專利名稱：丁基酸鈉的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及防霉劑技術領域，更具體地，涉及飼料防霉劑技術領 域，特別是指丁基酸鈉在祠料防霉中的應用。
背景技術：
飼料在儲存、運輸、銷售和使用過程中，由于飼料中水分的變化 和環(huán)境的影響，極易發(fā)生霉變，大量生長和繁殖的霉菌污染飼料，飼 料發(fā)霉和霉菌毒素中毒癥是世界范圍內(nèi)畜禽生產(chǎn)中普遍存在的嚴重問 題，控制飼料霉變是飼料生產(chǎn)中不可忽視的環(huán)節(jié)。
目前常用的防霉劑品種有丙酸和丙酸鹽、山梨酸及其鉀鹽、苯曱 酸及其鈉鹽和雙乙酸鈉等。這些防霉劑對保護飼料品質(zhì)、促進畜牧業(yè) 健康發(fā)展有著十分重要的作用，其經(jīng)濟和社會效益得到了人們的充分 肯定。但也存在一定的問題，如丙酸有剌激性氣味以及很強的腐蝕性，
受熱損失大，揮發(fā)快，使用不太方便；山梨酸及其鉀鹽防霉效果受pH值 的影響，pH值大于7.5時，幾乎無抑菌作用，對乳酸菌幾乎無效，在 水中易氧化，在塑料容器中其活性會降低，在空氣中不穩(wěn)定，能被氧 化著色，有吸濕性；苯曱酸及其鈉鹽對pH值要求很窄，只能在酸性條 件下發(fā)揮作用，pH值大于4時防霉作用開始下降，有苦澀等不良味道； 當飼料霉變嚴重時或雙乙酸鈉量達不到完全抑菌時，雙乙酸鈉它本身 可作為微生物的營養(yǎng)源反而促進了霉菌的生長，相應增加雙乙酸鈉的 量可完全抑菌，但又增加了防霉成本。
丁基酸鈉的最大特點是抗菌范圍廣，它通過滲透進入微生物的細 胞壁，干擾細胞內(nèi)各種酶體系而產(chǎn)生作用，主要抵抗常易使飼料、食 品、飲料中繁殖而引起的腐敗變質(zhì)的細菌、酵母菌、霉菌等微生物，
3特別是假單孢子菌、葡萄球菌和大腸桿菌。耐光耐熱性好，受酸堿度 影響較小，有效使用濃度較低，且水溶液穩(wěn)定，不會在加工過程中受 熱分解，或隨水蒸氣揮發(fā)，但是不清楚不同條件下丁基酸鈉對幾種霉 菌的抑制濃度，妨礙了 丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中作為防霉劑的應用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的就是針對以上存在的問題與不足，提供一種丁 基酸鈉在飼料防霉中的應用，該應用提供了不同條件下丁基酸鈉對幾 種霉菌的抑制濃度，為丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案如下 一種丁基酸鈉在飼料防霉中的應用，其特點是，用于防治黃曲霉、
煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變祠料中
提取的混合霉菌。
較佳地，所述丁基酸鈉對混合霉菌的最低抑菌濃度為62mg/kg。 較佳地，所述丁基酸鈉對黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為
62mg/kg。
較佳地，所述丁基酸鈉對枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮 刀菌的最低抑菌濃度為88mg/kg。
較佳地，經(jīng)12rC高溫處理30min后，所述丁基酸鈉的最低抑菌濃 度為62mg/kg。
較佳地，pH=5.5時所述丁基酸鈉的最低抑菌濃度為88mg/kg。 較佳地，pHN7.5時所述丁基酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。 本發(fā)明主要以防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀 菌或禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌為對象，提供了 丁基 酸鈉對幾種不同霉菌的最低抑菌濃度，以及不同pH條件下的最低抑菌 濃度，為丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎。
具體實施例方式
為更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面結合具體實施例作進一步說明。測定最低抑制溶度采用最低抑菌濃度(MIC)法，該方法根據(jù)防霉劑 能夠抑制霉菌生長的最低抑菌濃度來判斷防霉劑抑菌效果，抑菌濃度 愈低，防霉效果愈佳。
實施例中所用到的稀釋液0.85%生理鹽水，稱取分析NaC18.5g, 定容1000ml， 12rC高溫高壓滅菌30min。
實施例中還具體用到了下列三種培養(yǎng)基
① 高鹽察氏培養(yǎng)基硝酸鈉2g、磷酸二氫鉀lg、硫酸鎂 (MgS04.7H20) 0.5g、氯化鉀0.5g、硫酸亞鐵0.01g、氯化鈉60g、蔗糖
