啉酮類物質(zhì)的 回收率在91.0% - 108. 4%之間，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD)小于8%，說明本發(fā)明方法的回 收率高，重復(fù)性好。
[0063] 表4方法的重復(fù)性和加標(biāo)回收率
[0064]

【附圖說明】
[0065] 圖1為本發(fā)明測定MI、CMI和BIT含量的LC-MS/MS標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖
[0066] 圖2為本發(fā)明測定MI、CMI和BIT含量的LC-MS/MS水基膠樣品色譜圖
[0067] 圖中：1 -MI、MI-d3,2 -CMI、CMI-d3,3 -BIT、BIT-13C6。
【具體實(shí)施方式】
[0068] 本發(fā)明結(jié)合以下實(shí)例做進(jìn)一步描述，但并不是限制本發(fā)明。
[0069] 實(shí)例：
[0070] 1、材料、試劑與儀器：
[0071] API4500QTRAP質(zhì)譜儀（美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）；DIONEX U3000型高效液相色譜 儀（美國Thermo公司）；Mettler XS2〇5型電子天平（感量：0.0001g，瑞士Mettler公司）； Sigma3-30K臺式高速離心機(jī)（德國Sigma公司）；HY-8A大容量振蕩器（金壇市國旺實(shí)驗(yàn)儀 器廠）；實(shí)驗(yàn)用水均為美國Millipore Advantage A10制備的去離子水（電阻率彡18. 2MD .cm) ;2_甲基-4-異噻唑啉-3-酮（彡98.0%，DR公司）、5_氯-2-甲基-4-異噻唑 啉-3-酮（彡99.0%，DR公司）、1，2_苯并異噻啉-3-酮（彡99.0%，DR公司）；d3-2-甲 基-4-異噻唑啉-3-酮.鹽酸鹽（MI-d 3，純度彡98%，TRC公司），d3-5-氯-2-甲基-4-異 噻唑啉-3-酮（CMI-d 3,純度彡98%，TRC公司）；13C6-1，2-苯并異噻啉-3-酮（BIT- 13C6，純 度彡98%，TRC公司）；甲醇（色譜純，美國默克公司）；有機(jī)相過濾膜（0.22 ym，上海興亞 凈化材料廠）；一次性注射器（5mL，江西洪達(dá)醫(yī)療器械集團(tuán)有限公司）。玻璃器皿：各種規(guī) 格移液管、容量瓶和具塞錐形瓶。
[0072] 2?實(shí)驗(yàn)樣品
[0073] 接嘴膠、搭口膠、包裝膠、中線膠各1個(gè)。
[0074] 3.樣品處理和分析：
[0075] 稱取水基膠0. 3g，精確至0. lmg，置于50mL具塞三角瓶中，用5mL水分散后加入 20mL甲醇，150r/min振蕩萃取30min，移取約1. 8mL萃取液于2mL離心管中離心10min，轉(zhuǎn) 速為10000r/min。準(zhǔn)確移取lmL上清液至10mL容量瓶中，加入100 y L內(nèi)標(biāo)使用液，用甲醇 定容，取約2mL過0. 22 y m有機(jī)相濾膜，待LC-MS/MS檢測。
[0076] 4.標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：
[0077] 準(zhǔn)確稱取1. Omg的MI-d3、CMI-d#P BIT- 13C6,分別置于3只10mL容量瓶中，用甲醇 稀釋至刻度，配制成濃度均為l〇〇mg/L的內(nèi)標(biāo)儲備液。分別移取MI-d 3、CMI-djP BIT- 13C6 的儲備液5. OmL至50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成MI-d3、CMI-d# BIT- %濃 度為10mg/L的混合內(nèi)標(biāo)工作溶液。
[0078] 分別稱取適量的3種異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配制成濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn) 儲備溶液。分別準(zhǔn)確移取lmL的MI、lmL的CMI、0. 25mL的BIT標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100mL容量瓶 中，用甲醇定容，配制濃度為MI、CMI濃度為10mg/L，BIT濃度為4mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。
[0079] 分別準(zhǔn)確移取 2 y L、10 y L、50 y L、100 y L、250 y L、500 y L、100 y L 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 至lOmL容量瓶中，加入100 yL內(nèi)標(biāo)工作溶液，用甲醇定容至刻度。
[0080] 5.分析及結(jié)果計(jì)算：
