專利名稱：：一種甾體生物堿藜蘆胺及其制備方法和降壓應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種甾體生物堿，具體來(lái)說(shuō)是下述式(1)表示的藜蘆胺，還涉及該化合物的制備方法以及它在降壓方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：藜盧屬(Kera^7朋Linn.)為百合科(Liliaceae)植物，世界上約有40種，據(jù)《中國(guó)植物志》記載，我國(guó)有其中13種和一個(gè)變種。中醫(yī)用黑藜蘆(Ker^r"歷L.)、興安藜蘆[K.G^/"hc〃yz7(Turcz.)Loes.f.]、天目藜戶(K5b/J'/7c/7eriLoes.f.)、毛穗藜戸(K鵬ach7Regel)、大理藜盧(Kta7ie"seLoes.f.)、毛葉藜戶[K《7"a/7ed/2'/7artw7(Maxim.)Loes.f.]等的根和根莖入藥，有涌吐風(fēng)痰、殺蟲(chóng)療瘡的功效，內(nèi)服用于中風(fēng)痰壅、喉痹不通、癲癇等證；油調(diào)外涂，治疥癬禿瘡；還常被用來(lái)治療肺結(jié)核及肺癌、精神分裂癥、瘧疾、骨折等。我國(guó)學(xué)者對(duì)藜蘆生物堿進(jìn)行了深入的研究，最近幾年又對(duì)藜蘆屬植物的其它化學(xué)成分展開(kāi)研究，除己知的生物堿類(lèi)化合物外，又發(fā)現(xiàn)芪類(lèi)化合物、二肽類(lèi)、黃酮類(lèi)及其它類(lèi)化合物。藜蘆根及根狀莖含多種甾體總生物堿，并以春秋兩季最為豐富，夏季最少。主要為藜蘆堿(又名藜蘆胺)(Veratr柳ine)、介芬堿(Jervine)、偽介芬堿(Pseudojervine)、紅介芬堿(Rubijervine)、計(jì)莫林堿(Ge匿rine)及藜戶酰棋盤(pán)花堿(Veratroylzygadenine)、異紅介芬堿(Isorubijervine)、原藜戸堿A(ProtoveratrineA)、計(jì)莫亭堿(Germidine)、雙脫乙?；紤鯄A甲(DiDeacetylprotoveratrineA)、藜蘆辛(Verazine)、秋水仙堿(Colchicine)，藜盧堿胺甲、乙、丙、丁(alkamineA、B、C、D),藜戶嗪(Verazine)，介芬堿(Jervine)和新計(jì)巴丁(Neogermbudine)等。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外已從藜蘆屬植物中分離鑒定出一百多種甾體生物堿。從國(guó)產(chǎn)烏蘇里藜蘆中分得7種西藜蘆堿類(lèi)異甾生物堿及維藜蘆堿類(lèi)與介藜蘆堿類(lèi)生物堿各1種；從國(guó)產(chǎn)毛穗藜蘆中分得4種西藜盧堿類(lèi)異甾生物堿和2種維藜蘆堿類(lèi)生物堿；從長(zhǎng)白山產(chǎn)的光脈藜蘆得到5種藜盧堿類(lèi)化合物及2種介藜蘆堿類(lèi)生物堿；從產(chǎn)自湖北的長(zhǎng)梗藜蘆根中分得的成分和藜蘆的相似，為西藜蘆堿類(lèi)異甾生物堿，及維藜蘆堿類(lèi)生物堿；從云南產(chǎn)的大理藜蘆中分得為3種維藜盧堿類(lèi)生物堿；從生長(zhǎng)于臺(tái)灣的黑紫藜蘆中僅分得維藜蘆堿類(lèi)生物堿；從狹葉藜蘆中分得一種維藜蘆堿類(lèi)生物堿和狹葉藜蘆堿甲，后者具顯著的降血壓作用。有人對(duì)歐洲中部和南部生長(zhǎng)的白藜盧進(jìn)行了比較深入的研究，分得2種西藜蘆堿類(lèi)異甾生物堿，5種介藜蘆堿類(lèi)生物堿及一種藜盧胺類(lèi)生物堿；從美國(guó)產(chǎn)綠藜蘆中分得25種甾體生物堿，近來(lái)又分得4種茄堿類(lèi)生物堿和兩種維藜產(chǎn)堿類(lèi)生物堿。藜蘆屬植物含有具有生物活性的留體生物堿，研究證明總生物堿具有顯著降壓作用，但總生物堿中何種單體成分起主要藥效未見(jiàn)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于從百合科(Liliaceae)植物黑藜蘆(「aratr"歷L.)