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生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)的前處理和檢測方法、及檢測試劑盒的制作方法_3

文檔序號(hào):8359824閱讀:來源:國知局
行測定; (3) 液相色譜色譜柱的填料為以硅膠和/或其修飾物為基質(zhì)的封端或未封端的反相碳 十八、以硅膠和/或其修飾物為基質(zhì)的封端或未封端的反相碳八、弱陽離子交換萃取柱、強(qiáng) 陽離子交換萃取柱、官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱、氧化鋁萃取柱和HILIC萃取柱中一 種或多種; (4) 液相色譜的柱溫為30-35°C ; (5) 液相色譜的樣品池保持4°C ; (6) 液相色譜的流動(dòng)相為水和乙腈;具體地,流動(dòng)相的洗脫程序?yàn)椋阂译?0-30V/V% (Omin, 0. 2-1. OmT,/miη)-乙臆 20_30v/v % (2_5min,0· 2-1. OmT,/miη)-乙臆 70_90ν/ ν% (5_8min,0.2-1. OmL/min)-乙臆 70_90v/v % (8.0-12. Omin,0.2-1. OmL/min)-乙臆 20-30v/v% (8. 5-16. 5min,0. 2-1. OmL/min); (7) 質(zhì)譜的離子源為電噴霧離子源;具體地,離子噴射電壓為4000-4500V ;更具體地, 霧化氣壓力為35-45psi ;進(jìn)一步具體地,干燥器溫度為300-350°C,流速為9-10L/min ;更進(jìn) 一步具體地,檢測方式為正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式; (8) 所述前處理產(chǎn)物為在線固相萃取的轉(zhuǎn)移階段轉(zhuǎn)移至液相色譜的物質(zhì)。
6. 生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)和/或其代謝產(chǎn)物的檢測試劑盒,包括衍生化試劑和在線固相 萃取柱;具體地,還包括與萃取柱配合使用的流動(dòng)相試劑;更具體地,還包括堿性調(diào)節(jié)劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測試劑盒,其特征在于如下(1)-(6)中任意一項(xiàng)或者多項(xiàng), (1) 流動(dòng)相試劑為水和乙腈的混合液; (2) 流動(dòng)相試劑包括第一流動(dòng)相試劑、第二流動(dòng)相試劑和第三流動(dòng)相試劑,分別用于在 線固相萃取的富集、轉(zhuǎn)移和柱活化階段; (3) 第一流動(dòng)相試劑中,乙腈和水的體積比為(5-15) :(85-95)或(5-20) :(80-95); (4) 第二流動(dòng)相試劑中,乙腈和水的體積比為(85-100) :(0-15); (5) 第三流動(dòng)相試劑中,乙腈和水的體積比為(5-15) :(85-95)或(5-20) :(80-95); (6) 衍生化試劑的結(jié)構(gòu)含有與芳環(huán)連接的磺酰氯基或酰氯基;具體地,還含有與芳環(huán) 連接的胺基;更具體地,胺基為對(duì)位或間位胺基;進(jìn)一步具體地,衍生化試劑為2-氯苯磺 酰氯、3-氯苯磺酰氯、4-(氯磺酰)異氰酸苯酯、4-氯苯磺酰氯、苯磺酰氯、2, 3, 4-三氟 苯磺酰氯、2, 3-二氯苯磺酰氯、2, 4, 5-三氯苯磺酰氯、2, 4, 6-三氯苯磺酰氯、2, 4-二氟苯 磺酰氯、2, 4-二溴苯磺酰氯、2, 4-二硝基苯磺酰氯、2, 5-二氟苯磺酰氯、2, 5-二氯苯磺酰 氯、2, 5-二溴苯磺酰氯、2, 6-二氟苯磺酰氯、2-(三氟甲基)苯磺酰氯、2-氟苯磺酰氯、 氯-4_ (二氟甲基)苯磺酰氯、2-氯-4-氟苯磺酰氯、2-氯-4-氰基苯磺酰氯、2-氰基苯 磺酰氯、2-溴-4, 6-二氟苯磺酰氯、2-溴苯磺酰氯、2-溴-4-氟苯磺酰氯、2-甲基-5-硝基 苯磺酰氯、2-硝基苯磺酰氯、3, 4, 5-三氟苯磺酰氯、3, 4-二氟苯磺酰氯、3, 