專利名稱：喹喔啉基衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性，并且有用于治療HCV感染的大環(huán) 類。本發(fā)明更尤其涉及喹喔啉基大環(huán)化合物、含有此類化合物的組合物和使用此類化合物 的方法、以及制備此類化合物的方法。
背景技術(shù)：
HCV是引起非甲型、非乙型肝炎的主要原因，并且在發(fā)達(dá)世界和發(fā)展世界中成為越 來越嚴(yán)重的公共健康問題。據(jù)估計，全世界超過兩億人受到該病毒感染，超過感染有人免疫 缺陷病毒(HIV)的個體數(shù)量近五倍。由于高百分率的個體遭受慢性感染，因此HCV感染的 患者處于發(fā)展為肝硬化、隨后發(fā)展為肝細(xì)胞癌和晚期肝病的高風(fēng)險之中。在西方世界，HCV 是引起肝細(xì)胞癌的最普遍的原因，并且使患者需要肝臟移植?？笻CV療法的開發(fā)存在相當(dāng)大的障礙，其包括但不限于病毒的持久性，病毒在宿 主中復(fù)制過程中的遺傳多樣性，病毒發(fā)展為耐藥突變體的高發(fā)生率，和重現(xiàn)性感染培養(yǎng)系 統(tǒng)和用于HCV復(fù)制和發(fā)病機(jī)理的小動物模型的缺乏。在大多數(shù)情況中，如果考慮到感染病 程的溫和性肝臟生物學(xué)的復(fù)雜性，則對可能具有顯著副作用的抗病毒藥物必須仔細(xì)考慮。目前只有兩種批準(zhǔn)的用于HCV感染的療法。原始治療方案通常涉及3-12個月療 程的靜脈內(nèi)(注射)干擾素_ α (IFN- α )，而新批準(zhǔn)的第二代療法涉及用IFN- α和通常的 抗病毒核苷模擬物(例如利巴韋林)進(jìn)行共同治療。這兩種療法都具有干擾素相關(guān)的副作 用以及抗HCV感染的低功效。由于現(xiàn)有療法的耐受性差且功效令人失望，因此仍需要開發(fā) 有效的抗病毒藥劑，用于治療HCV感染。在大多數(shù)個體受到慢性感染并且無癥狀，且預(yù)后未知的患者群中，希望有效藥物 比目前可用的治療具有顯著更小的副作用。丙型肝炎非結(jié)構(gòu)蛋白_3 (NS3)是病毒多蛋白加 工并因此進(jìn)行病毒復(fù)制所需要的蛋白水解酶。雖然存在與HCV感染有關(guān)的大量病毒變體， 但NS3蛋白酶的活性位點保持高度保守，因此使得對它的抑制成為有吸引力的干預(yù)模式。 最近用蛋白酶抑制劑治療HIV的成功，支持了抑制NS3是對抗HCV的戰(zhàn)役中的關(guān)鍵靶標(biāo)的 概念。HCV是黃病毒科(flaviridae)型RNA病毒。HCV基因組是有包膜的，并且含有由 大約9600個堿基對組成的單鏈RNA分子。它編碼由大約3010個氨基酸組成的多肽。HCV多蛋白被病毒和宿主肽酶加工成10個分立的肽，其具有各種功能。有三種結(jié) 構(gòu)蛋白C、E1和E2。P7蛋白的功能未知，并且由高度可變的序列組成。有六種非結(jié)構(gòu)性蛋 白。NS2是鋅依賴性金屬蛋白酶，其與一部分NS3蛋白聯(lián)合發(fā)揮功能。NS3并入兩種催化功
11能(從它與NS2的結(jié)合中分離):N-末端的絲氨酸蛋白酶功能，其需要NS4A作為輔因子；以 及羧基末端的ATP酶-依賴性解旋酶功能。NS4A是與絲氨酸蛋白酶緊密結(jié)合但非共價(結(jié) 合)的輔因子。NS3-NS4A蛋白酶負(fù)責(zé)裂解病毒多蛋白上的四個位點。NS3-NS4A裂解是自催化的， 以順式形式出現(xiàn)。其余三種水解NS4A-NS4B、NS4B-NS5A和NS5A-NS5B都以反式形式出現(xiàn)。 NS3是絲氨酸蛋白酶，在結(jié)構(gòu)上可將其歸類為胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶。盡管NS絲氨酸蛋白 酶本身具有蛋白水解活性，但就催化多蛋白裂解而言，HCV蛋白酶不是有效的酶。已表明， NS4A蛋白的中央疏水區(qū)域?qū)@種增強(qiáng)作用是需要的。NS3蛋白與NS4A形成復(fù)合物似乎為 加工事件、增強(qiáng)所有位點的蛋白水解功效所必需。開發(fā)抗病毒藥劑的一般策略是使病毒編碼的酶(包括病毒復(fù)制必需的NS3)失活。 S.Tan, A.Pause, Y. Shi, N. Sonenberg, Hepatitis CTherapeutics Current Status and Emerging Strategies,Nature Rev. DrugDiscov. 1,867-881(2002)綜述了前直接針對發(fā)現(xiàn) NS3蛋白酶抑制劑的努力。發(fā)明概述本發(fā)明涉及改進(jìn)的喹喔啉基大環(huán)化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥，以及 使用其在需要此類治療的受治療者(subject)中治療丙型肝炎感染的方法。本發(fā)明的大 環(huán)化合物干擾丙型肝炎病毒的生命周期，并且還用作抗病毒藥劑。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包含 上述化合物、鹽、酯或前藥的藥物組合物，用于給予患有HCV感染的受治療者。本發(fā)明進(jìn)一 步以藥物組合物為特征，其包含本發(fā)明的化合物(或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥)和 另一種抗HCV藥劑，例如干擾素(例如α-干擾素、β-干擾素、復(fù)合干擾素(consensus interferon)、聚乙二醇化的干擾素或白蛋白或其它共軛干擾素)；利巴韋林；金剛烷胺；另 一種HCV蛋白酶抑制劑；或HCV聚合酶、解旋酶或內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點抑制劑。本發(fā)明還 涉及通過給予受治療者本發(fā)明的藥物組合物來治療受治療者的HCV感染的方法。本發(fā)明 進(jìn)一步涉及藥物組合物，其包含本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥以及(in combination with)藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，公開了式I或II表示的化合物或其藥學(xué)上可接的 鹽、酯或前藥其中 R選自
12 Z是叔丁基或環(huán)戊基；表示碳-碳單或雙鍵。 發(fā)明詳述本發(fā)明的第一個實施方案是單獨的或與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑組合的如 上所述的式I表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥。在一個實施方案中，是單獨的或與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑組合的式III或 IV(如下所述)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥。
T、i
(III)或(IV)
其中R、Z和Ar如前面實施方案中所定義。
本發(fā)明的代表性化合物包括但不限于下列根據(jù)式V的化合物(表1)
14 本發(fā)明還以包含本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥的藥物組合物為 特征。
可以單獨的活性藥劑給予本發(fā)明化合物，或?qū)⒈景l(fā)明化合物與一種或多種藥劑聯(lián) 合使用，以治療或預(yù)防丙型肝炎感染或與HCV感染有關(guān)的癥狀。與本發(fā)明化合物或本發(fā)明 化合物的組合聯(lián)合給藥的其它藥劑包括通過直接或間接機(jī)制抑制HCV病毒復(fù)制來治療由 HCV感染所引起的疾病的療法。這些藥劑包括例如宿主免疫調(diào)節(jié)劑(例如干擾素-a、聚 乙二醇化的干擾素_ a、干擾素_ 0、干擾素_ Y、CpG寡核苷酸等)，或抑制宿主細(xì)胞功能的 抗病毒化合物，例如肌苷單磷酸脫氫酶(例如利巴韋林等等)。還包括的是調(diào)節(jié)免疫功能的 細(xì)胞因子。還包括的是疫苗，所述疫苗包含直接對抗HCV的HCV抗原或抗原佐劑組合。還 包括的是藥劑，其與宿主細(xì)胞組分相互作用，以通過抑制內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(IRES)引發(fā) 的HCV病毒復(fù)制的翻譯步驟來阻滯病毒蛋白合成，或阻滯病毒顆粒成熟，并且釋放靶向膜 蛋白的離子孔道蛋白(viroporin)家族(例如HCV P7等等)的藥劑。與本發(fā)明化合物聯(lián) 合給藥的其它藥劑包括通過靶向牽涉病毒復(fù)制的病毒基因組的蛋白來抑制HCV復(fù)制的任 何藥劑或藥劑組合。這些藥劑包括但不限于HCV RNA依賴性RNA聚合酶的其它抑制劑，例 如 W00190121(A2)或美國專利 No. 6，348，587B1 或 W00160315 或 W00132153 中描述的核苷 型聚合酶抑制劑或非核苷抑制劑，例如EP1162196A1或W00204425中描述的苯并咪唑聚合 酶抑制劑，或HCV蛋白酶的抑制劑，例如肽模擬物型抑制劑，例如BILN2061等等，或HCV解 旋酶的抑制劑。與本發(fā)明化合物組合給藥的其它藥劑包括抑制同時感染個體的其它病毒復(fù)制的 任何藥劑或藥劑組合。這些藥劑包括但不限于用于由乙型肝炎(HBV)感染所引起的疾病 的療法，例如阿德福韋、拉米夫定和替諾福韋；或用于由人免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起 的疾病的療法，例如蛋白酶抑制劑洛匹那韋、茚地那韋、奈非那韋、沙奎那韋、氨普那韋、阿 扎那韋(atazanavir)、替拉那韋(tipranavir)、TMC_114、呋山那韋；逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑齊多 夫定、拉米夫定、去羥肌苷、司他夫定、替諾福韋、扎西他濱、阿巴卡韋、依法韋侖、奈韋拉平、 地拉韋啶、TMC-125 ；整合酶抑制劑:L-870812、S-1360 ；或進(jìn)入抑制劑恩夫韋肽(T-20)、 T-1249。因此，本發(fā)明的一個方面涉及治療或預(yù)防由含有RNA的病毒所引起的感染的方 法，其包括對需要此類治療的患者共同給予一種或多種選自宿主免疫調(diào)節(jié)劑和第二種抗病 毒藥劑或其組合的藥劑，以及治療有效量的本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物的組合，或其藥 學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥、前藥的鹽或其組合。宿主免疫調(diào)節(jié)劑的例 子是但不限于干擾素_ a、聚乙二醇化的干擾素_ a、干擾素、干擾素_、、細(xì)胞因子、疫 苗和包含抗原和佐劑的疫苗，所述第二種抗病毒藥劑通過抑制與病毒復(fù)制有關(guān)的宿主細(xì)胞 功能或通過靶向病毒基因組的蛋白來抑制HCV的復(fù)制。本發(fā)明的其它方面涉及治療或預(yù)防由含有RNA的病毒所引起的感染的方法，其包 括對需要此類治療的患者共同給予治療或減輕HCV感染癥狀(包括肝硬化和肝炎)的藥 劑或藥劑組合，以及治療有效量的本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物的組合或其藥學(xué)上可接受 的鹽、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥、前藥的鹽或其組合。本發(fā)明的又一個方面提供治療或 預(yù)防由含有RNA的病毒所引起的感染的方法，其包括對需要此類治療的患者共同給予一種 或多種治療患者的由乙型肝炎(HBV)感染所引起疾病的藥劑，以及治療有效量的本發(fā)明化 合物或本發(fā)明化合物的組合或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥、前藥 的鹽或其組合。治療患者的由乙型肝炎(HBV)感染所引起疾病的藥劑可以是例如但不限于
