本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體涉及一種中藥連翹的非線性指紋圖譜檢測方法。

背景技術(shù)：

連翹（Forsythia suspense）為木犀科灌木植物連翹的果實(shí)，主產(chǎn)于中國陜西、山西、河北等地；秋季當(dāng)果實(shí)初熟、顏色商帶綠色時(shí)采收；除去雜質(zhì)，蒸熟，曬干，習(xí)稱“青翹”；采收熟透的果實(shí)，曬干，除去雜質(zhì)，習(xí)稱“老翹”。連翹的化學(xué)成分：連翹酚（forsythol）,齊墩果酸，6，7-二甲氧基香豆精，甾醇類化合物，白樺脂醇酸（betulinic acid）,連翹苷（phillyrin）,連翹苷元（phillygenin）,松脂素（pinoresinol）,牛蒡子苷，牛蒡子苷元，黃酮醇苷，表連翹醇，蕓香苷，白樺脂酸，蒎烯，香葉醛等，具有外可疏散風(fēng)熱，內(nèi)可清熱解毒之藥，常用于溫?zé)岵⌒l(wèi)、氣、營、血的多種癥候。目前對(duì)化學(xué)成分和其藥效之間的關(guān)聯(lián)未見深入研究。國內(nèi)已建立的連翹指紋圖譜主要是高效液相色譜指紋圖譜，其研究的指標(biāo)性成分重點(diǎn)是連翹苷、有機(jī)酸類，未建立反映連翹所有化學(xué)成分特征和有效成分含量的檢測方法，而非線性指紋圖譜檢測的對(duì)象是中藥材中所有的化學(xué)成分。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)不足，提供一種簡單、適用的檢測連翹真?zhèn)尾?duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)的非線性指紋圖譜檢測方法。

本發(fā)明以BrO³⁺—Mn²⁺—H⁺—CH₃COCH₃為振蕩體系，以連翹為振蕩底物，測定不同產(chǎn)地連翹的非線性指紋圖譜，討論連翹加入量對(duì)圖譜的影響，通過對(duì)特征參數(shù)的研究并將其與柴胡、冬凌草等比較，達(dá)到對(duì)中藥連翹進(jìn)行鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)的目的。

本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種中藥連翹的非線性指紋圖譜檢測方法包括以下步驟 ：

A、建立連翹化學(xué)成分的非線性指紋圖譜：

將同一產(chǎn)地同一品牌的一種連翹作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，通過化學(xué)振蕩反應(yīng)建立其化學(xué)成分的非線性指紋法圖譜。

B、檢測樣品：

取待檢測的連翹樣品，使用與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同的條件檢測，得出檢測樣品的圖譜，將兩者的指紋圖譜用直接觀察并且以O(shè)rigin 軟件分析作為定性依據(jù)。

C、重現(xiàn)性考察

取待檢測的連翹樣品，測定其圖譜，測得的非線性指紋圖譜的各種特征參數(shù)的RSD＜3％，表明所述方法具有很好的重現(xiàn)性。

進(jìn)一步，所述指紋法包括如下步驟：

A-1、標(biāo)準(zhǔn)樣品選擇：

同一產(chǎn)地同一品牌的一種連翹，以4-8 個(gè)批次為標(biāo)準(zhǔn)樣品。

A-2、非線性電化學(xué)指紋法圖譜分析條件：

檢測儀器：瑞士萬通204N型電化學(xué)工作站，HH-501型超級(jí)恒溫水浴鍋，85-2A型數(shù)顯恒溫磁力攪拌器，213型金屬鉑電極，217型甘汞電極；溫度(310±0.05)K； 1.0g連翹粉末、10ml 0.2mol/L的KBr、10ml 4.0mol/L H₂SO₄、5ml0.04mol/LMnSO₄、5ml0.4mol/L CH₂(COOH)₂， 10ml 0.2mol/LKBrO₄溶液。

A-3、非線性指紋圖譜信息參數(shù)分析：

用Origin軟件繪制E-t曲線，即獲得連翹非線性指紋圖譜以及其特征參數(shù)。圖譜參數(shù)包括：誘導(dǎo)時(shí)間(s) ：從加入試劑到振蕩發(fā)生的時(shí)間，振蕩壽命(s)：振蕩開始到振蕩結(jié)束的時(shí)間，振蕩周期(s)：振蕩過程中出現(xiàn)相鄰峰的時(shí)間，最高電位 (v)；振蕩曲線的電位最高值。測得的非線性指紋圖譜的各種特征參數(shù)的RSD＜3％。