中分離出一個(gè)具有降壓作用的甾體生物堿藜蘆胺，另一個(gè)目的是提供該化合的制備方法，進(jìn)一步的目的是提供該化合物在制備降壓藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明以百合科(Liliaceae)植物黑藜蘆(Ker"ru/nm'gr"歷L.)的干燥根莖為原料，通過(guò)稀堿溶液浸潤(rùn)和氯仿浸泡，分離得到一個(gè)下述式(1)表示的甾體生物堿藜蘆胺，對(duì)正常動(dòng)物和高血壓模型動(dòng)物均有明顯的降壓作用并可減慢心率，且具有降壓作用緩和與持久的特點(diǎn)。藜蘆胺具有與藜蘆生物堿相似或相近的藥理活性，提示其可能是藜蘆生物堿降壓作用的主要有效成分之一。從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。本發(fā)明的藜蘆胺由式(1)表示-式(1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>本發(fā)明式(1)表示的藜蘆胺從百合科(Liliaceae)植物黑藜蘆(Keratr"歷/j'gr"邁L.)中分離得到，其制備方法包括以下步驟(1)以黑藜蘆(Ker"r"/77/7^r^L.)植物的干燥根莖為原料，粉碎成粗顆粒，置密閉容器內(nèi)，以O(shè).1%1%堿溶液浸潤(rùn)0.52小時(shí)，再按原料量38倍加入氯仿浸泡，濾過(guò)，濾液回收溶劑后繼續(xù)濃縮至稠膏狀；(2)步驟(1)得到的稠膏狀濃縮物以其1030倍量的1%10%的酸溶液溶解，濾過(guò)，調(diào)pH至810，冰箱冷藏層放置2448小時(shí)，濾過(guò)，收集沉淀物；(3)將步驟(2)得到的沉淀物以氯仿加熱溶解，濾過(guò)，濾液回收溶劑至近干后以氯仿溶解放置析出凍狀物，抽干，得粉末；(4)將步驟(3)得到的粉末以體積比710:1氯仿-甲醇溶解，放置，析出粗晶，粗晶經(jīng)純化，得上述式(1)化合物。步驟(1)中所述堿溶液可以是氫氧化鈉水溶液、氫氧化鉀水溶液或氨水，所述氯仿浸泡35次，每次浸泡17天；步驟(2)中所述酸溶液可以是1%5°/。酒石酸水溶液，2%5%硫酸溶液或5%10%的鹽酸溶液；所述濾液以20%30%氨水或1%8%的氫氧化鈉或氫氧化鉀調(diào)pH至810;步驟(4)中所述粗晶純化是先經(jīng)硅膠干柱層析，然后重結(jié)晶。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明藜蘆胺可在治療高血壓中的應(yīng)用。20本發(fā)明藜蘆胺對(duì)正常動(dòng)物和高血壓模型動(dòng)物均有明顯的降壓作用并可減慢心率，特別對(duì)高血壓模型動(dòng)物有良好作用，其降壓作用強(qiáng)度隨給藥劑量的增加而增強(qiáng)，且降壓作用緩和且持久，另外還可明顯減慢呼吸頻率，對(duì)于指導(dǎo)臨床應(yīng)用具有實(shí)際價(jià)值，而陽(yáng)性對(duì)照藥司樂(lè)平雖同樣有強(qiáng)且持久的降壓作用，但卻有加快心率的現(xiàn)象。具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明不限于下述實(shí)施例。實(shí)施例l:上述式(1)表示的藜戸胺的制備將藜蘆粉碎成粗顆粒(2kg)，置密閉容器內(nèi)，以0.4%氫氧化鈉(100mL)浸潤(rùn)0.5小時(shí)，加5倍量(約6.8L)氯仿浸泡三次，每次浸泡2天，濾過(guò)，濾液回收溶劑，繼續(xù)濃縮至稠膏狀(60g)，以20倍(1200g)5%酒石酸水溶液攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液以25M氨水調(diào)pH至89，冰箱冷藏層放置24小時(shí)，濾過(guò)，收集沉淀物。將沉淀物以氯仿加熱溶解，濾過(guò)，濾液回收溶劑近干，以氯仿轉(zhuǎn)溶于大試管中，放置析出凍狀物，抽干，得藜蘆總生物堿粉末12g。將此粉末以氯仿-甲醇(體積比9:1)溶解，放置，析出粗晶(2g)。粗晶(0.2g)先經(jīng)硅膠干柱層析(取硅膠2g，柱子直徑2cm，高度約10cm，洗脫劑體積比8:l氯仿-甲醇)，然后收集洗脫液，蒸干，得白色針狀結(jié)晶(0.12g)。經(jīng)分析確定該化合物為式(l)的化合物，分析數(shù)據(jù)如下無(wú)色細(xì)針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)214.2-216.5。