激活酶的化合物及組合物相關(guān)申請本申請根據(jù)35U.S.C.§119(e)要求于2012年8月3日提交的第61/679,129號美國臨時專利申請的優(yōu)先權(quán)，該臨時申請全文通過引證的方式納入本說明書。

背景技術(shù)：
細(xì)胞凋亡為高等生物通過除去過剩的、受損的或有潛在危險的細(xì)胞而維持體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的過程。半胱天冬酶為一類半胱氨酸蛋白酶，其在識別含C-端天冬氨酸殘基的序列后切開細(xì)胞的底物。半胱天冬酶的激活對細(xì)胞凋亡至關(guān)重要。有兩種典型的細(xì)胞凋亡途徑，其區(qū)別在于細(xì)胞凋亡的起始刺激為細(xì)胞內(nèi)的(內(nèi)源性途徑)或細(xì)胞外的(外源性途徑)。這些途徑歸結(jié)于半胱天冬酶原-3的斷裂以形成活性的半胱天冬酶-3——其為催化數(shù)百蛋白質(zhì)底物水解的關(guān)鍵“執(zhí)行者”半胱天冬酶——而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。癌癥的標(biāo)志之一是癌細(xì)胞逃避細(xì)胞凋亡的能力，使其不受抑制地繁殖。因此，在具有有缺陷的凋亡途徑的細(xì)胞中，細(xì)胞凋亡的再激活是一種有前景的抗癌策略?；衔锶鏿53-MDM2干擾物(Nutlins)、Bcl-2抑制劑(ABT-737)及XIAP的抑制劑(SM-164)均直接作用于細(xì)胞凋亡級聯(lián)中的蛋白質(zhì)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并導(dǎo)致癌細(xì)胞死亡。作為上述策略的補(bǔ)充，采用小分子直接激活半胱天冬酶原-3具有使癌癥治療個性化的潛能。在某些癌癥包括淋巴瘤、白血病、黑素瘤、胰腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌和結(jié)腸癌中，半胱天冬酶原-3的水平提高。由于癌細(xì)胞中半胱天冬酶原-3水平的提高、對用于細(xì)胞凋亡的半胱天冬酶-3激活的需求以及半胱天冬酶原-3在細(xì)胞凋亡級聯(lián)中相對下游的位置，正在積極探索通過直接激活半胱天冬酶原-3而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作為個性化的抗癌策略。因此，需要新的調(diào)節(jié)半胱天冬酶原-3活性的化合物，特別是激活半胱天冬酶原-3的化合物以及在代謝上足夠穩(wěn)定以成為有效的臨床療法的化合物。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
激活半胱天冬酶原的化合物-1(PAC-1)是鄰羥基N-?；辏潴w外增強(qiáng)了半胱天冬酶原-3的酶活性并在癌細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在患有淋巴瘤的寵物犬上進(jìn)行的獸醫(yī)臨床試驗評估了PAC-1的類似物，稱為S-PAC-1，發(fā)現(xiàn)其具有相當(dāng)大的潛能作為抗癌劑。帶著這樣的目標(biāo)，即在該類有前景的實驗性治療劑中鑒定更有效的化合物，創(chuàng)建了基于PAC-1的組合庫，并評估了這些化合物在培養(yǎng)物中誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡的能力。評估了這些化合物在癌細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力及其代謝穩(wěn)定性。這些新鑒定的化合物可提供療法用于治療多種具有提高的半胱天冬酶原-3表達(dá)水平的癌癥。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)能夠激活在癌細(xì)胞中通常以其非活性形式過度表達(dá)的酶的化合物。所述化合物可在癌細(xì)胞中誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡(細(xì)胞凋亡)，所述癌細(xì)胞包括那些具有上調(diào)的半胱天冬酶原-3的細(xì)胞。許多癌癥抵抗標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)療法。本文所描述的化合物可利用在癌細(xì)胞中可能上調(diào)的生物靶標(biāo)，并因此甚至在它們的凋亡機(jī)制中有缺陷的細(xì)胞中可能是有效的。這些化合物還可通過選擇性殺死癌細(xì)胞而成功用于靶向癌癥治療中，對具有較低水平半胱天冬酶原-3的非癌性的細(xì)胞具有可比較地減少的不良反應(yīng)。這些不良反應(yīng)可包括毒性，特別是神經(jīng)毒性。因此，本發(fā)明提供式Ⅰ化合物的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物：其中R1為任選取代的苯甲?；?、苯基、(芳基)亞甲基或(芳基)次甲基，其中次甲基碳任選被苯基取代；n為1、2、3或4；以及各R2獨立地為H、烷基、烷氧基、羥基、羧基、鹵、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、芐基、芐基氧基、硝基、氰基(-CN)、氨磺酰(-SO2NH2)、2-丙烯基、乙炔、N-烷基-三唑或N-芐基-三唑；或兩個R2基團(tuán)形成鄰位稠合的苯并基團(tuán)。在一些實施方案中，R1為苯甲?；?Ph(C＝O)-)。在其他實施方案中，R1為取代的苯甲?；Ｋ霰郊柞；鶊F(tuán)可被1、2、3或4個R2基團(tuán)取代。變量R2可位于苯甲?；鶊F(tuán)的羰基的鄰位、間位或?qū)ξ唬蚱浣M合。在一些實施方案中，n為1或2。在其他實施方案中，n為3或4。變量R2可位于式Ⅰ的羥基基團(tuán)的鄰位、間位或?qū)ξ?，或其組合。在一些實施方案中，R2為甲基、叔丁基、甲氧基、羥基、氟、氯、溴、碘、氨基、乙基氨基、二乙基氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、芐基、芐基氧基、硝基、氰基、氨磺酰、2-丙烯基、乙炔、N-甲基-三唑或N-芐基-三唑。在多個實施方案中，n為2且兩個R2基團(tuán)形成鄰位稠合的苯并基團(tuán)。在一些實施方案中，R1苯基基團(tuán)上的取代基可為取代基R2。在多個實施方案中，R2可獨立地為R1芳基基團(tuán)上的取代基，包括苯甲?；鶊F(tuán)，且所述基團(tuán)可具有一至五個R2取代基。在一些實施方案中，n為2且各R2為叔丁基。在一些實施方案中，n為1且R2為2-丙烯基。在一些實施方案中，R1為甲氧基-芐基；二甲氧基-芐基；芐基氧基-芐基；叔丁基-芐基；萘基亞甲基；或乙基-芐基。在某些具體實施方案中，R1為4-甲氧基-芐基；2,5-二甲氧基-芐基；4-芐基氧基-芐基；4-叔丁基-芐基；2-萘基亞甲基；或4-乙基-芐基。在某些其他具體實施方案中，R1為：在多個具體實施方案中，所述化合物為實施例4中化合物1-45中的一個或多個、表1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑合物。在其他實施方案中，所述化合物為本文所描述的化合物，其中對于每一個本文所描述或舉例說明的在連接至遠(yuǎn)端哌嗪氮的亞甲基碳上沒有氧代基團(tuán)的化合物而言，連接至遠(yuǎn)端哌嗪氮的亞甲基碳可被氧代基團(tuán)取代，例如：以及等。例如，在一個實施方案中，所述化合物為式(X)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物：其中R10為H、F、Cl、Br、-NO2、-CN、-CF3、-OCF3或-SO2NH2；R20為H、F、Cl、Br、-NO2、-CN、CF3、-OCF3或-SO2NH2；以及R30為H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基或(C1-C6)烷氧基。在一些實施方案中，R10為H。在一些實施方案中，R10為F、Cl或Br。在一些實施方案中，R10為-NO2或-CN。在一些實施方案中，R10為-CF3、-OCF3或-SO2NH2。在一些實施方案中，R20為H。在一些實施方案中，R20為F。在一些實施方案中，R20為H或F。在一些實施方案中，R20為F、Cl或Br。在一些實施方案中，R20為-NO2或-CN。在一些實施方案中，R20為-CF3、-OCF3或-SO2NH2。在一些實施方案中，R30為H。在一些實施方案中，R30為正丙基。在一些實施方案中，R30為2-丙烯基(烯丙基)。在一些實施方案中，R10可為上述R1，反之亦然。在一些實施方案中，R20可為上述R2，反之亦然。在一些實施方案中，R30可為上述R3，反之亦然。本發(fā)明還提供包含本文所描述的化合物和藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或載體的藥物組合物。在一些實施方案中，所述化合物在培養(yǎng)物中誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡。本發(fā)明還提供治療癌細(xì)胞的方法，包括(a)采用半胱天冬酶原激活劑化合物鑒定癌細(xì)胞對治療的敏感性；和(b)使癌細(xì)胞暴露于有效量的半胱天冬酶原激活劑化合物；其中所述半胱天冬酶原激活劑化合物為本文所描述的化合物。本發(fā)明還提供在細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法，包括給予細(xì)胞有效量的本文所描述的化合物。在一些實施方案中，本發(fā)明提供包含有效濃度——如約10nM至約100μM——的化合物或分子式的化合物和方法。在一些實施方案中，所述有效濃度為約200nM至約5μM。在另一實施方案中，所述有效濃度為如在直接半胱天冬酶原激活試驗中、在細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)試驗中或在動物臨床治療學(xué)評估中的50％的活性濃度的數(shù)值。在另一實施方案中，所述數(shù)值小于約200μM。在多個實施方案中，所述數(shù)值小于約10μM。在多個實施方案中，化合物可具有明顯的代謝穩(wěn)定性。例如，在肝微粒體穩(wěn)定性試驗中，在3小時培育后，至少約30％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約90％或至少約95％的化合物樣品可保留下來。因此，本發(fā)明提供化合物、組合物和治療學(xué)治療方法。在一些實施方案中，本發(fā)明可應(yīng)用于多種癌癥疾病和癌細(xì)胞類型如乳腺、淋巴瘤、腎上腺、腎臟、黑素瘤、白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、肺、大腦以及其他的環(huán)境中。本發(fā)明提供本文所描述的新的化合物和本文所描述分子式的化合物、用于合成所述化合物的中間體以及制備所述化合物的方法。本發(fā)明還提供可用作合成其他有用化合物的中間體的化合物。本發(fā)明還提供本文所描述組合物用于醫(yī)學(xué)治療的用途。所述醫(yī)學(xué)治療可為治療癌癥，例如淋巴瘤、白血病、黑素瘤、胰腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌和結(jié)腸癌。本發(fā)明還提供本文所描述組合物用于制造治療哺乳動物疾病——例如人類癌癥——的藥物的用途。所述藥物可包含藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或載體。附圖說明以下附圖構(gòu)成本說明書的一部分，這些附圖包含于說明書中以進(jìn)一步證明本發(fā)明的某些實施方案或多個方面。在一些情況中，通過參考附圖并結(jié)合本文所呈現(xiàn)的詳細(xì)描述可最好地理解本發(fā)明的實施方案。該描述和附圖可突出某一具體實施例或本發(fā)明的某一方面。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解部分實施例或方面可與本發(fā)明的其他實施例或方面結(jié)合使用。圖1用于構(gòu)建PAC-1類似物的組合庫的酰肼。在多個實施方案中，各R1芐基酰肼前體還可為相應(yīng)的R1苯甲酰基酰肼前體化合物。圖2根據(jù)某些實施方案，用于PAC-1類似物的組合庫的醛。圖3細(xì)胞培養(yǎng)物活性。采用化合物在25μM下處理24小時的U-937細(xì)胞(人淋巴瘤)。通過阿拉馬藍(lán)(Alamarblue)試驗評估細(xì)胞生存力。誤差棒代表偏離平均值(n＝3)的標(biāo)準(zhǔn)誤差。圖4肝微粒體穩(wěn)定性試驗?；衔?10μM)與肝微粒體培育3h并用含內(nèi)標(biāo)物的MeCN淬滅，通過LC/MS(280nm)分析。具體實施方式在2006年，報道了激活半胱天冬酶原的化合物-1(PAC-1，方案A)的發(fā)現(xiàn)(Puttetal.,NatChemBiol2006,2,543-550)。PAC-1體外增強(qiáng)了半胱天冬酶原-3的酶活性、在癌細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡性細(xì)胞死亡并在多種鼠腫瘤模型顯示效能。構(gòu)效關(guān)系研究顯示出PAC-1體外和在細(xì)胞培養(yǎng)物中的活性取決于鄰羥基N-?；瓴糠?方案A)的存在，所述鄰羥基N-?；瓴糠譃橐阎獏⑴c金屬螯合的官能團(tuán)。的確，鋅是一種強(qiáng)有力的半胱天冬酶原-3酶活性的抑制劑，PAC-1體外激活半胱天冬酶原-3的機(jī)理為通過對半胱天冬酶原-3中抑制性鋅的螯合作用，這使半胱天冬酶原-3將自身加工為活性形式。同樣的基本機(jī)理似乎也在細(xì)胞培養(yǎng)物中起作用：大約10％的細(xì)胞鋅不是緊密結(jié)合的而是作為“不穩(wěn)定鋅池(labilezincpool)”存在。由于來自不穩(wěn)定池的鋅已顯示與半胱天冬酶原-3共定位(co-localize)，因此似乎PAC-1對細(xì)胞內(nèi)部不穩(wěn)定鋅的螯合作用增強(qiáng)半胱天冬酶原-3活性，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。方案A：PAC-1和S-PAC-1，具有鄰羥基N-?；昊?，及相應(yīng)的苯甲酰基(Bz)衍生物?？蓪AC-1在使血清濃度保持48小時～10μM的劑量下安全地給予小鼠和研究用犬?？蓪⒑被酋５腜AC-1衍生物——稱為S-PAC-1(方案A)——在小鼠中提供非常高的血清濃度(～3.5mM)的劑量下安全地給藥。令人鼓舞的是，在患有自發(fā)形成的淋巴瘤的寵物犬中，S-PAC-1(以24-或72-小時連續(xù)的靜脈輸注給藥)的獸醫(yī)臨床試驗顯示該化合物在所有獸醫(yī)患者中均是安全的，并且在減少或穩(wěn)定腫瘤生長方面對6個患者中的4個是有效的。該結(jié)果對這樣的想法提供概念證明，即經(jīng)由小分子對不穩(wěn)定鋅的螯合作用的半胱天冬酶原-3激活可以是安全且有效的抗癌策略。在連續(xù)的對更有效的PAC-1衍生物的研究中，我們在本文中報道新的PAC-1類似物的合成、對這些化合物在培養(yǎng)物中誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡的能力的評估以及對具有增強(qiáng)的代謝穩(wěn)定性的各種化合物的進(jìn)一步表征。基于PAC-1的組合庫的設(shè)計和合成。以鑒定能夠在培養(yǎng)物中引起癌細(xì)胞的有效死亡的化合物為目標(biāo)，設(shè)計了PAC-1類似物的庫。由于直至至少24小時時仍未達(dá)到S-PAC-1的最大細(xì)胞毒性，且PAC-1和S-PAC-1兩者均呈現(xiàn)體內(nèi)1-2小時的短的半衰期，因此該研究的第二目標(biāo)為鑒定可更快地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的PAC-1類似物。報道了PAC-1和S-PAC-1的合成路線，以及其他PAC-1類似物的合成路線，它們利用酰肼和醛的縮合作為合成方案的最終的步驟(美國專利公開第2007/0049602號)(WO2008/134474(Hergenrotheretal.))。PAC-1合成的這種模塊化性質(zhì)使不同排列的官能團(tuán)被方便地納入PAC-1骨架中而不改變核心鄰羥基N-?；昊?，該鄰羥基N-?；昊?qū)τ诎腚滋於冈?3激活和細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)而言是必要的。如圖1和2所示，選擇31種酰肼(1{1-31})和27種醛(2{1-27})用于構(gòu)建837種PAC-1類似物的庫。該酰肼是從市售可得的芐基鹵化物起始原料構(gòu)建的。之前已報道過酰肼1{1-6}的合成(Puttetal.,NatChemBiol2006,2,543-550；Petersonetal.,JMedChem2009,52,5721-5731；Petersonetal.,CancerRes2010,70,7232-41)。酰肼1{7-27}是根據(jù)方案1合成的。取代的芐基鹵化物4{7-27}首先與哌嗪反應(yīng)形成取代的芐基哌嗪5{7-27}。采用氯乙酸乙酯對哌嗪環(huán)進(jìn)行第二次烷基化得到二取代的哌嗪6{7-27}，然后通過與肼的反應(yīng)將酯轉(zhuǎn)化為酰肼1{7-27}。方案1：酰肼1{7-27}的合成。在方案2中詳細(xì)地描述了指向酰肼1{28-31}的合成路線。酰肼1{28}的合成通過采用4-乙烯基芐氯(7)對哌嗪進(jìn)行烷基化形成單取代哌嗪8開始(方案2，反應(yīng)式1)。采用氯乙酸乙酯的第二次烷基化形成酯9，與肼的反應(yīng)形成酰肼并將烯烴還原，得到酰肼1{28}。采用肼對烯烴進(jìn)行的還原通常涉及氧化劑的添加(Miller,C.E.,HydrogenationwithDiimide.JChemEduc1965,42,254)，但大氣氧的存在足以實現(xiàn)該轉(zhuǎn)化。方案2：酰肼1{28-31}的合成。酰肼1{29}的合成(方案2，反應(yīng)式2)由2-(哌嗪-1-基)乙酸乙酯與芐基溴4{29}反應(yīng)形成中間體6{29}開始。