本發(fā)明涉及用于腫瘤診斷的分子標(biāo)志，特別涉及用于膀胱癌非侵入式診斷的分子標(biāo)志。

背景技術(shù)：
在全球范圍內(nèi)，每年有近90萬人被診斷為膀胱癌，每年約有25萬人死于膀胱癌[1]。在我國，膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，膀胱癌可分為非肌層浸潤性膀胱癌(Ta/T1期)和肌層浸潤性膀胱癌(T2-T4期)。早期膀胱癌患者可行經(jīng)尿道膀胱腫物電切術(shù)(TransurethralResectionofBladderTumorTURBT),而肌層浸潤性膀胱癌患者需行全膀胱切除、尿流改道，手術(shù)后嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，而且手術(shù)之后5年生存率僅為23％-46％[2]。因此，膀胱癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高腫瘤治療效果和提高患者生存質(zhì)量的關(guān)鍵。膀胱鏡檢查是膀胱癌早發(fā)現(xiàn)、早診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但膀胱鏡檢查為有創(chuàng)性檢查，并且可能導(dǎo)致泌尿系感染、出血、尿道損傷，并且臨床應(yīng)用受到外科醫(yī)生經(jīng)驗(yàn)水平及場地設(shè)備等制約，再者，膀胱光鏡檢查的費(fèi)用也頗為昂貴，諸多因素造成了膀胱鏡檢查不利于膀胱癌的早期篩查。因此，尋求無創(chuàng)、便捷、準(zhǔn)確的膀胱癌早期診斷和術(shù)后檢測方法，是研究者不斷努力的方向。通過檢測尿液中的瘤標(biāo)是目前早期膀胱癌無創(chuàng)性診斷的一種研究趨勢。目前已經(jīng)有數(shù)種獲得美國食品藥物管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)批準(zhǔn)能在臨床上應(yīng)用的尿液膀胱腫瘤標(biāo)記物，包括核基質(zhì)蛋白22(nuclearmatrixprotein22，NMP22)、膀胱腫瘤抗原(Bladdertumorantigen,BTA)、UroVysion、ImmunoCytTMCYFRA21-1、UBCtest[3,4]。其中NMP22及BTA檢測的平均敏感度分別為67％(41％-100％)及68％(51％-100％)、平均特異度分別為79％(43％-95％)及75％(54％-93％)，而其他幾種瘤標(biāo)的敏感度和特異度有待多地區(qū)和多中心的進(jìn)一步研究。這些檢測方法的臨床應(yīng)用，可以使得膀胱癌患者減少膀胱鏡檢查得頻率，減少患者的痛苦及醫(yī)療費(fèi)用，但仍然不能完全取代膀胱鏡檢查。因此，在尿液當(dāng)中尋找新的檢測瘤標(biāo)是目前膀胱癌無創(chuàng)性診斷的研究熱點(diǎn)方向之一，期望能發(fā)現(xiàn)診斷準(zhǔn)確率更高的瘤標(biāo)，或者通過新瘤標(biāo)與某種常用瘤標(biāo)的聯(lián)合診斷來提高診斷準(zhǔn)確度，從而逐步實(shí)現(xiàn)膀胱癌無創(chuàng)診斷的目標(biāo)。AIB1(Amplifiedinbreastcancer1)首先在人類乳腺癌細(xì)胞株當(dāng)中被發(fā)現(xiàn)的癌基因，并已經(jīng)證實(shí)了其在前列腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤細(xì)胞當(dāng)中擴(kuò)增與表達(dá)，AIB1是多種惡性腫瘤生長、增殖多必須的[5-7]。發(fā)明人的前期研究表明，AIB1在膀胱癌組織當(dāng)中的基因及蛋白表達(dá)水平均較正常組織增高，AIB1高表達(dá)水平與患者生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，同時(shí)發(fā)明人還闡明了AIB1通過AKT信號通路及充當(dāng)E2F1協(xié)調(diào)激活因子的作用來促進(jìn)膀胱腫瘤細(xì)胞的增殖，發(fā)明人通過利用納米技術(shù)特異抑制ABI1的表達(dá)之后，能后明顯抑制膀胱癌細(xì)胞株的體外生長與及其在免疫缺陷小鼠體內(nèi)成瘤[8-10]。EIF5A2(Eukaryoticinitiationfactor5A2)基因首先在卵巢癌HT29細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)[11]。