專(zhuān)利名稱(chēng)：含叔丁基的三氮唑類(lèi)化合物、其制備方法、其應(yīng)用以及含該類(lèi)化合物的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型的含叔丁基的三氮唑類(lèi)抗真菌化合物，本發(fā)明還涉及該類(lèi)化合物的制備方法，本發(fā)明進(jìn)一步涉及了該類(lèi)化合物的制藥用途。

背景技術(shù)：
近年來(lái)，隨著抗生素的大量使用，腫瘤病人的放化療和器官移植患者人數(shù)的增加，導(dǎo)管和插管的普遍采用，皮質(zhì)激素和免疫抑制劑的廣泛使用，以及免疫缺陷病人尤其是艾滋病病人的急速增加，致使真菌感染特別是深部真菌感染發(fā)病率急劇增加。深部真菌感染在臨床上已上升為第三大傳染性疾病，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康。統(tǒng)計(jì)資料表明，艾滋病患者中60％的直接死亡原因?yàn)樯畈空婢腥?。因此，臨床上迫切需要高效、低毒、選擇性高的新型深部抗真菌藥物。
目前，用于治療深部真菌感染的藥物仍然只有兩性霉素B(Amphotericin B)、氟康唑(Fluconazole)和伊曲康唑(Itraconazole)等少數(shù)幾個(gè)藥物。兩性霉素B仍是抗真菌藥物的黃金標(biāo)準(zhǔn)，但副作用嚴(yán)重，如發(fā)熱、寒顫，尤其是嚴(yán)重的腎毒性限制了其臨床應(yīng)用。目前，氟康唑和伊曲康唑應(yīng)用最廣，但日趨嚴(yán)重的耐藥性問(wèn)題和對(duì)有些菌株療效較差限制了其臨床應(yīng)用。近期的一項(xiàng)調(diào)查報(bào)告中發(fā)現(xiàn)，33％的AIDS患者口腔中存在對(duì)氟康唑耐藥性的白色念珠菌。
氮唑類(lèi)藥物的作用機(jī)理是三唑環(huán)上的N原子與真菌細(xì)胞色素P45014α-甾醇去甲基酶(CYP51)血紅素卟啉基上的亞鐵原子相絡(luò)合，從而中斷底物羊毛甾醇的14α去甲基化反應(yīng)，使麥角甾醇合成受阻，羊毛甾醇蓄積，細(xì)胞流動(dòng)性、膜通透性和酶活性改變，結(jié)構(gòu)和功能消失，最終導(dǎo)致真菌死亡。自上世紀(jì)90年代以來(lái)，國(guó)內(nèi)外合成了數(shù)以萬(wàn)計(jì)的三唑類(lèi)化合物，活力康唑(Voriconazole)已于2002年獲準(zhǔn)上市；拉夫康唑(Ravuconazole)、普沙康唑(Posaconazole)和TAK-187等正在進(jìn)行臨床研究。這些化合物與氟康唑和伊曲康唑的結(jié)構(gòu)差別都較小，易于產(chǎn)生交叉耐藥性，而且都含有2，4-二氟苯基。早期的構(gòu)效關(guān)系研究表明，苯基為抗真菌活性所必需，而且最好是2，4-二氯或2，4-二氟取代的苯基，但鹵素取代的苯基在體內(nèi)代謝時(shí)毒性較大。與氟康唑相比，活力康唑和拉夫康唑等目前在臨床使用或在研的第二代三唑醇類(lèi)化合物抗菌譜廣，對(duì)曲霉菌屬真菌的抗菌活性明顯增強(qiáng)，與伊曲康唑不相上下，并且對(duì)耐氟康唑菌株有效，其結(jié)構(gòu)特征是在3位增加了一個(gè)甲基，增加了一個(gè)手性碳原子，合成難度顯著增加。
為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本技術(shù)領(lǐng)域需要開(kāi)放出新穎的化合物，從體外抑菌活性來(lái)看，該類(lèi)新穎的化合物對(duì)深部真菌、淺表真菌和曲霉菌的活性都可與伊曲康唑相比，有些甚至優(yōu)于伊曲康唑。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一類(lèi)高效、低毒、廣譜的新型的含叔丁基的三氮唑類(lèi)化合物。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供該類(lèi)化合物的制備方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有該類(lèi)化合物的抗真菌組合物。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供該化合物在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種體外非醫(yī)藥用抗真菌方法，包括向需要的場(chǎng)所施加本發(fā)明化合物。