然后6{29}與肼反應(yīng)形成酰肼1{29}。酰肼1{30}(方案2，反應(yīng)式3)是如下合成的：由1-苯基哌嗪(5{30})與氯乙酸乙酯反應(yīng)得到二取代的哌嗪6{30}開始，與肼反應(yīng)形成酰肼1{30}。酰肼1{31}是通過首先將4-甲基二苯甲酮(11)保護(hù)為亞乙基縮醛(12)而合成的，如方案2、反應(yīng)式4所示。將該化合物在自由基條件下溴化得到芐基溴13。與單取代的哌嗪10反應(yīng)得到中間體14，與肼反應(yīng)得到酰肼15。采用含水酸對縮醛進(jìn)行脫保護(hù)得到酰肼1{31}。源自對～30種化合物的合成和評估的PAC-1的構(gòu)效關(guān)系證實了鄰羥基基團(tuán)的必要性，因此選擇27種水楊醛構(gòu)件塊用于庫構(gòu)建。醛2{1-23}是通過商業(yè)來源獲得的，且之前已經(jīng)報道了醛2{24-26}的合成(Petersonetal.,JMedChem2009,52,5721-5731；Petersonetal.,CancerRes2010,70,7232-41；Changetal.,DaltonTrans2004,1731-8)。醛2{27}是經(jīng)由銅催化下的醛2{26}與芐基疊氮化物的環(huán)加成而合成的，如方案3所示。方案3：醛2{27}的合成。使用BüchiSyncore平行合成儀，使各酰肼與各醛縮合，有超過80個反應(yīng)同時進(jìn)行。允許各醛(5-15mg)與過量的酰肼(1.7當(dāng)量)反應(yīng)，并使用質(zhì)譜法監(jiān)測反應(yīng)混合物中醛的消失。當(dāng)醛已反應(yīng)完全后，加入聚苯乙烯結(jié)合的苯甲醛作為清除劑樹脂與過量的酰肼反應(yīng)并將其除去。當(dāng)質(zhì)譜法顯示沒有酰肼殘留時，將熔珠濾出，并將溶液在高真空下干燥。通過HPLC/MS評價837種化合物中的每一種。各化合物的純度為約74-100％，平均純度為91％。PAC-1組合庫的評估。手上已有837種PAC-1類似物，評估了化合物在細(xì)胞培養(yǎng)物中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力。使U-937人淋巴瘤細(xì)胞暴露于濃度為20μM的所述化合物24小時。在這些條件下，PAC-1和S-PAC-1兩者均顯示出對該細(xì)胞系的中等功效(～50％細(xì)胞死亡)。凋亡性細(xì)胞死亡是通過流式細(xì)胞儀、使用膜聯(lián)蛋白V-FITC/碘化丙啶染色而評價的。通過該篩選過程，鑒定了六種化合物并證實它們在這些條件下誘導(dǎo)>80％的細(xì)胞死亡。表A。六種庫化合物在24和72小時兩種實驗中誘導(dǎo)U-937細(xì)胞(人淋巴細(xì)胞)的有效的細(xì)胞死亡，其中使用磺基羅丹明B(sulforhodamineB)試驗對生物量進(jìn)行定量。通過命中化合物的細(xì)胞死亡誘導(dǎo)以及鋅介導(dǎo)的半胱天冬酶原-3抑制的解除。在再合成命中物(3{2,7}、3{4,7}、3{18,7}、3{20,24}、3{25,7}和3{28,7})之后，在進(jìn)一步的生物學(xué)試驗中評估化合物的分析純樣品。這些結(jié)構(gòu)和生物學(xué)結(jié)果在上面的表A中示出。評估了化合物在一定濃度范圍在U-937細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的能力以及其體外激活半胱天冬酶原-3的能力。發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞培養(yǎng)物中，這些命中物中的全部六種在72-小時處理中比PAC-1和S-PAC-1更有效2-4倍。在第二實驗中，采用膜聯(lián)蛋白V-FITC/碘化丙啶對U-937細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析，使所述細(xì)胞暴露于單一濃度(7.5μM)的化合物中24小時(表A)。在24小時內(nèi)，大多數(shù)經(jīng)化合物處理的細(xì)胞正在經(jīng)歷細(xì)胞凋亡(在直方圖右下象限中的細(xì)胞——膜聯(lián)蛋白V陽性，碘化丙啶陰性)或處于凋亡后期/壞死階段(右上象限——膜聯(lián)蛋白V陽性，碘化丙啶陽性)。發(fā)現(xiàn)所述新的類似物在這些24小時條件下比PAC-1更有效。然后評估了這六種命中物體外解除鋅介導(dǎo)的半胱天冬酶原-3抑制的能力(表A)。在該實驗中，將半胱天冬酶原-3和ZnSO4一起培育，在該條件下半胱天冬酶原-3沒有酶活性。所有化合物在這些條件下均能增強(qiáng)半胱天冬酶原-3的酶活性(如通過比色的半胱天冬酶-3底物Ac-DEVD-pNA的斷裂而測定的，所述底物是按照之前報道的方法合成的(Petersonetal.,NatProtoc2010,5,294-302))，且這六個命中化合物中的五個在該測定中顯示出比PAC-1更好的活性。這些數(shù)據(jù)表明所述化合物通過對抑制性鋅的螯合作用增強(qiáng)半胱天冬酶原-3的體外活性，并暗示在細(xì)胞中所述化合物螯合來自不穩(wěn)定池的鋅，使半胱天冬酶原-3被處理為活性的半胱天冬酶-3，導(dǎo)致凋亡性細(xì)胞死亡。直接調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡蛋白是一種實用的抗癌策略。螯合細(xì)胞內(nèi)的不穩(wěn)定鋅并在癌細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的PAC-1及其衍生物S-PAC-1在多種臨床前的抗腫瘤模型中是有效的。然而，更快速且更有效地誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的衍生物作為療法甚至將更有吸引力。使用平行合成法并根據(jù)已知的SAR指導(dǎo)，我們構(gòu)建了837種PAC-1類似物并評估了它們誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的性質(zhì)。表A所示的六種化合物從這種努力中顯現(xiàn)出來。在24-小時和72-小時試驗中，這些化合物在誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡方面比PAC-1更有效二至四倍。鑒于命中化合物相對于PAC-1的普遍的疏水性，細(xì)胞死亡的增強(qiáng)的潛能和增強(qiáng)的比率可能受增強(qiáng)的細(xì)胞滲透性的驅(qū)動。當(dāng)化合物在體內(nèi)前進(jìn)時，這些特點很可能是有利的。此外，在檢查交替的性質(zhì)(如用于體內(nèi)研究的穿過血-腦屏障的傾向、改善的代謝穩(wěn)定性、改善的溶解性/劑型等)時，該庫中的其他成員將很可能作為有活力的體內(nèi)候選物而顯現(xiàn)。因此，該837種化合物的庫將是一個從中開發(fā)出下一代激活半胱天冬酶原-3的化合物的豐富來源。其他化合物和分析。對大約20,000種化合物的高通量篩選鑒定了PAC-1(1，方案A1)為體外增強(qiáng)半胱天冬酶原-3的斷裂的化合物。該化合物在廣泛的癌細(xì)胞系內(nèi)在培養(yǎng)物中誘導(dǎo)凋亡性細(xì)胞死亡并在多種小鼠腫瘤模型中顯示出抗癌功效。1進(jìn)一步的構(gòu)效關(guān)系(SAR)研究鑒定了鄰羥基N-?；隇殛P(guān)鍵的藥效團(tuán)。2-3若干含有該基序的PAC-1衍生物在體外和在培養(yǎng)物中具有可比較的活性，但具有改性的核的衍生物則失去活性。3已知鄰羥基N-?；牝辖饘?，4還已知許多金屬抑制半胱天冬酶原和半胱天冬酶。2,5-7特別地，來自不穩(wěn)定鋅池的鋅(其是松散地結(jié)合的并且在這些蛋白質(zhì)的活性中不起必需作用)已顯示出與半胱天冬酶原-3共定位并抑制其酶活性。PAC-1的作用機(jī)理可能涉及來自不穩(wěn)定池的鋅的螯合作用，解除鋅介導(dǎo)的半胱天冬酶原-3抑制并使該酶將自身加工為活性的形式。2-3方案A1.PAC-1(1)和S-PAC-1(2)的結(jié)構(gòu)。PAC-1的藥物代謝動力學(xué)研究顯示可達(dá)到大約10μM的血清濃度并具有最小的副作用。8含氨磺酰的PAC-1衍生物——稱為S-PAC-1(2，方案A1)——可在350mg/kg或更高的劑量下安全地給藥，得到3.5mM的血漿濃度峰值。9與PAC-1相比，這種改善的安全特性在很大程度上歸因于其穿過血腦屏障(BBB)的能力降低。10令人鼓舞地，S-PAC-1在減少或穩(wěn)定腫瘤生長方面對患有自發(fā)形成的淋巴瘤的六只犬科患者中的四只是有效的，且該化合物在所有六只犬中的耐受性良好。9該結(jié)果證明半胱天冬酶原激活作為安全且有效的抗癌策略的潛力。結(jié)果和討論?；衔锖铣伞Ｏ惹暗腜AC-1及其他衍生物的合成包括酰肼與醛在晚期階段的縮合以形成關(guān)鍵的鄰羥基N-?；?。1,3,9,11該反應(yīng)對于從比較小數(shù)量的起始原料產(chǎn)生大數(shù)量的衍生物而言是有用的。