之后研究者相繼在卵巢癌、胃癌、肝癌、肺癌及結(jié)腸癌等惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)EIF5A2基因的擴(kuò)增及其編碼的蛋白異常表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生及復(fù)發(fā)密切相關(guān)[12-17]。發(fā)明人的前期研究表明，EIF5A2基因在膀胱癌組織當(dāng)中擴(kuò)增，其編碼的蛋白異常表達(dá)，EIF5A2可以充當(dāng)腫瘤復(fù)發(fā)及進(jìn)展的預(yù)測因子。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)EIF5A2是患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因子。發(fā)明人之后的研究當(dāng)中揭示了EIF5A2是通過STAT而促進(jìn)TGF-B1表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化化來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲[18-20]。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種更為準(zhǔn)確的用于膀胱癌診斷的非侵入式分子標(biāo)志，以及基于該分子標(biāo)志的診斷試劑盒?；谇捌诘难芯炕A(chǔ)，發(fā)明人通過檢測膀胱患者及非膀胱癌人群中尿液當(dāng)中的AIB1及EIF5A2的蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)AIB1及EIF5A2能夠充當(dāng)膀胱癌無創(chuàng)性診斷的新瘤標(biāo)，聯(lián)合AIB1、EIF5A2及NMP22更能提高膀胱癌的診斷準(zhǔn)確度。發(fā)明人檢測了不同組尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白含量。訓(xùn)練組中，膀胱癌組尿液樣本中AIB1(1.40vs.0.35ng/ml)、EIF5A2(5.83vs.4.56ng/ml)和NMP22(7.74vs.6.31ng/ml，三種蛋白的含量明顯高于對照組(p值均小于0.0001)。其中，AIB1的受試者工作特征(receiveroperatingcharacteristicROC)曲線面積為0.846(95％可信區(qū)間[95％CI]0.775–0.917)，通過ROC曲線，得出AIB1的診斷界限值為0.58ng/ml，AIB1對膀胱癌的診斷具有81％(95％CI：71％–89％)的敏感性及88％(95％CI：76％–96％)的特異性，陽性及陰性報(bào)告率分別為92％(95％CI：84％–97％)及73％(95％CI：60％–84％)；EIF5A2的ROC曲線面積為0.761(95％CI0.675–0.846)，通過ROC曲線，得出EIF5A2的診斷界限值為5.06ng/ml，EIF5A2對膀胱癌的診斷具有74％(95％CI：64％–83％)的敏感性及78％(95％CI：64％–89％)的特異性，陽性及陰性報(bào)告率分別為85％(95％CI：75％–92％)及64％(95％CI：51％–76％)；NMP22的ROC曲線面積為0.794(95％CI0.712–0.876)，通過ROC曲線，得出NMP22的診斷界限值為6.89ng/ml，NMP22對膀胱癌的診斷具有79％(95％CI：69％–87％)的敏感性及80％(95％CI：66％–90％)的特異性，陽性及陰性報(bào)告率分別為87％(95％CI：77％–94％)及69％(95％CI：56％–81％)。在210例獨(dú)立驗(yàn)證組尿液樣本中，發(fā)明人驗(yàn)證了AIB1、EIF5A2及NMP22具有類似的膀胱癌診斷準(zhǔn)確度(表3)。采用單因素邏輯回歸分析表明：尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22含量的增加都與膀胱癌風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)(p值均小于0.0001)。獨(dú)立驗(yàn)證組中，該結(jié)論同樣成立(p值均小于0.0001)。