C;EIMS:m/z410[M+H]+，推測(cè)其分子式為C27H39N02。碳譜中的低場(chǎng)信號(hào)Sc139.5，131.9，142.6，118.7，124.7，和142.2，提示有一個(gè)四取代苯環(huán)存在，在低場(chǎng)中另外的信號(hào)Se141.8，120.5，提示有環(huán)雙鍵存在，對(duì)照參考文獻(xiàn)(TezukaY,KikuchiT，ZhaoW，ChenJ，GuoY.Twonewsteroidalalkaloids,20_isoveratramineandverapatuline，fromtherootsandrhizomesofZaratr鵬pat"7"瓜J.Nat.Prod.1998，61，1078-1081)，與藜戸胺(veratramine)及其異構(gòu)體20-異藜蘆胺(20-isoveratramine)接近。化合物的旋光度([a]D25-55.9(CHCUc=0.5)與文獻(xiàn)藜蘆胺一致[a]。25-60.21°，c=0.29，MeOH)。另外該化合物的詳細(xì)核磁光譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表l。表l本發(fā)明式(1)的化合物的'H,13C核磁共振數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例2:實(shí)施例1得到的化合物對(duì)正常貓血壓的影響的實(shí)驗(yàn)研究取30只健康貓，隨機(jī)等分五組，每組6只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以5M烏拉每lg/kg腹腔注射麻醉[1]，仰位固定手術(shù)暴露左頸總動(dòng)脈，左頸總動(dòng)脈插管并連接于PT14M2型壓力傳感器上。借助于JH-2型肌張力換能傳感器連于貓胸廓呼吸明顯處記錄呼吸；四肢連接心電導(dǎo)線，以上信號(hào)通過(guò)MS-2000多媒體化生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)同步記錄。術(shù)畢穩(wěn)定30分鐘后，測(cè)給藥前正常值，然后十二指腸一次給予實(shí)施例得到的化合物l.O、0.5、0.25mg/kg，分別作為實(shí)驗(yàn)組l，2，3，陽(yáng)性對(duì)照組司樂(lè)平O.156mg/kg，空白對(duì)照組給丙二醇溶液，體積均為5ml/kg。記錄給藥前及給藥后15150min的收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均壓(MP)、心率(HR)和呼吸的變化。比較給藥前、后自身差異及與對(duì)照組變化百分率的差異顯著性。本發(fā)明的化合物對(duì)正常貓舒張壓的影響見(jiàn)表2，其中r6，T土SD，*/<0.05;**/<0.01;0.001;本發(fā)明的化合物對(duì)正常貓收縮壓的影響見(jiàn)表3,其中/f6,Z土SD,0.05;林/7<0.01;***p<0.001;本發(fā)明的化合物對(duì)正常貓心率的影響見(jiàn)表4，其中f6，/±SD，*p<0.05。表2本發(fā)明的式(1)的化合物對(duì)正常貓舒張壓的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表3本發(fā)明的式(l)的化合物對(duì)正常貓收縮壓的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表4本發(fā)明的式(l)的化合物對(duì)正常貓心率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)施例3:實(shí)施例1得到的化合物對(duì)SHR自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響采用尾壓法，取合格S服大鼠50只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前1周，每日定時(shí)采用RBP-1型大鼠血壓儀測(cè)量尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)，取一周內(nèi)的血壓平均值作為藥前值。