21L_脫氧胸苷、阿德福韋、拉夫米定或替諾福韋替諾福韋或其任何組合。含有RNA的病毒的例 子包括但不限于丙型肝炎病毒(HCV)。本發(fā)明的又一個方面提供治療或預(yù)防由含有RNA的病毒所引起的感染的方法， 其包括對需要此類治療的患者共同給予一種或多種治療患者的由人免疫缺陷病毒(HIV) 感染所引起疾病的藥劑，以及治療有效量的本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物的組合或其藥 學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、前藥、前藥的鹽或其組合。治療患者的由人免 疫缺陷病毒(HIV)感染所引起疾病的藥劑可以包括但不限于洛匹那韋、茚地那韋、尼非那 韋(nelfmavir)、沙奎那韋、氨普那韋、阿扎那韋(atazanavir)、替拉那韋(tipranavir)、 TMC-114、呋山那韋、齊多夫定、拉米夫定、去羥肌苷、司他夫定、替諾福韋、扎西他濱、阿巴卡 韋、依法韋侖、奈韋拉平、地拉韋啶、TMC-125、L-870812、S-1360、恩夫韋肽(T-20)或T-1249 或其任何組合。含有RNA的病毒的例子包括但不限于丙型肝炎病毒(HCV)。另外，本發(fā)明提 供本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物的組合或其治療可接受的鹽形式、立體異構(gòu)體或互變異構(gòu) 體、前藥、前藥的鹽或其組合以及一種或多種選自宿主免疫調(diào)節(jié)劑和第二種抗病毒藥劑或 其組合在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療患者的由含有RNA的病毒(尤其是丙型肝 炎病毒)所引起的感染。宿主免疫調(diào)節(jié)劑的例子是但不限于干擾素-a、聚乙二醇化的-干 擾素、干擾素、干擾素、細(xì)胞因子、疫苗和包含抗原與佐劑的疫苗，所述第二種抗 病毒藥劑通過抑制與病毒復(fù)制有關(guān)的宿主細(xì)胞功能或通過靶向病毒基因組的蛋白來抑制 HCV的復(fù)制。當(dāng)用于上述或其它治療時，一種或多種本發(fā)明化合物連同一種或多種本文上面所 定義藥劑的組合可以純形式(在存在此類形式的情況下)、其藥學(xué)上可接受的鹽、前藥、前 藥的鹽或其組合的形式使用。或者，此類治療劑的組合可以以藥物組合物的形式給藥，所述 藥物組合物含有治療有效量的感興趣的化合物或化合物的組合?；蛩鼈兊乃帉W(xué)上可接受的 鹽形式、前藥或前藥的鹽，以及一種或多種上文所定義的藥劑和藥學(xué)上可接受的載體。通過 使所述病毒與所述藥物組合物接觸，類藥物組合物可用來抑制含有RNA的病毒(尤其丙型 肝炎病毒(HCV))的復(fù)制。另外，此類組合物有用于治療或預(yù)防由含有RNA的病毒(尤其丙 型肝炎病毒(HCV))所引起的感染。因此，本發(fā)明的其它方面涉及治療或預(yù)防由含有RNA的病毒(尤其丙型肝炎病毒 (HCV))所引起的感染的方法，其包括對需要此類治療的患者給予藥物組合物，所述藥物組 合物包含本發(fā)明化合物或本發(fā)明化合物的組合或其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或互變 異構(gòu)體、前藥、前藥的鹽或其組合，一種或多種上文所定義的藥劑和藥學(xué)上可接受的載體。當(dāng)以聯(lián)合形式給藥時，可以將治療劑配制為同時給予或在預(yù)定時段內(nèi)給予的單獨 組合物，或可以以單一單位劑型的形式給予治療劑。此類聯(lián)合療法中所使用的抗病毒藥劑包括有效抑制哺乳動物中病毒形成和/或 復(fù)制的藥劑(化合物或生物制品)，其包括但不限于干擾哺乳動物中病毒形成和/或復(fù)制所 必需的宿主或病毒機(jī)制的藥劑。此類藥劑可以選自另一種抗HCV藥劑；HIV抑制劑；HAV抑 制劑；和HBV抑制劑。其它抗HCV藥劑包括有效削弱或預(yù)防丙型肝炎相關(guān)癥狀或疾病的進(jìn)展的那些藥 劑。此類藥劑包括但不限于免疫調(diào)節(jié)劑；HCV NS3蛋白酶的抑制劑；HCV聚合酶的其它抑制 劑；HCV生命周期中的另一種靶標(biāo)的抑制劑；以及其它抗HCV藥劑，包括但不限于利巴韋林、金剛烷胺(amantadine)、左旋韋林(levovirin)和利巴韋林前體(viramidine)。免疫調(diào)節(jié)劑包括有效提高或增強(qiáng)哺乳動物中免疫系統(tǒng)反應(yīng)的那些藥劑 (化合物或生物制品)。免疫調(diào)節(jié)劑包括但不限于肌苷單磷酸脫氫酶抑制劑，例如 VX-497(merimepodib, Vertex Pharmaceuticals) ；I 類干擾素；II 類干擾素；復(fù)合干擾素； 脫唾液酸干擾素(asialo-interferon)聚乙二醇化的干擾素和共軛干擾素，包括但不限于 與其它蛋白(包括但不限于人白蛋白)共軛的干擾素。I類干擾素是所有與I型受體結(jié)合 的干擾素組，包括天然和合成產(chǎn)生的I類干擾素，而II類干擾素都與II型受體結(jié)合。I類 干擾素的例子包括但不限于[a]-
-、[A]-、[Q]-和[t]-干擾素，而II類干擾素的 例子包括但不限于干擾素。HCV NS3蛋白酶的抑制劑包括有效抑制哺乳動物中HCV NS3蛋白酶的功能 的藥劑(化合物或生物制品)。HCV NS3蛋白酶的抑制劑包括但不限于W099/07733、 W0 99/07734、W0 00/09558、W0 00/09543、W0 00/59929、W003/064416, W0 03/064455、 W0 03/064456、W0 2004/030670、W02004/037855、W0 2004/039833、W0 2004/101602、 W0 2004/101605、W02004/103996、W0 2005/028501、W0 2005/070955、W0 2006/000085、 W02006/007700 和 W0 2006/007708 (都由 Boehringer Ingelheim 申請)、W002/060926、 W0 03/053349、W003/099274、W0 03/099316、W02004/032827、W0 2004/043339、W0 2004/094452、W0 2005/046712、W02005/051410、W0 2005/054430 (都由 BMS 申請)、W0 2004/072243、W02004/093798、W0 2004/113365、W0 2005/010029 (都由 Enanta 申請)、 W02005/037214 (Intermune)和 W0 2005/051980 (Schering)中描述的那些化合物，以及鑒 定為 VX-950、ITMN-191 和 SCH 503034 的候選物。HCV聚合酶的抑制劑包括有效抑制HCV聚合酶的功能的藥劑(化合物或生物制 品)。此類抑制劑包括但不限于HCV NS5B聚合酶的非核苷和核苷抑制劑。HCV聚合酶的 抑制劑的例子包括但不限于 W0 02/04425、W003/007945、W0 03/010140、W0 03/010141、 W0 2004/064925、W02004/065367、W0 2005/080388 和 W0 2006/007693 (都由 Boehringer Ingelheim 申請)、TO 2005/049622 (Japan Tobacco)、W0 2005/014543 (JapanTobacco)、 W0 2005/012288 (Genelabs)、W0 2004/087714 (IRBM)、ff003/101993 (Neogenesis)、W0 03/026587 (BMS)、W0 03/000254 (Japan Tobacco)和 W0 01/47883 (Japan Tobacco)中描述 的那些化合物、以及臨床候選物XTL-2125、HCV 796、R-1626和NM 283。HCV生命周期中的另一種靶標(biāo)的抑制劑包括不通過抑制HCV NS3蛋白酶的功能而 有效抑制HCV的形成和/或復(fù)制的藥劑(化合物或生物制品)。此類藥劑可以干擾HCV的 形成和/或復(fù)制所必需的宿主或HCV病毒機(jī)制。HCV生命周期中的另一種靶標(biāo)的抑制劑包 括但不限于進(jìn)入抑制劑；抑制選自解旋酶、NS2/3蛋白酶和內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(IRES)的 靶標(biāo)的藥劑；和干擾其它病毒靶標(biāo)(包括但不限于NS5A蛋白和NS4B蛋白)的功能的藥劑?？赡艹霈F(xiàn)可同時被丙型肝炎病毒和一種或多種其它病毒感染的患者，所述其它病 毒包括但不限于人免疫缺陷病毒(HIV)、甲型肝炎病毒(HAV)和乙型肝炎病毒(HBV)。因此 還考慮通過共同給予按照本發(fā)明的化合物以及HIV抑制劑、HAV抑制劑和HBV抑制劑中的 至少一種來治療此類同時感染的聯(lián)合療法。根據(jù)又一個實施方案，本發(fā)明的藥物組合物可以進(jìn)一步包含一種或多種HCV生命 周期中的其它靶標(biāo)的抑制劑，所述其它靶標(biāo)包括但不限于解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶和內(nèi)
23部核糖體進(jìn)入位點(IRES)。根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明的藥物組合物可以進(jìn)一步包含另一種抗病毒、抗細(xì) 菌、抗真菌或抗癌藥劑、或免疫調(diào)節(jié)劑或另一種治療劑。根據(jù)再一個實施方案，本發(fā)明包括通過給予所述受治療者有效量的本發(fā)明化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥在需要此類治療的受治療者中治療病毒感染(例如但不 限于丙型肝炎感染)的方法。根據(jù)其它實施方案，本發(fā)明包括通過給予所述受治療者抗HCV病毒有效量或抑制 量的本發(fā)明藥物組合物在需要此類治療的受治療者中治療丙型肝炎感染的方法。本發(fā)明的另外實施方案包括通過使生物樣品與本發(fā)明的化合物接觸來處理生物 樣品的方法。本發(fā)明的又一方面是制備本文所描述的任何化合物的方法，該方法使用本文所描 述的任何合成方法。紅以下列出的是用于描述本發(fā)明的各種術(shù)語的定義。這些定義適用于在貫穿本說明 書和權(quán)利要求中使用的術(shù)語，除非在特定情況下另有限定，無論是單獨限定還是作為較大 基團(tuán)的一部分限定。術(shù)語“病毒感染”是指病毒進(jìn)入細(xì)胞或組織中，例如丙型肝炎病毒(HCV)。通常，病 毒的進(jìn)入還與復(fù)制有關(guān)?？赏ㄟ^使用例如酶免疫分析測定生物流體樣品(例如血液)中的 病毒抗體滴度來確定病毒感染。其它合適的診斷方法包括基于分子的技術(shù)，例如RT-PCR、 直接雜交捕獲試驗、基于核酸序列的擴(kuò)增等等。病毒可以感染器官(例如肝臟)，并導(dǎo)致疾 病，例如肝炎、肝硬化、慢性肝病和肝細(xì)胞癌。術(shù)語“抗癌藥劑”是指能夠預(yù)防或抑制癌癥發(fā)展的化合物或藥物。此類藥劑的例 子包括順鉬、放線菌素D、多柔比星、長春新堿、長春堿、依托泊苷、安吖唳、米托蒽醌、替尼泊 苷(tenipaside)、紫杉醇、秋水仙堿、環(huán)孢素A、吩噻嗪類或硫雜蒽類。術(shù)語“抗真菌劑”應(yīng)用來描述除了 3-AP、3_AMP或3_AP和3-AMP的前藥之外的 可用于治療真菌感染的本發(fā)明化合物。本發(fā)明的抗真菌劑包括例如特比萘芬、氟康唑、 伊曲康唑、泊沙康唑(posaconazole)、克霉唑、灰黃霉素、制霉菌素、托萘酯、卡泊芬凈 (caspofungin)、兩性霉素B、脂質(zhì)體兩性霉素B和兩性霉素B脂質(zhì)復(fù)合物。術(shù)語“抗細(xì)菌劑”是指由微生物產(chǎn)生的抑制其它微生物生長的天然存在的抗生素， 和在實驗室中合成或修飾的具有滅菌或抑菌活性的藥劑，例如內(nèi)酰胺抗細(xì)菌藥劑、糖 肽類、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類、四環(huán)素類和氨基糖苷類。通常，如果抗細(xì)菌劑是抑菌劑，則指 該藥劑基本終止細(xì)菌細(xì)胞生長(但不殺死細(xì)菌)；如果該藥劑是殺菌劑，則指該藥劑殺死細(xì) 菌細(xì)胞(并且可以在殺死細(xì)菌之前終止其生長)。術(shù)語“免疫調(diào)節(jié)劑”是指改變受治療者的體液或細(xì)胞免疫系統(tǒng)的工作的任何物質(zhì)。 此類免疫調(diào)節(jié)劑包括肥大細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥的抑制劑、干擾素、白介素、前列腺素、留體、皮質(zhì) 甾體、集落刺激因子、趨化因子等等。本文所描述的化合物含有一個或多個不對稱中心，并由此產(chǎn)生對映體、非對映體 及其它立體異構(gòu)形式，可根據(jù)絕對立體化學(xué)將其定義為(R)_或(S)-，或?qū)τ诎被醽碚f， 定義為(D)-或(L)-。本發(fā)明旨在包括所有此類可能的異構(gòu)體，以及它們的外消旋體和光學(xué)