采用多因素邏輯回歸分析表明：尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22含量的增加都與膀胱癌風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)(p值均小于0.0001)。獨(dú)立驗(yàn)證組中，該結(jié)論同樣成立(p值均小于0.0001)。發(fā)明人利用AIB1、EIF5A2和NMP22三種瘤標(biāo)構(gòu)建膀胱癌尿液診斷模型，在訓(xùn)練組中，模型的ROC曲線面積為0.919(95％CI：0.864–0.974)，通過ROC曲線，診斷模型的界限概率分值是10.08，模型對膀胱癌的診斷具有92％(95％CI：84％–97％)的敏感性及92％(95％CI：81％–98％)的特異性，陽性及陰性報(bào)告率分別為95％(95％CI：88％–99％)及87％(95％CI：75％–95％)。獨(dú)立驗(yàn)證組中，模型的ROC曲線面積為0.898(95％CI：0.849–0.947)，模型對膀胱癌的診斷具有89％(95％CI：82％–94％)的敏感性及91％(95％CI：82％–96％)的特異性，陽性及陰性報(bào)告率分別為94％(95％CI：89％–98％)及82％(95％CI：72％–90％)。概率分值的分布顯示模型具有更好的診斷準(zhǔn)確性，優(yōu)于單個(gè)診斷瘤標(biāo)(p值均小于0.05)。采用單因素邏輯回歸分析表明：模型中概率分值的增加與膀胱癌風(fēng)險(xiǎn)增加正相關(guān)(p值小于0.0001)。獨(dú)立驗(yàn)證組中，該結(jié)論同樣成立(p值小于0.0001)。采用多因素邏輯回歸分析表明：模型中概率分值的增加與膀胱癌風(fēng)險(xiǎn)增加正相關(guān)(p值小于0.0001)。獨(dú)立驗(yàn)證組中，該結(jié)論同樣成立(p值小于0.0001)。發(fā)明人基于AIB1、EIF5A2和NMP22建立了膀胱癌的非侵入式診斷模型，極大地方便了膀胱癌的診斷。附圖說明圖1是訓(xùn)練組和獨(dú)立驗(yàn)證組尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白含量檢測結(jié)果繪制的散點(diǎn)圖；圖2是訓(xùn)練組和獨(dú)立驗(yàn)證組中AIB1、EIF5A2和NMP22在尿液樣本中蛋白表達(dá)的濃度；圖3是尿液AIB1、EIF5A2和NMP22用于膀胱癌診斷的特征表現(xiàn)情況；圖4是含有AIB1、EIF5A2和NMP22的尿液膀胱癌診斷模型的表現(xiàn)情況。具體實(shí)施方式方法和材料樣本和數(shù)據(jù)收集本研究是在獲得當(dāng)?shù)貍惱韺彶槲瘑T會批準(zhǔn)后進(jìn)行。所有納入研究對象均簽署知情同意書?？偣彩占?45位納入研究對象的晨尿，尿液樣本均值收集后30min內(nèi)于-20℃保存直到分析。訓(xùn)練組中，85膀胱癌患者尿液樣本為來自中山大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年11月25日至2014年10月28日期間所收集的樣本。50位對照組對象由6名腎結(jié)石患者、5名良性膀胱腫物患者、7名良性前列腺增生癥患者、7名血尿癥患者、6名尿路感染患者和19名健康志愿者組成。5名良性膀胱腫物患者進(jìn)行過經(jīng)尿道膀胱腫物電切術(shù)，7名良性前列腺增生患者均進(jìn)行過經(jīng)尿路前列腺電切手術(shù)。獨(dú)立驗(yàn)證組中，134份膀胱癌患者液樣本均來自中山大學(xué)腫瘤中心2013年11月1日至2014年11月28日期間所收集的樣本，對照組中76位對象由7名腎結(jié)石患者、8名良性膀胱腫物患者、10名良性前列腺增生癥患者、9名血尿癥患者、8名尿路感染患者和34名健康志愿者組成。良性膀胱損傷患者進(jìn)行過經(jīng)尿道膀胱腫物電切術(shù)，良性前列腺增生患者進(jìn)行經(jīng)尿路前列腺電切手術(shù)。腫瘤分級參照2004世界衛(wèi)生組織(WHO)分級系統(tǒng)，腫瘤分期參照第六版腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移[tumor-nodes-metastasis(TNM)]分期系統(tǒng)。所有納入研究對象均確認(rèn)無腎功能損害。對照組血尿患者均進(jìn)行了膀胱鏡檢查確認(rèn)無膀胱腫物。根據(jù)國際共識小組公開的膀胱組織標(biāo)志，本研究為二期(驗(yàn)證)研究。