[0081] 對混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜分析，得到各定量離子的峰面 積，然后計(jì)算各目標(biāo)化合物與對應(yīng)內(nèi)標(biāo)的峰面積之比（MI與MI-d 3相比、CMI與CMI-d3相比、 BIT與BIT-13C6相比），擬合峰面積比與濃度成線性，且線性相關(guān)系數(shù)R 2彡0. 99。
[0082] 對試樣萃取液進(jìn)行分析，依據(jù)內(nèi)標(biāo)法由混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得到測定值。見表 5〇
[0083] 表5水基膠樣品中異噻唑啉酮的含量
[0084]
[0085] 參見說明書附圖：圖1為本發(fā)明測定MI、CMI和BIT含量的LC-MS/MS標(biāo)準(zhǔn)樣品色 譜圖
[0086] 圖2為本發(fā)明測定MI、CMI和BIT含量的LC-MS/MS水基膠樣品色譜圖
[0087] 圖中：1 -MI、MI-d3,2 -CMI、CMI-d3,3 -BIT、BIT-13C6。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種水基膠中異噻唑啉酮?dú)⒕鷦y定的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，其特征在于：稱 取水基膠，先加入一定體積的水進(jìn)行分散，再加入甲醇振蕩萃取，離心、稀釋后，以Luna3u PFP(2)色譜柱為分析柱，以甲醇和水混合液作為流動相，采用LC-MS/MS測定水基膠中MI、 CMI和BIT的含量，以同位素內(nèi)標(biāo)法定量。2. 根據(jù)權(quán)利1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，其特征在于：①稱取0. 2~0. 3g水基 膠，先加入2~5mL的水進(jìn)行分散，再加入甲醇振蕩萃取，取1~5ml溶液于離心管中，以 10000~150000g離心10~20min，稀釋和加入內(nèi)標(biāo)后，經(jīng)0. 22ym有機(jī)相濾膜過濾；②在 測定水基膠的過程中以Luna3uPFP(2)色譜柱為分析柱，以甲醇和水混合液作為流動相， 流動相流速0. 4~0. 6mL/min，采用LC-MS/MS測定水基膠中MI、CMI和BIT的含量，以同位 素內(nèi)標(biāo)法定量。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，其特征在于：①稱取0. 3g水基膠， 先加入5mL的水進(jìn)行分散，再加入20mL甲醇振蕩萃取，轉(zhuǎn)速150r/min，時(shí)間30min，移取約 1. 8mL萃取液于2mL離心管中離心lOmin，轉(zhuǎn)速為10000r/min;準(zhǔn)確移取lmL上清液至10mL 容量瓶中，加入l〇〇yL濃度為10mg/L的內(nèi)標(biāo)使用液，用甲醇定容，取約2mL過0. 22ym有 機(jī)相濾膜；②測定水基膠中MI、CMI和BIT過程中，色譜柱為菲羅門公司生產(chǎn)的Luna3u PFP(2)柱，規(guī)格為3ym, 150mmX4. 6mm，柱溫30°C，流動相流速0? 5mL/min，采用梯度洗脫， 梯度洗脫程序見表1 ;③在測定水基膠中MI、CMI和BIT過程中，采用的質(zhì)譜條件為：離子 源：電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；離子源溫度：600°C;離 子對的駐留監(jiān)測時(shí)間：50ms;輔助氣Gasl壓力：55Psi;輔助氣Gas2壓力：55Psi;各分析物 的定量離子對、定性離子對及去簇電壓、碰撞能量見表2 ; 表1梯度洗脫程序表2質(zhì)譜檢測參數(shù)表注：*定量離子。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法：MI的內(nèi)標(biāo)為：d3-2_甲基-4-異噻唑 啉-3-酮.鹽酸鹽（MI-d3) ;CMI的內(nèi)標(biāo)為：d3-5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮（CMI-d3); BIT的內(nèi)標(biāo)為：13C6-1，2-苯并異噻啉-3-酮（BIT-13C6)。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，其特征在于：所述的水基膠為接嘴 膠、搭口膠、包裝膠、中線膠，質(zhì)譜采用美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司的API4500QTRAP質(zhì)譜儀，液 相色譜采用美國Thermo公司的DIONEXU3000型高效液相色譜儀，并配備有真空脫氣機(jī)、二 元梯度泵、自動進(jìn)樣器、恒溫柱箱和色譜質(zhì)譜工作站。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，其特征在于： 1、 提取 稱取水基膠0. 3g，精確至0.lmg，置于50mL具塞三角瓶中，用5mL水分散后加入20mL甲醇，150r/min振蕩萃取30min，移取約1. 