24純形式。可以通過上述程序從它們各自的旋光活性前體來制備旋光異構(gòu)體，或通過外消旋 混合物的拆分來制備旋光異構(gòu)體。可以在拆分試劑的存在下，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的 色譜或重復(fù)結(jié)晶或這些技術(shù)的一些組合來進(jìn)行拆分。關(guān)于拆分的進(jìn)一步細(xì)節(jié)可在Jacques 等人，Enantiomers, Racemates，and Resolutions (John Wiley&Sons, 1981)中找到。當(dāng)本 文所描述的化合物含有烯屬雙鍵或其它幾何不對稱中心時，除非另有說明，否則化合物有 意包括E和Z幾何異構(gòu)體兩者。同樣，還有意包括所有的互變異構(gòu)形式。除非文中如此聲 明，否則本文出現(xiàn)的碳_碳雙鍵的構(gòu)型只是為方便起見而選擇，并無意指定特定的構(gòu)型；因 此，本文任意描述為反式的碳-碳雙鍵可能是順式、反式或該兩者的任何比例的混合物。本文使用的術(shù)語“受治療者”是指哺乳動物。因此受治療者是指例如狗、貓、馬、牛、 豬、豚鼠等等。優(yōu)選的受治療者是人。當(dāng)受治療者是人時，受治療者在本文中可被稱為患者。本文使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指通過本發(fā)明方法所形成的化合物的那 些鹽，其在合理醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適用于與人和低等動物的組織接觸，而沒有過度的毒性、刺 激性、過敏反應(yīng)等等，并且與合理的益處/風(fēng)險比率相稱。藥學(xué)上可接受的鹽在本領(lǐng)域是眾 所周知的。本文使用的術(shù)語“氨基保護(hù)基”是指本領(lǐng)域已知的在合成程序過程中保護(hù)氨基對 抗不希望有的反應(yīng)的不穩(wěn)定化學(xué)部分。所述合成程序之后，可以選擇性地除去本文所描述 的氨基保護(hù)基。T. H. Greene 禾口 P. G. M. ffuts, Protective Groups in OrRanic Synthesis, 第3版，John ffiley&Sons, NewYork(1999)中一般性描述了已知的氨基保護(hù)基。氨基保護(hù) 基的例子包括但不限于叔丁氧羰基，9-芴基甲氧羰基，芐氧羰基等。本文使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的酯”是指通過本發(fā)明方法所形成化合物的 酯，其在體內(nèi)水解，并且包括容易在人體中分解釋放母體化合物或其鹽的那些酯。合適 的酯基團(tuán)包括例如衍生自藥學(xué)上可接受的脂族羧酸(尤其烷酸、烯酸、環(huán)烷酸和烷二酸 (alkanedioie acids))的那些酯，其中每個烷基或烯基部分有利地不超過6個碳原子。具 體酯的例子包括但不限于甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和琥珀酸乙酯。本文使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的前藥”是指通過本發(fā)明方法所形成化合物的那 些前藥，其在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適用于與人和低等動物的組織接觸，而沒有過度的毒 性、刺激性、過敏反應(yīng)等等，與合理的益處/風(fēng)險比率相稱，并且有效達(dá)到其預(yù)期用途，可能 的話，還可以是本發(fā)明化合物的兩性離子形式。本文使用的“前藥”是指可在體內(nèi)通過代謝 方式(例如通過水解)轉(zhuǎn)化得到本發(fā)明的式所描述的任何化合物的化合物。前藥的各種形 式在本領(lǐng)域是已知的，例如在下列中所討論的那些Bundgaard編，Design of Prodrugs, Elsevier (1985) ；Widder 等人編，Methods in Enzymology,第 4 卷，AcademicPress (1985)； Krogsgaard-Larsen 等人編，"Design and Application of Prodrugs, Textbook of Drug Design and Development,第 5 章，113—191 (1991) ；Bundgaard ^ A Journal of Drug Deliver Reviews, 8 :1_38(1992) ；Bundgaard,J. of Pharmaceutical Sciences,77 :285 et seq. (1988) ；Higuchi禾口Stella編，Prodrugs as Novel Drug Delivery Systems,American Chemical Society (1975)；禾口 Bernard Testa&Joachim Mayer, "Hydrolysis In Drug And ProdrugMetabolism Chemistry, Biochemistry And Enzymology, " John Wiley andSons, Ltd. (2002)。本文使用的術(shù)語“非質(zhì)子溶劑”是指相對于質(zhì)子活性呈惰性的溶劑，即，不擔(dān)當(dāng)質(zhì)子供體。實例包括但不限于烴類(例如己烷和甲苯)，例如鹵代烴，例如二氯甲烷、二氯乙 烷、氯仿等等；雜環(huán)化合物，例如四氫呋喃和N-甲基吡咯烷酮；以及醚，例如二乙醚、二-甲 氧基甲基醚。此類溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，并且單獨(individual)溶劑或其混合物 可優(yōu)選用于特定的化合物和反應(yīng)條件，這取決于以下因素例如試劑的溶解性、試劑的反應(yīng) 性和優(yōu)選的溫度范圍。非質(zhì)子溶劑的進(jìn)一步討論可以在有機(jī)化學(xué)教科書或在專業(yè)專著中找 至丨J，例如 OrRanic Solvents Physical Properties and Methods ofPurification,第 4版， John A. Riddick 等人編，第 II 卷，Techniques of Chemistry Series, John Wiley&Sons, NY, 1986。本文使用的術(shù)語“給質(zhì)子有機(jī)溶劑，，或“質(zhì)子溶劑，，是指傾向于提供質(zhì)子的溶劑， 例如醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、叔丁醇等等。此類溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所 熟知，并且單獨的溶劑或其混合物可優(yōu)選用于特定的化合物和反應(yīng)條件，這取決于以下因 素例如試劑的溶解性、試劑的反應(yīng)性和優(yōu)選溫度范圍。給質(zhì)子溶劑的進(jìn)一步討論可以 在有機(jī)化學(xué)教科書或在專業(yè)專著中找到，例如Organic Solvents Physical Properties and Methodsof Purification, al 4 片反，John A. Riddick 等人編，第 II 卷，Techniques ofChemistry Series, John Wiley&Sons，NY,1986?？梢詮姆磻?yīng)混合物中分離合成的化合物，并且進(jìn)一步通過諸如柱色譜、高壓液 相色譜或重結(jié)晶之類的方法進(jìn)行純化。另外，可以以改變的(alternate)次序或順序進(jìn) 行各種合成步驟，以得到所需要的化合物。另外，本文所描述的溶劑、溫度、反應(yīng)持續(xù)時 間等等，只是為了舉例說明目的，反應(yīng)條件的變化可以制備所需要的本發(fā)明橋連大環(huán)產(chǎn) 物。有用于合成本文所述化合物的合成化學(xué)轉(zhuǎn)化和保護(hù)基方法學(xué)(保護(hù)和脫保護(hù))包括 例如描述在下列文獻(xiàn)中的那些:R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989) ；T. ff. Greene 禾口 P. G. M. ffuts, Protective Groups inOrganic Synthesis,第 2 版，John Wiley and Sons (1991) ；L. Fieser 禾口 M. Fieser, Fieser and Fieser ' s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1994)； 禾口 L. Paquette 編，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John ffileyand Sons(1995)?？赏ㄟ^本文所描述的合成方式加上各種官能團(tuán)(functionalities)來修飾本發(fā) 明的化合物以增強(qiáng)其選擇性生物學(xué)特性。此類修飾包括提高對給定生物系統(tǒng)(如血液、淋 巴系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng))的生物滲透性、提高口服利用度、提高溶解度以允許注射給藥、改 變代謝和改變排泄速率的那些修飾。藥物組合物本發(fā)明的藥物組合物包含與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體一起配制的治療有 效量的本發(fā)明化合物。本文使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”是指無毒的惰性固體、半固 體或液體填料、稀釋劑、包膠囊物質(zhì)或任何類型的制劑助劑?？梢該?dān)當(dāng)藥學(xué)上可接受的載體 的物質(zhì)的一些實例是糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖 維素和它的衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；粉末黃蓍膠；麥芽； 明膠；滑石粉；賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；油，例如花生油、棉籽油；紅花油；芝麻油；橄 欖油；玉米油和大豆油；二醇類，例如丙二醇；酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩 沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無熱原的水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇和磷酸