30g、瓊脂20g、蒸餾水1000ml;稀釋液0.85%生理鹽水。
② 查氏培養(yǎng)基蒸餾水1000ml、硝酸鈉3g、磷酸氫二鉀lg、硫酸 鎂0.5g、氯化鉀0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g、瓊脂15g。
③ 馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯去皮切成薄片，每200g馬鈴薯加自來 水1000ml，置電爐上80。C溫浸lh,用紗布過濾，稀釋到1000ml， 15磅 30min滅菌即為20。/。的馬鈴薯浸汁。每100ml馬鈴薯浸汁加葡萄糖2g，加 瓊脂1.5-2g, 15磅30min滅菌即得固態(tài)馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基。
這三種培養(yǎng)基的pH值調(diào)成4.5。 實施例l 丁基酸鈉對飼料中霉菌最低抑制溶度(MIC)測定 1.1制備霉菌孢子懸液
稱取有霉菌的雞飼料25g，該飼料購自南京農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 飼料加工實驗室，放入含有滅菌的生理鹽水250ml的三角瓶中，置振蕩 器上振蕩30min，用10ml移液管吸取10ml的上述帶霉菌的生理鹽水l: 10稀釋于25ml試管中，用洗耳球及l(fā)ml移液管反復吹吸50次，使霉菌孢 子分散開。取lml此帶霉菌的稀釋液加入9ml生理鹽水，充分混合得l: IOO帶霉菌的稀釋液。取l: lOO帶霉菌的稀釋液lml,力口到100ml滅菌生 理鹽水中，充分混合得l: IOOOO帶有霉菌的稀釋液(此稀釋液每毫升 含有霉菌菌落數(shù)大致100個)。
1.2制備含不同丁基酸鈉溶度的平板分別取防霉劑丁基酸鈉0.1g、 (U25g、 0.15g、 0,175g、 0.2g置于250ml 滅菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100ml，放置振蕩器30min取下， 置電爐上加溫至50。C左右3min 5min,使防霉劑的有效成分充分溶解， 分別加入無菌培養(yǎng)皿各lml,倒入約45。C滅菌的培養(yǎng)基①19ml，充分混 勻待其凝固后，最終溶度為40mg/Kg、 50mg/Kg、 60mg/Kg、 62mg/kg、 88mg/kg。同時設對照組，每組做兩個平板作重復。
1.3接種用移液槍加入步驟l.l制備的lmll: IOOOO帶霉菌的稀釋 液于平板中，涂布均勻后，將平板倒置于28 。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時 后觀察，培養(yǎng)觀察一周。無微生物生長的最低濃度為其最低防霉?jié)舛取?br> 1.4結果
表l: 丁基酸鈉最低抑菌濃度
丁基酸鈉濃度mg/kg空白4050607080
霉菌生長情況++++++++++--
由表1可見，隨著丁基酸鈉濃度的提高，霉菌數(shù)目逐漸減少；在丁 基酸鈉溶度達到62mg/kg時霉菌就不能生長，所以得出當培養(yǎng)劑的pH值 在4.5時，丁基酸鈉對飼料中霉菌最小抑制溶度為62mg/kg。
實施例2 丁基酸鈉對六種不同霉菌的抑制效果
六種標準實驗菌黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、 禾谷鐮刀菌購于中國普通微生物保藏中心。 1.1菌抹恢復培養(yǎng)
用無菌吸管，吸取0.3-0.4ml適宜的液體培養(yǎng)基葡萄糖蛋白胨湯，滴 入買來的具有相應菌抹的安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸
浮狀；取約0.2ml菌體懸浮液，移植于指定的瓊脂斜面/平板培養(yǎng)基上， 培養(yǎng)5d。
1.2平板制備分別取丁基酸鈉0.1g、 0.125g、 0.15g、 0.175g、 0.2g置于250毫升滅 菌的三角瓶中，加滅菌后的生理鹽水100毫升，放置振蕩器30min取下， 置電爐上加溫至50。C左右3min 5min, 4吏丁基酸鈉充分溶解分別加入 無菌培養(yǎng)皿各lml,倒入約45 。C滅菌的培養(yǎng)基19ml，充分混勻待其凝固 后，最終濃度為40mg/kg、 50mg/kg、 60mg/kg、 62mg/kg、 88mg/kg。 其中，黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉使用②培養(yǎng)基，串珠鐮刀菌、 禾谷鐮刀菌使用③培養(yǎng)基。
1.3接種
