一種鐵皮石斛離體快速繁殖的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物的組織培養(yǎng)領域，具體涉及一種鐵皮石斛試管內開花的方法。
【背景技術】
[0002]鐵皮石斛(學名:Dendrobiumofficinale Kimura et Migo),又名:黑節(jié)草、云南鐵皮。屬微子目，蘭科多年生附生草本植物。鐵皮石斛是我國傳統(tǒng)中藥，也是觀賞價值很高的花卉。近年來，鐵皮石斛產業(yè)發(fā)展迅猛，生產一直處于供不應求的狀態(tài)。鐵皮石斛在自然及栽培條件下開花周期較長，至少需要2年時間，離體開花結實技術不僅可以縮短育種年限，而且對于闡明成花機理及開發(fā)市場都具有重要意義。目前，已成功誘導離體開花的石斛屬植物種類有細莖石斛心、金釵石斛、霍山石斛、Dendrobium Chao Praya Smile、Den_drobiumSonia 17和Dendrobium Madame Thong-1n等，有關鐵皮石斛離體開花雖有報道，但花誘芽導率不高。
[0003]石斛具有較高的觀賞價值和藥用價值，是重要的貿易蘭花種類。目前雜交育種是培育石斛遺傳改良的重要手段，蘭花育種周期長達2?3 a，如能縮短其育種周期，則可大大促進該產業(yè)的發(fā)展。當代，植物組織培養(yǎng)基本技術成熟，周期短、便于人工控制培養(yǎng)條件、繁殖速度快、占用空間小、經(jīng)濟效益高，是優(yōu)良品種培育的有效途徑。

【發(fā)明內容】

[0004]為解決目前鐵皮石斛在自然及栽培條件下開花周期長的問題，本發(fā)明提供一種鐵皮石斛試管內開花的方法。
[0005]本發(fā)明提供的鐵皮石斛試管內開花的方法，包括如下步驟:
1)增殖培養(yǎng):選取長勢旺盛、葉片翠綠及長勢一致的鐵皮石斛無菌苗，接種于增殖培養(yǎng)基中，常規(guī)培養(yǎng)至形成大量叢生芽，獲得大量無菌鐵皮石斛苗。
[0006]2)挑選步驟1)長勢旺盛、葉片翠綠及長勢一致的鐵皮石斛無菌苗，接種于生根培養(yǎng)基中，常規(guī)培養(yǎng)至長出白色的根。
[0007]3)開花培養(yǎng):挑選步驟2)中根長0.5-1 cm的鐵皮石斛苗，接種至花芽誘導培養(yǎng)基上，常規(guī)培養(yǎng)，直至開花。
[0008]其中，所述無菌苗優(yōu)選長勢旺盛、葉片翠綠及長勢一致的鐵皮石斛無菌苗。
[0009]其中，所述增殖誘導培養(yǎng)基以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，外加植物調節(jié)劑。其中MS配方中所含蔗糖濃度為30 g/L，外加的萘乙酸濃度為0.1 mg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為3.0 mg/L。
[0010]其中，所述生根培養(yǎng)基以1/2 MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，外加植物調節(jié)劑。其中所含蔗糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.05 mg/L、活性炭濃度為1.0 mg/L。
[0011]其中，所述試管內開花培養(yǎng)基以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，外加植物調節(jié)劑。其中MS配方中所含蔗糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.1 mg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為
3.5mg/L。
[0012]其中，所述常規(guī)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為pH值5.8，培養(yǎng)溫度26 °C，光照周期12小時/天，光照強度為1000 lx。
[0013]其中，所述增殖培養(yǎng)的時間為30 d。
[0014]其中，所述生根培養(yǎng)的時間為7 d。
[0015]其中，所述試管內從形成花芽到開花直至凋謝共可維持60 d。
[0016]本發(fā)明還提供所述鐵皮石斛試管內開花的方法在鐵皮石斛繁育中的應用。
[0017]本發(fā)明的有益效果在于:
1)本發(fā)明可快速繁殖鐵皮石斛無菌種苗。
[0018]2 )本發(fā)明采用離體快速繁殖技術對鐵皮石斛進行試管內開花誘導，極大地解決了鐵皮石斛自然及栽培條件下開花周期較長以及病蟲害感染等諸多問題，能快速提供鐵皮石斛種苗、縮短育種年限以適應市場的需求。
[0019]3)本發(fā)明在保護鐵皮石斛自然資源、鐵皮石斛優(yōu)良品種和良好的生態(tài)環(huán)境等方面具有重要意義。
【附圖說明】
[0020]以下是試管內鐵皮石斛形成花苞、花苞半開放、花苞全開放、花苞凋謝以及試管鐵皮石斛花卉的圖片說明。
[0021]圖1是培養(yǎng)30天后試管內鐵皮石斛形成的花苞；
圖2是培養(yǎng)35天后試管內鐵皮石斛形成的半開放花苞；
圖3是培養(yǎng)40天后試管內鐵皮石斛形成的全開放花苞；
圖4是培養(yǎng)60天后試管內鐵皮石斛的凋謝的花。
【具體實施方式】
[0022]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神和實質的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。
[0023]若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規(guī)手段。實施例中所用化學試劑均可市購。
[0024]實施例1
利用本發(fā)明進行鐵皮石斛試管內開花誘導培養(yǎng)。
[0025]1)增殖誘導培養(yǎng):挑選長勢旺盛、葉片翠綠及長勢一致的鐵皮石斛無菌苗接種至增殖培養(yǎng)基中進行常規(guī)誘導培養(yǎng)。所述鐵皮石斛增殖誘導培養(yǎng)基為以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.lmg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為3.0 mg/L的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基pH值為5.8。(培養(yǎng)條件同步驟2)。培養(yǎng)30 d后，每株鐵皮石斛苗能形成3棵左右的叢生芽，芽長1.5-2 cm。
[0026]2)生根誘導培養(yǎng):挑選步驟1)中鐵皮石斛叢生芽，接種至生根培養(yǎng)基中，進行常規(guī)誘導培養(yǎng)。所述鐵皮石斛生根培養(yǎng)基為以1/2 MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含鹿糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.05 mg/L、活性炭濃度為1.0 mg/L的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基pH值為5.8。(培養(yǎng)條件同步驟2)。培養(yǎng)7 d后，形成大量0.5~1 cm的白色根須。