26鹽緩沖液；以及其它無毒的相容性潤滑劑，例如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂；以及根據(jù)配制 者的判斷，著色劑、釋放劑、涂布劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑也可以存 在于組合物中。可以下列方式對人及其它動物給予本發(fā)明藥物組合物口服、直腸給藥、胃 腸外給藥、腦池內(nèi)給藥、陰道內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、局部給藥(散劑、軟膏劑或滴劑)、經(jīng)頰給 藥或經(jīng)口或經(jīng)鼻噴霧給藥。本發(fā)明的藥物組合物可以口服給藥、胃腸外給藥、吸入劑噴霧給藥、局部給藥、直 腸給藥、經(jīng)鼻給藥、經(jīng)頰給予、陰道給藥或通過植入的儲庫給藥，優(yōu)選通過口服或注射給藥。 本發(fā)明藥物組合物可以含有任何常規(guī)無毒的藥學(xué)上可接受的載體、佐劑或賦形劑。在某些 情況下，可以用藥學(xué)上可接受的酸、堿或緩沖液調(diào)節(jié)制劑的PH，以增強(qiáng)所配制化合物或其遞 送形式的穩(wěn)定性。本文使用的術(shù)語“胃腸外給藥”包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、動 脈內(nèi)、滑膜內(nèi)(intrasynovial)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、損傷內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸注技術(shù)?？诜靡后w劑型包括藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿和酏劑。 除了活性化合物之外，液體劑型可以含有本領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑，例如水或其它溶 劑；增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、 1，3_ 丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝 麻油)、甘油、四氫慷醇、聚乙二醇和脫水山梨醇的脂肪酸酯；和其混合物。除惰性稀釋劑以 外，口服組合物還可以包含佐劑，例如濕潤劑、乳化和懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑?？梢园凑毡绢I(lǐng)域已知的方法，使用合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配制注射制 劑，例如無菌注射水性或油性混懸劑。無菌注射制劑還可以是在無毒的胃腸外可接受的稀 釋劑或溶劑中的無菌注射溶液劑、混懸劑或乳劑，例如在1，3_ 丁二醇中的溶液。在可接受 的賦形劑和溶劑之中，可以使用的是水、林格氏溶液、U.S. P.和等滲氯化鈉溶液。另外，無 菌的不揮發(fā)性油通常規(guī)用作溶劑或懸浮介質(zhì)。對于這種目的，可以使用任何溫和的不揮發(fā) 性油，包括合成的單或二甘油脂。此外，脂肪酸(例如油酸)用于注射制劑中。可以用以下方式將注射制劑滅菌例如通過截留細(xì)菌的過濾器 (bacterial-retaining filter)進(jìn)行過濾，或通過向使用前可被溶于或分散于無菌水和其 它無菌注射用介質(zhì)的無菌固體組合物形式中并入滅菌劑。為了延長藥物效果，減緩皮下或肌內(nèi)注射的藥物的吸收常常是合意的。這可以通 過使用具有差的水溶解性的晶體或無定形物質(zhì)的液體懸浮液來實現(xiàn)。藥物的吸收速率取決 于它的溶解速率，溶解速率又取決于晶體大小和結(jié)晶形式。或者，通過將藥物溶解或懸浮在 油性賦形劑中來實現(xiàn)胃腸外給予的藥物形式的延遲吸收?？赏ㄟ^如下方式制備長效注射劑 型在可生物降解的聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成藥物的微膠囊基質(zhì)。根據(jù) 藥物與聚合物的比率和所使用具體聚合物的性質(zhì)，可以控制藥物的釋放速率。其它可生物 降解的聚合物的例子包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。還可以通過將藥物包埋在可與身體 組織相容的脂質(zhì)體或微乳液中來制備長效注射制劑?？梢酝ㄟ^將本發(fā)明的化合物與合適的無刺激性賦形劑或載體混合來制備用于直 腸或陰道給藥的組合物(優(yōu)選栓劑)，所述賦形劑或載體例如可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟， 其在環(huán)境溫度下是固體，但在體溫下是液體，因此在直腸或陰道中熔化，并釋放活性化合 物?？诜霉腆w劑型包括膠囊、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在此類固體劑型中，活性
27化合物與至少一種惰性的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體混合，所述賦形劑或載體例如檸檬 酸鈉或磷酸氫鈣和/或下列物質(zhì)a)填料或增量劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇 和硅酸；b)粘合劑，例如羧甲纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠； c)保濕劑，例如甘油；d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸 鹽和碳酸鈉；e)溶液阻滯劑，例如鏈烷烴；f)吸收促進(jìn)劑，例如季銨化合物；g)濕潤劑，例 如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；h)吸附劑，例如高嶺土和膨潤土 ；和i)潤滑劑，例如滑石粉、 硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和其混合物。在膠囊、片劑和丸劑的情況 下，所述劑型還可以包含緩沖劑。相似類型的固體組分也可在采用諸如乳糖或奶糖(milk sugar)以及高分子量聚 乙二醇等之類的賦形劑的軟和硬填充明膠膠囊中用作填充劑。活性化合物還可以是與一種或多種如上所述賦形劑的微膠囊形式。可以用包衣和 包殼(shell)(例如腸溶包衣、控制釋放包衣及藥物配制領(lǐng)域眾所周知的其它包衣)來制備 固體劑型片劑、糖錠、膠囊、丸劑和顆粒劑。在此類固體劑型中，活性化合物可以與至少一種 惰性稀釋劑例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。如同在正常實踐中，此類劑型還可以包含不同于惰 性稀釋劑的另外物質(zhì)，例如壓片潤滑劑和其它壓片助劑，例如硬脂酸鎂和微晶纖維素。在膠 囊、片劑和丸劑的情況下，所述劑型還可以包含緩沖劑。它們可以任選含有遮光劑，還可以 是任選以延遲方式僅僅在腸道的某一部分或優(yōu)先在腸道的某一部分釋放一種或多種活性 成分的組合物?？梢允褂玫陌窠M分的例子包括聚合物和蠟。用于局部或透皮給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、糊劑、乳膏劑、洗劑、凝 膠劑、散劑、溶液劑、噴霧劑、吸入劑或貼劑。將活性組分與藥學(xué)上可接受的載體和任何需要 的防腐劑或可能需要的緩沖劑在無菌條件下混合。眼科制劑、滴耳劑、眼膏、散劑和溶液劑 也考慮在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。除了本發(fā)明的活性化合物之外，軟膏劑、糊劑、乳膏劑和凝膠劑還可含有賦形劑， 例如動物和植物脂肪、油、蠟、鏈烷烴、淀粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅氧烷、膨潤 土、硅酸、滑石粉和氧化鋅或其混合物。除了本發(fā)明化合物之外，散劑和噴霧劑還可以包含賦形劑，例如乳糖、滑石粉、硅 酸、氫氧化鋁、硅酸鈣和聚酰胺粉末或這些物質(zhì)的混合物。噴霧劑可以另外含有常用的推進(jìn) 劑，例如氯氟烴。透皮貼劑具有以控制遞送方式向身體提供化合物的額外優(yōu)點?？梢酝ㄟ^將化合物 溶解或分散在適當(dāng)介質(zhì)中來制備此類劑型。吸收增強(qiáng)劑還可以用于增加化合物穿過皮膚的 通量?？赏ㄟ^提供速率控制膜或通過將化合物分散在聚合物基質(zhì)或凝膠中，來控制速率。抗病毒活性本發(fā)明化合物的抑制量或劑量可以為大約0. 01mg/Kg至大約500mg/Kg，或者從大 約1至大約50mg/Kg。抑制量或劑量還將根據(jù)給藥途徑以及與其它藥劑共同使用的可能性 而變化。根據(jù)本發(fā)明的治療方法，通過給予受治療者抗丙型肝炎病毒有效量或抑制量的本 發(fā)明化合物，以獲得所需要的結(jié)果所必需的量和時間，在受治療者(例如人或低級哺乳動 物)中治療或預(yù)防病毒感染。本發(fā)明的另外方法是用抑制量的本發(fā)明化合物或組合物，以 獲得所需要的結(jié)果所必需的量和時間，來處理生物樣品。
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本文使用的術(shù)語本發(fā)明化合物的“抗丙型肝炎病毒有效量”是指足以降低生物樣 品或受治療者中的病毒載量(例如導(dǎo)致病毒載量降低至少10%，優(yōu)選至少50%，更優(yōu)選至 少80%，最優(yōu)選至少90%或95% )的化合物的量。如醫(yī)學(xué)領(lǐng)域所充分理解的，本發(fā)明化合 物的抗丙型肝炎病毒有效量將處于適用于任何醫(yī)學(xué)治療合理的益處/風(fēng)險比率。術(shù)語本發(fā)明化合物的“抑制量”是指足以降低生物樣品或受治療者中的丙型肝炎 病毒載量(例如導(dǎo)致病毒載量降低至少10%，優(yōu)選至少50%，更優(yōu)選至少80%，最優(yōu)選至 少90%或95%)的量。應(yīng)理解，當(dāng)給予受治療者所述抑制量的本發(fā)明化合物時，該量將處 于適用于由醫(yī)生確定的任何醫(yī)學(xué)治療的合理的益處/風(fēng)險比率。本文使用的術(shù)語“生物樣 品”是指有意給予受治療者的生物來源的物質(zhì)。生物樣品的例子包括但不限于血液及其組 分，例如血漿、血小板、血細(xì)胞亞群等等；器官，例如腎臟、肝臟、心臟、肺等等；精子和卵子； 骨髓及其組分；或干細(xì)胞。因此，本發(fā)明的另一個實施方案是通過使所述生物樣品與抑制量 的本發(fā)明的化合物或藥物組合物接觸來處理生物樣品的方法。一旦受治療者的病癥得到改善，如果需要，可給予維持劑量的本發(fā)明的化合物、組 合物或組合。隨后可隨著癥狀變化而將給藥劑量或頻率或兩者降低至保持癥狀改善的水 平，當(dāng)癥狀已經(jīng)減輕至所需要的水平時，應(yīng)停止治療。然而，一旦疾病癥狀出現(xiàn)任何復(fù)發(fā)，受 治療者可能需要基于長期的間歇治療。然而，應(yīng)理解，本發(fā)明化合物和組合物的總的日用量將由主治醫(yī)師在合理的醫(yī)學(xué) 判斷范圍內(nèi)決定。用于任何特定患者的具體抑制劑量取決于各種因素，包括所治療的病 癥和該病癥的嚴(yán)重性；所使用的具體化合物的活性；所使用的具體組合物；患者的年齡、體 重、一般健康情況、性別和飲食；所使用的具體化合物的給藥時間、給藥途徑和排泄速度； 治療持續(xù)時間；與所使用的具體化合物聯(lián)合或同時使用的藥物；和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域眾所周知的類 似因素。以單劑量或分次劑量形式給予受治療者的本發(fā)明化合物的總的每日抑制劑量可 以是例如0. 01至50mg/kg的量，或更通常是0. 1至25mg/kg體重的量。單劑量組合物可以 含有構(gòu)成日劑量的此類量或其約數(shù)。通常，根據(jù)本發(fā)明的治療方案包括每天以單劑量或多 劑量給予需要此類治療的患者大約10mg至大約lOOOmg的本發(fā)明化合物。除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常已知 的含義一致。本文中提及的所有的出版物、專利、公開的專利申請及其它參考文獻(xiàn)通過引用 整體并入本文。MM在方案和實施例的描述中所用的縮寫如下ACN表示乙腈；BME表示2-巰基乙醇；B0P表示苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)鱗六氟磷酸鹽；COD表示環(huán)辛二烯；DAST表示二乙氨基三氟化硫；DABCYL表示6-(N-4'-羧基_4_ ( 二甲氨基)偶氮苯)-氨基己基-1_0_ (2-氰基 乙基)-(N, N- 二異丙基)-亞磷酰胺；DCM表示二氯甲烷；
