一種量子點(diǎn)-抗體溶液及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種量子點(diǎn)-抗體溶液，使用量子點(diǎn)代替?zhèn)鹘y(tǒng)膠體金或熒光基團(tuán)進(jìn)行標(biāo)記，所述量子點(diǎn)-抗體溶液與原有提前干燥在玻璃纖維膜上的量子點(diǎn)-抗體交聯(lián)物不同，其釋放程度對(duì)反應(yīng)結(jié)果影響小，無(wú)干擾，大大提高了靈敏度，適用于所有抗體與量子點(diǎn)的交聯(lián)，甚至可用于檢測(cè)一些微量或痕量物質(zhì)，該類物質(zhì)由于濃度或含量過(guò)低而無(wú)法使用現(xiàn)有免疫層析法進(jìn)行檢測(cè)。
【專利說(shuō)明】一種量子點(diǎn)-抗體溶液及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)分析檢測(cè)領(lǐng)域，尤其是一種量子點(diǎn)-抗體溶液及其制備方法與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]現(xiàn)階段，快速檢測(cè)試劑盒一般的標(biāo)記物是膠體金或者熒光基團(tuán)。例如，檢測(cè)轉(zhuǎn)鐵蛋白(SF)的檢測(cè)試紙，由含有膠體金標(biāo)記的抗人SF抗體的膠體金-抗體墊。
[0003]膠體金標(biāo)記的檢測(cè)試劑盒雖然成本較量子點(diǎn)更低，但檢測(cè)靈敏度不如量子點(diǎn)標(biāo)記高，檢測(cè)范圍也較量子點(diǎn)更窄。熒光基團(tuán)標(biāo)記的檢測(cè)試劑盒，靈敏度也低于量子點(diǎn)標(biāo)記。
[0004]膠體金使用可見(jiàn)光吸光進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果為反應(yīng)區(qū)上一條紅色或紫色的條帶。一般膠體金檢測(cè)試劑盒均為肉眼觀察該條帶是否出現(xiàn)及顏色深淺。而量子點(diǎn)則是由紫外光激發(fā)，產(chǎn)生非常強(qiáng)的激發(fā)光，其信號(hào)強(qiáng)度要大于膠體金的反應(yīng)信號(hào)，提高靈敏度。同時(shí)，當(dāng)膠體金在反應(yīng)區(qū)結(jié)合達(dá)到一定值時(shí)，再增加結(jié)合膠體金不會(huì)改變條帶顏色。而量子點(diǎn)是進(jìn)行發(fā)光強(qiáng)度測(cè)定，故而無(wú)此問(wèn)題，從而增大檢測(cè)范圍。
[0005]和熒光基團(tuán)相比，量子點(diǎn)的激發(fā)光和發(fā)射光距離較遠(yuǎn)，故而激發(fā)光對(duì)于發(fā)射光的干擾很小，從而減小檢測(cè)的本底值，進(jìn)而提高靈敏度。同時(shí)，量子點(diǎn)的激發(fā)光譜很窄，故而在峰值的光強(qiáng)非常強(qiáng)。若使用同樣光柵進(jìn)行測(cè)定時(shí)，量子點(diǎn)產(chǎn)生的激發(fā)光強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于突光基團(tuán)的發(fā)光強(qiáng)度。故而量子點(diǎn)標(biāo)記得到的激發(fā)光信號(hào)更強(qiáng)。同時(shí)，和熒光基團(tuán)相比，量子點(diǎn)具有相似或者更高的吸光系數(shù)和光量子產(chǎn)率。故而使用量子點(diǎn)標(biāo)記，其檢測(cè)靈敏度較熒光基團(tuán)更聞。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種量子點(diǎn)-抗體溶液。
[0007]本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于提供上述量子點(diǎn)-抗體溶液的制備方法。
[0008]本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于提供上述量子點(diǎn)-抗體溶液的應(yīng)用。
[0009]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0010]一種量子點(diǎn)-抗體溶液，是由下述方法得到的:
[0011](I)每 20-200nmol 抗體和 200pmol 量子點(diǎn)混勻后，加入 40_200nmol 的 EDC 和 NHS，避光反應(yīng)60-180分鐘并持續(xù)攪拌；
[0012](2)所得反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到1K-1OOKDa孔徑的超濾管中，在速度10，OOOXg下離心15分鐘，重復(fù)5次；
[0013](3)收集超濾管中的反應(yīng)產(chǎn)物，即為量子點(diǎn)-抗體交聯(lián)物；
[0014](4)在該溶液中加入2% BSA后，存于4°C冰箱中備用。
[0015]優(yōu)選的，上述量子點(diǎn)-抗體溶液，所述抗體可以是所有單克隆或多克隆抗體。