8mL萃取液于2mL離心管中離心lOmin，轉(zhuǎn)速為 10000r/min； 2、 稀釋 準(zhǔn)確移取lmL上清液至10mL容量瓶中，加入100yL內(nèi)標(biāo)使用液，用甲醇定容，取約2mL過0. 22ym有機(jī)相濾膜，待LC-MS/MS檢測； 3、 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 準(zhǔn)確稱取1. 〇mg的MI-d3、CMI-d#PBIT- 13C6，分別置于3只10mL容量瓶中，用甲醇稀 釋至刻度，配制成濃度均為l〇〇mg/L的內(nèi)標(biāo)儲備液。分別移取MI-d3、CMI-d#PBIT- 13(：6的 儲備液5.OmL至50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成MI-d3、CMI-d#BIT- 13C6濃度 為lOmg/L的混合內(nèi)標(biāo)工作溶液； 4、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 分別稱取適量的3種異噻唑啉酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配制成濃度為1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備 溶液。分別準(zhǔn)確移取lmL的MI、lmL的CMI、0. 25mL的BIT標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100mL容量瓶中， 用甲醇定容，配制濃度為MI、CMI濃度為10mg/L，BIT濃度為4mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液； 分別準(zhǔn)確移取2yL、10yL、50yL、100yL、250yL、500yL、100yL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液至lOmL容量瓶中，加入100yL內(nèi)標(biāo)工作溶液，用甲醇定容至刻度； 5、 測定 移取以上配制好的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液，注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 儀； 采用的液相色譜條件為： --色譜柱：Luna3uPFP(2)，4. 6x150mm, 3. 0ym; 一一流動相：甲醇和水，梯度洗脫，梯度見表1 ; --流速：〇? 5mL/min； 一一進(jìn)樣量：l〇yL; --柱溫：30°C; 表1梯度洗脫程序采用的質(zhì)譜條件為： --離子源：電噴霧離子源； --掃描方式：正離子掃描； --檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測； --尚子源溫度：600°C; 一一離子對的駐留監(jiān)測時(shí)間：50ms--輔助氣Gasl壓力：55Psi; --輔助氣Gas2壓力：55Psi; 各分析物的定量離子對、定性離子對及去簇電壓、碰撞能量見表2 ; 表2質(zhì)譜檢測參數(shù)表注：*定量離子 6、結(jié)果計(jì)算 對混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行LC-MS/MS分析，得到各定量離子的峰面積，然后計(jì)算各目標(biāo) 化合物與對應(yīng)內(nèi)標(biāo)的峰面積之比（MI與]\〇-(13相比、CMI與CMI-d3相比、BIT與BIT- 13(：6相 比），擬合峰面積比與濃度成線性，且要求線性相關(guān)系數(shù)R2多0. 99。對試樣萃取液進(jìn)行分 析，依據(jù)內(nèi)標(biāo)法由混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算得到測定值。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種水基膠中異噻唑啉酮?dú)⒕鷦y定的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。包括如下步驟：稱取水基膠，先加入水進(jìn)行分散，再加入甲醇振蕩萃取，離心、稀釋后，以Luna 3u PFP(2)色譜柱為分析柱，以甲醇和水混合液作為流動相，采用LC-MS/MS測定，以同位素內(nèi)標(biāo)法定量。本方法首次基于使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)分析水基膠中3種異噻唑啉酮類殺菌劑。本發(fā)明具有操作簡便、分析速度快、靈敏度高、準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，特別適用于大批量水基膠中異噻唑啉酮?dú)⒕鷦┑姆治觥?br>【IPC分類】G01N30/88
【公開號】CN104991017
【申請?zhí)枴緾N201510359833
【發(fā)明人】周曉, 李小蘭, 陳志燕, 馮守愛, 周蕓, 林莉, 范忠, 黃世杰
【申請人】廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年6月25日