一方面，本發(fā)明提供了具有如下通式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1和R3各自獨(dú)立地代表氫原子、甲基或乙基； R2和R4位于苯環(huán)的鄰、間或?qū)ξ唬瑸閱稳〈螂p取代，R2和R4選自(1)鹵素；(2)C1-8烴基；(3)C1-8烴氧基；(4)羥基；(5)硝基。
所述的鹵素優(yōu)選的是氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。
優(yōu)選的C1-8烴基是甲基、乙基、異丙基或叔丁基。
優(yōu)選的C1-8烴氧基是甲氧基或3，4-二氧亞甲基，特別優(yōu)選的是2，3-二甲氧，3，4-二甲氧。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R2和R4是對(duì)位取代的鹵素。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2和R4是對(duì)位取代的硝基。
所述的藥學(xué)上可接受的鹽為所述化合物的鹽酸鹽、磷酸鹽、甲烷磺酸鹽、草酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽或丁二酸鹽等常見(jiàn)藥用鹽類(lèi)。
本發(fā)明的化合物優(yōu)選地選自下表1和表2所列出的化合物 表1

表2

另一方面，本發(fā)明提供了制備上述通式(A)化合物的方法，
其中R1代表氫原子、甲基或乙基； R2位于苯環(huán)的鄰、間或?qū)ξ?，為單取代或雙取代，所述的R2選自(1)鹵素；(2)C1-8烴基；(3)C1-8烴氧基；(4)羥基；(5)硝基， 所述的方法包括使下式(IV)和(VI)化合物在無(wú)水碳酸鹽其中包括但并不限于諸如K2CO3、Na2CO3等和無(wú)水烷基醇包括但并不限于諸如無(wú)水甲醇、無(wú)水乙醇、無(wú)水丙醇等存在下反應(yīng)
式(VI)和式(VI)中，R1和R2的定義同上，得到通式(A)化合物。
再一方面，本發(fā)明還提供了通式(B)化合物的制備方法，
其中R1代表氫原子、甲基或乙基； R2位于苯環(huán)的鄰、間或?qū)ξ?，為單取代或雙取代，所述的R2選自(1)鹵素；(2)C1-8烴基；(3)C1-8烴氧基；(4)羥基；(5)硝基， 所述的方法包括使通式(X)化合物
與下式化合物反應(yīng)
式中的R3和R4的定義同上，得到通式(B)的化合物。
本發(fā)明的再一方面提供了通式(A)或(B)化合物或其藥學(xué)上可接合的鹽在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明還提供了一種體外非醫(yī)藥用的抗真菌方法，包括對(duì)需要的場(chǎng)所施加通式(A)或(B)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種抗真菌組合物，它包含通式(A)和/或通式(B)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體。
根據(jù)上述化合物中取代基結(jié)構(gòu)的不同，其合成路線和方法可以相應(yīng)有多種選擇。例如，以下推薦但并非僅限于此的就是可供選擇的合成路線之一。
流程1中采用相應(yīng)的肉桂酸、一氯頻那酮和哌嗪為起始原料，來(lái)制備結(jié)構(gòu)通式(A)的合成路線如下 流程1
注流程1中的式(VII)化合物相當(dāng)于式(A)化合物 triazole三唑 流程2顯示了結(jié)構(gòu)通式(B)化合物的合成路線
注流程2中的式(XI)化合物相當(dāng)于式(B)化合物 本發(fā)明化合物鹽類(lèi)的合成是在上述反應(yīng)的基礎(chǔ)上，作如下進(jìn)一步反應(yīng)
其中HX代表鹽酸鹽、磷酸鹽、甲烷磺酸鹽、草酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽和丁二酸鹽等常見(jiàn)藥用鹽類(lèi)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，上述各流程由下列具體步驟進(jìn)行實(shí)施 (1)制備α-三唑基頻那酮(II) 1，2，4-三氮唑、一氯頻那酮(I)、無(wú)水K2CO3，在乙酸乙酯中反應(yīng)，生成α-三唑基頻那酮(II)； (2)制備1-(2-叔丁基-2，3-環(huán)氧丙基)-1H-1，2，4-三唑甲烷磺酸鹽(III) α-三唑基頻那酮(II)、三甲基氧硫碘化物、NaH，60℃反應(yīng)5小時(shí)，形成環(huán)氧化物，它可與甲烷磺酸成鹽，得中間體1-(2-叔丁基-2，3-環(huán)氧丙基)-1H-1，2，4-三唑甲烷磺酸鹽(III)。