11在該工作中，PAC-1類似物1-45是通過九種酰肼(46a-i)與五種醛(47a-e)的縮合而合成的，如方案A2所示。方案A2。用于構(gòu)建庫的構(gòu)件塊。酰肼是根據(jù)方案A3a-c合成的。該合成從哌嗪(48)與氯乙酸乙酯(49)的烷基化形成單取代的哌嗪50開始。然后化合物50與取代的芐基或苯甲酰基鹵化物反應(yīng)以高收率得到二取代的哌嗪51a-i。然后酯與肼反應(yīng)得到酰肼46a-i。方案A3。PAC-1類似物的合成。(a)酰肼的合成(46a-i)。(b)醛的合成(47a-e)。(c)酰肼與醛的縮合形成PAC-1類似物(1-45)。醛的合成如方案A3b所示。采用烯丙基溴將水楊醛(52)和5-氟水楊醛(47c)兩者烷基化以高收率得到烯丙氧基苯甲醛53a-b。將這些化合物在200℃加熱使這些底物經(jīng)歷克萊森重排以大約50％的收率得到醛47a和47d。最后，采用二苯基硫醚作為催化劑毒物12進(jìn)行化學(xué)選擇性氫化以高收率得到醛47b和47e。如方案A3c所示，使各酰肼(46a-i)與各醛(47a-e)在催化量的HCl存在下縮合得到PAC-1衍生物1-45，它們的結(jié)構(gòu)在表1中給出(還參見圖3和4)。表1.PAC-1類似物的結(jié)構(gòu)、實驗數(shù)據(jù)以及預(yù)測的logBB值。PAC-1類似物的評估。合成完成之后，評估了化合物的生物學(xué)活性。首先，測定了化合物在培養(yǎng)物中對抗U-937細(xì)胞的72-小時IC50值(表1)。令人鼓舞地，發(fā)現(xiàn)這些化合物中的每一種在這些條件下均誘導(dǎo)劑量依賴性的細(xì)胞死亡，且大多數(shù)化合物大致與PAC-1和S-PAC-1一樣有效。接下來，在大鼠肝微粒體中評估了化合物的代謝穩(wěn)定性。將化合物在10μM下評估3小時，并通過LC/MS觀察代謝產(chǎn)物。該試驗的結(jié)果在表1中示出。含苯甲酰基取代基的化合物比含芐基基團(tuán)的類似化合物明顯更穩(wěn)定。出乎意料地，含丙基的化合物比含烯丙基的化合物較不穩(wěn)定，盡管采用丙基化合物未觀察到二羥基化的代謝產(chǎn)物。此外，S-PAC-1在肝微粒體中相當(dāng)穩(wěn)定，盡管該化合物的體內(nèi)半衰期短，這暗示其他清除機(jī)理在S-PAC-1從體內(nèi)的消除中起著更大的作用。最后，對各化合物計算了預(yù)測的logBB值。將該算法(包括極性表面積和ClogP)用于預(yù)測小分子穿過血腦屏障(BBB)的滲透性。13具有更正向的logBB值的化合物將在腦中具有較高的濃度，而具有較負(fù)向的logBB值的化合物將在血液中具有較高的濃度。所述值在表1中示出。正如所預(yù)期的，含有更多疏水取代基的化合物被預(yù)測為比含有更多極性取代基的化合物穿過BBB的程度更高。體內(nèi)毒性的評價。帶著鑒定具有改善的耐受性的化合物這樣的目標(biāo)，在小鼠中評估了45種PAC-1類似物中的32種。該毒性研究結(jié)果在表1中示出。毒性水平被認(rèn)定為0(未觀測到不良反應(yīng))至3(嚴(yán)重毒性，幾乎致命)的等級。許多化合物對小鼠而言是致死的，因為小鼠或者在處理的24小時內(nèi)死亡或者大于處理后72小時時死亡；這些結(jié)果也是顯著的。引文。1.Putt,K.S.；Chen,G.W.；Pearson,J.M.；Sandhorst,J.S.；Hoagland,M.S.；Kwon,J.T.；Hwang,S.K.；Jin,H.；Churchwell,M.I.；Cho,M.H.；Doerge,D.R.；Helferich,W.G.；Hergenrother,P.J.,Small-moleculeactivationofprocaspase-3tocaspase-3asapersonalizedanticancerstrategy.Nat.Chem.Biol.2006,2,543-550.2.Peterson,Q.P.；Goode,D.R.；West,D.C.；Ramsey,K.N.；Lee,J.J.Y.；Hergenrother,P.J.,PAC-1ActivatesProcaspase-3inVitrothroughReliefofZinc-MediatedInhibition.J.Mol.Biol.2009,388,144-158.3.Peterson,Q.P.；Hsu,D.C.；Goode,D.R.；Novotny,C.J.；Totten,R.K.；Hergenrother,P.J.,Procaspase-3ActivationasanAnti-CancerStrategy:Structure-ActivityRelationshipofProcaspase-ActivatingCompound1(PAC-1)andItsCellularCo-LocalizationwithCaspase-3.J.Med.Chem.2009,52,5721-5731.4.Charkoudian,L.K.；Pham,D.M.；Franz,K.J.,Apro-chelatortriggeredbyhydrogenperoxideinhibitsiron-promotedhydroxylradicalformation.J.Am.Chem.Soc.2006,128,12424-12425.5.Aiuchi,T.；Mihara,S.；Nakaya,M.；Masuda,Y.；Nakajo,S.；Nakaya,K.,Zincionspreventprocessingofcaspase-3duringapoptosisinducedbygeranylgeraniolinHL-60cells.J.Biochem.1998,124,300-303.6.Chai,F.；Truong-Tran,A.Q.；Ho,L.H.；Zalewski,P.D.,Regulationofcaspaseactivationandapoptosisbycellularzincfluxesandzincdeprivation:Areview.Immunol.CellBiol.1999,77,272-278.7.Perry,D.K.；Smyth,M.J.；Stennicke,H.R.；Salvesen,G.S.；Duriez,P.；Poirier,G.G.；Hannun,Y.A.,Zincisapotentinhibitoroftheapoptoticprotease,caspase-3.Anoveltargetforzincintheinhibitionofapoptosis.J.Biol.Chem.1997,272,18530-18533.8.Lucas,P.W.；Schmit,J.M.；Peterson,Q.P.；West,D.C.；Hsu,D.C.；Novotny,C.J.；Dirikolu,L.；Churchwell,M.I.；Doerge,D.R.；Garrett,L.D.；Hergenrother,P.J.；Fan,T.M.,PharmacokineticsandderivationofananticancerdosingregimenforPAC-1,apreferentialsmallmoleculeactivatorofprocaspase-3,inhealthydogs.Invest.NewDrugs2011,29,901-911.9.Peterson,Q.P.；Hsu,D.C.；Novotny,C.J.；West,D.C.；Kim,D.；Schmit,J.M.；Dirikolu,L.；Hergenrother,P.J.；Fan,T.M.,Discoveryandcaninepreclinicalassessmentofanontoxicprocaspase-3-activatingcompound.CancerRes.2010,70,7232-7241.10.West,D.C.；Qin,Y.；Peterson,Q.P.；Thomas,D.L.；Palchaudhuri,R.；Morrison,K.C.；Lucas,P.W.；Palmer,A.E.；Fan,T.M.；Hergenrother,P.J.,Differentialeffectsofprocaspase-3activatingcompoundsintheinductionofcancercelldeath.Mol.Pharmaceutics2012,9,1425-1434.11.Hsu,D.C.；Roth,H.S.；West,D.C.；Botham,R.C.；Novotny,C.J.；Schmid,S.C.；Hergenrother,P.J.,ParallelSynthesisandBiologicalEvaluationof837AnaloguesofProcaspase-ActivatingCompound1(PAC-1).ACSComb.Sci.2012,14,44-50.12.Mori,A.；Miyakawa,Y.；Ohashi,E.；Haga,T.；Maegawa,T.；Sajiki,H.,Pd/C-catalyzedchemoselectivehydrogenationinthepresenceofdiphenylsulfide.Org.Lett.2006,8,3279-3281.13.Clark,D.E.,Rapidcalculationofpolarmolecularsurfaceareaanditsapplicationtothepredictionoftransportphenomena.2.Predictionofblood-brainbarrierpenetration.J.Pharm.Sci.1999,88,815-821.