本發(fā)明屬于藥物分析領域，具體涉及一種建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法。

背景技術：

茜草藤為茜草科茜草屬植物茜草R.cordifolia L.或東南茜草R.argyi(Lévl.et Van.)Hara ex L.A.Lauener et D.K.Ferguson的干燥地上部分，茜草藤作藥用最早記載于《履巉巖本草》，陜西漢中市以及河南南陽市的民間將茜草藤水煮后用于治療小兒腹瀉、并廣為流傳，西安醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院兒科將其作為臨床醫(yī)院制劑使用已有十多年。

目前的茜草藤藥材標準為1997年收載于安徽省藥品標準中(皖Q/WS-01-97)的標準，通過鑒別和浸出物含量測定來檢測其質(zhì)量。近年來，國內(nèi)外的研究主要是關于地下部分的茜草，對地上部分茜草藤的研究文獻很少，陳戰(zhàn)國等對茜草藤的生藥學進行了一定的研究(中草藥，2001，32(2)：157-159.)，研究中指出，茜草藤主要含有皂苷、多糖、黃酮類、酚類、微量元素等化學成分，但并沒有明確具體成分。

從上述可知，目前茜草藤質(zhì)量研究方面的相關信息有限，僅有少量性狀、顯微、理化薄層鑒別研究等，還有待進一步完善。一方面，由于茜草藤藥材的同屬植物較多、相互之間不易鑒別，產(chǎn)地對茜草藤藥材所含的化學成分的種類和各化學成分的含量等也有一定的影響，通過現(xiàn)行標準控制茜草藤藥材的質(zhì)量過于單一、片面，不能從整體上全面反映茜草藤藥材的質(zhì)量，進而導致質(zhì)量檢測結果可能缺乏客觀性和準確性，從而無法保證茜草藤藥材臨床用藥的有效性和安全性；另一方面，通過鑒別和浸出物含量測定聯(lián)合來檢測茜草藤藥材的質(zhì)量，費時、費力，難以廣泛地應用于生產(chǎn)實踐。

因而，建立一種能夠全面地、快速地檢測茜草藤藥材的質(zhì)量的方法，對于其全面質(zhì)量檢測和整體質(zhì)量控制具有重要意義。

技術實現(xiàn)要素：

為此，本發(fā)明要解決的第一個技術問題是茜草藤藥材的質(zhì)量檢測方法不能從整體上全面反映茜草藤藥材的質(zhì)量、進而導致質(zhì)量檢測結果可能缺乏客觀性和準確性、從而無法保證茜草藤藥材臨床用藥的安全性和有效性的問題，本發(fā)明要解決的第二個技術問題是現(xiàn)有的茜草藤藥材的質(zhì)量檢測方法費時、費力，難以廣泛地應用于生產(chǎn)實踐的問題，從而提供一種建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法。

為解決上述技術問題，本發(fā)明是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：

本發(fā)明提供一種建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，該方法包括如下步驟：

(1)取待測茜草藤藥材0.5～5.0重量份，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為20％～100％的甲醇水溶液25～100體積份，稱定重量，超聲提取15～60分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為20％～100％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取蘆丁對照品，加甲醇制成每1體積份含0.00005～0.00020重量份的溶液，搖勻，作為對照品溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分數(shù)為0.05％～0.5％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0～5min，A：B為5％：95％；5～40min，A：B為5％：95％→20％：80％；40min，A：B為20％：80％；40～55min，A：B為20％：80％→40％：60％；55min，A：B為40％：60％；55～60min，A：B為40％：60％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～70min，A：B為80％：20％；70min，A：B為80％：20％；70～75min，A：B為80％：20％→5％：95％；檢測波長為218～222nm，柱溫25～40℃，流速為0.5～1.5mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液5～20μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液和對照品溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜；

所述重量份與所述體積份的關系為g/mL。

優(yōu)選地，上述建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，該方法包括如下步驟：

(1)取待測茜草藤藥材0.5～2.0重量份，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為30％～70％的甲醇水溶液25～50體積份，稱定重量，超聲提取20～30分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為30％～70％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取蘆丁對照品，加甲醇制成每1體積份含0.00005～0.00015重量份的溶液，搖勻，作為對照品溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分數(shù)為0.05％～0.20％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0～5min，A：B為5％：95％；5～40min，A：B為5％：95％→20％：80％；40min，A：B為20％：80％；40～55min，A：B為20％：80％→40％：60％；55min，A：B為40％：60％；55～60min，A：B為40％：60％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～70min，A：B為80％：20％；70min，A：B為80％：20％；70～75min，A：B為80％：20％→5％：95％；檢測波長為220nm，柱溫為30～35℃，流速為0.8～1.2mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液5～15μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液和對照品溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