將已活化的菌種分別接入無菌生理鹽水，制成含菌量(孢子量)為 100cfu/ml的菌懸液，用移液槍加入lml菌懸液涂布均勻后，霉菌于28。C 培養(yǎng)72h,細菌于37。C培養(yǎng)24h,酵母于37。C培養(yǎng)72h后，丁基酸鈉對黃 曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為62mg/kg,對枯青霉、島青霉、串珠鐮 刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為88mg/kg, 丁基酸鈉對這六種特定 霉菌具有很好的抑制作用。 實施例3 pH值對丁基酸鈉抑制效果的影響
1.1不同pH值的培養(yǎng)基配制
用0.1mol/L氫氧化鈉把培養(yǎng)基(種類)的pH分別調(diào)成5.5、 7.5。 1.2制備平板分別取丁基酸鈉(江蘇天成生化制品有限公司，批 號20071011，規(guī)格25kg/袋)0.1g、 0.125g、 0.15g、 0.175g、 0.2g、 0.225g、 0.25g、 0.275g、 0.3g、 0.325g、 0.35g置于250毫升滅菌的三角 瓶中，加滅菌后的生理鹽水100毫升，放置振蕩器30min取下，置電爐 上加溫至50。C左右3 5min,使丁基酸鈉充分溶解，分別加入無菌培養(yǎng) 皿各lml，倒入約45 。C滅菌的各pH培養(yǎng)基19ml，充分混勻待其凝固后， 最終濃度為40mg/kg、 50mg/kg、 60mg/kg、 62mg/kg、 88mg/kg、 90 mg/kg、 100mg/kg、 110mg/kg、 120 mg/kg、 130mg/kg、 140mg/kg。分別設各 pH值的對照組，每組做兩個平板作重復。 1.3接種用移液槍加入實施例l制備的lml 1: 10000帶霉菌的稀釋液于平板 中，涂布均勻后，將平板倒置于28 。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時后觀察， 培養(yǎng)觀察一周。
當培養(yǎng)基pH二5.5時，丁基酸鈉的最低抑菌濃度為88mg/kg;當培養(yǎng) 基pH-7.5時，丁基酸鈉的最低抑菌濃度為140mg/kg。當培養(yǎng)基呈弱酸 性時，丁基酸鈉的防霉效果最佳；當培養(yǎng)基呈中性或弱堿性時，丁基 酸鈉的防霉效果減弱，隨著培養(yǎng)基pH值增大，丁基酸鈉的防霉?jié)舛戎?漸升高；pH大于7.5時仍有一定的防霉作用，與常用的化學防霉劑的有 效pH值(苯曱酸鈉pHS4，山梨酸鉀pH^7)相比丁基酸鈉的防霉效果更 具有實用性。
綜上所述，本發(fā)明提供了不同條件下丁基酸鈉對幾種霉菌的抑制濃 度，為丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎。
權利要求
1.一種丁基酸鈉在飼料防霉中的應用，其特征在于，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌。
2. 根據(jù)權利要求l所述的應用，其特征在于，所述丁基酸鈉對混合霉菌 的最低抑菌濃度為62mg/kg。
3. 根據(jù)權利要求l所述的應用，其特征在于，所述丁基酸鈉對黃曲霉、 煙曲霉的最低抑菌濃度為62mg/kg 。
4. 根據(jù)權利要求l所述的應用，其特征在于，所述丁基酸鈉對枯青霉、 島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為SSmg/kg。
5. 根據(jù)權利要求l所述的應用，其特征在于，經(jīng)121。C高溫處理30min 后，所述丁基酸鈉的最低抑菌濃度為62mg/kg。
6. 根據(jù)權利要求l所述的應用，其特征在于，pH-5.5時所述丁基酸鈉的 最低抑菌濃度為88mg/kg。
7. 根據(jù)權利要求l所述的應用，其特征在于，pH-7.5時所述丁基酸鈉的 最低抑菌濃度為140mg/kg。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種丁基酸鈉在飼料防霉中的應用，用于防治黃曲霉、煙曲霉、枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌或從霉變飼料中提取的混合霉菌，丁基酸鈉對混合霉菌的最低抑菌濃度為62mg/kg，對黃曲霉、煙曲霉的最低抑菌濃度為62mg/kg，對枯青霉、島青霉、串珠鐮刀菌、禾谷鐮刀菌的最低抑菌濃度為88mg/kg，經(jīng)121℃高溫處理30min后，丁基酸鈉的最低抑菌濃度為62mg/kg，pH＝5.5、7.5時，丁基酸鈉的最低抑菌濃度分別為88mg/kg、130mg/kg、140mg/kg，本發(fā)明提供了不同條件下丁基酸鈉對幾種霉菌的抑制濃度，為丁基酸鈉在飼料生產(chǎn)中用作防霉劑奠定了基礎。
文檔編號A23K1/00GK101675766SQ200810157188
公開日2010年3月24日 申請日期2008年9月19日 優(yōu)先權日2008年9月19日
發(fā)明者胡金來 申請人:胡金來