定義如本文中所使用的，所引用的術(shù)語具有如下含義。本說明書所使用的所有其他術(shù)語和短語均具有如本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解的其普通含義。所述普通含義可通過參考技術(shù)詞典獲得，如Hawley’sCondensedChemicalDictionary第14版，R.J.Lewis,JohnWiley&Sons著，紐約，N.Y.，2001。在本說明書中，提及“一個實施方案”或“一實施方案”等，表示所描述的實施方案可包含特定的方面、特征、結(jié)構(gòu)、部分或特性，但不是每個實施方案必然包含該方面、特征、結(jié)構(gòu)、部分或特性。此外，所述短語可以，但不必然，指在本說明書其他部分中所提及的相同的實施方案。另外，當(dāng)結(jié)合實施方案來描述特定的方面、特征、結(jié)構(gòu)、部分或特性時，無論是否明確地描述，使所述方面、特征、結(jié)構(gòu)、部分或特性影響其他實施方案或與其他實施方案聯(lián)合，這均在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識范圍內(nèi)。單數(shù)形式“一”、“一個”和“該”均包括復(fù)數(shù)指代，除非上下文另有清晰的指示。因此，例如，提及“一個化合物”包括多個所述化合物，因此一個化合物X包括多個化合物X。還要注意，可將權(quán)利要求書撰寫為排除任意任選元素。因此，該表述旨在作為應(yīng)用與權(quán)利要求元素的敘述相關(guān)的排他性術(shù)語(如“單獨地”、“僅”等)或者應(yīng)用“否定”限定的先前基礎(chǔ)。術(shù)語“和/或”意指所述項目中的任一項、所述項目的任意結(jié)合或與該術(shù)語相關(guān)的所述項目的全部。短語“一或多個”很容易被本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解，特別是在讀到其用法的上下文時。例如，苯環(huán)上的一或多個取代基是指一至五個或一至四個，例如如果該苯環(huán)是二取代的。術(shù)語“約”可指指定值的±5％、±10％、±20％或±25％的變異。例如，“約50％”在一些實施方案中可支撐45至55％的變異。對于整數(shù)范圍而言，術(shù)語“約”可包括一或兩個大于和/或小于該范圍各端所列舉整數(shù)的整數(shù)。除非本文另有指示，術(shù)語“約”旨在包括近似于所列舉范圍的數(shù)值(如重量百分比)，所述近似的數(shù)值在單個成分、組合物或?qū)嵤┓桨钢械墓δ苄允堑刃У?。技術(shù)人員將理解，所有的數(shù)字，包括那些表示組分的量、性質(zhì)(如分子量)、反應(yīng)條件等的數(shù)字，均為近似值并應(yīng)理解為在所有情況下均任選地被術(shù)語“約”所修飾。這些數(shù)值可依據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員利用本說明書的教導(dǎo)所尋求獲得的期望性質(zhì)而變化。還應(yīng)理解所述數(shù)值固有地包含必然由在它們各自的測試測量中所發(fā)現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差引起的變異性。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，為了任何的和所有的目的，特別是在提供書面說明書方面，本文所列舉的所有范圍還涵蓋任何的和可能的亞范圍以及其亞范圍的組合，以及構(gòu)成該范圍的各個值，特別是整數(shù)值。所列舉的范圍(例如重量百分比或碳基團(tuán))包括該范圍內(nèi)的各具體值、整數(shù)、小數(shù)或本數(shù)(identity)。任意何所列出的范圍均可被容易地認(rèn)定為充分地描述的且使得同樣的范圍被分割為至少二等分、三等分、四等分、五等分或十等分。作為非限制性實例，本文所討論的各范圍均可被容易地分割為下三分之一、中三分之一或上三分之一等。本領(lǐng)域技術(shù)人員還將理解，所有用語如“最高達(dá)”、“至少”、“大于”、“小于”、“多于”、“或更多”等均包含所列舉的數(shù)字且所述術(shù)語是指隨后可被如上述被分割為亞范圍的范圍。以同樣的方式，本文所列舉的所有比值還包括所有落入該較寬比值內(nèi)的亞比值。因此，針對原子團(tuán)、取代基和范圍所列舉的具體值僅用于說明；它們不排除針對原子團(tuán)或取代基所定義的范圍內(nèi)的其他定義值或其他值。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應(yīng)將容易地認(rèn)識到當(dāng)將成員被以常見方式集合到一起時，如在馬庫什(Markush)組中，該發(fā)明不僅涵蓋作為整體所列出的整個組，還涵蓋該組的各單獨的成員以及該主組的所有可能的亞組。此外，為各種目的，本發(fā)明不僅涵蓋主組，還涵蓋缺少一或多個組成員的主組。因此，本發(fā)明設(shè)想明確排除所列出的組中的任何一或多個成員。因此，條件可適用于任何所公開的類別或?qū)嵤┓桨?，借此可從所述類別或?qū)嵤┓桨钢信懦魏我换蚨鄠€所列舉的元素、種類或?qū)嵤┓桨?，例如，如同在明確的否定限制中所使用的。術(shù)語“接觸”是指接觸的行為、使接觸或使貼近或緊密地接近，包括在細(xì)胞或分子水平上，例如在溶液中、在反應(yīng)混合物中、體外或體內(nèi)，引起生理反應(yīng)、化學(xué)反應(yīng)或物理變化?！坝行Я俊笔侵赣行е委熂膊?、紊亂和/或病癥的量，或有效引起所列舉的效果如激活或抑制的量。例如，有效量可為有效減少所治療的病癥或癥狀的進(jìn)展或嚴(yán)重程度的量。治療學(xué)上有效量的確定完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。術(shù)語“有效量”旨在包括本文所描述的化合物的量、或本文所描述的化合物的組合的量，例如，所述量在宿主中對治療或預(yù)防疾病或紊亂，或?qū)χ委熂膊』蛭蓙y的癥狀而言是有效的。因此，“有效量”通常意指提供期望的效果的量。在一個實施方案中，有效量是指本文所描述的活性劑單獨或與藥物載體結(jié)合，在單劑量或多劑量給予細(xì)胞或受試者(例如患者)時，在抑制生長或增殖、誘導(dǎo)殺傷或防止過度增殖的細(xì)胞的生長方面是有效的量。所述生長抑制或殺傷可作為受試者(例如患者)的存活延長超過在缺乏所述治療時預(yù)期的存活時間或受試者相對于缺乏所述治療時在預(yù)后方面的任何改善而反映出來。術(shù)語“治療(treating)”、“治療(treat)”和“治療(treatment)”包括(i)防止疾病、病理學(xué)或醫(yī)學(xué)病癥的發(fā)生(例如預(yù)防)；(ii)抑制疾病、病理學(xué)或醫(yī)學(xué)病癥或阻止其發(fā)展；(iii)緩解疾病、病理學(xué)或醫(yī)學(xué)病癥；和/或(iv)減少與疾病、病理學(xué)或醫(yī)學(xué)病癥相關(guān)的癥狀。因此，術(shù)語“治療(treat)”、“治療(treatment)”和“治療(treating)”可延伸至預(yù)防并可包括防止(prevent)、防止(prevention)、防止(preventing)、降低、停止或逆轉(zhuǎn)所治療的病癥或癥狀的進(jìn)展或嚴(yán)重程度。因此，適當(dāng)時，術(shù)語“治療”可包括醫(yī)學(xué)、治療性和/或預(yù)防性給藥。在一些實施例中，術(shù)語“治療(treatment)”、“治療(treat)”和“治療的(treated)”還可指(i)防止腫瘤的生長或腫瘤的再生長(預(yù)防)，(ii)減少或消除關(guān)注的癥狀或疾病(治療)(iii)腫瘤的消除或消滅(治愈)。術(shù)語“抑制(inhibit)”、“抑制(inhibiting)”和“抑制(inhibition)”是指延緩、停止或逆轉(zhuǎn)疾病、感染、病癥或細(xì)胞組的生長或進(jìn)展。例如，與在缺乏所述治療或接觸時出現(xiàn)的生長或進(jìn)展相比，該抑制可大于約20％、40％、60％、80％、90％、95％或99％。此外，術(shù)語“誘導(dǎo)”、“抑制”、“增強(qiáng)”、“提高”、“增加”“降低”等表示兩種狀態(tài)之間的定量差異，并且可指兩種狀態(tài)之間的至少有統(tǒng)計上顯著的差異。例如，“有效抑制過度增殖的細(xì)胞生長的量”意指該細(xì)胞的生長率，在一些實施方案中，可與未經(jīng)處理的細(xì)胞至少在統(tǒng)計上顯著地不同。所述術(shù)語在本文中可適用于例如增殖率。對過度增殖的細(xì)胞(例如贅生性細(xì)胞)的“生長或增殖的抑制”，該短語是指延緩、中斷、阻止或停止其生長和轉(zhuǎn)移，且不必然表示完全消除瘤生長。術(shù)語“癌細(xì)胞”涵蓋如本領(lǐng)域廣泛理解的定義。