B、檢測樣品：

取待檢測的連翹樣品，使用與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同的條件檢測，得出檢測樣品的指紋圖譜，將兩者的指紋圖譜直接觀察并且以O(shè)rigin軟件分析作為定性依據(jù)，如果兩者的圖譜特征參數(shù)的RSD＜10％，可認(rèn)為是同一產(chǎn)品，若RSD＞10％則認(rèn)為是非同一產(chǎn)品。

C、重現(xiàn)性考察：

取6份待測連翹樣品，測定其圖譜并進(jìn)行考察。

本發(fā)明對(duì)連翹所用成分做成的指紋圖譜具有方法重現(xiàn)性好、無需預(yù)處理、操作簡便以及快捷經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，能夠?yàn)楦黝愡B翹品質(zhì)的鑒別提供可靠信息，適于在連翹安全檢測技術(shù)領(lǐng)域推廣應(yīng)用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明連翹非線性指紋圖譜示意圖。

圖 2為不同產(chǎn)地連翹非線性指紋圖譜示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。

A、建立連翹化學(xué)成分的非線性指紋圖譜：

以5個(gè)批次陜西連翹為標(biāo)準(zhǔn)樣品建立其化學(xué)成分非線性指紋圖譜。

使用儀器：瑞士萬通204N型電化學(xué)工作站，HH-501型超級(jí)恒溫水浴鍋，85-2A型數(shù)顯恒溫磁力攪拌器，213型金屬鉑電極，217型甘汞電極；化學(xué)振蕩反應(yīng)在連續(xù)攪拌的帶夾套的反應(yīng)器中進(jìn)行，開啟超級(jí)恒溫水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度控制在(310±0.05)K，依次加入1.0g 連翹，10ml 0.2mol/L的KBr、10ml 4.0mol/L H₂SO₄、5ml0.04mol/LMnSO₄、5ml0.4mol/L CH₂(COOH)₂，溶液于帶夾套的反應(yīng)器中，蓋好帶溫度計(jì)、213型金屬鉑電極和217型甘汞電極的反應(yīng)器蓋。開啟通過數(shù)據(jù)采集裝置相連計(jì)算機(jī)，以及磁力攪拌器（450r/min轉(zhuǎn)速），恒溫恒速攪拌10min時(shí)，通過注射器迅速加入10ml 0.2mol/LKBrO₄溶液，即刻點(diǎn)擊菜單采集數(shù)據(jù)，記錄E-t曲線至電位振蕩消失為止，用 Origin 軟件繪制 E-t曲線，即獲得連翹非線性指紋圖譜，如圖1所示。獲得7個(gè)連翹非線性指紋圖譜以及其特征參數(shù)。測得的非線性指紋圖譜的各種特征參數(shù)的 RSD ＜ 3％。

B、檢測樣品 ：

使用與上述測定標(biāo)準(zhǔn)樣品相同的條件，分別測定不同產(chǎn)地的連翹，其非線性指紋圖譜如圖2所示。從整個(gè)指紋圖譜來看，不同品種連翹的 E-t曲線存在明顯區(qū)別，肉眼即可看出不同種類連翹的區(qū)別。測得的非線性指紋圖譜的各種特征參數(shù)的 RSD＞10％。

C、重現(xiàn)性考察：

取6份待測連翹樣品，測定其圖譜，測得的非線性指紋圖譜的各種特征參數(shù)的RSD＜3％，表明本發(fā)明方法具有很好的重現(xiàn)性。

本發(fā)明鑒別連翹的電化學(xué)指紋法對(duì)于特定樣品的化學(xué)成分指紋圖譜的各特征參數(shù)是穩(wěn)定的。進(jìn)行鑒別時(shí)只需將各產(chǎn)地、品牌連翹標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜與被測樣品圖譜數(shù)據(jù)用Origin 軟件導(dǎo)出，如果兩者的圖譜特征參數(shù)的 RSD＜10％，則為同一產(chǎn)品，RSD＞10％則為非同一產(chǎn)品。如表1所示，比較不同產(chǎn)地中藥連翹的非線性圖譜的誘導(dǎo)時(shí)間和振蕩壽命，可用于不同連翹的鑒別及質(zhì)量評(píng)價(jià)。

表1

$???:\; C:\backslash Program\; Files\backslash gwssi\backslash CPC?????\backslash cases\backslash inventions\backslash 88d3217d-878f-4b03-a31f-b69b6cabdbdc\backslash new\backslash 100002\backslash dest\_path\_image002aa.jpg$

以上所述的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果進(jìn)行了進(jìn)一步詳細(xì)說明，所應(yīng)理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式而已，并不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。