[0027]3)開花誘導培養(yǎng):挑選步驟2)中根長0.5-1 cm的鐵皮石斛苗，接種至花芽誘導培養(yǎng)基中，進行常規(guī)誘導培養(yǎng)。所述鐵皮石斛開花培養(yǎng)基為以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.1 mg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為3.5 mg/L的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基pH值為5.8。(培養(yǎng)條件同步驟2)。培養(yǎng)30 d后即有花芽形成，直至開花、凋謝可維持60 d。(見附件1)
結果表明，無菌苗增殖倍數(shù)達4，生根率達100%，試管內開花率達75%、花期可維持30 d左右，能夠得到保持母株優(yōu)良性狀的大量鐵皮石斛種苗和試管開花植株。
[0028]實施例2
利用本發(fā)明進行鐵皮石斛試管內開花培養(yǎng)。
[0029]所述增殖誘導培養(yǎng)基為以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.1 mg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為3.0 mg/L的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基pH值為5.8。其他條件同實施例1。
[0030]所述生根誘導培養(yǎng)基為以1/2 MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30g/L、萘乙酸濃度為0.05 mg/L、活性炭濃度為1.0 mg/L的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基pH值為5.8，其他條件同實施例1。
[0031]所述開花誘導培養(yǎng)基為以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含鹿糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.1 mg/L,6-芐氨基嘌呤濃度為3.5 mg/L的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基pH值為5.8，其他條件同實施例1。
[0032]結果表明，無菌苗增殖倍數(shù)達4，生根率達100%，試管內開花率達75%、花期可維持30 d左右，能夠得到保持母株優(yōu)良性狀的大量鐵皮石斛種苗和試管開花植株。
[0033]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明技術原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。
【主權項】
1.一種鐵皮石斛試管內開花的方法，包括如下步驟: 1)增殖培養(yǎng):選取長勢旺盛、葉片翠綠及長勢一致的鐵皮石斛無菌苗，接種于增殖培養(yǎng)基中，常規(guī)培養(yǎng)至分化出叢生芽，獲得大量的鐵皮石斛無菌苗； 2)生根培養(yǎng):挑選步驟1)長勢旺盛、葉片翠綠及長勢一致的鐵皮石斛無菌苗，接種于生根培養(yǎng)基中，常規(guī)培養(yǎng)至長出白色的根； 3)開花培養(yǎng):挑選步驟2)中根長0.5-1 cm的鐵皮石斛苗，接種至花芽誘導培養(yǎng)基上，常規(guī)培養(yǎng)，直至開花。2.如權利要求1所述的鐵皮石斛試管內開花的方法，其特征在于，所述鐵皮石斛無菌苗為長勢旺盛、葉片翠綠及長勢一致的鐵皮石斛無菌苗。3.如權利要求2所述的鐵皮石斛試管內開花的方法，其特征在于，所述鐵皮石斛增殖誘導培養(yǎng)基為以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.1mg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為3.0 mg/L的培養(yǎng)基。4.如權利要求3所述的鐵皮石斛試管內開花的方法，其特征在于，所述鐵皮石斛生根培養(yǎng)基為以1/2 MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.05mg/L、活性炭濃度為1 mg/L的培養(yǎng)基。5.如權利要求4所述的鐵皮石斛試管內開花的方法，其特征在于，所述鐵皮石斛試管內開花培養(yǎng)基為以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所含蔗糖濃度為30 g/L、萘乙酸濃度為0.1 mg/L、6-芐氨基嘌呤濃度為3.5 mg/L的培養(yǎng)基。6.如權利要求1-5所述的鐵皮石斛試管內開花的方法，其特征在于，所述常規(guī)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為pH值5.8，培養(yǎng)溫度26 V，光照周期12小時/天，光照強度為1000 lx。7.如權利要求6所述的鐵皮石斛試管內開花的方法，其特征在于，所述鐵皮石斛增殖培養(yǎng)的時間為30 d左右。8.如權利要求7所述的鐵皮石斛試管內開花的方法，其特征在于，所述鐵皮石斛生根培養(yǎng)的時間為7 d左右。9.如權利要求8所述的鐵皮石斛試管內開花的方法，其特征在于，所述鐵皮石斛試管內形成花芽的時間為30 d左右，直至花凋謝共可維持60 d。10.權利要求1-9任一項所述的鐵皮石斛試管內開花的方法是在鐵皮石斛繁育中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種鐵皮石斛離體開花的方法，包括如下步驟：增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、開花培養(yǎng)和常規(guī)培養(yǎng)直至開花。本發(fā)明的方法外植體消毒效率高達90%，增值倍數(shù)達到4，無菌苗生根率達100%；正?；ㄕT導率最高達84%，最低為25%，每株開l～3朵花不等。鐵皮石斛試管離體開花技術極大地解決了鐵皮石斛自然及栽培條件下開花周期較長以及病蟲害感染等諸多問題，能快速提供鐵皮石斛種苗、縮短育種年限以適應市場的需求。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105475128
【申請?zhí)枴緾N201410468593
【發(fā)明人】陳建榮, 劉芳, 唐映紅, 郭清泉
【申請人】長沙學院
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2014年9月16日