報(bào)告數(shù)據(jù)參照根據(jù)診斷準(zhǔn)確性報(bào)告規(guī)范(Standardsforreportingofdiagnosticaccuracy)。尿液樣本的處理在治療介入前，對每個(gè)對象收集約50ml清晨第一次中段尿液，收集后立即在4℃，1000g離心力下離心10分鐘。吸取尿上清于-20℃凍存直至實(shí)驗(yàn)分析。試劑人屬AIB1和NMP22(NUMA1:SEC332Hu)的ELISA試劑盒購自優(yōu)爾生生命科學(xué)(中國武漢)。用于檢測人尿液樣本EIF5A2的酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)(enzyme-linkedimmunosorbentassayELISA)配對抗體(H00056648-AP11)和重組蛋白(H00056648-P01)購自Abnova公司(中國臺灣臺北)。二次鏈霉親和素-過氧化物偶連抗鼠免疫球蛋白G抗體(ab6789)購自Abcam(Cambridge,MA,USA)。尿液樣本AIB1和NMP22的檢測使用ELISA試劑盒定量尿樣中的AIB1和NMP22蛋白濃度，按試劑盒的使用說明重復(fù)測定3次。AIB1的檢測敏感值為0.124ng/ml，NMP22的檢測敏感值為0.063ng/ml。尿液樣本EIF5A2的檢測采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)定量尿樣中的EIF5A2。按配對抗體的使用說明重復(fù)測定3次。EIF5A2的檢查敏感值為3ng/ml。統(tǒng)計(jì)分析組內(nèi)分類變量差異使用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析。使用非參數(shù)的Mann–WhitneyU檢驗(yàn)比較組間的變量。重復(fù)測量數(shù)據(jù)的精度使用組內(nèi)相關(guān)系數(shù)(intra-classcorrelationcoefficients)確定。美國國家腫瘤研究院推薦使用受試者工作特征(ROC)曲線評價(jià)某種瘤標(biāo)是否適合于腫瘤診斷[21]。因此，發(fā)明人使用ROC曲線分析來選定一個(gè)由Youden指數(shù)確定的診斷界值[22]。對象值大于或等于界值被定義為陽性(患有腫瘤)，對象值小于界值被定義為陰性(非腫瘤)。發(fā)明利用ROC曲線確定單個(gè)瘤標(biāo)對膀胱癌診斷的敏感性、特異性、陽性報(bào)告率、陰性報(bào)告率。在訓(xùn)練組當(dāng)中，發(fā)明人使用多二次回歸分析以構(gòu)建包含AIB1、EIF5A2和NMP22的模型，根據(jù)模型得出個(gè)體預(yù)測分值公式＝(3.304×AIB1表達(dá)值)+(0.828×EIF5A2表達(dá)值)+(0.546×NMP22表達(dá)值)，運(yùn)用預(yù)測公式根據(jù)對象個(gè)體AIB1、EIF5A2和NMP22的表達(dá)水平計(jì)算每個(gè)對象的預(yù)測分值。發(fā)明人根據(jù)ROC曲線分析來選定一個(gè)由Youden指數(shù)確定的診斷界定預(yù)測分值，發(fā)明利用ROC曲線確定模型對膀胱癌診斷的敏感性、特異性、陽性報(bào)告率、陰性報(bào)告率。發(fā)明人采用同樣的方法將該模型應(yīng)用于獨(dú)立驗(yàn)證組。發(fā)明人使用單因素和多因素二元邏輯回歸分析計(jì)算比值比和95％置信區(qū)間。本研究中統(tǒng)計(jì)學(xué)意義設(shè)定為p<0.05，所有p值都是雙邊值。發(fā)明人使用SPSS12.0和第八版醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件(MedCalcversion8.0)對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。研究對象的特性表1體現(xiàn)了訓(xùn)練組和獨(dú)立驗(yàn)證組的臨床和病理學(xué)特性。訓(xùn)練組由85份膀胱癌患者的尿液樣本(實(shí)驗(yàn)組)和50份對照尿液樣本組成。實(shí)驗(yàn)組和對照之間的性別、年齡和吸煙習(xí)慣方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p值均大于0.05)。實(shí)驗(yàn)組中，64.7％為非肌層浸潤膀胱癌(non-muscleinvasiveBCa，NMIBC)，43.5％為低級別膀胱癌(low-gradedisease)。