DIAD表示偶氮二羧酸二異丙酯；DIBAL-H表示二異丁基氫化鋁；DIEA表示二異丙基乙胺；DMAP表示N，N- 二甲基氨基吡啶；DME表示乙二醇二甲醚；DMEM 表示 Dulbecco' s 改進(jìn)的 Eagle 培養(yǎng)基；DMF表示N，N_ 二甲基甲酰胺；DMS0表示二甲亞砜；EDANS表示5- (2_氨基-乙氨基)_萘磺酸；EDCI或EDC表示1- (3- 二乙基氨基丙基)_3_乙基碳化二亞胺鹽酸鹽；EtOAc表示乙酸乙酯；HATU表示0-(7_氮雜苯并三唑-1-基)_N，N，N' , N'-四甲基脲六氟磷酸鹽；HoVeyda' s Cat.表示二氯(0_異丙氧基苯基亞甲基)(三環(huán)己基膦)釕(II)；KHMDS是二(三甲基甲硅烷基)氨基鉀；Ms表示甲磺酰基；NMM表示N-4-甲基嗎啉；PyBrOP表示溴-三-吡咯烷基-鱗六氟磷酸鹽；Ph表示苯基；RCM表示閉環(huán)復(fù)分解；RT表示逆轉(zhuǎn)錄；RT-PCR表示逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；TBAF表示四丁基氟化銨；TEA表示三乙基胺；TFA表示三氟乙酸；THF表示四氫呋喃；TLC表示薄層色譜；TPP或PPh3表示三苯基膦；tBOC或Boc表示叔丁氧基羰基；和Xantphos表示4，5-雙-二苯基膦烷基_9，9- 二甲基-9H-咕噸(4， 5-Bis-diphenylphosphanyl-9,9-dimethyl-9H-xanthene)。合成方法結(jié)合下列舉例說明可制備本發(fā)明化合物的合成方案和方法可以更好地理解本發(fā) 明的化合物和方法。方案1
30 從共同的中間體丄-6制備所有喹喔啉類似物。方案1中概述了化合物丄_6的合成。 用HC1在二噁烷中將市售的Boc-羥脯氨酸丄-1脫保護(hù)，然后使用HATU與酸丄_2偶合，得到 中間體丄-3?？梢允褂闷渌心┒讼N的氨基酸衍生物來代替丄_2，以便生成各種大環(huán)結(jié) 構(gòu)(關(guān)于進(jìn)一步細(xì)節(jié)，參見W0/0059929)。用LiOH將丄_3水解，然后使隨后的肽與含有環(huán) 丙基的胺丄-4偶合，得到三-肽丄-5。最后，用基于釕的催化劑(例如二氯(0-異丙氧基苯 基亞甲基)(三環(huán)己基膦)釕(II))進(jìn)行閉環(huán)復(fù)分解，得到所需要的關(guān)鍵中間體丄_6(關(guān)于 閉環(huán)復(fù)分解的進(jìn)一步細(xì)節(jié)，參見最近的綜述Grubbs等人，Acc. Chem. Res.，1995，28，446 ； Shrock 等人，Tetrahedron 1999，55,8141 ；Furstner, A. Angew. Chem. Int. Ed. 2000，39， 3012 ；Trnka 等人，Acc. Chem. Res. 2001，34，18 ；和 Hoveyda 等人，Chem. Eur. J. 2001，7，945)。方案2 經(jīng)由一些不同的合成路線制備本發(fā)明的喹喔啉類似物。示于方案2中的一種方法 是通過使用三信(Mitsimobu)條件將市售的2-噻吩基-1H-喹喔啉-2-酮縮合。關(guān)于三信反 應(yīng)的進(jìn)一步細(xì)節(jié)，參見 0. Mitsunobu, Synthesis 1981，1-28 ；D. L. Hughes, Org. React. 29， 1-162(1983)。某些合成步驟的替代方法描述在序列號為12/271，144的美國專利申請中， 通過引用將其內(nèi)容整體并入本文。方案3
31 可以通過如下方法制備游離胺中間體2-1 用合適的酸(例如HC1)處理化合物 2-1，然后通過在RT或高溫下將酸置于偶合試劑(即⑶I、HATU、DCC、EDC等等)中進(jìn)行酰 胺偶合，隨后在堿的存在下加入相應(yīng)的磺酰胺R-C0-0H，其中R如前面所定義。在不存在偶 合試劑的情況下，可以使用?；却鍾-C0-0H。隨后用試劑(例如LiOH)將乙酯水解，提 供化合物2-1。方案4 通過如下方式，從相應(yīng)的酸2-1制備磺酰胺1-1 在RT或在高溫下，將酸置于 偶合試劑(即CDI、HATU、DCC、EDC等等)中，隨后在堿的存在下加入相應(yīng)的磺酰胺環(huán)丙 基-S (0) 2-NH2，其中R如前面所定義。本文引用的所有參考文獻(xiàn)，無論是印刷品、電子形式、計算機(jī)可讀性存儲介質(zhì)形式 (computer readable storage media)或其它形式，都通過引用將以其整體明確并入本文， 包括但不限于摘要、文章、期刊、出版物、教科書、論文、國際互連網(wǎng)網(wǎng)址、數(shù)據(jù)庫、專利和專 利出版物。結(jié)合下列實施例將更好地理解本發(fā)明的化合物和方法，這些實施例只是為了舉例 說明而并非為了限制本發(fā)明的范圍。所公開的實施方案的各種變化和修飾對于本領(lǐng)域技術(shù) 人員是顯而易見的，可在不偏離本發(fā)明的精神和所附權(quán)利要求的范圍的情況下做出此類變 化和修飾，其非限制性地包括與本發(fā)明的化學(xué)結(jié)構(gòu)、取代基、衍生物、制劑和/或方法有關(guān) 的那些。按照共同待審的美國申請no. 11/768，723中所描述的類似程序制備化合物1_50。
向化合物 A(30. 0mg，0. 044謹(jǐn)ol)、5-甲基異噁唑 _3_ 羧酸(5. 6mg，0. 044mmol) 和HATU(21.9mg，0. 057mmol)的二氯甲烷(1. lmL)溶液中加入二異丙基乙胺(8. 9mg， 0. 069mmol)。在25°C下攪拌反應(yīng)混合物2小時，然后在1NHC1和乙酸乙酯之間分配。用無水 硫酸鎂干燥有機(jī)層，過濾，蒸發(fā)。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(22. lmg，64% 產(chǎn)率)。 MS (ESI) :m/z = 788. 0 [M+H]。 實施例2.式B的化合物,其中
(化合物19)使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用1-甲基-1H-吡唑-3-羧酸替代5-甲基 異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(64%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 797. 1 [M+H]。 實施例3.式B的化合物，其中 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用異煙酸替代5-甲基異噁唑-3-羧酸。用 反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(39%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 751. 1 [M+H]。實施例4.式B的化合物,其中^
R= s使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用噻唑-4-羧酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(66%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 789. 9 [M+H]。
(化合物5)
33 實施例5.式B的化合物，其中 |f J /使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用吡嗪-2-羧酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(44%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 785. 0 [M+H]。實施例6.式B的化合物,其中 NT / (化合物了) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用6-甲基煙酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(65%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 798. 0 [M+H]。 實施例7.式B的化合物,其中J 、…(化合物6) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用2，4-二甲基噻唑-5-羧酸替代5-甲基 異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(60%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 817.9[M_H]。 實施例8.式B的化合物，其中/T^V (化合物1)
n- 、N
iV一u使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用1H-吡唑-4-羧酸替代5-甲基異噁 唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(24%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 773. 1 [M+H]。
O實施例9.式B的化合物，其中 N^(化合物3)使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用噠嗪-4-羧酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(38%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 785. 0 [M+H]。
O實施例10.式B的化合物，其中(化合物2)
R= ,使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用5-甲基吡嗪-2-羧酸替代5-甲基異噁 唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(38%產(chǎn)率)。
34
MS (ESI) :m/z = 799. 0 [M+H]。實施例11.式B的化合物,其中jf^f ^ (化合物24)
R= F使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用4-氟苯甲酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(40%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 801.0 [M+H]。實施例12.式B的化合物,其中YT > (化合物23) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用4-氟苯甲酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(45%產(chǎn)率)。 實施例13.式B的化合物,其中 [p^p / (化合物22)使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用2-氟苯甲酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(65%產(chǎn)率)。 實施例14.式B的化合物，其中 JrX ^ (化合物27) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用3-甲基異噁唑-4-羧酸替代5-甲基異 噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(23%產(chǎn)率)。