進一步優(yōu)選地，上述建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，該方法包括如下步驟：

(1)取待測茜草藤藥材1.0重量份，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為50％的甲醇水溶液25體積份，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為50％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取蘆丁對照品，加甲醇制成每1體積份含0.00010重量份的溶液，搖勻，作為對照品溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分數(shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0～5min，A：B為5％：95％；5～40min，A：B為5％：95％→20％：80％；40min，A：B為20％：80％；40～55min，A：B為20％：80％→40％：60％；55min，A：B為40％：60％；55～60min，A：B為40％：60％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～70min，A：B為80％：20％；70min，A：B為80％：20％；70～75min，A：B為80％：20％→5％：95％；檢測波長為220nm，柱溫為30℃，流速為1.0mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液和對照品溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

進一步優(yōu)選地，上述建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，以250mm×4.6mm、5μm的Agilent HC-C₁₈為色譜柱。

進一步優(yōu)選地，上述建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，所述茜草藤藥材的指紋圖譜中，共有特征峰為：1號峰、2號峰、3號峰、4號峰、5號峰和6號峰蘆??；以6號峰為內(nèi)參照峰，各峰號的相對保留時間分別為：1號峰0.15±0.0075、2號峰0.30±0.015、3號峰0.45±0.0225、4號峰0.55±0.0275、5號峰0.63±0.0315和6號峰1.0。

進一步優(yōu)選地，上述建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，所述茜草藤藥材的指紋圖譜中，各峰號的相對保留時間分別為：1號峰0.15、2號峰0.30、3號峰0.45、4號峰0.55、5號峰0.63和6號峰1.0。

進一步優(yōu)選地，上述建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，所述茜草藤藥材為茜草的地上部分或東南茜草的地上部分。

本發(fā)明還提供上述方法在茜草藤藥材的質(zhì)量檢測和質(zhì)量控制中的應用。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的上述技術方案具有如下優(yōu)點：

(1)本發(fā)明建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，以茜草藤藥材為檢測對象，建立了針對該藥材的指紋圖譜的方法，獲得了較為全面的圖譜信息，確認了共有特征峰1號峰、2號峰、3號峰、4號峰、5號峰和6號峰蘆??；選擇6號峰為內(nèi)參照峰，確定了茜草藤藥材的共有特征峰1號峰、2號峰、3號峰、4號峰和5號峰的相對保留時間，且結合該指紋圖譜中的多個色譜峰的信息，能夠全面地、快速地檢測茜草藤藥材的質(zhì)量，有利于其全面質(zhì)量檢測和整體質(zhì)量控制，從而有助于提高該藥材臨床用藥的有效性和安全性；

(2)本發(fā)明建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，具有穩(wěn)定性高、精密度高、重復性好等優(yōu)點，通過該方法即可對茜草藤藥材的質(zhì)量進行檢測，操作較簡便，可以用于茜草藤藥材的生產(chǎn)過程監(jiān)測和質(zhì)量控制中，從而可以確保茜草藤藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性和均一性，從而有助于提高該藥材臨床用藥的有效性和安全性。

附圖說明

為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實施例并結合附圖，對本發(fā)明作進一步詳細的說明，其中：

圖1為本發(fā)明實驗例1中蘆丁對照品溶液的液相色譜圖；

圖2為本發(fā)明實驗例1中茜草藤藥材的供試品溶液(編號：QCT-01-001)的液相色譜圖；

圖3為本發(fā)明實驗例1中19批茜草藤藥材的供試品溶液導入指紋圖譜相似度計算軟件后導出的疊加色譜圖；

圖4為本發(fā)明實驗例1中建立的茜草藤藥材的指紋圖譜。

具體實施方式

本發(fā)明以下實施例和實驗例中，茜草藤藥材為茜草的地上部分或東南茜草的地上部分。

實施例1

本實施例建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測茜草藤藥材1.0g，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為50％的甲醇水溶液25mL，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為50％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取蘆丁對照品，加甲醇制成每1mL含0.00010g的溶液，搖勻，作為對照品溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分數(shù)為0.1％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0～5min，A：B為5％：95％；5～40min，A：B為5％：95％→20％：80％；40min，A：B為20％：80％；40～55min，A：B為20％：80％→40％：60％；55min，A：B為40％：60％；55～60min，A：B為40％：60％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～70min，A：B為80％：20％；70min，A：B為80％：20％；70～75min，A：B為80％：20％→5％：95％；檢測波長為220nm，柱溫30℃，流速為1.0mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液和對照品溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實施例2

