本發(fā)明涉及食品領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法。
背景技術(shù)：
：甜菊糖苷是一種天然的非營養(yǎng)型高甜度甜味劑，它是從原產(chǎn)南美巴拉圭和巴西的菊科多年生灌木植物甜葉菊(steviarebaudianabertoni)的葉子中提取而得到的，其甜度是蔗糖的250～300倍，有后苦和青草味。甜菊糖苷具有高甜度、低熱量、無毒等特性，長期食用不會使人發(fā)胖，特別適宜肥胖病、糖尿病、高血壓、動脈硬化、齲齒病患者使用，而且物理、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、無發(fā)酵性，可延長甜菊糖苷制品的保質(zhì)期。因而，被廣泛應(yīng)用在食品和藥物行業(yè)中，被譽(yù)稱為繼蔗糖、甜菜糖之后的第三種天然糖源。甜菊糖苷代替蔗糖符合現(xiàn)代人對健康理念的要求，因此開發(fā)甜菊糖苷具有極廣闊的前景。含乳飲料是指以新鮮牛乳(或乳粉)為主要原料，經(jīng)發(fā)酵或不發(fā)酵，加入水與適量輔料(如可可、咖啡、果汁和蔗糖等)加工而成的具有相應(yīng)風(fēng)味的飲品。然而，目前含乳飲料中甜菊糖苷含量的檢測方法仍有待開發(fā)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明提出了測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法，該方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。需要說明的是，本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的：目前甜菊糖苷的檢測方法主要是地方標(biāo)準(zhǔn)方法DBSS22/007-2012《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)食品中甜菊糖苷的測定高效液相色譜法》，該前處理方法較為繁瑣，不適合基質(zhì)較復(fù)雜的含乳飲料中甜菊糖苷的檢測。而國標(biāo)GB8270-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑甜菊糖苷》只是簡單的介紹了水溶性樣品的提取及檢測方法，相對于基質(zhì)較復(fù)雜的含乳飲料而言不適合。有鑒于此，發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，預(yù)先將含乳飲料與乙酸鉛溶液混合，以沉淀脂肪、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，通過離心除去沉淀，得到的上清液，再利用流動相進(jìn)一步萃取沉淀中的甜菊糖苷，并將所得到的待測液進(jìn)行色譜法檢測，從而能夠準(zhǔn)確地測定出含乳飲料中甜菊糖苷含量。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。為此，本發(fā)明提出了一種測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述方法包括：(1)將所述含乳飲料與乙酸鉛溶液進(jìn)行第一混合，并將得到的第一混合液進(jìn)行第一離心，分離所得到的沉淀和第一上清液；(2)將所述沉淀與流動相進(jìn)行第二混合，并將所得到的第二混合液進(jìn)行第二離心，收集第二上清液；(3)合并所述第一上清液和第二上清液，并用所述流動相定容，再將所得到的第三混合液進(jìn)行過濾，得到待測液；以及(4)利用色譜法對所述待測液進(jìn)行檢測，并基于檢測結(jié)果確定所述含乳飲料中甜菊糖苷含量。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，含乳飲料中基質(zhì)較復(fù)雜，若直接進(jìn)行離心、收集上清液，并對上清液進(jìn)行檢測，則基質(zhì)干擾較大，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，且對儀器造成損害。進(jìn)而，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，預(yù)先利用有機(jī)溶劑將含乳飲料中的大量基質(zhì)沉淀，對含有甜菊糖苷的上清液進(jìn)行檢測，能夠有效地避免基質(zhì)干擾，從而提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、精密度及穩(wěn)定性。為此，發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)得到最優(yōu)有機(jī)溶劑—乙酸鉛，乙酸鉛能夠充分沉淀蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)，而甜菊糖苷保留在上清液中，且得到的上清液較澄清，對后續(xù)的色譜法檢測的干擾較小，從而較大程度地提高了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法還可以具有下列附加技術(shù)特征：根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述乙酸鉛溶液的濃度為2體積％。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，基于5g所述含乳飲料，所述乙酸鉛溶液的用量為0.5～1mL，優(yōu)選0.5mL。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟(2)中，基于5g所述含乳飲料，所述流動相的用量為20mL。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述流動相為磷酸-乙腈溶液，所述磷酸-乙腈溶液中乙腈與磷酸的體積比為3：7。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述色譜法檢測條件如下：色譜柱：艾杰爾C18色譜柱(250mm×4.6mm，5.0μm)；流速：1.0mL/min；0.002mol/L所述流動相；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃；波長：210nm。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述第一混合和第二混合分別獨(dú)立地包括進(jìn)行超聲5～10min。