據(jù)SBP水平、體重隨機(jī)等分五組，一次灌胃實(shí)施例1得到的化合物2.24、1.12、0.56mg/kg，分別作為實(shí)驗(yàn)組l，2，3，陽(yáng)性對(duì)照組給予司樂(lè)平0.36mg/kg，模型組給予蒸餾水，體積均為20mL/kg。于藥后0.5h、lh、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h各測(cè)量血壓一次，比較給藥前、后自身差異及與對(duì)照組變化百分率的差異顯著性。本發(fā)明的化合物對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響見(jiàn)表5，其中f10，J士SD，*p<0.05;**/<。01;***/<0.001。本發(fā)明的式(l)的化合物對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心率的影響見(jiàn)表6，其中/7=10,J士SD，*p<0.05;**p<0.01;***;<0.001。表5本發(fā)明的式(l)的化合物對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權(quán)利要求1．式(1)表示的化合物2.權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征包括以下步驟(1)以黑藜蘆(KeratTT^/7^77朋L.)植物的干燥根莖為原料，粉碎成粗顆粒，置密閉容器內(nèi)，以O(shè).1%1%堿溶液浸潤(rùn)0.52小時(shí)，再按原料量38倍加入氯仿浸泡，濾過(guò)，濾液回收溶劑后繼續(xù)濃縮至稠膏狀；(2)步驟(1)得到的稠膏狀濃縮物以其1030倍量的1%10%的酸溶液溶解，濾過(guò)，濾液調(diào)pH至810，冰箱冷藏層放置2448小時(shí)，濾過(guò)，收集沉淀物；(3)將步驟(2)得到的沉淀物以氯仿加熱溶解，濾過(guò)，濾液回收溶劑至近干后以氯仿溶解放置析出凍狀物，抽干，得粉末；(4)將步驟(3)得到的粉末以體積比710:1氯仿-甲醇溶解，放置，析出粗晶，粗晶經(jīng)純化，得上述式(1)化合物。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是步驟(1)中所述堿溶液是氫氧化鈉水溶液、氫氧化鉀水溶液或氨水，所述氯仿浸泡35次，每次浸泡17天；步驟(2)中所述酸溶液是1%5%酒石酸水溶液，2%5%硫酸溶液或5%10%的鹽酸溶液；所述濾液以20%30%氨水或1%8%的氫氧化鈉或氫氧化鉀調(diào)pH至810;步驟(4)中所述粗晶純化是先經(jīng)硅膠干柱層析，然后重結(jié)晶。4.權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療高血壓的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種以下式(1)表示的藜蘆胺，還涉及這種藜蘆胺的制備方法，其特征是以黑藜蘆植物的干燥根莖為原料，以堿溶液浸潤(rùn)，氯仿浸泡后濾液濃縮成稠膏狀，再用稀酸溶解，濾液用濃氨水或稀堿調(diào)pH至8～10，放置過(guò)濾收集沉淀，用氯仿溶解，析出的凍狀物抽干成粉末，用氯仿-甲醇溶解，析出晶體經(jīng)硅膠干柱層析及重結(jié)晶，得到產(chǎn)物。本發(fā)明還涉及這種藜蘆胺在制備治療高血壓藥物中的應(yīng)用，其對(duì)正常動(dòng)物和高血壓模型動(dòng)物均有明顯的降壓作用并可減慢心率，降壓作用緩和且持久，有明顯的臨床實(shí)用價(jià)值。文檔編號(hào)A61K31/58GK101362791SQ200810198639公開(kāi)日2009年2月11日申請(qǐng)日期2008年9月19日優(yōu)先權(quán)日2008年9月19日發(fā)明者劉永宏,周雪峰,偉李,王隸書(shū),程?hào)|巖申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所