1-[3-丁基-1(3h)-異苯并呋喃酮-6-基]-1h-吡唑-5(4h)-酮衍生物及制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一類新的1-[3-丁基-1(3H)-異苯并呋喃酮- 6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍生物、其制備方法、含它們的藥物制劑及其作為抗血小板聚集、 抗氧劑和抗腦缺血藥物的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 缺血性腦卒中，是一種高致殘、高致死的疾病，發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜。丁苯酞(3-11-butylphthalide，3_ 丁基-1(3H)_異苯并咲喃酮)是我國(guó)近年來自主開發(fā)的新藥之一，臨床 上主要用于治療輕、中度缺血性腦卒中。丁苯酞通過抑制血小板聚集，改善腦微循環(huán)及能量 代謝發(fā)揮治療作用。
[0004] 依達(dá)拉奉(edaravone，1-苯基-3-甲基-1H-吡唑-5(4H)-酮)是一種新型腦神經(jīng)保 護(hù)劑，由三菱東京制藥株式會(huì)社開發(fā)，2001年在日本上市，臨床上主要用于治療急性缺血性 腦卒中。依達(dá)拉奉具有脂溶性，易透過血腦屏障，有很強(qiáng)的自由基清除及抗脂質(zhì)過氧化活 性，是目前臨床上使用的重要的自由基清除藥物。
[0005] 依達(dá)拉奉和丁苯酞是兩種作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制完全不同的腦缺血治療藥物。鑒于 腦缺血致病機(jī)理復(fù)雜，作用于多個(gè)靶點(diǎn)的多種藥物同時(shí)使用是比較有效的策略。近年來，臨 床上將兩種藥物聯(lián)合使用，研究表明，聯(lián)合應(yīng)用組總有效率顯著高于單一用藥組。但是聯(lián)合 用藥增加了患者負(fù)擔(dān)，也不方便，因此，開發(fā)基于丁苯酞-依達(dá)拉奉藥效團(tuán)拼合的"一藥多 革巴"型衍生物，對(duì)于尋找效果更好的新型腦缺血治療藥物具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明公開了一種1-[3_ 丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍 生物、其制備方法以及醫(yī)藥用途。初步藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的1-[3_丁基-1(3H)_異苯 并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍生物具有優(yōu)良的抗氧化和一定的抗血小板活性，因 此可用于制備治療心腦血管疾病的藥物。
[0007] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一類結(jié)構(gòu)新穎并具有抗氧化和抗血小板聚集活性的 1-[3_ 丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍生物，所述化合物具有以下 結(jié)構(gòu)通式(I):
[0009] 其中：R代表HXi-Cn)直鏈或支鏈烷基或C6-C1Q芳香基，其中芳香基可任選一個(gè)或多 個(gè)以下的基團(tuán)取代:F、Cl、Br、N02、NH：^0H;
[0010] 具體來說，通式I所示卜[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮 衍生物優(yōu)選下列化合物：
[0011] 3-甲基-l-[3-丁基-1(3H)_ 異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_ 酮（h);
[0012] 3-丙基-l-[3-丁基-1(3H)_ 異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_ 酮（12);
[0013] 3-異丙基-l-[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮（13);
[0014] 3-苯基-l-[3-丁基-1(3H)_ 異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_ 酮（14);