在一個實施方案中，該術(shù)語是指在人或動物中可促成癌癥的臨床病癥的異常調(diào)控的細(xì)胞。在一些實施方案中，該術(shù)語可指人或動物體內(nèi)的或源于人或動物體的培養(yǎng)的細(xì)胞系或細(xì)胞。癌細(xì)胞可為如本領(lǐng)域所理解的各種各樣的分化的細(xì)胞、組織或器官類型，且也如本文所描述的。因此，術(shù)語“癌癥”通常是指由異常細(xì)胞的不受控生長引起的一組超過100種疾病中的任一種。癌癥可為實體瘤和淋巴瘤的形式，也可為非實體癌如白血病的形式。與正常細(xì)胞增殖直至成熟且然后只作為必需品替換受損的細(xì)胞不同，癌細(xì)胞可不斷地生長或分裂、排擠臨近細(xì)胞并最終擴(kuò)散至身體的其他部分。本發(fā)明提供用于治療癌癥或癌性病癥的方法。術(shù)語“癌性病癥”涉及細(xì)胞處于異常狀態(tài)的任何病癥或通過快速的增殖或瘤形成來表征的病癥。癌性病癥在本質(zhì)上可為惡性的或非惡性的(例如癌前病癥)。為進(jìn)一步描述“癌性病癥”，可使用術(shù)語“過度增殖性”、“增生的”、“增生”、“惡性的”、“瘤的”和“瘤形成”。這些術(shù)語可互換使用且意圖包括所有類型的過度增殖性生長、增生的生長、癌性生長或致癌過程、轉(zhuǎn)移性組織或惡性轉(zhuǎn)化的細(xì)胞、組織或器官，而不考慮組織病理學(xué)類型、侵襲力階段或癌性確認(rèn)(例如惡性或非惡性)。術(shù)語“瘤形成”是指導(dǎo)致對正常的生長控制喪失反應(yīng)性的新細(xì)胞生長，例如，贅生性細(xì)胞生長?！霸錾笔侵附?jīng)歷異常高的生長率的細(xì)胞。然而，如它們的上下文將顯示，在一般地提及經(jīng)歷異常的細(xì)胞生長率的細(xì)胞時，這些術(shù)語可互換使用。“瘤形成”和“增生”包括腫瘤，所述腫瘤可為良性的、惡變前的、原位癌、惡性的、實體的或非實體的。已發(fā)現(xiàn)本文所描述的化合物對治療腦的癌癥特別有效。腦的癌癥包括，但不限于，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，所述惡性膠質(zhì)瘤包括多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)。被癌性細(xì)胞侵襲的組織可在腦本身(例如顱骨或中央椎管)中或在淋巴組織中、在血管中、在顱神經(jīng)中、在腦外膜(腦脊膜)中、頭骨、垂體腺或松果腺中?？芍委煹哪X癌的具體形式包括星形細(xì)胞瘤、軟骨瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、CNS(中樞神經(jīng)系統(tǒng))淋巴瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、神經(jīng)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)節(jié)瘤(也稱為神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤(包括星形細(xì)胞瘤、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤和室管膜瘤)、血管母細(xì)胞瘤(也稱為血管瘤)、原始神經(jīng)外胚層腫瘤(PNET)如成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦膜瘤和前庭神經(jīng)鞘瘤(以前稱為聽神經(jīng)瘤/神經(jīng)鞘瘤)。本文所描述的化合物還可用于治療從源自身體其他器官的癌侵入顱內(nèi)球體的轉(zhuǎn)移性腫瘤。這些病癥通常稱為繼發(fā)性腦瘤?？刹捎帽疚乃枋龅幕衔镏委煹睦^發(fā)性腦瘤包括源自肺癌、乳腺癌、惡性黑素瘤、腎癌、結(jié)腸癌和其他癌的腦轉(zhuǎn)移性腫瘤。在本發(fā)明范圍內(nèi)的癌性病癥的其他實例包括，但不限于，成神經(jīng)細(xì)胞瘤和成骨性癌(例如骨癌或骨中組織的瘤形成性生長)?？刹捎帽疚乃枋龅幕衔镏委煹膼盒栽l(fā)性骨腫瘤的實例包括骨肉瘤、軟骨肉瘤、Ewing氏肉瘤、纖維肉瘤等，以及繼發(fā)性骨腫瘤如已從其他器官——包括乳腺、肺和前列腺的癌——擴(kuò)散的轉(zhuǎn)移性病灶。術(shù)語烷基、環(huán)烷基、烯基、烯基、芳基、氨基基團(tuán)、烷氧基、鹵、鹵代烷基、雜芳基、雜環(huán)和酯是本領(lǐng)域公知的并具有它們在本領(lǐng)域公認(rèn)的定義，如在美國專利公開第2012/0040995號(Hergenrother等)中所描述的。例如，術(shù)語“烷基”是指單價的有支鏈或無支鏈的飽和烴鏈，優(yōu)選具有1至22個碳原子，并且指具有一或多個含3至22個碳原子的環(huán)的環(huán)烷基基團(tuán)。短鏈烷基基團(tuán)為具有1至6個碳原子的烷基基團(tuán)，包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基基團(tuán)，包括其所有的異構(gòu)體。長鏈烷基基團(tuán)為具有8-22個碳原子且優(yōu)選具有12-22個碳原子以及具有12-20和具有16-18個碳原子的烷基基團(tuán)。因此，術(shù)語“烷基”可指單價的有支鏈或無支鏈的飽和烴鏈，優(yōu)選具有1至22個碳原子。短鏈烷基基團(tuán)為具有1至12個碳原子的烷基基團(tuán)，包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基基團(tuán)，包括其所有的異構(gòu)體。長鏈烷基基團(tuán)為具有12-22個碳原子的烷基基團(tuán)。該基團(tuán)可為端基或橋連基。烷基、雜烷基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基團(tuán)，以及其環(huán)狀的和/或不飽和的變體，可為式Ⅰ的R基團(tuán)，且各基團(tuán)可被任選取代。因此，在多個實施方案中，以下取代基中的任何一個或多個可為本文所描述的基團(tuán)或分子式的R基團(tuán)(例如，R1、R2、R2、R10、R20、R30等)。術(shù)語“取代的”表示在使用“取代的”的表述中所指示的基團(tuán)上的一或多個氫原子被“取代基”替換。由‘一或多個’所指代的數(shù)字可從取代基所在的部分明顯地看出。例如，一或多個可指，例如1、2、3、4、5或6個；在一些實施方案中指1、2或3個；以及在其他實施方案中指1或2個。所述取代基可為從所指示的基團(tuán)中選擇的一個，或可為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的合適的基團(tuán)，條件是不超過該取代的原子的正常原子價，且條件是該取代得到穩(wěn)定的化合物。合適的取代基基團(tuán)包括例如烷基、烯基、炔基、烷氧基、鹵、鹵代烷基、羥基、羥基烷基、芳基、芳?；?、(芳基)烷基(例如，芐基或苯基乙基)、雜芳基、雜環(huán)、環(huán)烷基、烷?；⑼檠趸驶?、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、二氟甲基、酰氨基、硝基、羧基、羧基烷基、酮基、硫代、烷硫基、烷基亞磺?；⑼榛酋；?、芳基亞磺?；?、芳基磺?；㈦s芳基亞磺?；?、雜芳基磺?；㈦s環(huán)亞磺?；㈦s環(huán)磺?；?、磷酸酯、硫酸酯、羥胺、羥基(烷基)胺以及氰基。此外，合適的取代基基團(tuán)可為例如-X、-R、-O-、-OR、-SR、-S-、-NR2、-NR3、＝NR、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N＝C＝O、-NCS、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-NC(＝O)R、-C(＝O)R、-C(＝O)NRR、-S(＝O)2O-、-S(＝O)2OH、-S(＝O)2R、-OS(＝O)2OR、-S(＝O)2NR、-S(＝O)R、-OP(＝O)O2RR、-P(＝O)O2RR、-P(＝O)(O-)2、-P(＝O)(OH)2、-C(＝O)R、-C(＝O)X、-C(S)R、-C(O)OR、-C(O)O-、-C(S)OR、-C(O)SR、-C(S)SR、-C(O)NRR、-C(S)NRR或-C(NR)NRR，其中各X獨立地為鹵素(“鹵”)：F、Cl、Br或I；且各R獨立地為H、烷基、芳基、(芳基)烷基(例如芐基)、雜芳基、(雜芳基)烷基、雜環(huán)、雜環(huán)(烷基)或保護(hù)基團(tuán)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易地理解，當(dāng)取代基為酮基(＝O)或硫代(＝S)等時，則被取代原子上的兩個氫原子被替換。在一些實施方案中，可從適合于被取代基基團(tuán)上的取代基的可能值的組中排除一或多個上述取代基，如本文所描述的基團(tuán)或分子式中的R基團(tuán)(例如，R1、R2、R2、R10、R20、R30等)。術(shù)語“環(huán)烷基”是指具有單個環(huán)狀環(huán)或多個稠合環(huán)的3至22個碳原子的環(huán)狀烷基基團(tuán)。