[0016]優(yōu)選的，上述量子點(diǎn)-抗體溶液，所述量子點(diǎn)是ZnS、CdS、HgS、ZnSe, CdSe, HgSe,CdTe, ZnTe, Zn。、PbSe, HgTe, CaAs, InP、InAs, InCaAs, CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd(OH)2, CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe, BaS, BaSe, BaTe, CdS:Mn, ZnS:Mn, CdS: Cu、ZnS: Cu、CdS: Tb、ZnS: Tb 中的任意一種或任意幾種納米粒子的組合，以及由上述任意一種量子點(diǎn)為核、二氧化硅為殼的核殼型納米復(fù)合粒子。
[0017]上述量子點(diǎn)使用化學(xué)方法進(jìn)行鏈接，即使用EDC和NHS，以連接-NH2和-COOH基團(tuán)。
[0018]上述量子點(diǎn)-抗體溶液的制備方法，具體步驟為:
[0019](I)每 20-200nmol 抗體和 200pmol 量子點(diǎn)混勻后，加入 40_200nmol 的 EDC 和 NHS，避光反應(yīng)60-180分鐘并持續(xù)攪拌；
[0020](2)所得反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到1K-1OOKDa孔徑的超濾管中，在速度10，000 X g下離心15分鐘，重復(fù)5次；
[0021](3)收集超濾管中的反應(yīng)產(chǎn)物，即為量子點(diǎn)-抗體交聯(lián)物；
[0022](4)在該溶液中加入2% BSA后，存于4°C冰箱中備用。
[0023]優(yōu)選的,上述量子點(diǎn)-抗體溶液的制備方法,所述量子點(diǎn)是ZnS、CdS> HgS> ZnSe>CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd (OH)2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe, BaS, BaSe, BaTe, CdS:Mn, ZnS:Mn, CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb 中的任意一種或任意幾種納米粒子的組合，以及由上述任意一種量子點(diǎn)為核、二氧化硅為殼的核殼型納米復(fù)合粒子。
[0024]上述量子點(diǎn)-抗體溶液在制備檢測(cè)試紙和/或試劑盒方面的應(yīng)用。
[0025]優(yōu)選的，上述量子點(diǎn)-抗體溶液的應(yīng)用，將樣品加入所述量子點(diǎn)-抗體溶液中，然后再將混合物加到檢測(cè)試紙和/或試劑盒上進(jìn)行反應(yīng)。
[0026]優(yōu)選的，上述量子點(diǎn)-抗體溶液的應(yīng)用，所述檢測(cè)試紙由NC膜、樣品墊、吸樣墊和底板組成，所述樣品墊、NC膜和吸樣墊依次從底板一端排列至另一端，所述NC膜是由下述方法制備得到的:以0.0lM pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)將配對(duì)的待測(cè)物抗體配制成
0.l_5mg/mL溶液，在噴膜儀在NC膜上以1.2-1.5 μ L/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被l-2mg/mL的抗鼠IgG作為C線，干燥，備用。
[0027]優(yōu)選的，上述量子點(diǎn)-抗體溶液的應(yīng)用，所述檢測(cè)試紙的NC膜是一種由硝酸纖維素、尼龍膜、或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜構(gòu)成的多孔結(jié)構(gòu)的膜，孔徑為8-12 μ m。
[0028]本發(fā)明的有益效果是:
[0029]本發(fā)明提供了量子點(diǎn)-抗體溶液使用量子點(diǎn)代替?zhèn)鹘y(tǒng)膠體金或熒光基團(tuán)進(jìn)行標(biāo)記，所述量子點(diǎn)-抗體溶液與原有提前干燥在玻璃纖維膜上的量子點(diǎn)-抗體交聯(lián)物不同，其釋放程度對(duì)反應(yīng)結(jié)果影響小，無(wú)干擾，大大提高了靈敏度，適用于所有抗體與量子點(diǎn)的交聯(lián)，甚至可用于檢測(cè)一些微量或痕量物質(zhì)，該類物質(zhì)由于濃度或含量過(guò)低而無(wú)法使用現(xiàn)有免疫層析法進(jìn)行檢測(cè)。

【具體實(shí)施方式】
[0030]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0031]實(shí)施例1
[0032]一種量子點(diǎn)-抗體溶液，是由下述方法得到的:
[0033](I)每 20-200nmol 抗體和 200pmol 量子點(diǎn)混勻后，加入 40_200nmol 的 EDC 和 NHS，避光反應(yīng)60-180分鐘并持續(xù)攪拌；
[0034](2)所得反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到1K-1OOKDa孔徑的超濾管中，在速度10，000 X g下離心15分鐘，重復(fù)5次；