[0015] 3-(4-甲氧苯基）-1-[3_ 丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮 (Is)；
[0016] 3-(4-乙氧苯基）-l-[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮 (16);
[0017] 3-(4-氯苯基）-卜[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮（17);
[0018] 3-三氟甲基-l-[3-丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮（18);
[0019] 3-(4-溴苯基)-1-[3_ 丁基-1(3H)_ 異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_ 酮（19);
[0020] 下面藥理實(shí)驗(yàn)中涉及的化合物代號(hào)等同于此處代號(hào)所對(duì)應(yīng)的化合物。
[0021] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供通式I所示化合物的制備方法，具體通過以下步驟 實(shí)現(xiàn)：
[0023]其中R的定義如前所述。
[0024] (1)制備中間體3-丁基-6-肼基-1(3H)_異苯并呋喃酮(b)
[0025]化合物a參考文獻(xiàn)的方法合成（CN102260233A)。在0~5°C條件下，將3-丁基-6-氨 基-1(3H)_異苯并呋喃酮(a)加入體積百分比為30%的酸性水溶液中，a與體積百分比為 30%的酸性水溶液的質(zhì)量比為1: (5~20)，攪拌均勻，冰浴冷卻;再向其中緩慢滴入亞硝酸 鈉溶液，a與亞硝酸鈉的摩爾比為1: (1.0~1.2)，保溫?cái)嚢?.5h，得淡黃色重氮鹽溶液;將二 水氯化亞錫溶于濃酸溶液中，二水氯化亞錫和濃酸溶液質(zhì)量比為1: (2~5)，攪拌均勻，冰浴 冷卻至0~5°C。將含氯化亞錫的酸溶液在0_5°C條件下，緩慢滴入到上述淡黃色重氮鹽溶液 中，制得淡黃色溶液的a與氯化亞錫的摩爾比為1: (3~5)，滴畢，0-5°C繼續(xù)攪拌lh，室溫繼 續(xù)反應(yīng)3h，停止反應(yīng)，過濾，濾餅緩慢加至80mL冰水中，攪拌溶解，用30~50 %的氫氧化鈉溶 液調(diào)節(jié)pH至12~14,析出固體。抽濾，真空干燥，得淡黃色粉末狀固體。
[0026]本發(fā)明所述的酸為濃鹽酸、濃硫酸、濃磷酸中的一種。優(yōu)選濃鹽酸。
[0027] (2)制備1-[3_ 丁基-1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]-1H-吡唑-5(4H)_酮衍生物（I)
[0028] 在室溫下，將3-丁基-6-肼基-1 (3H)-異苯并呋喃酮(b)加入溶劑中，攪拌，溶解，滴 加取代?；宜嵋阴パ苌?，其中b和取代?；宜嵋阴パ苌锏哪柋葹?: (1~1.5)，滴 畢，回流反應(yīng)3~5h。冷卻，減壓蒸除溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析色譜分離[石油醚：乙酸乙酯(v :V) = (3~12):1]，得黃色油狀或粉末狀固體1。
[0029] 本發(fā)明所述的反應(yīng)溶劑選自乙醇、冰醋酸、四氫呋喃、氯仿。優(yōu)選冰醋酸。反應(yīng)的溫 度為室溫至所選溶劑的沸點(diǎn)。
[0030] 本發(fā)明的再一目的是提供通式I所示化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng) 用，尤其是治療腦缺血藥物中的應(yīng)用。
[0031] 以下是本發(fā)明代表化合物的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)：
[0032] 1.化合物抗血小板聚集的活性
[0033]以阿司匹林(ASP)及丁苯酞(NBP)為對(duì)照藥物，采用微量板比濁法對(duì)丁苯酞衍生物 進(jìn)行了體外ADP誘導(dǎo)的抗血小板聚集活性進(jìn)行了測(cè)定。
[0034]試驗(yàn)方法：
[0035] (1)富血小板血漿(PPP)與貧血小板血漿(PRP)的制備：家兔心臟取血，以3.8%的 枸椽酸鈉抗凝(V血:劍=9:1)，將其800r/min離心lOmin后吸取上清液即制得PRP，將剩余 部分以3000r/min離心lOmin后吸取上清液即得PPP。新鮮制備的PRP在2h內(nèi)用完。