4-二氯苯磺酰 氯、3, 5-二氟苯磺酰氯、3, 5-二氯-2-羥基苯磺酰氯、3, 5-二氯苯磺酰氯、3, 5-二甲基苯磺 酰氯、3-(三氟甲基)苯磺酰氯、3-氟-4-甲基苯磺酰氯、3-氟苯磺酰氯、3-氯-2-氟苯磺 酰氯、3-氯-4-甲基苯磺酰氯、3-氰基-4-氟苯磺酰氯、3-氰基苯磺酰氯、3-溴苯磺酰氯、 3-甲氧基苯磺酰氯、3-硝基苯磺酰氯、4, 4'-亞甲基雙(苯磺酰氯)、4-(三氟甲基)苯磺 酰氯、4-(溴甲基)苯磺酰氯、4-(甲磺酰)苯磺酰氯、4-乙酰基苯磺酰氯、4-叔丁基苯磺酰 氯、4-異丙基苯磺酰氯、4-氟-2-甲基苯磺酰氯、4-氟苯磺酰氯、4-氯-2-硝基苯磺酰氯、 氯 -3_硝基苯磺酰氯、4-氰基苯磺酰氯、4-溴-2, 5-二氟苯磺酰氯、4-溴-2, 6-二氯苯磺 酰氯、4-溴-2-氟苯磺酰氯、4-溴-2-氯苯磺酰氯、4-溴-3-氟苯磺酰氯、4-溴-3-甲基苯磺 酰氯、4-溴苯磺酰氯、4-甲基-3-硝基苯磺酰氯、4-甲氧基苯磺酰氯、4-甲氧基苯磺酰氯、 硝基苯磺酰氯、4-碘苯磺酰氯、4-苯氧基苯磺酰氯、5-氟-2-甲基苯磺酰氯、5-氯-2-氟 苯磺酰氯、五氟苯磺酰氯、五甲基苯磺酰氯、2, 4, 6-三異丙基苯磺酰氯、2, 4-二甲氧基苯磺 酰氯、2, 5-二甲氧基苯磺酰氯、2, 5-雙(三氟甲基)苯磺酰氯、2-(三氟甲氧基)苯磺酰氯、 2-溴-4-(三氟甲基)苯磺酰氯、2-溴-5-(三氟甲基)苯磺酰氯、2-甲氧基-4-硝基苯磺 酰氯、2-硝基-4-(三氟甲基)苯磺酰氯、3, 4-二甲氧基苯磺酰氯、3, 5-雙(三氟甲基)苯 磺酰氯、3_(三氟甲氧基)苯磺酰氯、3-(二氟甲氧基)苯磺酰氯、3-氟-4-甲氧基苯磺酰 氯、3-溴-5-(三氟甲基)苯磺酰氯、4,4'-亞甲基雙(苯磺酰氯)、4-(三氟甲氧基)苯磺 酰氯、4-(二氟甲氧基)苯磺酰氯、4-(二甲氨基)偶氮苯-4'-磺酰氯、4-二甲胺基苯基 偶氮苯磺酰氯、4-氟-2-三氟甲基苯磺酰氯、4-溴-2-(三氟甲基)苯磺酰氯、4-溴-2-(三 氟甲氧基)苯磺酰氯、4-溴-3-(三氟甲基)苯磺酰氯、4-甲氧基-2, 3, 6-三甲基苯磺酰 氯、4-硝基-3-(三氟甲基)苯磺酰氯、5-溴-2-甲氧基苯磺酰氯、(2-氯苯基)甲基磺酰 氯、4-(氟磺酰)苯酰氯、對(duì)氨基苯磺酰氯、對(duì)氨基苯酰氯、對(duì)甲胺基苯磺酰氯、對(duì)甲胺基苯 酰氯、對(duì)二甲胺基苯磺酰氯、對(duì)二甲胺基苯酰氯、間氨基苯磺酰氯、間氨基苯酰氯、間甲胺基 苯磺酰氯、間甲胺基苯酰氯、間二甲胺基苯磺酰氯、間二甲胺基苯酰氯、4-二甲胺基苯基偶 氮苯磺酰氯、1-二甲氨基萘-5-磺酰氯、對(duì)氨基萘磺酰氯、對(duì)氨基萘酰氯、對(duì)甲胺基萘磺酰 氯、對(duì)甲胺基萘酰氯、對(duì)二甲胺基萘磺酰氯和對(duì)二甲胺基萘酰氯中的一種或多種,優(yōu)選為對(duì) 二甲胺基苯磺酰氯;更進(jìn)一步具體地,衍生化試劑以乙腈為溶劑配置成溶液使用;更加具 體地,溶液的濃度為Ing/mL~10mg/mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測試劑盒,其特征在于如下(1)-(5)任意一項(xiàng)或者多項(xiàng): (1) 在線固相萃取柱為SPE柱、預(yù)柱或色譜柱; (2) 在線固相萃取柱的填料為以硅膠和/或其修飾物為基質(zhì)的封端或未封端的反相碳 十八、以硅膠和/或其修飾物為基質(zhì)的封端或未封端的反相碳八、弱陽離子交換萃取柱、強(qiáng) 陽離子交換萃取柱、官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱、氧化鋁萃取柱和HILIC萃取柱中一 種或多種; (3) 在線固相萃取柱為美國Thermo公司的Retain PEP Javelin, 10mmX2. 1mm,或者 HYPERSIL ODS 預(yù)柱,20 X 4mm,5 μ m ; (4) 堿性調(diào)節(jié)劑為乙酸銨、硼酸-碳酸氫鈉緩沖鹽、磷酸-磷酸鈉緩沖鹽、碳酸鈉-碳酸 氫鈉緩沖鹽、碳酸氫鈉-氫氧化鈉緩沖鹽、硼酸-氫氧化鈉緩沖鹽和硼酸-四硼酸鈉緩沖鹽 中的一種或多種; (5)還包括蛋白沉淀劑;具體地,所述蛋白沉淀劑為甲醇-乙腈溶劑或者三氯乙酸-高 氯酸溶劑。