(3)制備1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-哌嗪-2-丙醇(IV) 1-(2-叔丁基-2，3-環(huán)氧丙基)-1H-1，2，4-三唑甲烷磺酸鹽(III)、無(wú)水哌嗪，在乙醇中回流5h，得到1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-哌嗪-2-丙醇(IV)。
(4)制備取代肉桂酰氯(VI) 各種取代的肉桂酸在SOCl2作用下生成取代肉桂酰氯(VI)。
(5)制備1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-[4-(取代肉桂?；?哌嗪-1-基]-2-丙醇(VII) 1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-哌嗪-2-丙醇(IV)、各種取代肉桂酰氯(VI)、無(wú)水K2CO3，在無(wú)水乙醇中，室溫反應(yīng)得到1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-[4-(取代肉桂?；?哌嗪-1-基]-2-丙醇(VII)。
(6)制備中間體(IX) 1-(2-叔丁基-2，3-環(huán)氧丙基)-1H-1，2，4-三唑、1-(4-羥基苯基)-4-乙酰哌嗪，堿性條件下在乙醇中回流，得到中間體(IX)。
(7)制備中間體(X) 中間體(III)在乙醇、NaOH和水中回流水解成中間體(X)。
(8)制備目標(biāo)化合物(XI) 中間體(X)、各種取代肉桂酰氯、無(wú)水K2CO3，在無(wú)水乙醇中，室溫反應(yīng)得到目標(biāo)化合物(XI)。
按照本發(fā)明的方法合成的本發(fā)明的最優(yōu)選化合物結(jié)構(gòu)、產(chǎn)率、熔點(diǎn)和分子式見(jiàn)上表1和表2。

具體實(shí)施例方式 下面基于各實(shí)施例對(duì)本申請(qǐng)作進(jìn)一步的詳盡闡述，這些實(shí)施例僅供闡述用，并非用來(lái)限定本發(fā)明。
實(shí)施例1α-三唑基頻那酮(II)的制備 于100ml三頸瓶中，依次加入1，2，4-三氮唑8.3g(120mmol)、一氯頻那酮13.5g(100mmol)、干燥研細(xì)的K2CO316.6g(120mmol)、十六烷基三甲基溴化銨少許、乙酸乙酯55ml，加熱回流3h(小時(shí))，過(guò)濾，濾液用飽和食鹽水洗滌，無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，回收溶劑，有淡黃色固體析出，過(guò)濾，濾餅用異丙醇重結(jié)晶，得白色粉末狀固體12.0g，收率71.9％，mp61-63℃。
實(shí)施例21-(2-叔丁基-2，3-環(huán)氧丙基)-1H-1，2，4-三唑甲烷磺酸鹽(III)的制備 將鈉氫(60％石蠟油分散體)1.2g(50mmol)與石油醚30ml置于250ml三頸瓶中，充分?jǐn)嚢韬箪o置，除去上層大部分石油醚。N2保護(hù)下，慢慢加入三甲基氧硫化碘8.8g(40mmol)和二甲亞砜40ml。攪拌1h后，滴加α-三唑基頻那酮6g(36mmol)與無(wú)水四氫呋喃80ml混合溶液，攪拌至勻，50℃條件下反應(yīng)3h。過(guò)濾，濃縮濾液。加入飽和食鹽水20ml，乙酸乙酯萃取(40ml×3)，合并有機(jī)相后，用40ml飽和食鹽水洗滌，無(wú)水Na2SO4干燥過(guò)夜。過(guò)濾，濾液濃縮至近干。30ml乙酸乙酯稀釋后，于0℃滴加甲烷磺酸2.8g(29mmol)與乙酸乙酯30ml的混合溶液，冰箱過(guò)夜，過(guò)濾出固體，異丙醇重結(jié)晶，得5g白色粉末狀固體，收率62.2％，mp118-120℃。1HNMR(DMSO-d6)δ8.74，8.18(2H，s，s，Tr)，4.64(2H，AB，CH2)，2.74(1H，d，J＝4.0Hz，CH2)，2.48(3H，s，CH3SO3H)，2.02(1H，d，J＝4.0Hz，CH2)，0.95[9H，s，C(CH3)3]。
實(shí)施例31-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-哌嗪-2-丙醇(IV)的制備 于250ml反應(yīng)瓶中，依次加入化合物1-(2-叔丁基-2，3-環(huán)氧丙基)-1H-1，2，4-三唑甲烷磺酸鹽(III)1.4g(5mmol)、無(wú)水哌嗪4.3g(50mmol)、無(wú)水乙醇60ml，加熱回流6h?；厥沾蟛糠秩軇?，加入水50ml，減壓濃縮。殘留液中加入氯仿50ml，水洗(20ml×3)，干燥，過(guò)濾，回收溶劑。乙酸乙酯重結(jié)晶，得白色粉末狀固體0.7g，收率為50.0％，mp 96-98℃。
