專利名稱：一種利用中國石蒜不帶基盤鱗片組培快繁的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用中國石蒜不帶基盤鱗片建立無菌培養(yǎng)體系快速繁殖鱗莖的方法。
2.
背景技術(shù)：
中國石蒜Lycoris chinensis 屬石蒜科 Amaryllidaceae 石蒜屬 Lycoris 植物,在國內(nèi)主要分布于長江流域及西南諸省，是一類優(yōu)良的球根花卉植物和藥用植物。目前，已在城市綠化、鮮切花銷售、藥用等不同領(lǐng)域得到應(yīng)用。自然條件下，中國石蒜主要依靠鱗莖分球和種子自播繁殖，繁殖系數(shù)很低，而且野生資源數(shù)量有限，難以滿足大規(guī)模的生產(chǎn)應(yīng)用。因此，開發(fā)中國石蒜組培快繁技術(shù)對(duì)野生種群保護(hù)與園林生產(chǎn)應(yīng)用具有重要意義。
組織培養(yǎng)技術(shù)作為植物品種快繁的主要手段已在鱗莖類植物中得到廣泛應(yīng)用，它可以大幅度提高鱗莖的繁殖系數(shù)，滿足中國石蒜快速大規(guī)模繁育生產(chǎn)的需要，有效解決中國石蒜鱗莖供不應(yīng)求的矛盾。CN102217540A公開了周堅(jiān)的“一種中國石蒜的快速繁殖方法”發(fā)明專利技術(shù)，以中國石蒜的種胚為外植體，先誘導(dǎo)外植體產(chǎn)生愈傷組織，進(jìn)而誘導(dǎo)不定芽、小鱗莖的發(fā)生，最終完成植株再生，這種方法雖然繁殖系數(shù)較高，但種子的遺傳背景較復(fù)雜，繁育出的后代性狀分離現(xiàn)象嚴(yán)重，限制了中國石蒜純系品種的推廣應(yīng)用。
3.

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是利用中國石蒜不帶基盤鱗片建立無菌培養(yǎng)體系培養(yǎng)再生植株。解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案按如下步驟進(jìn)行(I)培養(yǎng)基的配方及配制誘導(dǎo)及擴(kuò)繁培養(yǎng)基配方MS+6-BAO. 5mg/L+2，4-D I. Omg/L+ 蔗糖 30g/L壯苗培養(yǎng)基配方MS+6-BAI. Omg/L+2，4-D O. 5mg/L+ 蔗糖 30g/L生根培養(yǎng)培養(yǎng)基配方1/2MS+NAA O. 5mg/L+蔗糖30g/L具體的配制方法A、按照MS培養(yǎng)基配方，分別配置IOX大量元素、100X微量元素、100X鐵鹽及IOOX有機(jī)物的母液；B、加入一定量的母液，再加入相應(yīng)的激素及蔗糖(30g)、瓊脂(5.5g)，定容，調(diào)節(jié)pH值至5. 9，微波爐加熱，煮沸至溶液呈透明；C、將配制好的培養(yǎng)基分裝在事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中，IL 一般分裝20-22瓶，然后蓋上蓋子并注明標(biāo)簽進(jìn)行高壓滅菌(121°C維持時(shí)間18-25min)；D、滅菌過的培養(yǎng)基通常放在接種室或培養(yǎng)室中保存，放置24小時(shí)后使用，一般應(yīng)在消毒后的兩周內(nèi)用完。(2)材料的選擇及接種
A:選取營養(yǎng)充足的中國石蒜鱗莖，去除表面雜物，用洗潔劑浸泡lOmin，再用流水沖洗2h。將鱗莖表面的水分吸干，選取上半部不帶基盤的部分，進(jìn)行滅菌，滅菌過程為75%乙醇中消毒40s-lmin—無菌水清洗2次一O. 1% HgC12溶液中滅菌8_12min (期間不斷搖晃)一無菌水清洗5次。將滅好菌的材料用無菌濾紙吸干表面水分，用小剪刀將接觸HgCl2的四周剪去O. 5cm左右，再將其剪成長寬Icm左右的小片，即可接種到培養(yǎng)基中。B:選擇無菌培養(yǎng)的小鱗莖轉(zhuǎn)接，切除下半部基盤，去除上部葉片后，直接將其接種于培養(yǎng)基中，也可將其切成兩半分別接種。⑶培養(yǎng)條件將接種好的材料放在培養(yǎng)架上，培養(yǎng)室溫度控制在25±2°C，光照1000-12001x，16h/ 天。