9. 權(quán)利要求6-8任一所述檢測試劑盒在生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)和/或其代謝產(chǎn)物檢測 中的用途;具體地,所述檢測為定性或定量檢測;更具體地,生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)和/或其 代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)含酚羥基和/或胺基;進(jìn)一步具體地,生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)或其代謝產(chǎn)物 為如下任意一種或多種:多巴胺、5-羥色胺、犬尿喹啉酸、4-二羥基苯乙酸、5-羥吲哚乙酸、 5-羥基吲哚-2-羧酸、高香草酸、3, 4-二羥基芐胺、3-羥基鄰氨基苯甲酸、去甲腎上腺素、 腎上腺素、犬尿氨酸、3-甲氧基-4-羥基苯乙二醇、色氨酸、3-羥基犬尿氨酸、香草基扁桃 酸、褪黑素和喹啉酸;更為具體地,生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)或其代謝產(chǎn)物為多巴胺、去甲腎上 腺素、腎上腺素、5-羥色胺、犬尿氨酸及其代謝產(chǎn)物中一種或多種。
10. -種在體內(nèi)或體外檢測生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)和/或其代謝產(chǎn)物的方法,包括使用 有效量權(quán)利要求6-8任一所述的檢測試劑盒的步驟。
11. 其包含如下(1)-(3)中任意一項(xiàng)或多項(xiàng): (1) 式I所示的對(duì)二甲胺基苯磺酰氯化合物,
(2) 對(duì)二甲胺基苯磺酰氯的合成路線如下,
具體地,對(duì)二甲胺基苯磺酰氯的制備方法包括向?qū)Χ装坊交撬崛芤和ㄈ肼葰猓?氫氧化鈉為催化劑在-20~0°C條件下反應(yīng)2-4小時(shí)的步驟;更具體地,還包括將反應(yīng)產(chǎn)物 濃縮至干,固體以無水乙醇沖洗,濃縮濾液; (3) 對(duì)二甲胺基苯磺酰氯在生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)和/或其代謝產(chǎn)物的衍生化、前處理 或檢測中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明屬于檢測技術(shù)領(lǐng)域,涉及一種生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)和/或其代謝產(chǎn)物的前處理方法,包括將含有生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)和/或其代謝產(chǎn)物的樣品衍生化,對(duì)衍生化產(chǎn)物在線固相萃取。在此基礎(chǔ)上,還涉及生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)和/或其代謝產(chǎn)物的檢測方法、檢測試劑盒及用途。本發(fā)明的前處理方法能夠去除衍生化產(chǎn)物中的雜質(zhì),將衍生化產(chǎn)物富集后以適宜濃度轉(zhuǎn)移入后續(xù)檢測步驟。本發(fā)明的檢測方法能快速、準(zhǔn)確地測定出生物樣品中生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量,檢測靈敏度高。
【IPC分類】G01N30-06, G01N30-08, G01N30-02
【公開號(hào)】CN104678028
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510076850
【發(fā)明人】李迎, 梅興國, 張有志
【申請(qǐng)人】中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所
【公開日】2015年6月3日
【申請(qǐng)日】2015年2月12日
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