本實施例建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測茜草藤藥材0.5g，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為70％的甲醇水溶液25mL，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為70％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取蘆丁對照品，加甲醇制成每1mL含0.00005g的溶液，搖勻，作為對照品溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分數(shù)為0.05％～0.20％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0～5min，A：B為5％：95％；5～40min，A：B為5％：95％→20％：80％；40min，A：B為20％：80％；40～55min，A：B為20％：80％→40％：60％；55min，A：B為40％：60％；55～60min，A：B為40％：60％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～70min，A：B為80％：20％；70min，A：B為80％：20％；70～75min，A：B為80％：20％→5％：95％；檢測波長為220nm，柱溫35℃，流速為0.8mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液15μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液和對照品溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實施例3

本實施例建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測茜草藤藥材2.0g，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為30％的甲醇水溶液50mL，稱定重量，超聲提取20分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為30％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取蘆丁對照品，加甲醇制成每1mL含0.00015g的溶液，搖勻，作為對照品溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分數(shù)為0.05％～0.20％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0～5min，A：B為5％：95％；5～40min，A：B為5％：95％→20％：80％；40min，A：B為20％：80％；40～55min，A：B為20％：80％→40％：60％；55min，A：B為40％：60％；55～60min，A：B為40％：60％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～70min，A：B為80％：20％；70min，A：B為80％：20％；70～75min，A：B為80％：20％→5％：95％；檢測波長為220nm，柱溫30℃，流速為1.2mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液5μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液和對照品溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實施例4

本實施例建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測茜草藤藥材0.5g，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為100％的甲醇水溶液25mL，稱定重量，超聲提取60分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為100％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取蘆丁對照品，加甲醇制成每1mL含0.00005g的溶液，搖勻，作為對照品溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分數(shù)為0.05％～0.5％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0～5min，A：B為5％：95％；5～40min，A：B為5％：95％→20％：80％；40min，A：B為20％：80％；40～55min，A：B為20％：80％→40％：60％；55min，A：B為40％：60％；55～60min，A：B為40％：60％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～70min，A：B為80％：20％；70min，A：B為80％：20％；70～75min，A：B為80％：20％→5％：95％；檢測波長為222nm，柱溫25℃，流速為1.5mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液5μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液和對照品溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實施例5

本實施例建立茜草藤藥材的指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

(1)取待測茜草藤藥材5.0g，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為20％的甲醇水溶液100mL，稱定重量，超聲提取15分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為20％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

(2)精密稱取蘆丁對照品，加甲醇制成每1mL含0.00020g的溶液，搖勻，作為對照品溶液；

(3)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、以體積分數(shù)為0.05％～0.5％的磷酸水溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫：0～5min，A：B為5％：95％；5～40min，A：B為5％：95％→20％：80％；40min，A：B為20％：80％；40～55min，A：B為20％：80％→40％：60％；55min，A：B為40％：60％；55～60min，A：B為40％：60％→80％：20％；60min，A：B為80％：20％；60～70min，A：B為80％：20％；70min，A：B為80％：20％；70～75min，A：B為80％：20％→5％：95％；檢測波長為218nm，柱溫40℃，流速為0.5mL/min；

(4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液20μL，注入高效液相色譜儀，測定，分別得到供試品溶液和對照品溶液的液相色譜；

(5)利用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，對供試品溶液和對照品溶液的液相色譜分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導入、多點校正和數(shù)據(jù)匹配，即得指紋圖譜。

實驗例1

1、儀器與試藥

儀器包括：高效液相色譜儀：戴安UItiMate3000高效液相色譜儀；色譜柱：Agilent HC-C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱；紫外檢測器；萬分之一天平(Sartorius BS224S)，十萬分之一天平(Precisa XR205SM DR)；超聲波發(fā)生器：(昆山超聲KQ-700DE 40KHz 280W)；

試藥包括：磷酸(上海中試化工有限公司)，色譜甲醇(瑞典歐森巴克環(huán)境化學公司)，色譜乙腈(瑞典歐森巴克環(huán)境化學公司)，水為超純水(電阻率18.2mΩ.cm)，其他試劑均為分析純。