獨(dú)立驗(yàn)證組中由134份膀胱癌患者的尿液樣本(實(shí)驗(yàn)組)和76份對照尿液樣本組成，實(shí)驗(yàn)組和對照之間的性別、年齡和吸煙習(xí)慣方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p值均大于0.05)。實(shí)驗(yàn)組中，64.7％的患者為非肌層浸潤膀胱癌，41.8％為低級別膀胱癌。訓(xùn)練組和獨(dú)立驗(yàn)證組的相對應(yīng)組之間的患者在性別、年齡、吸煙習(xí)慣、腫瘤病理分期和腫瘤級別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p值均大于0.05)。ELISA數(shù)據(jù)重復(fù)性的評估發(fā)明人驗(yàn)證ELISA蛋白測量結(jié)果的重復(fù)穩(wěn)定性，重復(fù)測量了訓(xùn)練組和獨(dú)立驗(yàn)證組尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22的蛋白含量。根據(jù)所有樣本的檢測結(jié)果繪制散點(diǎn)圖驗(yàn)證3次連續(xù)測量的重復(fù)性。在本研究中，所有的組內(nèi)相關(guān)系數(shù)(ICC)都大于0.98，表明所有組中的測量結(jié)果都具有很好重復(fù)穩(wěn)定性(圖1)?；诖?，發(fā)明人認(rèn)為ELISA檢測流程非常適用于尿液中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白水平的檢測。實(shí)驗(yàn)組及對照組尿液樣本中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白水平的表達(dá)圖2顯示了訓(xùn)練組和獨(dú)立驗(yàn)證組中AIB1、EIF5A2和NMP22在尿液樣本中蛋白表達(dá)的濃度。在訓(xùn)練組中，實(shí)驗(yàn)組和對照組中AIB1的中位濃度值分別為1.40ng/ml和0.35ng/ml；EIF5A2中位濃度值分別為5.83ng/ml和4.56ng/ml；NMP22的中位濃度值分別為7.74ng/ml和6.31ng/ml，實(shí)驗(yàn)組中三種蛋白的濃度均高于對照組，所有p值均小于0.0001，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在獨(dú)立驗(yàn)證組中，實(shí)驗(yàn)組和對照組中AIB1的中位濃度值分別為1.31ng/ml和0.39ng/ml；EIF5A2的中位濃度值分別為5.74ng/ml和4.60ng/ml；NMP22的中位濃度值分別為7.78ng/ml和6.23ng/ml，實(shí)驗(yàn)組中三種蛋白的濃度均高于對照組，所有p值均小于0.0001，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。如表2所示，在訓(xùn)練組中，肌層浸潤性膀胱癌患者尿液中AIB1、EIF5A2和NMP22的蛋白濃度均比非肌層浸潤性膀胱癌患者的濃度高，三組p值均小于0.05，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在獨(dú)立驗(yàn)證組中得出同樣的結(jié)果(表2)。將膀胱癌患者按性別、年齡、吸煙習(xí)慣分組時(shí)，在訓(xùn)練組或獨(dú)立驗(yàn)證組中AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表2)。尿液AIB1、EIF5A2和NMP22用于膀胱癌診斷的特征表現(xiàn)通過訓(xùn)練組可得出AIB1、EIF5A2和NMP22的診斷界值分別為0.58ng/ml,5.06ng/ml,和6.89ng/ml。圖3A為訓(xùn)練組中AIB1、EIF5A2和NMP22的ROC曲線。表3顯示了尿液中三種生物標(biāo)志的診斷準(zhǔn)確水平。在訓(xùn)練組中，AIB1具有81％的敏感性和88％的特異性，ROC曲線下面積為0.846(95％可信度[95％CI]0.775–0.917)；尿液EIF5A2具有74％的敏感度和78％的特異性，ROC曲線下面積為0.761(95％CI0.675–0.846)。尿液NMP22具有79％的敏感度和80％的特異性，ROC曲線下面積為0.794(95％CI0.712–0.876)。為驗(yàn)證這3個(gè)生物標(biāo)志在不同的人群中具有相似的診斷表現(xiàn)，發(fā)明人在具有210例的獨(dú)立組中對3個(gè)生物標(biāo)記物進(jìn)行了驗(yàn)證。