培養(yǎng)基，添加聚乙 烯吡咯烷酮〇. 5g/L、活性炭1.0 g/L以及植物激素：吲哚丁酸0. 5-1. Omg/L、萘乙酸0. 5mg/ U靈發(fā)素0. lmg/L ;蔗糖和瓊脂濃度分別是20g/L和6. 5g/L ;培養(yǎng)基pH值為5. 8 ; (5) 煉苗移栽： 將步驟（4)獲得的帶根的3cm高試管苗煉苗5-7d，用鑷子取出試管苗，洗凈根部的培養(yǎng) 基，移栽置滅菌后的質量比：蛭石：泥炭土為1:1的基質中生長2個月后，再移栽大棚進行 管理。2. 根據(jù)權利要求1所述的牛樟樹組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征是：所述WPM為木 本植物用培養(yǎng)基， 配方：
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種牛樟樹組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，包括外植體的采集和消毒、無菌試管苗的獲得、試管苗繁殖培養(yǎng)、試管苗的生根培養(yǎng)、煉苗移栽等步驟。本發(fā)明得到的種苗健壯，成活率達到99.2%，滿足市場對牛樟樹的種苗的大量需求，有效解決牛樟樹規(guī)?；鐔栴}。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105409779
【申請?zhí)枴緾N201510990381
【發(fā)明人】王磊, 王仲禮, 宿紅艷
【申請人】魯東大學
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年12月25日