實施例15.式B的化合物,其中 N化合物32)使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用1，3，5_三甲基-1H-吡唑-4-羧酸替代 5_甲基異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(54%產(chǎn)率)。 實施例16.式B的化合物,其中 )r\y (化合物25) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用3，5-二甲基異噁唑-4-羧酸替代5-甲 基異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(73%產(chǎn)率)。
MS (ESI) :m/z = 802. 0 [M+H]。實施例17.式B的化合物,其中
(化合物8)使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用6-甲基吡啶甲酸替代5-甲基異噁 唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(62%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 798. 0 [M+H]。實施例18.式B的化合物,其中
(化合物30)使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用3，5_ 二甲基-1H-吡唑-4-羧酸替代 5_甲基異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(66%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 800. 9 [M+H]。實施例19.式B的化合物,其中
(化合物13)使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用嘧啶-4-羧酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(63%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 785. 0 [M+H]。 實施例20.式B的化合物,其中
(化合物19) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸替代5-甲基 異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(70%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 797. 1 [M+H]。實施例21.式B的化合物，其中
化合物33)使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用3-異丙基異噁唑-5-羧酸替代5-甲基 異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(54%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 816. 0 [M+H]。
實施例22.式B的化合物,其中 J \ \ (化合物34)使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用4，5，6，7-四氫苯并[d]異噁唑_3_羧酸 替代5-甲基異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(51%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 828. 0 [M+H]。 實施例23.式B的化合物,其中V^N (化合物18) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用3-甲基吡啶甲酸替代5-甲基異噁 唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(63%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 798. 1 [M+H]。 實施例24.式B的化合物,其中I ^ (化合物10) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用2-甲基煙酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(54%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 798. 0 [M+H]。 實施例25.式B的化合物，其中1 . ^ (化合物21) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用煙酸替代5-甲基異噁唑-3-羧酸。用反 相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(75%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 784. 0 [M+H]。實施例26.式B的化合物,其中(\ i ^ (化合物20) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用吡啶甲酸替代5-甲基異噁唑-3-羧酸。 用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(66%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 784. 0 [M+H]。
實施例27.式B的化合物，其中 n^ , ^ (化合物12)
R=使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用6-羥基吡啶甲酸替代5-甲基異噁 唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(52%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 800. 0. 0 [M+H]。 實施例28.式B的化合物,其中^ t Z (化合物15) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用4-甲基煙酸替代5-甲基異噁唑-3-羧 酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(68%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 798. 1 [M+H]。實施例29.式B的化合物,其中\(zhòng)\(化合物11) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用2-氟煙酸替代5-甲基異噁唑-3-羧酸t(yī) 用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(71%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 802. 0 [M+H]。 實施例30.式B的化合物,其中 { VN 1 ^ (化合物31) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用3，5- 二甲基-1-苯基-IH-吡唑_4_羧 酸替代5-甲基異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(43%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 876. 8 [M+H]。 實施例31.式B的化合物，其中 NI) ^ (化合物9) 使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用2-苯基噻唑-4-羧酸替代5-甲基異噁 唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(63%產(chǎn)率)。
MS (ESI) :m/z = 866. 9 [M+H]。其中噻吩被取代的喹喔啉化合物的制備程序。
實施例32.式D的化合物，其中 實施例32a.將化合物C(4. Og, 5. 6Immol ；在堿的存在下，通過相應(yīng)的羥脯氨酸 衍生物與對溴苯磺酰氯的反應(yīng)來制備)、3_氯喹喔啉-2-醇(1. 22g，6. 74mmol)和碳酸銫 (4. 57g，14. Ommol)在NMP(HmL)中的混合物在70°C下加熱18小時。然后將反應(yīng)混合物傾 入IN HCl溶液中，并用乙酸乙酯萃取。用飽和氯化鈉洗滌合并的有機(jī)層，用無水硫酸鎂干 燥，過濾，蒸發(fā)。對殘余物進(jìn)行硅膠色譜純化，得到所需要的產(chǎn)物32a(l. 8g，49%產(chǎn)率)。實施例32b.將實施例32a中制備的化合物(25mg，0. 038mmol)、2_(三丁基甲錫烷 基)噻唑(28. 5mg，0. 076mmol)、四(三苯基膦)鈀(4. 4mg，0. 0038mmol)和二噁烷(0. 24mL) 的混合物用氮氣流脫氣，然后在微波反應(yīng)器(300W)中，于110°C加熱1小時。然后將反應(yīng)混 合物冷卻至室溫，用氯仿稀釋，通過硅藻土過濾，減壓蒸發(fā)。用硅膠色譜純化殘余物，得到所 需要的產(chǎn)物32b (24mg, 89%產(chǎn)率)。實施例32c.在50°C下，將實施例32b的產(chǎn)物(24mg，0. 034mmol)和氫氧化鋰 (5. 7mg，0. 136mmol)在THF (0. 2mL)、乙醇(0. ImL)和水(0. ImL)的混合物中的溶液攪拌1
39小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用IN HCl洗滌。用無水硫酸鎂干燥有 機(jī)層，過濾，減壓蒸發(fā)。殘余物未經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。實施例32.在40°C下，將實施例32c的產(chǎn)物(28. Omg,0. 041mmol)和羰基二咪唑 (10. Img, 0. 062eq)在二氯乙烷(0. 5mL)中的混合物攪拌2小時。向該混合物中加入環(huán)丙磺 酰胺(7. 5mg，0. 062讓01)，而后加入08^9. 5mg，0. 062mmol)。在40°C下攪拌混合物1小時， 然后冷卻至室溫。將混合物在氯仿和IN HCl之間分配，并將所得有機(jī)層用飽和氯化鈉水溶 液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。用硅膠色譜純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(12mg， 37%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 780. 1 [M+H]。實施例33.式D的化合物,其中
(化合物45)實施例33a.按照實施例32b的程序制備標(biāo)題化合物，用2_(三丁基甲錫烷基)噁 唑替代2-(三丁基甲錫烷基)噻唑。實施例33b.按照實施例32c的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例33a的產(chǎn)物替代實 施例32b的產(chǎn)物。實施例33.按照實施例32的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例33b的產(chǎn)物替代實施 例32c的產(chǎn)物。MS(ESI) :m/z = 764. 2 [M+H]。實施例34.式D的化合物,其中