將訓(xùn)練組中得出的3個(gè)生物標(biāo)記物診斷界值分別用于獨(dú)立驗(yàn)證組，發(fā)現(xiàn)它們均具有類似的診斷準(zhǔn)確度(圖3B，表3)。表3.訓(xùn)練組和獨(dú)立驗(yàn)證組AIB1、EIF5A2、NMP22及模型的膀胱癌診斷準(zhǔn)確度：CI＝置信區(qū)間。將AIB1或EIF5A2的AUC與NMP22的進(jìn)行對比，在訓(xùn)練組中它們的診斷準(zhǔn)確度均無顯著區(qū)別(p>0.05)。但是，在獨(dú)立驗(yàn)證組中，AIB1的診斷準(zhǔn)確度顯著大于NMP22的診斷準(zhǔn)確度。尿液AIB1、EIF5A2和NMP22蛋白水平用于膀胱癌診斷的邏輯回歸分析訓(xùn)練組中，單因素邏輯回歸分析提示尿液中AIB1、EIF5A2和NMP22含量的增加都與患膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)(p值均小于0.0001，表4)。在獨(dú)立驗(yàn)證組中得出同樣的結(jié)論(p值均小于0.0001，表4)。多因素logistics回歸分析排除了年齡、性別和吸煙習(xí)慣三種因素影響AIB1、EIF5A2和NMP22對膀胱癌診斷的準(zhǔn)確度(p值均小于0.0001表4)。構(gòu)建包含有AIB1、EIF5A2和NMP22的尿液膀胱癌診斷模型在訓(xùn)練組中，根據(jù)3個(gè)瘤標(biāo)的蛋白水平得出膀胱癌診斷模型的概率分值是10.08。概率分值的分布圖顯示模型具有更好的診斷準(zhǔn)確度(圖4A)，其具有92％的敏感性和92％的特異性，AUC為0.919(95％CI0.864–0.974)，優(yōu)于單個(gè)診斷標(biāo)志(p值均小于0.05圖3A)。在單因素logistic回歸中，模型的概率分值與患膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)(p<0.0001，表4)。多因素logistics回歸分析排除了年齡、性別和吸煙習(xí)慣三種因素影響模型對膀胱癌診斷的準(zhǔn)確度(p<0.0001，表4)。為驗(yàn)證模型在不同的人群中是否具有相似的診斷準(zhǔn)確度，發(fā)明人將其應(yīng)用于由來自其他醫(yī)療中心的134位患者和76對照對象。結(jié)果表明模型具有訓(xùn)練組的類似的診斷準(zhǔn)確度(圖4B)。圖3B顯示了模型的ROC曲線，其敏感性和特異性分別是89％和91％(表3)。模型的AUC為0.898(95％CI0.849–0.947)，再次證明了其診斷準(zhǔn)確度優(yōu)于任何單個(gè)生物標(biāo)志(p值均小于0.05，圖3B)。在單因素logistic回歸中，模型的概率分值與患膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)(p<0.0001，表4)。多因素logistics回歸分析排除了年齡、性別和吸煙習(xí)慣三種因素影響模型對膀胱癌診斷的準(zhǔn)確度(p<0.0001，表4)。表4.訓(xùn)練組及獨(dú)立驗(yàn)證組的邏輯回歸分析：CI＝置信區(qū)間。參考文獻(xiàn)1.KlotzLandBrausiMA.WorldUrologicOncologyFederationBladderCancerPreventionProgram:Aglobalinitiative.UrolOncol-SeminOri.2015；33(1):25-29.2.JemalA,SiegelR,XuJandWardE.Cancerstatistics,2010.CA:acancerjournalforclinicians.2010；60(5):277-300.3.TilkiD,BurgerM,DalbagniG,GrossmanHB,HakenbergOW,PalouJ,ReichO,RoupretM,ShariatSFandZlottaAR.Urinemarkersfordetectionandsurveillanceofnon-muscle-invasivebladdercancer.Europeanurology.2011；60(3):484-492.4.BabjukM,SoukupV,PeslM,KostirovaM,DrncovaE,SmolovaH,SzakacsovaM,GetzenbergR,PavlikIandDvoracekJ.UrinarycytologyandquantitativeBTAandUBCtestsinsurveillanceofpatientswithpTapT1bladderurothelialcarcinoma.Urology.2008；71(4):718-722.5.GnanapragasamVJ,LeungHY,PulimoodAS,NealDEandRobsonCN.ExpressionofRAC3,asteroidhormonereceptorco-activatorinprostatecancer.Britishjournalofcancer.2001；85(12):1928-1936.6.TannerMM,GrenmanS,KoulA,JohannssonO,MeltzerP,PejovicT,BorgAandIsolaJJ.Frequentamplificationofchromosomalregion20q12-q13inovariancancer.Clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch.2000；6(5):1833-1839.7.SakaguchiH,FujimotoJ,SunWSandTamayaT.Clinicalimplicationsofsteroidreceptorcoactivator(SRC)-3inuterineendometrialcancers.TheJournalofsteroidbiochemistryandmolecularbiology.2007；104(3-5):237-240.8.LuoJH,XieD,LiuMZ,ChenW,LiuYD,WuGQ,KungHF,ZengYXandGuanXY.ProteinexpressionandamplificationofAIB1inhumanurothelialcarcinomaofthebladderandoverexpressionofAIB1isanewindependentprognosticmarkerofpatientsurvival.InternationaljournalofcancerJournalinternationalducancer.2008；122(11):2554-2561.9.TongZT,WeiJH,ZhangJX,LiangCZ,LiaoB,LuJ,FanS,ChenZH,ZhangF,MaHH,QianWC,KongLL,FangY,ChenW,XieDandLuoJH.AIB1predictsbladdercanceroutcomeandpromotesbladdercancercellproliferationthroughAKTandE2F1.Britishjournalofcancer.2013；108(7):1470-1479.10.WeiJ,CheangT,TangB,XiaH,XingZ,ChenZ,FangY,ChenW,XuA,WangSandLuoJ.Theinhibitionofhumanbladdercancergrowthbycalciumcarbonate/CaIP6nanocompositeparticlesdeliveringAIB1siRNA.Biomaterials.2013；34(4):1246-1254.11.GuanXY,ShamJS,TangTC,FangY,HuoKKandYangJM.Isolationofanovelcandidateoncogenewithinafrequentlyamplifiedregionat3q26inovariancancer.Cancerresearch.2001；61(9):3806-3809.12.MarchetA,MocellinS,BellucoC,AmbrosiA,DeMarchiF,MammanoE,DigitoM,LeonA,D'ArrigoA,LiseMandNittiD.Geneexpressionprofileofprimarygastriccancer:towardsthepredictionoflymphnodestatus.Annalsofsurgicaloncology.2007；14(3):1058-1064.13.XieD,MaNF,PanZZ,WuHX,LiuYD,WuGQ,KungHFandGuanXY.OverexpressionofEIF-5A2isassociatedwithmetastasisofhumancolorectalcarcinoma.Humanpathology.2008；39(1):80-86.14.YangGF,XieD,LiuJH,LuoJH,LiLJ,HuaWF,WuHM,KungHF,ZengYXandGuanXY.ExpressionandamplificationofeIF-5A2inhumanepithelialovariantumorsandoverexpressionofEIF-5A2isanewindependentpredictorofoutcomeinpatientswithovariancarcinoma.Gynecologiconcology.2009；112(2):314-318.15.TangDJ,DongSS,MaNF,XieD,ChenL,FuL,LauSH,LiY,LiYandGuanXY.Overexpressionofeukaryoticinitiationfactor5A2enhancescellmotilityandpromotestumormetastasisinhepatocellularcarcinoma.Hepatology(Baltimore,Md).2010；51(4):1255-1263.16.HeLR,ZhaoHY,LiBK,LiuYH,LiuMZ,GuanXY,BianXW,ZengYXandXieD.OverexpressionofeIF5A-2isanadverseprognosticmarkerofsurvivalinstageInon-smallcelllungcancerpatients.InternationaljournalofcancerJournalinternationalducancer.2011；129(1):143-150.17.ZhuW,CaiMY,TongZT,DongSS,MaiSJ,LiaoYJ,BianXW,LinMC,KungHF,ZengYX,GuanXYandXieD.OverexpressionofEIF5A2promotescolorectalcarcinomacellaggressivenessbyupregulatingMTA1throughC-myctoinduceepithelial-mesenchymaltransition.Gut.2012；61(4):562-575.18.ChenW,LuoJH,HuaWF,ZhouFJ,LinMC,KungHF,ZengYX,GuanXYandXieD.OverexpressionofEIF-5A2isanindependentpredictorofoutcomeinpatientsofurothelialcarcinomaofthebladdertreatedwithradicalcystectomy.Cancerepidemiology,biomarkers&prevention:apublicationoftheAmericanAssociationforCancerResearch,cosponsoredbytheAmericanSocietyofPreventiveOncology.2009；18(2):400-408.19.WeiJH,CaoJZ,ZhangD,LiaoB,ZhongWM,LuJ,ZhaoHW,ZhangJX,TongZT,FanS,LiangCZ,LiaoYB,PangJ,WuRH,FangY,ChenZH,etal.EIF5A2predictsoutcomeinlocalisedinvasivebladdercancerandpromotesbladdercancercellaggressivenessinvitroandinvivo.Britishjournalofcancer.2014；110(7):1767-1777.20.LuoJH,HuaWF,RaoHL,LiaoYJ,KungHF,ZengYX,GuanXY,ChenWandXieD.OverexpressionofEIF-5A2predictstumorrecurrenceandprogressioninpTa/pT1urothelialcarcinomaofthebladder.Cancerscience.2009；100(5):896-902.21.PepeMS,EtzioniR,FengZ,PotterJD,ThompsonML,ThornquistM,WingetMandYasuiY.Phasesofbiomarkerdevelopmentforearlydetectionofcancer.JournaloftheNationalCancerInstitute.2001；93(14):1054-1061.22.FlussR,FaraggiDandReiserB.EstimationoftheYoudenIndexanditsassociatedcutoffpoint.BiometricaljournalBiometrischeZeitschrift.2005；47(4):458-472.