實(shí)施例44-溴肉桂酰氯的制備 于100ml圓底燒瓶中，依次加入4-硝基肉桂酰氯1.3g(6mmol)、1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-(2，4-二氟苯基)-3-(哌嗪-1-基)-2-丙醇1.6g(5mmol)、無(wú)水K2CO32.1g(15mmol)、十六烷基三甲基溴化銨少許、無(wú)水乙醇40ml，室溫?cái)嚢?h，過(guò)濾，濾液柱層析，得黃色粉末狀固體2.2g，收率88.0％，mp144-146℃。
實(shí)施例51-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-(4-溴取代肉桂?；哙?1-基)-2-丙醇(表1中化合物A4)的制備 于100ml反應(yīng)瓶中，依次加入1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-(哌嗪-1-基)-2-丙醇(IV)1.3g(5mmol)、4-溴肉桂酰氯1.5g(6mmol)、無(wú)水K2CO32.1g(15mmol)、十六烷基三甲基溴化銨少許、乙醇40ml，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾，回收溶劑，柱層析得產(chǎn)物1.5g，收率為68.2％，mp133-135℃。1HNMR(DMSO-d6)δ8.29，7.92(2H，s，s，Tr)，7.58-6.73(2H，dd，J＝15.3Hz，J＝15.3Hz，2CH)，7.51-7.27(4H，m，Ar)，4.78(1H，s，OH)，4.37-4.23(2H，dd，J＝14.1Hz，J＝14.1Hz，CH2)，3.52-1.75[10H，m，N(CH2)4N，CH2]，1.01[9H，s，C(CH3)3]。
參照上述實(shí)施例的反應(yīng)步驟，得到如下標(biāo)題化合物。
實(shí)施例61-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-(2，3-二甲氧取代肉桂?；哙?1-基)-2-丙醇(表1中化合物A1)的制備 1HNMR(DMSO-d6)δ8.51，7.97(2H，s，s，Tr)，7.73-7.14(2H，dd，J＝15.6Hz，J＝15.6Hz，2CH)，7.43-7.05(3H，m，Ar)，4.56(1H，brs，OH)，4.36(2H，s，CH2)，3.80-3.71(6H，s，s，2CH3)，2.50-2.17[10H，m，N(CH2)4N，CH2]，0.93[9H，s，C(CH3)3]。
實(shí)施例71-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-(4-氟取代肉桂?；哙?1-基)-2-丙醇(表1中化合物A2)的制備 1HNMR(DMSO-d6)δ8.29，7.92(2H，s，s，Tr)，7.62-6.67(2H，dd，J＝15.3Hz，J＝15.3Hz，2CH)，7.51-7.03(4H，m，Ar)，4.79(1H，brs，OH)，4.38-4.23(2H，dd，J＝14.1Hz，J＝14.1Hz，CH2，)，3.52-1.74[10H，m，N(CH2)4N，CH2]，1.01[9H，s，C(CH3)3]。
實(shí)施例81-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-(4-氯取代肉桂酰基哌嗪-1-基)-2-丙醇(表1中化合物A3)的制備 1HNMR(DMSO-d6)δ8.29，7.92(2H，s，s，Tr)，7.60-6.72(2H，dd，J＝15.3Hz，J＝15.3Hz，2CH)，7.44-7.27(4H，m，Ar)，4.77(1H，s，OH)，4.37-4.23(2H，dd，J＝14.1Hz，J＝14.1Hz，CH2)，3.52-1.75[10H，m，N(CH2)4N，CH2]，1.01[9H，s，C(CH3)3]。
實(shí)施例91-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-(4-硝基取代肉桂?；哙?1-基)-2-丙醇(表1中化合物A4)的制備 1HNMR(DMSO-d6)δ8.28，7.90(2H，s，s，Tr)，8.22-7.60(4H，dd，J＝9.0Hz，J＝9.0Hz，Ar)，7.65-6.87(2H，dd，J＝15.6Hz，J＝15.6Hz，2CH)，4.69(1H，s，OH)，4.36-4.22(2H，dd，J＝14.1Hz，J＝14.1Hz，CH2)，3.52-1.77[10H，m，N(CH2)4N，CH2]，1.00[9H，s，C(CH3)3]。