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述第一離心和第二離心分別獨(dú)立地在3000～5000r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行5～10min，優(yōu)選4000r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行5min。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。另外，本發(fā)明提出了另一種測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述方法包括：1)稱取5g所述含乳飲料于50mL離心管中，加入0.5mL2體積％乙酸鉛水溶液，超聲10min后，4000r/min離心5min，取所得到的第一上清液于50ml容量瓶中，沉淀保留在離心管中；2)加入10ml的流動相(磷酸-乙腈溶液，其中乙腈與磷酸的體積比為3：7)于所述離心管中，超聲5min后，4000r/min離心5min，取所得到的第二上清液于所述容量瓶中，沉淀保留在所述離心管中；3)重復(fù)步驟2)的操作2次，每次所述流動相的用量為5mL；4)于所述容量瓶中，用所述流動相定容，得到待測液；5)稱取甜菊糖苷標(biāo)準(zhǔn)品，配制濃度分別為5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的甜菊糖苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，0.22nm有機(jī)膜過濾，得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；6)利用液相色譜分別對所述待測液及系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，將所得到的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積與溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并將所述待測液的峰面積代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便確定所述含乳飲料中甜菊糖苷含量，其中，色譜檢測條件如下：色譜柱：艾杰爾C18色譜柱(250mm×4.6mm，5.0μm)；流速：1.0mL/min；流動相：0.002mol/L磷酸-乙腈溶液，磷酸-乙腈溶液中乙腈與磷酸的體積比為3：7；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃；波長：210nm。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。附圖說明本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中：圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法的流程示意圖。具體實(shí)施方式下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例。下面描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。需要說明的是，術(shù)語“第一”、“第二”僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相對重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隱含地包括一個或者更多個該特征。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的描述中，除非另有說明，“多個”的含義是兩個或兩個以上。本發(fā)明提出了一種測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法，下面將對其進(jìn)行詳細(xì)描述。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，參見圖1，方法包括：獲得第一上清液S100；獲得第二上清液S200；獲得待測液S300；以及色譜法檢測S400。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。S100獲得第一上清液在該步驟中，將含乳飲料與乙酸鉛溶液進(jìn)行第一混合，并將得到的第一混合液進(jìn)行第一離心，分離所得到的沉淀和第一上清液。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，含乳飲料中基質(zhì)較復(fù)雜，若直接進(jìn)行離心、收集上清液，并對上清液進(jìn)行檢測，則基質(zhì)干擾較大，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，且對儀器造成損害。進(jìn)而，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，預(yù)先利用有機(jī)溶劑將含乳飲料中的大量基質(zhì)沉淀，對含有甜菊糖苷的上清液進(jìn)行檢測，能夠有效地避免基質(zhì)干擾，從而提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。為此，發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)得到最優(yōu)有機(jī)溶劑—乙酸鉛，乙酸鉛能夠充分沉淀蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)，而甜菊糖苷保留在上清液中，且得到的上清液較澄清，對后續(xù)的色譜法檢測的干擾較小，從而較大程度地提高了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、精密度及穩(wěn)定性。然而，其他有機(jī)溶劑的沉淀效果較差，例如，將導(dǎo)致蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)沉淀不完全，上清液較渾濁，影響后續(xù)檢測；或者將導(dǎo)致大量甜菊糖苷隨蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)一同沉淀，檢測結(jié)果偏低。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，乙酸鉛溶液的濃度為2體積％。發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，乙酸鉛溶液的濃度影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。進(jìn)而，經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)得到最優(yōu)乙酸鉛溶液濃度為2體積％，在此條件下能夠充分使蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)沉淀，上清液較澄清，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性較強(qiáng)。若濃度過低，上清液較渾濁，且與沉淀分界不明顯，導(dǎo)致檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性較低；若濃度過高，將導(dǎo)致提取的甜菊糖苷濃度較低，后續(xù)色譜法檢測的峰面積較小，誤差較大，并且浪費(fèi)藥品。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，基于5g含乳飲料，乙酸鉛溶液的用量為0.5～1mL，優(yōu)選0.5mL。發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)得到上述乙酸鉛最優(yōu)用量，在此條件下能夠充分使蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)沉淀，上清液較澄清，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性較強(qiáng)。若用量過高，將導(dǎo)致提取的甜菊糖苷濃度較低，后續(xù)色譜法檢測的峰面積較小，誤差較大；若用量過低，無法充分沉淀脂肪、蛋白質(zhì)等物質(zhì)，上清液較渾濁，且與沉淀分界不明顯，導(dǎo)致檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性較低。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，第一混合包括在超聲下進(jìn)行5～10min。由此，能夠充分沉淀脂肪、蛋白質(zhì)等物質(zhì)，防止干擾。根據(jù)本發(fā)明的另一個實(shí)施例，第一離心是在3000～5000r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行5～10min，優(yōu)選4000r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行5min。由此，能夠有效地使沉淀和上清液分離，便于后續(xù)提取。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。S200獲得第二上清液在該步驟中，將沉淀與流動相進(jìn)行第二混合，并將所得到的第二混合液進(jìn)行第二離心，收集第二上清液。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，流動相為磷酸-乙腈溶液，磷酸-乙腈溶液中乙腈與磷酸的體積比為3：7。發(fā)明人進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，若不含步驟S200，直接將收集的第一上清液進(jìn)行定容的操作，回收率較低，而且標(biāo)準(zhǔn)品的出峰位置與樣品中目標(biāo)物的出峰位置有所偏移，從而使檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度較低。主要原因可能是，由于含乳飲料中基質(zhì)較復(fù)雜，利用乙酸鉛沉淀蛋白質(zhì)和脂肪時，容易將少量甜菊糖苷帶入沉淀中，導(dǎo)致回收率偏低。進(jìn)而，發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，利用后續(xù)色譜法檢測過程中的流動相—磷酸-乙腈溶液進(jìn)一步萃取沉淀中的甜菊糖苷，能夠有效地提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度。接著，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，選擇乙腈、磷酸作為流動相，且乙腈與磷酸的體積比為3：7時，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度進(jìn)一步提高。乙腈能夠有效地從沉淀中提取出甜菊糖苷，磷酸鹽起到調(diào)節(jié)流動相pH值的作用，從而影響目標(biāo)物的出峰時間。若乙腈的比例增大，目標(biāo)物出峰時間較長，延長檢驗(yàn)周期；若乙腈比例較小，目標(biāo)物則與樣品的雜峰相重合，影響檢驗(yàn)準(zhǔn)確度，且無法充分從沉淀中提取出甜菊糖苷。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟S200中，基于5g含乳飲料，流動相的用量為15～25mL，優(yōu)選20mL。發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)得到上述流動相最優(yōu)用量，在此條件下能夠充分提取出蛋白質(zhì)和脂肪沉淀中的甜菊糖苷，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性較強(qiáng)。若用量過高，將導(dǎo)致提取的甜菊糖苷濃度較低，后續(xù)色譜法檢測的峰面積較小，誤差較大；若用量過低，無法充分從沉淀中提取出甜菊糖苷，導(dǎo)致檢測結(jié)果偏低。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，步驟S200中，流動相分兩次與S100所得到的沉淀進(jìn)行第二混合。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，將流動相以任意比例分為兩份，先將其中一份與沉淀進(jìn)行混合，再將所得到的混合液離心，收集上清液；再向沉淀中加入另一份流動相并混合離心，收集上清液。