一種同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙 ?；釣躅^堿的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃草烏Komarov)為云南地方習(xí)用的烏頭類傷科藥物， 因其毒性劇烈，大多經(jīng)過炮制后入藥，其炮制飲片（制黃草烏）為虎力散、云南紅藥、百寶丹 等云南著名和特色中成藥制劑中的重要處方藥。黃草烏生藥材的化學(xué)成分研究表明，滇烏 堿（yunaconitine)等二廠生物堿是其主要成分。滇烏堿具有明顯的鎮(zhèn)痛抗炎、解熱和免 疫調(diào)節(jié)等作用，但其毒性較強(qiáng)，治療窗狹窄。近期研究表明黃草烏在炮制過程中，其滇烏堿 成分能夠部分轉(zhuǎn)化為8-去乙?；釣躅^堿，后者仍具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛活性，且其毒性顯著降 低。因此，建立同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿兩種生物堿成分含量 的檢測(cè)方法，對(duì)于黃草烏炮制過程的科學(xué)監(jiān)測(cè)和制黃草烏飲片的質(zhì)量控制研究具有重要意 義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿 的方法。
[0004] 本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，包括對(duì)照品溶液制備、供試品溶液制備、檢測(cè)步驟， 具體包括： A、 對(duì)照品溶液制備：分別精密稱取滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿，加0. 1%的鹽酸甲醇 配制成滇烏堿濃度16. 11 mg/mL、8-去乙?；釣躅^堿濃度為30. 13 mg/mL的混合溶液，得 到對(duì)照品溶液； B、 供試品溶液制備：取制黃草烏粉末2. 00 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水2 mL潤濕，加乙醚20 mL，超聲處理提取，循環(huán)提取2~4次，合并提取液，蒸干，殘?jiān)?. 1%的 鹽酸甲醇溶解并定容到10 mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，0.45 μπι微孔濾膜濾過，得 到供試品溶液； C、 檢測(cè)：將對(duì)照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。
[0005] 本發(fā)明建立了同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿兩種生物堿成 分含量的檢測(cè)方法，對(duì)于黃草烏炮制過程的科學(xué)檢測(cè)和制黃草烏飲片的質(zhì)量控制研究具有 重要意義。
【附圖說明】
[0006] 圖1為對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖：滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的保留時(shí)間 分別為 32. 78 min 和 15. 41min ; 圖2為制黃草烏樣品溶液的高效液相色譜圖：滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的保留時(shí) 間分別為 32. 73min 和 15. 47min。
【具體實(shí)施方式】
[0007] 下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以 限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0008] 本發(fā)明所述的同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的方法，包括 對(duì)照品溶液制備、供試品溶液制備、檢測(cè)步驟，具體包括： A、 對(duì)照品溶液制備：分別精密稱取滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿，加0. 1%的鹽酸甲醇 配制成滇烏堿濃度16. 11 mg/mL、8-去乙酰基滇烏頭堿濃度為30. 13 mg/mL的混合溶液，得 到對(duì)照品溶液； B、 供試品溶液制備：取制黃草烏粉末2. 00 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水2 mL潤濕，加乙醚20 mL，超聲處理提取，循環(huán)提取2~4次，合并提取液，蒸干，殘?jiān)?. 1%的 鹽酸甲醇溶解并定容到10 mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，0.45 μπι微孔濾膜濾過，得 到供試品溶液； C、 檢測(cè)：將對(duì)照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。
[0009] B步驟中所述的制黃草烏粉末的粒度為50目。
[0010] B步驟中所述的超聲處理的功率為200 W，頻率為40 KHz，超聲處理的時(shí)間為5 min〇
[0011] C步驟中所述的高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)的色譜條件為：色譜柱=Agilent Zorbax Extend_C18柱（4. 6X250 mm，5 μπι);流動(dòng)相：三乙胺水溶液-乙腈，梯度洗脫； 流速：1. 0 mL · min-1;檢測(cè)波長：260 nm ;柱溫：30°C ;進(jìn)樣量10 μ L。
[0012] 所述的三乙胺水溶液濃度為0. 2%，并用磷酸調(diào)pH值為3. 1。
[0013] 所述的梯度洗脫條件為：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的方法，其特征在于包括 對(duì)照品溶液制備、供試品溶液制備、檢測(cè)步驟，具體包括： A、 對(duì)照品溶液制備：分別精密稱取滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿，加0. 1%的鹽酸甲醇 配制成滇烏堿濃度16. 11 mg/mL、8-去乙?；釣躅^堿濃度為30. 13 mg/mL的混合溶液，得 到對(duì)照品溶液； B、 供試品溶液制備：取制黃草烏粉末2. 00 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水2 mL潤濕，加乙醚20 mL，超聲處理提取，循環(huán)提取2~4次，合并提取液，蒸干，殘?jiān)?. 1%的 鹽酸甲醇溶解并定容到10 mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，0.45 μπι微孔濾膜濾過，得 到供試品溶液； C、 檢測(cè)：將對(duì)照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的方法， 其特征在于B步驟中所述的制黃草烏粉末的粒度為50目。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的方法， 其特征在于B步驟中所述的超聲處理的功率為200 W，頻率為40 KHz，超聲處理的時(shí)間為5 min〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的方法， 其特征在于C步驟中所述的高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)的色譜條件為：色譜柱=Agilent Zorbax Extend_C18柱（4. 6X250 mm，5 μπι);流動(dòng)相：三乙胺水溶液-乙腈，梯度洗脫； 流速：1. 0 mL · min-1;檢測(cè)波長：260 nm ;柱溫：30°C ;進(jìn)樣量10 μ L。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的方 法，其特征在于所述的三乙胺水溶液濃度為0. 2%，并用磷酸調(diào)pH值為3. 1。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的方法， 其特征在于所述的梯度洗脫條件為：
【專利摘要】本發(fā)明公開一種同時(shí)測(cè)定制黃草烏中滇烏堿和8-去乙?；釣躅^堿的方法，包括：對(duì)照品溶液制備，稱取滇烏堿和8-去乙酰基滇烏頭堿，加鹽酸甲醇配制成滇烏堿、8-去乙?；釣躅^堿的混合溶液，得到對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，取制黃草烏粉末，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水，加乙醚，超聲處理提取，循環(huán)提取后合并提取液，蒸干，殘?jiān)尤臌}酸甲醇溶解并定容到容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，微孔濾膜濾過，得到供試品溶液；將對(duì)照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明建立了以制黃草烏中滇烏堿及其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物8-去乙?；釣躅^堿為指標(biāo)的檢測(cè)方法，對(duì)于黃草烏炮制過程的科學(xué)檢測(cè)和制黃草烏飲片的質(zhì)量控制研究具有重要意義。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號(hào)】CN104678020
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510101815
【發(fā)明人】馬曉霞, 周志宏, 楊竹雅, 楊樹德, 錢子剛
【申請(qǐng)人】云南中醫(yī)學(xué)院, 云南云河藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請(qǐng)日】2015年3月9日