實(shí)施例10中間體(X)的制備 于100ml圓底燒瓶中，加入絕對(duì)乙醇40ml、金屬鈉0.2g(10mol)，制成醇鈉溶液。加入1-(4-羥基苯基)-4-乙?；哙?.2g(10mmol)，磁力攪拌，待溶解后，滴加化合物1-(2-叔丁基-2，3-環(huán)氧丙基)-1H-1，2，4-三唑1.8g(10mol)，加熱回流7h，將反應(yīng)液用稀NaOH溶液調(diào)pH至8.0-9.0，乙酸乙酯萃取(30ml×3)。干燥，過(guò)濾，回收溶劑，柱層析，得類(lèi)白色固體2.5g，mp 106-108℃。將該固體溶于甲醇40ml中，加熱，回流狀態(tài)下滴加2.5mol·l-1NaOH溶液15ml以及水25ml，反應(yīng)7h，將反應(yīng)液倒入100ml水中，乙酸乙酯提取(30ml×3)，干燥，回收溶劑得油狀物2.0g，無(wú)需純化直接用于下一步反應(yīng)，收率58.5％。
實(shí)施例11目標(biāo)化合物(表2中化合物B5)的制備 于100ml圓底燒瓶中，依次加入4-硝基肉桂酰氯1.3g(6mmol)、中間體(X)1.8g(5mmol)、十六烷基三甲基溴化銨少許、無(wú)水乙醇40ml及無(wú)水K2CO32.1g(15mmol)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，過(guò)濾出固體，濾液濃縮，柱層析，得固體1.9g，mp158-160℃，收率69.1％。1HNMR(DMSO-d6)δ8.10，7.94(2H，s，s，Tr)，8.27-7.67(4H，m，Ar)，6.89-6.69(4H，dd，J＝9.0Hz，J＝9.0Hz，Ar)，7.76-7.03(2H，dd，J＝15.6Hz，J＝15.6Hz，2CH)，4.75-4.33(2H，dd，J＝13.8z，J＝13.8z，CH2)，3.96-3.24(2H，dd，J＝9.6Hz，J＝9.6Hz，CH2)，3.87-3.11[8H，brs，brs，N(CH2)4N]，1.13[9H，s，C(CH3)3]。
參照上述實(shí)施例的反應(yīng)步驟，得到如下標(biāo)題化合物。
實(shí)施例12目標(biāo)化合物(表2中化合物B1)的制備 1HNMR(DMSO-d6)δ8.08，7.93(2H，s，s，Tr)，7.68-6.75(2H，dd，J＝15.3Hz，J＝15.3Hz，2CH)，7.14-6.68(7H，m，2Ar)，4.75-4.33(2H，dd，J＝13.8z，J＝13.8z，CH2)，3.96-3.23(2H，dd，J＝9.6Hz，J＝9.6Hz，CH2)，3.95-3.94(6H，s，s，2CH3)，3.87-3.08[8H，brs，brs，N(CH2)4N]，1.13[9H，s，C(CH3)3]。
實(shí)施例13目標(biāo)化合物(表2中化合物B2)的制備 1HNMR(DMSO-d6)δ8.08，7.94(2H，s，s，Tr)，7.70-6.82(2H，dd，J＝15.3Hz，J＝15.3Hz，2CH)，7.55-6.69(8H，m，2Ar)，4.75-4.33(2H，dd，J＝14.1Hz，J＝14.1Hz，CH2)，3.96-3.23(2H，dd，J＝9.9Hz，J＝9.9Hz，CH2)，3.86-3.08[8H，brs，brs，N(CH2)4N]，1.13[9H，s，C(CH3)3]。
實(shí)施例14目標(biāo)化合物(表2中化合物B3)的制備 1HNMR(DMSO-d6)δ8.08，7.94(2H，s，s，Tr)，7.68-6.87(2H，dd，J＝15.3Hz，J＝15.3Hz，2CH)，7.49-7.34(4H，dd，J＝8.7Hz，J＝8.7Hz，Ar)，6.88-6.68(4H，dd，J＝9.0Hz，J＝9.0Hz，Ar)，4.75-4.33(2H，dd，J＝14.4Hz，J＝14.4Hz，CH2)，3.96-3.22(2H，dd，J＝9.9Hz，J＝9.9Hz，CH2)，3.86-3.07[8H，brs，brs，N(CH2)4N]，1.13[9H，s，C(CH3)3]。
實(shí)施例15目標(biāo)化合物(表2中化合物B4)的制備 1HNMR(DMSO-d6)δ8.08，7.94(2H，s，s，Tr)，7.67-6.88(2H，dd，J＝15.3Hz，J＝15.3Hz，2CH)，7.54-7.39(4H，m，Ar)，6.86-6.69(4H，m，Ar)，4.76-4.33(2H，dd，J＝14.1Hz，J＝14.1Hz，CH2)，3.96-3.22(2H，dd，J＝9.9Hz，J＝9.9Hz，CH2)，3.85-3.08[8H，brs，brs，N(CH2)4N]，1.13[9H，s，C(CH3)3]。