19批茜草藤的樣品信息如下表1所示：

表1 19批茜草藤的樣品信息表

2、流動相的梯度洗脫程序

表2流動相的梯度洗脫程序

3、茜草藤藥材指紋圖譜的建立

按如下方法建立茜草藤藥材的指紋圖譜：

取蘆丁對照品和取19個批次經(jīng)現(xiàn)行標準檢測合格的茜草藤樣品(如表1所示)的地上部分粉碎，過2號篩，分別制備對照品溶液和供試品溶液，按照實施例1的方法建立茜草藤藥材的指紋圖譜。

蘆丁對照品溶液的液相色譜圖、編號為QCT-01-001的茜草藤藥材供試品溶液的液相色譜圖、19批茜草藤藥材供試品溶液導入指紋圖譜相似度計算軟件后導出的疊加色譜圖和建立的茜草藤藥材的指紋圖譜分別如圖1-4所示。

采用藥典委員會編制的指紋圖譜相似度評價軟件中“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004版”，生成對照特征圖譜。

由圖4可知，茜草藤藥材的指紋圖譜中有6個共有特征峰，依次標號為1、2、3、4、5、6，經(jīng)過對照品溶液比對，其中6號峰為蘆丁，選取6號峰蘆丁作為內(nèi)參照峰(S峰)，以參照峰的相對保留時間為1，計算其他各峰的相對保留時間，結果見表3。

表3 19批茜草藤藥材共有峰相對保留時間

由表3可知，1～6號峰的平均相對保留時間為：0.15、0.30、0.45、0.55、0.63、1，相對標準偏差均≤0.105。

4、方法學驗證

4.1精密度考察

取同一重復性項下的茜草藤藥材(編號為QCT-01-001)，按實施例1的供試品溶液制備方法制備供試品溶液，連續(xù)進樣6次，得到6個色譜圖，以參照物蘆丁保留時間為1計算其他特征峰的相對保留時間，記錄各共有色譜峰的相對保留時間，經(jīng)計算各共有色譜峰的相對保留時間的相對標準偏差RSD≤0.05％，說明該方法的精密度良好。

4.2重復性考察

取同一編號的供試品(編號為QCT-01-001)6份，分別按實施例1的供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并進行高效液相色譜測定，記錄各共有色譜峰的相對保留時間，經(jīng)計算各共有色譜峰的相對保留時間的相對標準偏差RSD≤0.04％，說明該方法的重復性較好。

4.3穩(wěn)定性考察

取重復性項下的同一供試品溶液(編號為QCT-01-001)，按實施例1的方法分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h進行檢測，記錄各共有色譜峰的相對保留時間，經(jīng)計算各共有色譜峰的相對保留時間的相對標準偏差RSD≤0.25％，說明該方法的穩(wěn)定性較好。

綜上，采用本發(fā)明的方法建立的茜草藤藥材的指紋圖譜的精密度、重復性和穩(wěn)定性均較好，結果準確可靠，能較全面的反映茜草藤藥材的質(zhì)量。

5、茜草藤藥材的質(zhì)量檢測

(1)檢測樣品：茜草藤，2016年8月采集于亳州

供試品溶液的制備：取上述茜草藤樣品1.0g，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為50％的甲醇水溶液25mL，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為50％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；

對照品溶液的制備：精密稱取蘆丁對照品5mg至10mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并定容至刻度，精密量取1mL蘆丁溶液至5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度搖勻，即得對照品溶液；

色譜條件：同實施例1；

高效液相分析：分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液10μL注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件記錄80min，即得供試品溶液和對照品溶液的液相色譜圖。在待測樣品中找到與指紋圖譜對應的6個特征峰，以對照品蘆丁保留時間為1計算其他特征峰的相對保留時間，分別為：0.15、0.30、0.44、0.55、0.63，均在規(guī)定的相對保留時間偏差范圍內(nèi)，說明該批茜草藤藥材的質(zhì)量檢測符合要求。

(2)檢測樣品：茜草藤，2016年7月采集于合肥

供試品溶液的制備：取上述茜草藤樣品1.0g，精密稱定，精密加入體積分數(shù)為50％的甲醇水溶液25mL，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，用體積分數(shù)為50％的甲醇水溶液補足損失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；

對照品溶液的制備：精密稱取蘆丁對照品5mg至10mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并定容至刻度，精密量取1mL蘆丁溶液至5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度搖勻，即得對照品溶液；

色譜條件：同實施例1；

高效液相分析：分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液10μL注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件記錄80min，即得供試品溶液和對照品溶液的液相色譜圖。在待測樣品中僅找到與指紋圖譜對應的4個特征峰，另外兩個特征峰未找到，說明該批茜草藤藥材質(zhì)量不合格，不符合要求，不能用于制劑生產(chǎn)。

顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。