[0035](3)收集超濾管中的反應(yīng)產(chǎn)物，即為量子點(diǎn)-抗體交聯(lián)物；
[0036](4)在該溶液中加入2% BSA后，存于4°C冰箱中備用。
[0037]所述抗體可以是所有單克隆或多克隆抗體。
[0038]所述量子點(diǎn)是ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd (OH) 2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS, ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe> CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、Sr S、Sr Se、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS: Mn、ZnS: Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu> CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一種或任意幾種納米粒子的組合，以及由上述任意一種量子點(diǎn)為核、二氧化娃為殼的核殼型納米復(fù)合粒子。
[0039]上述參照實(shí)施例對(duì)該一種量子點(diǎn)-抗體溶液及其制備方法與應(yīng)用進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說(shuō)明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個(gè)實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種量子點(diǎn)-抗體溶液，其特征在于:是由下述方法得到的: (1)每20-200nmol抗體和200pmol量子點(diǎn)混勻后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避光反應(yīng)60-180分鐘并持續(xù)攪拌； (2)所得反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到1K-1OOKDa孔徑的超濾管中，在速度10，000Xg下離心15分鐘，重復(fù)5次； (3)收集超濾管中的反應(yīng)產(chǎn)物，即為量子點(diǎn)-抗體交聯(lián)物； (4)在該溶液中加入2%BSA后，存于4°C冰箱中備用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)-抗體溶液，其特征在于:所述量子點(diǎn)是ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO,PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd (OH) 2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、Sr S、Sr Se、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS: Mn、ZnS: Mn、CdS: Cu、ZnS: Cu、CdS: Tb、ZnS: Tb 中的任意一種或任意幾種納米粒子的組合，以及由上述任意一種量子點(diǎn)為核、二氧化硅為殼的核殼型納米復(fù)合粒子。
3.權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)-抗體溶液的制備方法，其特征在于:具體步驟為: (1)每20-200nmol抗體和200pmol量子點(diǎn)混勻后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避光反應(yīng)60-180分鐘并持續(xù)攪拌； (2)所得反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到1K-1OOKDa孔徑的超濾管中，在速度10，000Xg下離心15分鐘，重復(fù)5次； (3)收集超濾管中的反應(yīng)產(chǎn)物，即為量子點(diǎn)-抗體交聯(lián)物； (4)在該溶液中加入2%BSA后，存于4°C冰箱中備用。
4.權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)-抗體溶液在制備檢測(cè)試紙和/或試劑盒方面的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的量子點(diǎn)-抗體溶液的應(yīng)用，其特征在于:將樣品加入所述量子點(diǎn)-抗體溶液中，然后再將混合物加到檢測(cè)試紙和/或試劑盒上進(jìn)行反應(yīng)。
【文檔編號(hào)】G01N33/532GK104459106SQ201410772325
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月15日
【發(fā)明者】李洲, 周洪銳, 許俊燕, 張道紅, 李昀地, 楊延瑞 申請(qǐng)人:天津中新科炬生物制藥有限公司