一種羊齒天冬組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種天冬組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羊齒天冬(AsparagusfilicinusBuch.-Ham.ex D.Don)別名月芽一支蒿、千錘打、廣麥冬、土百部、九重根等，為百合科多年生草本植物，以塊根入藥，具有潤(rùn)肺止咳、殺蟲止癢、咯血止帶之功效，并具有較強(qiáng)的抑瘤作用。羊齒天冬目前大多處于野生狀態(tài)，但由于過度采挖利用，其資源瀕臨枯竭。
[0003]人工栽培的羊齒天冬主要靠種子和分株繁殖，但種子發(fā)芽率較低，分株繁殖中，每株只能分得3-5株帶有根系的枝條，繁殖系數(shù)低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種羊齒天冬組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良羊齒天冬種苗、滿足生產(chǎn)需要。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種羊齒天冬組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0006](I)外植體的選擇與消毒:取羊齒天冬健壯植株新萌發(fā)的嫩芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1 %升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3_5次，然后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；
[0007](2)外植體初代誘導(dǎo)獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的外植體置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，切成長(zhǎng)0.5-1.0cm的莖段，接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8-10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中添加0.5-1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊月旨，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0008](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中添加0.5-1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-0.5mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的PH值為5.8 ;
[0009](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中添加0.1-1.011^/12，4二氯苯氧乙酸2，4-0 0.5-0.1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA0.1-1.0mg/L的赤霉素GA3、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0010](5)生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到完整帶根苗，其中MS生根培養(yǎng)基中添加0.5-4.0mg/L的萘乙酸NAA、的0.5-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、lOg/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5. 8 ;
[0011](6)煉苗移栽：將步驟（5)得到的完整帶根苗在室溫下煉苗4-7天，待表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽到按質(zhì)量比為蛭石：泥炭土 = I ：1的基質(zhì)中，生長(zhǎng)一個(gè)月后移栽到大田。
[0012]本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)在于：
[0013](I)采用本發(fā)明所述組織培養(yǎng)方法對(duì)羊齒天冬進(jìn)行繁殖，在短時(shí)間內(nèi)可培育出大量?jī)?yōu)質(zhì)羊齒天冬幼苗，其擴(kuò)繁系數(shù)可達(dá)20-30倍，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。
[0014](2)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的羊齒天冬叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到20-30倍，叢生芽健壯，接種到生根培養(yǎng)基后容易生根，生根率可達(dá)95%以上。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說明。
[0016]實(shí)施例I
[0017]本發(fā)明所述的羊齒天冬組織培養(yǎng)快速繁殖方法的一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟：
[0018](I)外植體的選擇與消毒：取羊齒天冬健康植株新萌發(fā)的嫩芽作為外植體，去外除葉后，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升O. I %升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0019](2)外植體初代誘導(dǎo)獲得無菌試管苗：將步驟（I)得到的外植體置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，用解剖刀切成I. 0-1. 5cm長(zhǎng)的帶有一個(gè)腋芽的莖段接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8-10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中添加O. 5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0. 2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5. 8 ;
[0020](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng)：將步驟（2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中添加O. 5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0. 2mg/L的吲哚丁酸IBA、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5. 8。叢生芽增殖率為15. 5。
[0021](4)叢生芽壯苗培養(yǎng)：將步驟（3)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中添加O. 2mg/L 2. 4 二氯苯氧乙酸2. 4_D、1. Omg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0. 5mg/L赤霉素GA3、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5. 8。
[0022](5)生根培養(yǎng)：將步驟（4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8-10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到完整帶根苗，其中MS生根培養(yǎng)基中添加3. Omg/L的萘乙酸NAA、的2. Omg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、10g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5. 8。生根率為80%
[0023]實(shí)施例2
[0024]本發(fā)明所述的羊齒天冬的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的另一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟：
[0025](I)外植體的選擇與消毒：取羊齒天冬健康植株新萌發(fā)的嫩芽作為外植體，去外去葉后，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15_30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1 %升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0026](2)外植體初代誘導(dǎo)獲得無菌試管苗:將步驟(I)得到的外植體置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，用解剖刀切成1.0-1.5cm長(zhǎng)的帶有一個(gè)腋芽的莖段接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8-10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到無菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的萘乙酸NNA、0g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0027](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中添加1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚丁酸IBA、、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖率為31.2。
[0028](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為8_10h/d的條件下培養(yǎng)30天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中添加0.5mg/L 2.4 二氯苯氧乙酸2.4_D、0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BAU.0mg/L赤霉素GA3、30g/L蔗糖和5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
[0029](5)生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15