由此能夠充分提取出甜菊糖苷，從而提高了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。優(yōu)選，將流動相等分為兩份。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，第二混合包括在超聲下進(jìn)行5～10min。由此，能夠充分萃取甜菊糖苷。根據(jù)本發(fā)明的另一個實(shí)施例，第二離心是在3000～5000r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行5～10min，優(yōu)選4000r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行5min。由此，能夠有效地使沉淀和上清液分離，便于后續(xù)提取。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。S300獲得待測液在該步驟中，合并第一上清液和第二上清液，并用流動相定容，再將所得到的第三混合液進(jìn)行過濾，得到待測液。發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，若用水進(jìn)行定容，目標(biāo)物與標(biāo)準(zhǔn)品的出峰位置不同，有所偏移，延長檢測時間，且檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性偏低。利用流動相定容后，目標(biāo)物與標(biāo)準(zhǔn)品的出峰位置一致，且檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性較強(qiáng)。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。S400色譜法檢測在該步驟中，利用色譜法對待測液進(jìn)行檢測，并基于檢測結(jié)果確定含乳飲料中甜菊糖苷含量。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，色譜法檢測條件如下：色譜柱：艾杰爾C18色譜柱(250mm×4.6mm，5.0μm)；流速：1.0mL/min；0.002mol/L流動相；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃；波長：210nm。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、穩(wěn)定性好、操作簡便。另外，本發(fā)明提出了另一種測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，方法包括：1)稱取5g含乳飲料于50mL離心管中，加入0.5mL2體積％乙酸鉛水溶液，超聲10min后，4000r/min離心5min，取所得到的第一上清液于50ml容量瓶中，沉淀保留在離心管中；2)加入10ml的流動相(磷酸-乙腈溶液，其中乙腈與磷酸的體積比為3：7)于離心管中，超聲5min后，4000r/min離心5min，取所得到的第二上清液于容量瓶中，沉淀保留在離心管中；3)重復(fù)步驟2)的操作2次，每次流動相的用量為5mL；4)于容量瓶中，用流動相定容，得到待測液；5)稱取甜菊糖苷標(biāo)準(zhǔn)品，配制濃度分別為5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的甜菊糖苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，0.22nm有機(jī)膜過濾，得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；6)利用液相色譜分別對待測液及系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，將所得到的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積與溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并將待測液的峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便確定含乳飲料中甜菊糖苷含量，其中，色譜檢測條件如下：色譜柱：艾杰爾C18色譜柱(250mm×4.6mm，5.0μm)；流速：1.0mL/min；流動相：0.002mol/L磷酸-乙腈溶液，磷酸-乙腈溶液中乙腈與磷酸的體積比為3：7；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃；波長：210nm。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法準(zhǔn)確性強(qiáng)、精密度高、操作簡便。在本發(fā)明的上下文中，所有在此公開了的數(shù)字均為近似值。每一個數(shù)字的數(shù)值有可能會出現(xiàn)1％、2％、5％、7％、8％或10％等差異。每當(dāng)公開一個具有N值的數(shù)字時，任何具有N+/-1％，N+/-2％，N+/-3％，N+/-5％，N+/-7％，N+/-8％或N+/-10％值以內(nèi)的數(shù)字會被明確地公開，其中“+/-”是指加或減。每當(dāng)公開一個數(shù)值范圍中的一個下限，DL，和一個上限，DU，時，任何處于該公開了的范圍之內(nèi)的數(shù)值會被明確地公開。下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的方案進(jìn)行解釋。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下面的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。儀器和設(shè)備：天平：感量為0.1mg，廠家：METTLERTOLEDO，型號：XP205液相色譜儀：帶紫外檢測器，廠家：戴安，型號：U-3000離心機(jī)：廠家：HealForce，型號：Neofuge23R超聲波清洗機(jī)：廠家：旗美，型號：QC10260實(shí)施例1在該實(shí)施例中，按照下列方法測定含乳飲料中甜菊糖苷含量的方法：1、試劑超純水；0.002mol/L磷酸溶液：精密稱取0.196g磷酸于1000mL容量瓶中，加水定容至刻度；2％乙酸鉛溶液：準(zhǔn)確稱取20g乙酸鉛于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用；乙腈：色譜純。