(4)誘導(dǎo)培養(yǎng)和增殖培養(yǎng) 材料接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上一個(gè)月后，即可誘導(dǎo)出的愈傷組織及小鱗莖，然后切割并轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中，一般一次繼代培養(yǎng)可擴(kuò)繁4倍以上。繼代培養(yǎng)可連續(xù)進(jìn)行，繼代周期一個(gè)月左右，達(dá)到預(yù)期擴(kuò)繁數(shù)量為止。(5)壯苗培養(yǎng)將分化出的小鱗莖去除葉片，根系，直接接種于壯苗培養(yǎng)基中一個(gè)月，即可達(dá)到壯苗效果。(6)生根培養(yǎng)繼代培養(yǎng)得到的小鱗莖直徑達(dá)到O. 5cm左右時(shí)，即可進(jìn)行生根培養(yǎng)。將生長勢健壯的中國石蒜小苗(適當(dāng)去除葉片減少營養(yǎng)消耗)轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基上，一般半個(gè)月時(shí)間可長出一定量的健壯根系，待長出3條Icm以上的須根后，進(jìn)行馴化移栽。(7)馴化移栽將幼苗根部附著的培養(yǎng)基用清水洗凈，然后修剪去較長的根須，用稀釋800-1000倍的多菌靈浸泡10-15min即可移栽于大棚苗床，保持空氣濕度90 %以上，并加蓋遮陽網(wǎng)。半個(gè)月后，待幼苗葉片展開后，可除去遮陽網(wǎng)，進(jìn)行正常栽培管理。本發(fā)明的有益效果(1)利用中國石蒜不帶基盤的鱗片作為外植體，建立無菌快繁體系，再生植株，為中國石蒜的快速繁育提供一種新的有效的途徑。(2)由組織培養(yǎng)得到的中國石蒜幼苗，具有遺傳基礎(chǔ)一致、性狀穩(wěn)定、生長勢整齊等特點(diǎn)，在觀賞中國石蒜的栽培中有顯著的競爭優(yōu)勢。
4.


圖I :不帶基盤單鱗片誘導(dǎo)出愈傷組織；圖2 :不帶基盤單鱗片誘導(dǎo)出小鱗莖；圖3 :無菌苗小鱗莖上半部誘導(dǎo)出愈傷組織；圖4 :愈傷組織誘導(dǎo)小鱗莖。
5.
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步詳述本發(fā)明所指明的培養(yǎng)過程包括四個(gè)培養(yǎng)階段，各培養(yǎng)階段所用培養(yǎng)基配方均以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加不同種類和不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑構(gòu)成。通過生長調(diào)節(jié)劑的調(diào)節(jié)，調(diào)控中國石蒜再生植株的發(fā)育過程，實(shí)現(xiàn)中國石蒜鱗片組織的脫分化、再分化，得到再生植株。下面將本發(fā)明中培養(yǎng)過程的信息按五項(xiàng)實(shí)施例列于下表
權(quán)利要求
1.一種利用中國石蒜不帶基盤鱗片組培快繁的方法，其技術(shù)方案按如下步驟進(jìn)行 (1)培養(yǎng)基的配方及配制 誘導(dǎo)及擴(kuò)繁培養(yǎng)基配方MS+6-BA O. 5mg/L+2，4-D I. Omg/L+蔗糖30g/L 壯苗培養(yǎng)基配方MS+6-BA I. 0mg/L+2,4-D O. 5mg/L+蔗糖 30g/L 生根培養(yǎng)培養(yǎng)基配方1/2MS+NAA O. 5mg/L+蔗糖30g/L 具體的配制方法 A、按照MS培養(yǎng)基配方，分別配置IOX大量元素、100X微量元素、100 X鐵鹽及100X有機(jī)物的母液； B、加入一定量的母液，再加入相應(yīng)的激素及蔗糖(30g)、瓊脂(5.5g)，定容，調(diào)節(jié)pH 值至5. 9，微波爐加熱，煮沸至溶液呈透明； C、將配制好的培養(yǎng)基分裝在事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中，IL一般分裝20-22瓶，然后蓋上蓋子并注明標(biāo)簽進(jìn)行高壓滅菌(121°C維持時(shí)間18-25min)； D、滅菌過的培養(yǎng)基通常放在接種室或培養(yǎng)室中保存，放置24小時(shí)后使用，一般應(yīng)在消毒后的兩周內(nèi)用完。