(化合物47)實施例34a.按照實施例32b的程序制備標(biāo)題化合物，用2_(三丁基甲錫烷基)呋 喃替代2-(三丁基甲錫烷基)噻唑。實施例34b.按照實施例32c的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例34a的產(chǎn)物替代實 施例32b的產(chǎn)物。實施例34.按照實施例32的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例34b的產(chǎn)物替代實施 例32c的產(chǎn)物。MS(ESI) :m/z = 763. 2 [M+H]。實施例35.式D的化合物，其中
(化合物46)實施例35a.按照實施例32b的程序制備標(biāo)題化合物，用1_甲基_2_(三丁基甲錫 烷基)-IH-吡咯替代2-(三丁基甲錫烷基)噻唑。實施例35b.按照實施例32c的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例35a的產(chǎn)物替代實 施例32b的產(chǎn)物。實施例35.按照實施例32的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例35b的產(chǎn)物替代實施 例32c的產(chǎn)物。MS (ESI) :m/z = 776. 1 [M+H]。 實施例36.式D的化合物,其中 實施例36a.按照實施例32b的程序制備標(biāo)題化合物，用2_(三丁基甲錫烷基)苯 并[d]噻唑替代2-(三丁基甲錫烷基)噻唑。實施例36b.按照實施例32c的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例36a的產(chǎn)物替代實 施例32b的產(chǎn)物。實施例36.按照實施例32的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例36b的產(chǎn)物替代實施 例32c的產(chǎn)物。MS (ESI) :m/z = 830. 0 [M+H]。 實施例37.式D的化合物,其中V^N夕(化合物50) 實施例37a.按照實施例32b的程序制備標(biāo)題化合物，用2_(三丁基甲錫烷基)吡 啶替代2-(三丁基甲錫烷基)噻唑。實施例37b.按照實施例32c的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例37a的產(chǎn)物替代實 施例32b的產(chǎn)物。實施例37.按照實施例32的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例37b的產(chǎn)物替代實施 例32c的產(chǎn)物。MS(ESI) :m/z = 774. 2 [M+H]。實施例38.式D的化合物,其中L II (化合物39)
R=實施例38a.將實施例32a中制備的化合物(50mg，0. 076mmol)、4_叔丁基苯基硼 酸(48. 8mg，0. 274mmol)、鈀催化劑 FC1007(63. 5mg，0. 36mmol/g,0. 023mmol)、1M 碳酸鉀水 溶液(0.084mL，0.084mmol)和乙腈(0. 7mL)的混合物用氮氣流脫氣，然后在微波反應(yīng)器 (300W)中，于130°C加熱30分鐘。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用氯仿稀釋，通過硅藻土 過濾，減壓蒸發(fā)。用硅膠色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物38a(29mg，51%產(chǎn)率)。實施例38b.按照實施例32c的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例38a的產(chǎn)物替代實 施例32b的產(chǎn)物。實施例38.按照實施例32的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例38b的產(chǎn)物替代實施 例32c的產(chǎn)物。MS (ESI) :m/z = 829. 1 [M+H]。 實施例39.式D的化合物,其中V"^^ (化合物38)
R= 實施例39a.按照實施例38a的程序制備標(biāo)題化合物，用4_氟苯基硼酸替代2_ (
41
丁基甲錫烷基)噻唑。實施例39b.按照實施例32c的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例39a的產(chǎn)物替代實 施例32b的產(chǎn)物。實施例39.按照實施例32的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例39b的產(chǎn)物替代實施 例32c的產(chǎn)物。MS (ESI) :m/z = 791. 1 [M+H]。 實施例40.式D的化合物,其中V"^^ (化合物40) 實施例40a.按照實施例38a的程序制備標(biāo)題化合物，用吡啶_4_基硼酸替代 2_(三丁基甲錫烷基)噻唑。實施例40b.按照實施例32c的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例40a的產(chǎn)物替代實 施例32b的產(chǎn)物。實施例40.按照實施例32的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例40b的產(chǎn)物替代實施 例32c的產(chǎn)物。MS (ESI) :m/z = 774. 1 [M+H]。
,Vv^ A實施例41.式B的化合物,其中O ^oJ^J (化合物4)
也0使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用(R)-4-(芐氧基)-2-(芐氧基羰基氨 基)-4-氧代丁酸替代5-甲基異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn) 物(69%產(chǎn)率)。MS(ESI) :m/z = 1017. 4[M+H] 實施例42.式B的化合物,其中(化合物16)
趙。T使用實施例1的程序制備標(biāo)題化合物，用(S)-4_氨基_2-(叔丁氧羰基氨 基)-4_氧代丁酸替代5-甲基異噁唑-3-羧酸。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn) 物(12%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 892. 9 [M+H]。
/^-S O實施例43.式B的化合物,其中(化合物36)
R=H r^將化合物A (30. Omg, 0. 044mmol)和 2-異氰酰-4-甲基噻吩(6. 8mg，0. 049mmol) 的在二氯甲烷(l.lmL)中的溶液于25°C攪拌2小時，然后在水和乙酸乙酯之間分配。用無 水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過濾，蒸發(fā)。用反相色譜純化殘余物，得到所需要的產(chǎn)物(9. 6mg,27%
產(chǎn)率)。
42
MS (ESI) :m/z = 817. 9 [M+H]。 實施例44.式D的化合物,其中
(化合物48) 實施例44a.在50°C下，將實施例32a中制備的化合物(110mg，0. 168mmol)和氫氧 化鋰(28. 2mg，0. 671mmol)在THF(ImL)、甲醇(0. 5mL)和水(0. 5mL)中的混合物攪拌1小 時。然后將混合物在乙酸乙酯和IN HCl之間分配，并將有機(jī)層用飽和氯化鈉水溶液洗滌， 用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸發(fā)。殘余物未經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。(100mg，96%產(chǎn)率)。實施例44.按照實施例32的程序制備標(biāo)題化合物，用實施例44a的產(chǎn)物替代實施 例32c的產(chǎn)物。MS(ESI) :m/z = 727. 2 [M+H]。實施例45.下列方案用于制備實施例45 (化合物48)。 實施例45b.將化合物 45a (1. 25g, 1. 725mmol)溶于 THF (5. 75mL)、EtOH(2. 87mL) 和水(2.87mL)中。加入氫氧化鋰一水合物(0. 217g，5. 17mmol)，并在室溫下攪拌該溶液過 夜。用水稀釋反應(yīng)混合物，通過加入HCl (2N)進(jìn)行酸化。將所得油狀固體超聲處理，并將所 得粉末過濾，用水沖洗，干燥。該物質(zhì)(0. 908g，76%產(chǎn)率)未經(jīng)進(jìn)一步純化而在下一步中使用。實施例45c.將實施例45b的產(chǎn)物(908mg, 1. 303mmol)溶于二氯乙烷(13mL)中， 用羰基二咪唑(317mg，1.955mm0l)處理，并加熱到50°C，保持1小時。加入環(huán)丙磺酰胺 (395mg，3. 26mmol)，而后加入 DBU(0. 295mL, 1. 955mmol)。將反應(yīng)混合物加熱到 50°C，保持 1 小時，然后在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物用2N HCl稀釋，用乙酸乙酯萃取。用無水硫 酸鎂干燥有機(jī)層，過濾，濃縮。用硅膠色譜純化殘余物，得到化合物45c (0. 94g，90%產(chǎn)率)。實施例45d.將7-溴喹喔啉-2-醇(100mg，0. 444mmol)、2_氟苯基硼酸(124mg， 0. 889mmol)、二環(huán)己基(2'，6' - 二甲氧基聯(lián)苯 _2_ 基)膦(7. 30mg，0. 018mmol)和二乙酰 氧基鈀(1.995mg，8.89ymol)加入到微波管瓶中，并用乙醇(400 μ 1)稀釋。將該混合物用2M碳酸鈉(222μ 1,0. 444mmol)處理，并在微波反應(yīng)器(300W)中加熱到100°C，保持1. 5小 時。將反應(yīng)混合物用水稀釋，用二氯甲烷萃取。用無水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過濾，減壓蒸發(fā)。 用硅膠色譜純化殘余物，得到化合物45d(0. 030g，28%產(chǎn)率)。實施例45e.將實施例45c的產(chǎn)物(30mg，0. 038mmol)溶于DMF (375 μ 1)中，并用 碳酸銫(13. 44mg，0. 041mmol)和 7-(2-氟苯基)喹喔啉 _2 (IH)-酮(18. 02mg，0. 075mmol， 實施例45d)處理。將反應(yīng)混合物加熱至80°C，保持2小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，在 氮氣流下蒸發(fā)溶劑。用反相色譜純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(7.0!1^，23%產(chǎn)率)。MS (ESI) :m/z = 803. 1 [M+H]。實施例46.式D的化合物,其中R = H(化合物42)使用實施例45的程序制備標(biāo)題化合物，用喹喔啉_2 (IH)-酮替代7_(2_氟苯基) 喹喔啉-2(1H)_酮。用反相色譜純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(5mg，28%產(chǎn)率)。MS(ESI) :m/z = 709. 2 [M+H]。本發(fā)明化合物顯示出對抗HCV NS3蛋白酶的有效抑制性能。下列實施例描述了其 中可測試本發(fā)明化合物的抗HCV效果的試驗。實施例47. NS3/NS4a蛋白酶試騎使用內(nèi)部猝滅的熒光底物來試驗HCV蛋白酶活性和抑制。