環(huán)烷基基團(tuán)包括具有3-8元環(huán)的環(huán)烷基基團(tuán)和具有5和6元環(huán)的環(huán)烷基基團(tuán)。環(huán)烷基基團(tuán)包括，例如，單環(huán)結(jié)構(gòu)如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)辛基等，或多環(huán)結(jié)構(gòu)如金剛烷基等。術(shù)語“烯基”是指有支鏈或無支鏈的不飽和烴基團(tuán)的單價基團(tuán)，優(yōu)選具有2至22個碳原子，以及是指具有一或多個含3至22個碳原子的環(huán)——其中至少一個環(huán)含雙鍵——的環(huán)烯基基團(tuán)。烯基基團(tuán)可包含一或多個雙鍵(C＝C)，所述雙鍵可為共軛的。優(yōu)選的烯基基團(tuán)為具有1或2個雙鍵的烯基基團(tuán)。短鏈烯基基團(tuán)為具有2至6個碳原子的烯基基團(tuán)，包括乙烯(乙烯基)丙烯、丁烯、戊烯和己烯基團(tuán)，包括其所有的異構(gòu)體。長鏈烯基基團(tuán)為具有8-22個碳原子且優(yōu)選具有12-22個碳原子以及具有12-20個碳原子和具有16-18個碳原子的烯基基團(tuán)。術(shù)語“環(huán)烯基”是指具有單個環(huán)狀環(huán)或多個稠合環(huán)——其中至少一個環(huán)含雙鍵(C＝C)——的3至22個碳原子的環(huán)狀烯基基團(tuán)。環(huán)烯基基團(tuán)包括，例如，單環(huán)結(jié)構(gòu)如環(huán)丙烯基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)辛烯基、環(huán)辛二烯基和環(huán)辛三烯基。術(shù)語烯丙基是指烯基基團(tuán)-CH2-CH＝CH2。術(shù)語“炔基”是指優(yōu)選具有2至22個碳原子且具有一或多個三鍵(C≡C)的不飽和烴的單價基團(tuán)。炔基基團(tuán)包括乙炔基、炔丙基等。短鏈炔基基團(tuán)為具有2至6個碳原子的炔基基團(tuán)，包括其所有的異構(gòu)體。長鏈炔基基團(tuán)為具有8-22個碳原子且優(yōu)選具有12-22個碳原子以及具有12-20個碳原子和具有16-18個碳原子的炔基基團(tuán)。術(shù)語“芳基”是指包含6至22個碳原子的不飽和芳族碳環(huán)基團(tuán)的基團(tuán)，其具有單環(huán)(例如苯基)、一或多個環(huán)(例如，聯(lián)苯基)或多個稠合(稠)環(huán)，其中至少一個環(huán)為芳族的(例如，萘基、二氫菲基、芴基或蒽基)。芳基包括苯基、萘基等。除不飽和的芳族環(huán)外，芳基基團(tuán)可包含烷基、烯基或炔基部分。術(shù)語“烷芳基”是指包含烷基部分的芳基基團(tuán)，即-亞烷基-芳基和-取代的亞烷基-芳基。所述烷芳基基團(tuán)的實例為芐基(-CH2-苯基)、苯乙基等。烷基、烯基、炔基和芳基基團(tuán)是任選取代的，如本文所描述的(該術(shù)語可包括取代的變體)，并且取決于基團(tuán)中的碳原子數(shù)和基團(tuán)的不飽和度，可包含1-8個的非氫取代基。如本文所描述的所有所述變量可為未取代的(其中任何可為氫的變量基團(tuán)為氫)或被一或多個選自下列的非氫取代基取代：鹵素(包括氟、氯、溴或碘)、C1-C3鹵代烷基、羥基(OH)、巰基(HS-)、C1-C6烷基、C1-C3烷基、C1-C6烷氧基、C1-C3烷氧基、苯基、芐基、烯基、C2-C4烯基、炔基、C2-C4炔基、-NH2、-NR’H、-NR’R”、R’CO-、R’R”NCO-、R’CO-NH-、或R’CO-NR’-，其中R’和R”為C1-C6烷基、C1-C3烷基或苯基。術(shù)語“氨基”是指基團(tuán)-NH2或基團(tuán)-NR’R”，其中各R’和R”獨立地選自氫、烷基或芳基基團(tuán)?！胞u代烷基”是指被一或多個如本文所定義的鹵基團(tuán)所取代的如本文所定義的烷基，所述鹵基團(tuán)可為相同或不同的。代表性的鹵代烷基基團(tuán)包括，例如，三氟甲基、3-氟十二烷基、12,12,12-三氟十二烷基、2-溴辛基、3-溴-6-氯庚基等。術(shù)語“雜芳基”是指2至22個碳原子的芳族基團(tuán)，其在至少一個環(huán)內(nèi)(如果有多于一個的環(huán))具有1至4個選自氧、氮和硫的雜原子。雜芳基基團(tuán)可以是任選取代的。雜芳基基團(tuán)其中包括具有5和6-元環(huán)的雜芳基基團(tuán)和環(huán)上具有一或兩個氮的雜芳基基團(tuán)、環(huán)上具有一或兩個氧的雜芳基基團(tuán)以及環(huán)上具有一或兩個硫的雜芳基基團(tuán)。術(shù)語“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”是指具有單個環(huán)或多個稠合環(huán)的飽和或不飽和的單價基團(tuán)，其具有2-22個碳原子并且在至少一個環(huán)內(nèi)具有1至6個雜原子、優(yōu)選1至4個雜原子，所述雜原子選自氮、硫、磷和/或氧。雜環(huán)的基團(tuán)可以是取代的。環(huán)優(yōu)選具有3-10個成員且更具體而言具有5或6個成員。術(shù)語“酯”是指如本領(lǐng)域所理解的化學(xué)實體且尤其可包括(RCO-)形式的基團(tuán)。本發(fā)明的化合物包括由所公開的化合物的取代而產(chǎn)生的所有新的立體化學(xué)異構(gòu)體。藥物制劑可將本文所描述的化合物用于制備治療性藥物組合物。所述化合物可以鹽或溶劑合物的形式加入到組合物中。例如，在化合物具有足夠的堿性或酸性可以形成穩(wěn)定的無毒的酸或堿的鹽的情況下，將化合物以鹽的形式給藥可能是合適的。藥學(xué)上可接受的鹽的實例為與形成生理學(xué)上可接受的陰離子的酸形成的有機(jī)酸加成鹽，例如，甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、丙二酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、α-酮戊二酸鹽和β-甘油磷酸鹽。還可形成合適的無機(jī)鹽，包括鹽酸鹽、鹵化物、硫酸鹽、硝酸鹽、碳酸氫鹽和碳酸鹽。藥學(xué)上可接受的鹽可通過使用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法獲得，例如通過使具有足夠堿性的化合物(如胺)與合適的酸反應(yīng)得到生理學(xué)上可接受的離子化合物。還可通過類似的方法制備堿金屬(例如，鈉、鉀或鋰)或堿土金屬(例如鈣)的羧酸鹽?？蓪⒈疚乃枋龅姆肿邮交衔锱渲茷樗幬锝M合物并且以多種形式給予哺乳動物宿主，如人患者。可使所述形式特別地適合于所選擇的給藥途徑，例如，口服給藥或經(jīng)由靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、局部或皮下途徑的腸胃外給藥。本文所描述的化合物可結(jié)合藥學(xué)上可接受的載體——如惰性稀釋劑或可吸收的可食載體——而全身地給藥。對于口服給藥，可將化合物封裝于硬殼或軟殼明膠膠囊中、壓制成片劑或直接摻入患者的食物中。還可將化合物與一或多種賦形劑結(jié)合并以可攝取的片劑、含片、錠劑、膠囊、酏劑、懸浮劑、糖漿劑、糯米紙囊劑(wafers)等形式使用。所述組合物和制劑通常包含至少0.1％的活性化合物。組合物和制劑的百分?jǐn)?shù)可變化且便利地為給定單位劑量形式重量的約2％至約60％?；钚曰衔镉谒鲋委熒嫌杏玫慕M合物中的量是如此，以至于可獲得有效的劑量水平。片劑、錠劑、丸劑、膠囊劑等還可包含下列中的一或多種：粘合劑如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑如磷酸二鈣；崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸等；以及潤滑劑如硬脂酸鎂。可加入甜味劑如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦；或芳香劑如薄荷、冬青油或櫻桃香精。當(dāng)單位劑量形式為膠囊時，除上述類型的材料外，其可包含液體載體，如植物油或聚乙二醇。多種其他材料可作為包衣存在或否則改變固體單位劑量形式的物理形式。例如，片劑、丸劑或膠囊可包覆明膠、蠟、蟲膠或糖等。糖漿劑或酏劑可包含活性化合物、蔗糖或果糖作為甜味劑，對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯作為防腐劑，著色劑和調(diào)味劑如櫻桃或橙香精。用于制備任何單位劑量形式的任何材料應(yīng)該是藥學(xué)上可接受的且在所使用的劑量下基本無毒。此外，可將活性化合物摻入緩慢釋放的制劑和裝置中?；钚曰衔锟赏ㄟ^輸注或注射而靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥?；钚曰衔锘蚱潲}的溶液可在任選混合有無毒表面活性劑的水中制備。分散體可在甘油、液態(tài)聚乙二醇、三醋汀或其混合物中，或在藥學(xué)上可接受的油中制備。在普通的儲存和使用條件下，制劑可包含防腐劑以防止微生物的生長。適于注射或輸注的藥物劑量形式可包括無菌水溶液、分散相或無菌粉末，所述無菌粉末包含適合臨時配制成無菌可注射的或可輸注的溶液或分散相的活性成分，任選包封于脂質(zhì)體中。最終的劑量形式在生產(chǎn)和儲存條件下應(yīng)當(dāng)是無菌的、液態(tài)的和穩(wěn)定的。液體載體或媒介物可以是溶劑或液態(tài)分散介質(zhì)，包括，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液態(tài)聚乙二醇等)、植物油、無毒甘油酯及其合適的混合物。例如，可通過形成脂質(zhì)體、通過維護(hù)分散相中所要求的顆粒大小或通過使用表面活性劑來維持適當(dāng)?shù)牧鲃有??？赏ㄟ^多種抗菌劑和抗真菌劑而實現(xiàn)防止微生物的作用，所述抗菌劑和抗真菌劑例如，對羥基苯甲酸類、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在許多情況下，優(yōu)選包含等滲劑，例如，糖、緩沖劑或氯化鈉?？勺⑸浣M合物的延長吸收可通過延遲吸收劑而實現(xiàn)，所述延遲吸收劑例如，單硬脂酸鋁和/或明膠。可通過將活性化合物以所需的量摻入含有上面列舉的多種其他成分的適當(dāng)溶劑中，根據(jù)需要，隨后進(jìn)行過濾滅菌而制備無菌可注射溶液。在用于配制無菌可注射溶液的無菌粉末的情況中，制備方法可包括真空干燥和冷凍干燥技術(shù)，得到活性成分加上存在于先前無菌濾過溶液中的任何所需附加成分的粉末。對于局部給藥，化合物可以純的形式應(yīng)用，例如當(dāng)其為液體時。然而，通常希望將活性劑作為組合物或制劑，例如，與皮膚病學(xué)上可接受的載體——其可為固體或液體——結(jié)合，而給藥至皮膚。有用的固體載體包括細(xì)碎的固體如滑石、粘土、微晶纖維素、二氧化硅、礬土等。有用的液體載體包括水、二甲基亞砜(DMSO)、醇、二醇或水-醇/二醇摻和物，其中化合物可以有效的水平溶解或分散，任選借助于無毒表面活性劑?？杉尤胼o助劑如香料和附加的抗微生物劑以優(yōu)化針對給定用途的性質(zhì)。所得液體組合物可從吸收墊中應(yīng)用、用于浸漬繃帶和其他敷料或使用泵型或氣霧劑噴霧器噴在患病區(qū)域上。還可利用增稠劑如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸鹽和酯、脂肪醇、改性纖維素或改性礦物原料與液體載體一起形成易于可涂抹的糊劑、凝膠、軟膏、皂等，用于直接敷用于使用者的皮膚。用于將活性劑遞送至皮膚的皮膚病學(xué)組合物的實例是本領(lǐng)域已知的；例如，參見美國專利第4,992,478(Geria)、4,820,508(Wortzman)、4,608,392(Jacquet等)和4,559,157(Smith等)號。所述皮膚病學(xué)組合物可與本文所描述的化合物結(jié)合使用，其中所述組合物中的組分可任選被本文所描述的化合物替換，或可將本文所描述的化合物添加至組合物中。本文所描述的化合物的有用劑量可通過比較它們在動物模型中的體外活性和體內(nèi)活性而確定。用于將小鼠和其他動物中的有效劑量外推至人類的方法是本領(lǐng)域已知的；例如，參見美國專利第4,938,949(Borch等)號。治療應(yīng)用中所需的化合物或其活性鹽或衍生物的量不僅將隨著所選擇的特定化合物或鹽而變化，還將隨著給藥途徑、待治療病癥的性質(zhì)以及患者的年齡和狀況而變化，并將最終由巡診醫(yī)生或臨床醫(yī)生決定。化合物可方便地以單位劑量形式給藥，例如，每單位劑量形式包含5至1000mg/m2、方便地10至750mg/m2、最方便地50至500mg/m2的活性成分。所需的劑量可方便地存在于單次劑量中或作為分份劑量在合適的時間間隔下給藥，例如，作為每天兩次、三次、四次或更多次的亞劑量。所述亞劑量本身還可被進(jìn)一步分成，例如，許多離散的松散間隔的給藥。本文所描述的化合物可為有效的抗腫瘤劑且與PAC-1相比具有更高的效能和/或降低的毒性。本發(fā)明的化合物可比PAC-1更有效且毒性更小，和/或避開PAC-1所遇到的分解代謝的潛在位點，即它們具有與PAC-1不同的代謝譜。本發(fā)明提供在哺乳動物中治療癌癥的治療方法，包括給予患有癌癥的哺乳動物有效量的本文所描述的化合物或組合物。哺乳動物包括靈長類、人類、嚙齒動物、犬科動物、貓科動物、?？苿游?、綿羊、馬科動物、豬、山羊、?？苿游锏?。癌癥是指任何不同類型的惡性腫瘤，例如，結(jié)腸癌、乳腺癌、黑素瘤和白血病，一般而言，癌癥的特征為不希望的細(xì)胞增殖，例如，不受調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長、缺乏分化、局部組織侵入和轉(zhuǎn)移。本發(fā)明的化合物治療癌癥的能力可通過使用本領(lǐng)域公知的試驗而測定。例如，治療方案的設(shè)計、毒性評估、數(shù)據(jù)分析、殺死的腫瘤細(xì)胞的量以及使用可移植腫瘤篩選的生物學(xué)意義是已知的。此外，化合物治療癌癥的能力可使用下面描述的試驗而測定。以下實施例旨在舉例說明上述發(fā)明，而不應(yīng)理解為限制本發(fā)明的范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員將很容易理解，實施例給出可實施本發(fā)明的許多其他方式。應(yīng)理解，保持在本發(fā)明的范圍內(nèi)可進(jìn)行許多變型和修改。實施例實施例1.合成PAC-1類似物的一般程序向16×150mm的試管中加入酰肼(1.7當(dāng)量)、醛(1.0當(dāng)量)、2-乙氧基乙醇(1mL)和1.2MHCl(10mol％)。將這些試管置于BüchiSyncore平行合成儀上于110℃震搖直到所有的醛已反應(yīng)(如通過ESI-MS監(jiān)測)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫(～23℃)，并加入聚苯乙烯-苯甲醛(3.5當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物于25-80℃震搖直到無酰肼殘留(如通過ESI-MS監(jiān)測)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后將樹脂過濾并用2-乙氧基乙醇洗滌。濾液在高真空下干燥得到PAC-1類似物。實施例2.PAC-1類似物的平行合成需要無水條件的反應(yīng)是在氮氣或氬氣的正壓氣氛下在烘干的玻璃器皿中進(jìn)行的。將標(biāo)準(zhǔn)注射器技術(shù)用于液體的無水加入。除非另有說明，所有的起始原料、溶劑和試劑均從商業(yè)供應(yīng)商處獲得并且不經(jīng)過進(jìn)一步純化即使用。使用230-400目的硅膠進(jìn)行快速色譜法。化合物1{1}、1{2}、1{3}、1{4}、1{5}、1{6}、2{24}、2{25}、2{26}和PAC-1是如之前所報道的方法合成的?；衔锓治?。在VarianUnity400MHz或500MHz光譜儀上在CDCl3(Sigma)、CD3OD(Sigma)或(CD3)2CO(Sigma)中記錄了NMR實驗，其中對于1H-NMR和13C-NMR實驗采用殘留的未氘代溶劑作為內(nèi)標(biāo)，對于19F-NMR實驗采用1％的CFCl3/CDCl3作為外標(biāo)。報告了化學(xué)位移，δ(ppm)；耦合常數(shù)，J(Hz)；峰裂數(shù)(s＝單峰，d＝雙重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，br＝寬峰)；以及積分。在伊利諾伊大學(xué)質(zhì)譜實驗室的MicromassQ-TofUltima混合四級桿/飛行時間ESI質(zhì)譜儀上記錄了高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)。一般程序A：1-芐基哌嗪的合成。將無水哌嗪(6.0當(dāng)量)懸浮于THF(0.45M芐基鹵化物)中。將混合物加熱至回流直到哌嗪完全溶解。溶解后，將取代的芐基鹵化物(1.0當(dāng)量)加入反應(yīng)混合物中。立即產(chǎn)生白色固體。將反應(yīng)混合物在回流下攪拌2.5小時。使混合物冷卻至室溫。將固體過濾并采用THF和EtOAc洗滌。將經(jīng)合并的濾液濃縮至原始體積的10％。將濃縮液倒入含采用KOH調(diào)至堿性(pH>12)的5％食鹽/H2O的分液漏斗中。水層用DCM和EtOAc萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，并濃縮。粗產(chǎn)品通過硅膠柱色譜法純化得到純的1-芐基哌嗪。一般程序B：乙酯的合成。將取代的1-芐基哌嗪(1.0當(dāng)量)溶解于丙酮(0.5M)中，然后根據(jù)需要向一些反應(yīng)混合物中加入氯仿以使1-芐基哌嗪完全溶解。加入NaHCO3(1.25當(dāng)量)，并將混合物在室溫下攪拌。然后滴加氯乙酸乙酯(1.1當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在回流下攪拌過夜...