(2)材料的選擇及接種 A :選取營養(yǎng)充足的中國石蒜鱗莖，去除表面雜物，用洗潔劑浸泡lOmin，再用流水沖洗2h。將鱗莖表面的水分吸干，選取上半部不帶基盤的部分，進(jìn)行滅菌，滅菌過程為75%乙醇中消毒40s-lmin—無菌水清洗2次一O. I % HgC12溶液中滅菌8_12min (期間不斷搖晃)一無菌水清洗5次。將滅好菌的材料用無菌濾紙吸干表面水分，用小剪刀將接觸HgC12的四周剪去O. 5cm左右，再將其剪成長寬Icm左右的小片，即可接種到培養(yǎng)基中。
B :選擇無菌培養(yǎng)的小鱗莖轉(zhuǎn)接，切除下半部基盤，去除上部葉片后，直接將其接種于培養(yǎng)基中，也可將其切成兩半分別接種。
(3)培養(yǎng)條件 將接種好的材料放在培養(yǎng)架上，培養(yǎng)室溫度控制在25±2°C，光照1000-12001x，16h/天。
(4)誘導(dǎo)培養(yǎng)和增殖培養(yǎng) 材料接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上一個(gè)月后，即可誘導(dǎo)出的愈傷及小鱗莖，然后切割并轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中，一般一次繼代培養(yǎng)可擴(kuò)繁4倍以上。繼代培養(yǎng)可連續(xù)進(jìn)行，繼代周期一個(gè)月左右，達(dá)到預(yù)期擴(kuò)繁數(shù)量為止。
(5)壯苗培養(yǎng) 將分化出的小鱗莖去除葉片，根系，直接接種于壯苗培養(yǎng)基中一個(gè)月，即可達(dá)到壯苗效果O (6)生根培養(yǎng) 繼代培養(yǎng)得到的小鱗莖直徑達(dá)到O. 5cm左右時(shí)，即可進(jìn)行生根培養(yǎng)。將生長勢健壯的中國石蒜小苗(適當(dāng)去除葉片減少營養(yǎng)消耗)轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基上，一般半個(gè)月時(shí)間可長出一定量的健壯根系，待長出3條Icm以上的須根后，進(jìn)行馴化移栽。
(7)馴化移栽 將幼苗根部附著的培養(yǎng)基用清水洗凈，然后修剪去較長的根須，用稀釋800-1000倍的多菌靈浸泡10-15min即可移栽于大棚苗床，保持空氣濕度90%以上，并加蓋遮陽網(wǎng)。半個(gè)月后，待幼苗葉片展開后，可除去遮陽網(wǎng)，進(jìn)行正常 栽培管理。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用中國石蒜不帶基盤鱗片組培快繁的方法，包括以下步驟(1)以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加6-BA、NAA、2，4-D等植物生長調(diào)節(jié)劑；(2)選取不帶基盤的中國石蒜鱗莖或無菌培養(yǎng)的小鱗莖；(3)培養(yǎng)室溫度控制在25±2℃，光照1000-1200lx；(4)誘導(dǎo)出愈傷組織及小鱗莖后，切割并轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中繼代；(5)壯苗培養(yǎng)；(6)生根培養(yǎng)；(7)幼苗消毒后移栽，保持濕潤環(huán)境，待幼苗葉片伸展，即可進(jìn)行正常管理。本發(fā)明利用中國石蒜不帶基盤鱗片建立快繁體系，具有取材少、繁殖系數(shù)高等優(yōu)點(diǎn)；得到的幼苗遺傳基礎(chǔ)一致、性狀穩(wěn)定、生長勢整齊，在觀賞和藥用新品種栽培中具有顯著的競爭優(yōu)勢。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102960243SQ20121023048
公開日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月28日
發(fā)明者姜小鳳, 童再康, 時(shí)劍, 高燕會(huì) 申請(qǐng)人:浙江農(nóng)林大學(xué)