將DABCYL和EDANS基 團(tuán)連接于短肽的相反末端。用蛋白酶剪切解除由DABCYL基團(tuán)對EDANS熒光的猝滅。使用 355nm的激發(fā)波長和485nm的發(fā)射波長，用Molecular Devices Fluoromax (或等效物)測 定熒光。本試驗在Corning 白色半?yún)^(qū)域(half-area)96 孔板(VffR 29444-312[Corning 3693])中進(jìn)行，使用NS4A輔因子束縛的全長NS3HCV蛋白酶Ib (最終酶濃度1到 15nM)。試驗緩沖液補(bǔ)充有10 μ MNS4A輔因子P印4Α (Anaspec 25336或內(nèi)部制備 的(in-house), Mff 1424.8)。RET Sl (Ac-Asp-Glu-Asp (EDANS)-Glu-Glu-Abu-[C00] Ala-Ser-Lys-(DABCYL) -NH2, AnaSpec 22991, MW 1548. 6)用作熒光肽底物。試驗緩沖液含 有50mMfepes (pH7. 5)、30mM NaCl和IOmM BME。然后在不存在和存在抑制劑的條件下，在室 溫下進(jìn)行酶反應(yīng)超過30分鐘的時程。肽抑制劑HCV Inh 1 (Anaspec 25345,MW 796. 8) Ac-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-O H[-200C ] ^P HCV Inh 2 (Anaspec 25346,MW 913. 1) Ac-Asp-Glu-Dif-Cha-Cys-OH用作參考 化合物。使用ActivityBase (IDBS)中的 XLFit，使用方程式 205，計算 IC50 值y = A+((B-A)/(1+((C/X)"D)))。實施例48-基于細(xì)胞的復(fù)制子試驗使用Huh 11-7細(xì)胞系來實現(xiàn)HCV復(fù)制子RNA的定量(基于HCV細(xì)胞的試驗(Cell Based Assay)) (Lohmann 等人，Science 285:110-113,1999)。以 4x103 個細(xì)胞 / 孔將細(xì) 胞接種在96孔板中，并加入含有DMEM(高糖)、10%胎牛血清、青霉素-鏈霉素和非必需氨 基酸的培養(yǎng)基。將細(xì)胞在7. 5% CO2培養(yǎng)箱中于37°C孵育。在孵育期結(jié)束時，使用Ambion RNAqueous 96試劑盒(目錄號AM1812)從細(xì)胞中提取總RNA，并純化。為了擴(kuò)增HCV RNA 從而得到可以用HCV特異性探針(下面)檢測到足夠的物質(zhì)，使用TaqMan One-StepRT-PCR Master Mix試劑盒(Applied Biosystems目錄號4309169)，使HCV特異性引物(下面)通
44過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)介導(dǎo)HCV RNA的逆轉(zhuǎn)錄和cDNA的擴(kuò)增兩者。位于HCV基因組的 NS5B區(qū)域的RT-PCR引物核苷酸序列如下
HCV 正向引物“ RBNS5bfor ”5，GCTGCGGCCTGTCGAGCT(SEQ ID NO 1)HCV 反向引物 “ RBNS5Brev ”5， CAAGGTCGTCTCCGCATAC(SEQ ID NO 2)。使用Applied Biosystems (ABI)Prism 7500 序列檢測系統(tǒng)(SDS)來實現(xiàn) RT-PCR 產(chǎn)物的檢測，所述檢測系統(tǒng)檢測用熒光報道基因染料和猝滅劑染料標(biāo)記的探針在PCR反應(yīng) 期間分解時所發(fā)射的熒光。在PCR的每個循環(huán)期間測定熒光量的增加，其反映了 RT-PCR產(chǎn) 物的增加量。具體地說，定量基于閾值循環(huán)，其中擴(kuò)增圖穿過定義的熒光閾值。將樣品與 已知標(biāo)準(zhǔn)品的閾值循環(huán)進(jìn)行比較，提供對不同樣品中的相對模板濃度的高靈敏度測定(ABI UserBulletin#2,1997年12月11日)。使用ABI SDS程序版本1. 7分析數(shù)據(jù)。可通過使 用具有已知拷貝數(shù)的HCV RNA標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將相對模板濃度轉(zhuǎn)化為RNA拷貝數(shù)(ABI User Bulletin#2,1997 年 12 月 11 日)。使用下列標(biāo)記的探針來檢測RT-PCR產(chǎn)物5' FAM-CGAAGCTCCAGGACTGCACGATGCT-TAMRA(SEQ ID NO 3)FAM =熒光報道基因染料。TAMRA =猝滅劑染料。在48°C下進(jìn)行RT反應(yīng)30分鐘，而后進(jìn)行PCR。在ABI Prism 7500序列檢測系統(tǒng) 上，用于PCR反應(yīng)的熱循環(huán)儀參數(shù)是在95°C下一個循環(huán)，10分鐘，而后40個循環(huán)，每個循 環(huán)包括在95°C下持續(xù)15秒的一次孵育，和在60°C下持續(xù)1分鐘的第二次孵育。為了將數(shù)據(jù)歸一化為細(xì)胞RNA內(nèi)的內(nèi)部對照分子，在細(xì)胞信使RNA甘油醛_3_磷 酸脫氫酶(GAPDH)上進(jìn)行RT-PCR。在所用的細(xì)胞系中，GAPDH拷貝數(shù)十分穩(wěn)定。在相同 RNA樣品上進(jìn)行GAPDH RT-PCR，并從中測定HCV拷貝數(shù)。GAPDH引物和探針包含在ABI Pre-Developed TaqMan試驗試劑盒(目錄號4310884E)中。HCV/GAPDH RNA的比率用于計 算用來評價對HCV RNA復(fù)制的抑制作用的化合物活性。作為HCV復(fù)制的抑制劑的化合物在含有Huh-7細(xì)胞系的復(fù)制子中的活性(基于細(xì) 胞的試驗)。通過比較暴露于化合物的細(xì)胞與暴露于DMSO賦形劑的細(xì)胞(陰性對照)中歸 一化為GAPDH的HCV RNA的量(例如HCV/GAPDH的比率)，來測定特異性抗病毒化合物對 Huh-11-7細(xì)胞中HCV復(fù)制子RNA水平的影響。具體地說，以4xl03個細(xì)胞/孔將細(xì)胞接種在 96孔板中，并用下列培養(yǎng)基孵育1)含有DMS0(0%抑制對照)的培養(yǎng)基，或2)培養(yǎng)基 /含有固定濃度化合物的1 % DMS0。然后將上述96孔板在37°C下孵育4天(EC50測定)。 抑制百分比定義為% 抑制=100-100 * S/C1其中S =樣品中HCV RNA拷貝數(shù)/GAPDH RNA拷貝數(shù)的比率；Cl = 0%抑制對照(培養(yǎng)基/1 % DMS0)中HCV RNA拷貝數(shù)/GAPDHRNA拷貝數(shù)的比率。
通過以下方式產(chǎn)生抑制劑的劑量反應(yīng)曲線向孔中加入經(jīng)三個對數(shù)級(three logs)三倍連續(xù)稀釋的化合物，從具體化合物的最高濃度1. 5uM開始，以最低濃度0. 23nM 結(jié)束。如果EC50值在曲線上的位置不合適，則進(jìn)行進(jìn)一步的連續(xù)稀釋(例如500nM至 0. 08nM)。以使用 4-參數(shù)的非線性回歸擬合的 IDBS Activity Base program"XL Fit，，(#205 型，版本 4.2. 1，build 16)測定 EC50。在上述試驗中，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的代表性化合物具有HCV復(fù)制抑制活性和HCV NS3蛋 白酶抑制活性。這些化合物也有效抑制不同HCV基因型的HCVNS3蛋白酶，包括基因型1、2、 3 禾口 4。在上述試驗中，試驗了化合物1-50。發(fā)現(xiàn)本文公開的示例性化合物具有< = 0. 2nM-IOOnM的活性(在NS3/NS4a蛋白酶試驗中)，和< =0. 2nM-IOOnM的活性(在基于 細(xì)胞的復(fù)制子試驗中)。雖然關(guān)于各種優(yōu)選實施方案描述了本發(fā)明，但本發(fā)明無意局限于其中，相反本領(lǐng) 域技術(shù)人員將認(rèn)識到，在本發(fā)明的精神范圍和所附加權(quán)利要求的范圍之內(nèi)，可以對其進(jìn)行 變化和修改。
權(quán)利要求
式I或II的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥其中R選自Ar選自Z是叔丁基或環(huán)戊基；表示碳 碳單或雙鍵。FPA00001188867100011.tif,FPA00001188867100012.tif,FPA00001188867100021.tif,FPA00001188867100022.tif,FPA00001188867100023.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥，所述化合物由式III或 IV表示 其中R、Z和Ar如權(quán)利要求1中所定義。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其由式V表示，其中Ar和R描述于表1中
4.藥物組合物，其包含抑制量的權(quán)利要求1所述的化合物以及藥學(xué)上可接受的載體或 賦形劑。
5.治療受治療者中的病毒感染的方法，其包括給予受治療者抑制量的權(quán)利要求4所述 的藥物組合物。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述病毒感染是丙型肝炎。
7.抑制丙型肝炎病毒復(fù)制的方法，所述方法包括提供丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制量 的權(quán)利要求4所述的藥物組合物。
8.權(quán)利要求5的方法，其進(jìn)一步包括同時給予另外的抗丙型肝炎病毒藥劑。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述另外的抗丙型肝炎病毒藥劑選自α-干擾素、干擾素、利巴韋林和金剛化合物。
10.權(quán)利要求8的方法，其中所述另外的抗丙型肝炎病毒藥劑是丙型肝炎病毒解旋酶、 聚合酶、金屬蛋白酶或IRES的抑制劑。
11.權(quán)利要求4的藥物組合物，其進(jìn)一步包含另一種抗HCV藥劑。
12.權(quán)利要求4的藥物組合物，其進(jìn)一步包含選自下列的藥劑干擾素、利巴韋林、金剛 烷胺、另一種HCV蛋白酶抑制劑、HCV聚合酶抑制劑、HCV解旋酶抑制劑、或內(nèi)部核糖體進(jìn)入 位點抑制劑。
13.權(quán)利要求4的藥物組合物，其進(jìn)一步包含聚乙二醇化的干擾素。
14.權(quán)利要求4的藥物組合物，其進(jìn)一步包含另一種抗病毒、抗細(xì)菌、抗真菌或抗癌藥 劑或免疫調(diào)節(jié)劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I或II的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前藥其抑制絲氨酸蛋白酶活性，尤其丙型肝炎病毒(HCV)NS3-NS4A蛋白酶的活性。因此，本發(fā)明化合物干擾丙型肝炎病毒的生命周期，并且還用作抗病毒藥劑。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包含上述化合物的藥物組合物，用于給予患有HCV感染的受治療者。本發(fā)明還涉及通過給予包含本發(fā)明化合物的藥物組合物來治療受治療者中HCV感染的方法。
文檔編號A01N57/00GK101932242SQ200880126164
公開日2010年12月29日 申請日期2008年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月5日
發(fā)明者J·D·穆爾, 劉 東, 唐大同, 孫穎, 柯日新, 牛德強(qiáng), 王喆, 蓋永華, 許國友 申請人:益安藥業(yè)