2、測定步驟(1)待測液的制備(1-1)稱取試樣約5g(精確到0.1mg)于50mL離心管中，加入0.5mL2％乙酸鉛水溶液，超聲10min后，4000r/min離心5min，取上清液于50ml容量瓶中，沉淀保留在離心管中；(1-2)加入10ml的流動相(磷酸-乙腈溶液，其中乙腈與磷酸的體積比為3：7)于50ml離心管中，超聲5min后，4000r/min離心5min，取上清液于上述50ml容量瓶中，沉淀保留在離心管中；(1-3)重復(fù)步驟(1-2)操作2次，每次流動相的用量為5mL；(1-4)于50mL容量瓶中，用流動相定容至刻度，得到待測液。(2)制備甜菊糖苷標(biāo)準(zhǔn)溶液：甜菊糖苷儲備液：精密稱取甜菊糖苷標(biāo)準(zhǔn)品10mg于10mL容量瓶中，加1ml乙腈，溶解后加水定容至刻度，得甜菊糖苷濃度為1mg/mL的甜菊糖苷儲備液。甜菊糖苷系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密吸取甜菊糖苷儲備液0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL于10mL容量瓶中，用流動相稀釋并定容至刻度，得濃度為5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的甜菊糖苷的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。取此系列標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，過0.22nm有機(jī)膜，得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。(3)利用液相色譜分別對步驟(1)的待測液及步驟(2)所得到的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，將所得到的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積與溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并將待測液的峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算得到含乳飲料中甜菊糖苷含量。其中，色譜檢測條件如下：色譜柱：艾杰爾C18色譜柱(250mm×4.6mm，5.0μm)；流速：1.0mL/min；流動相：0.002mol/L磷酸-乙腈溶液，磷酸-乙腈溶液中乙腈與磷酸的體積比為3：7；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃；波長：210nm。實(shí)施例2準(zhǔn)確度和精密度測定在該實(shí)施例中，按照下列方法測定回收率：(1)將不含甜菊糖苷的含乳飲料與甜菊糖苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液混合，得到加標(biāo)樣品；(2)按照實(shí)施例1的方法測定加標(biāo)樣品中甜菊糖苷含量，并基于下列公式計(jì)算回收率：回收率(％)＝加標(biāo)樣品中甜菊糖苷含量的測定值×100/加標(biāo)樣品中甜菊糖苷含量的理論值。結(jié)果如表1所示，其中，加標(biāo)樣品中甜菊糖苷含量的理論值如表1所示的“加標(biāo)量”?？梢钥闯?，回收率在90％～100％的范圍內(nèi)，RSD值在1.34％～1.68％的范圍內(nèi)，說明本發(fā)明方法的精密度和準(zhǔn)確度較高。表1本發(fā)明的精密度和準(zhǔn)確度(n＝6)試驗(yàn)序號加標(biāo)量(mg/kg)檢測結(jié)果(mg/kg)回收率范圍(％)RSD(％)14.03.8392.12～96.421.3428.07.6893.59～96.871.52320.019.193.35～97.571.68對比例1在該對比例中，按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行檢測，區(qū)別在于，乙酸鉛溶液濃度為1％。結(jié)果如表2所示?？梢钥闯?，加入2％乙酸鉛溶液的準(zhǔn)確度、精密度以及穩(wěn)定性都比1％的乙酸鉛溶液的效果好。表2實(shí)施例1和對比例1的檢測結(jié)果對比例2在該對比例中，按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行檢測，區(qū)別在于，不含步驟(1-2)和(1-3)，直接將上清液進(jìn)行定容。結(jié)果如表3所示?？梢钥闯觯昧鲃酉嗵崛”炔挥昧鲃酉嗵崛〉臏?zhǔn)確度、精密度以及穩(wěn)定性較高。表3實(shí)施例1和對比例2的檢測結(jié)果對比例3在該對比例中，按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行檢測，區(qū)別在于，利用水進(jìn)行定容。用水直接定容提取液，目標(biāo)物的出峰時間與標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時間有部分偏離，且參見表4，對比文件3的準(zhǔn)確度較差。表4實(shí)施例1和對比例3的檢測結(jié)果對比例4在該對比例中，按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行檢測，區(qū)別在于，以5mL乙腈替代乙酸鉛。結(jié)果如表5所示?？梢钥闯觯捎靡译娉恋淼鞍踪|(zhì)和脂肪，回收率和精密度較低。表5對比例4的檢測結(jié)果在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個實(shí)施例”、“一些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個實(shí)施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不必須針對的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任一個或多個實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以將本說明書中描述的不同實(shí)施例或示例以及不同實(shí)施例或示例的特征進(jìn)行結(jié)合和組合。盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。當(dāng)前第1頁1 2 3