[0036] (2)血小板聚集率的測(cè)定:在96孔板中加入90yLPRP，再加入5yL受試化合物(終濃 度100μΜ)，渦旋儀渦旋混勻，于37°C溫育床中振搖溫育lOmin。將96孔板振搖混勻后，置于酶 標(biāo)儀上，655nm下測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定3次，記每孔三次吸光度平均值為AbspRp(Absppp為90μ LPPP加5yLDMS0同法處理測(cè)得）。加入5yL誘導(dǎo)劑ADP(終濃度為ΙΟμΜ)，渦旋混勻，振搖5min， 記平行孔的吸光度均值為Abs_ple。
[0037] (3)數(shù)據(jù)處理：結(jié)果0D655nm以x±s表示，按以下公式計(jì)算各組血小板聚集率 (aggregationrate，AR)及血小板聚集抑制率（aggregationinhibitionrate，AIR)，并單 因素方差分析法(AN0VA)分析實(shí)驗(yàn)組與陽性組之間是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0040] 式中AbsPRP為加入ADP前吸光度;Abssampie為加入ADP振搖5min后吸光度;Absppp為PPP組吸光度;AR_trQi為空白對(duì)照組血小板聚集率;ARexperiment為給藥組血小板聚集率。
[0041] 測(cè)定結(jié)果見表1。
[0042]表1通式I所示化合物對(duì)血小板聚集的影響p±s, n=5)
[0043]
[0044] 2.化合物清除羥自由基活性
[0045]以維生素C和依達(dá)拉奉為陽性藥物，采用H202-Fe2+氧化法評(píng)價(jià)丁苯酞衍生物體外 清除輕自由基（· 0H)的能力。
[0046]試驗(yàn)方法：在3mL試管中加入9·OmMFeS〇4( 1 ·OmL)，0 · 3%H2〇2( 1 ·OmL)，9·OmM水楊 酸乙醇溶液(0.5mL)，分別加入陽性對(duì)照和受試化合物的DMSO溶液(0.5mL)，加蒸餾水補(bǔ)齊， 配成2mM溶液。于37°C水浴30min，在510nm下測(cè)定各組吸光度。
[0047] 羥基自由基清除率(scavengingrate，CR)計(jì)算公式為：
[0049] 式中:Ao為空白對(duì)照組的吸光度;Ax為化合物干預(yù)組的吸光度;AxQ為化合物物對(duì)照 組吸光度，即樣品本底吸收值。
[0050] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
[0051]表2通式I所示化合物對(duì)羥自由基清除作用p±s，
[0053]以上藥理數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明通式I化合物中一些1-[1(3H)_異苯并呋喃酮-6-基]_ 2-吡唑啉-5-酮衍生物，比如h、12、13，具有一定的抗血小板聚集活性和較強(qiáng)的抗氧化活性， 可用于制備治療心腦血管疾病的藥物。
【具體實(shí)施方式】：
[0054]本發(fā)明結(jié)合實(shí)施例做進(jìn)一步的說明。以下實(shí)施例只是說明本發(fā)明，而并非以任何 方式限制本發(fā)明。
[0055] 實(shí)施例1
[0056] 步驟一:3_丁基-6-肼基-1(3H)_異苯并呋喃酮(b)的制備
[0057] 在0~5°C條件下，將3-丁基-6-氨基-1(3H)_異苯并呋喃酮(a)加入體積百分比為 30%的鹽酸水溶液中，a與體積百分比為30%的鹽酸水溶液的質(zhì)量比為1: (5~15)，攪拌均 勻，冰浴冷卻;再向其中緩慢滴入亞硝酸鈉溶液，a與亞硝酸鈉的摩爾比為1:(1.0~1.1)，保 溫?cái)嚢?.5h，得淡黃色重氮鹽溶液;將二水氯化亞錫溶于濃鹽酸溶液中，二水氯化亞錫和濃 鹽酸溶液質(zhì)量比為1: (2~4)，攪拌均勻，冰浴冷卻至0~5°C。將含氯化亞錫的鹽酸溶液在0-5°C條件下，緩慢滴入到上述淡黃色重氮鹽溶液中，制得淡黃色溶液的a與氯化亞錫的摩爾 比為1:(3~4)，滴畢，0-5°C繼續(xù)攪拌lh，室溫繼續(xù)反應(yīng)3h，停止反應(yīng)，過濾，濾餅緩慢加至 80mL冰水中，攪拌溶解，用30~35 %的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至12~13，析出固體。抽濾，真空 干燥，得淡黃色粉末狀固體。m.p: 86.7-87.9°C。
[0058]步驟二:3_甲基-1-[