試驗(yàn)實(shí)施例抑菌試驗(yàn) 本發(fā)明合成的三唑類(lèi)化合物及其鹽類(lèi)具有抗真菌作用，其抑菌實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果如下采用美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)推薦的標(biāo)準(zhǔn)化抗真菌敏感性實(shí)驗(yàn)方法測(cè)試其體外抗真菌活性，以目標(biāo)化合物抑制所選真菌80％生長(zhǎng)的濃度作為判斷終點(diǎn)(MIC80，參考Antimicrob Agents Chemother45(9)2420，2001)。
一、材料與方法 1、實(shí)驗(yàn)真菌菌株 本研究選用兩種ATCC標(biāo)準(zhǔn)株和六種臨床株，ATCC標(biāo)準(zhǔn)株由上海市長(zhǎng)征醫(yī)院菌種保存中心贈(zèng)送，臨床株由上海市長(zhǎng)海醫(yī)院真菌室提供，分別采自長(zhǎng)海醫(yī)院不同科室臨床樣本，并經(jīng)形態(tài)學(xué)和生化學(xué)鑒定。
8種真菌包括4種深部真菌白色念珠菌(Candida albicans)ATCC76615、新生隱球菌(Cryptococcus neoformans)ATCC32609、熱帶念珠菌(Candidatropicalis)、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)，3種淺部真菌紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)、羊毛樣小孢子菌(Microsporum lauosum)、緊密著色真菌(Fonsecaea compacta)以及薰煙曲霉菌(Aspergillus fumigatus)。
2、培養(yǎng)液 RPMI1640培養(yǎng)液RPMI1640(Gibco BRL)10g，NaHCO3 2.0g，嗎啡啉丙磺酸(morpholinepropanesulfonic acid，MOPS)(Sigma)34.5g(0.165M)加三蒸水900ml溶解，1N NaOH調(diào)pH至7.0(25℃)，定溶至1000ml，濾過(guò)消毒，4℃保存。
沙堡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)蛋白胨10g，葡萄糖40g，瓊脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，調(diào)整pH至7.0，定溶至1000ml，高壓滅菌后4℃保存。
YEPD培養(yǎng)液酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，定溶至1000ml，高壓滅菌后4℃保存。
3、實(shí)驗(yàn)方法 菌液、藥液、藥敏板的制備按美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)提出的標(biāo)準(zhǔn)化方法操作。
二、MIC值判定 念珠菌、新生隱球菌及絲狀菌分別于35℃培養(yǎng)24h、72h和一周后，用酶標(biāo)分析儀于630nm測(cè)各孔OD值。與陽(yáng)性對(duì)照孔比，以O(shè)D值下降80％以上的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC80(真菌生長(zhǎng)80％被抑制時(shí)的濃度)。
當(dāng)藥物的MIC80值超過(guò)測(cè)定濃度范圍時(shí)，按以下方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)MIC80值高于最高濃度64mg/L時(shí)，記為“>64mg/L”；MIC80值為最低濃度或在最低濃度以下時(shí)，不作區(qū)別，均記為“0.00024mg/L”。
上述實(shí)驗(yàn)均平行操作2到3次，當(dāng)MIC80值能準(zhǔn)確重復(fù)或只差一個(gè)濃度時(shí)才被接受，并以較高濃度作為MIC80值；當(dāng)MIC80值相差兩個(gè)濃度以上時(shí)，則需重新實(shí)驗(yàn)，直到符合要求為止。
三、結(jié)果 表3 結(jié)構(gòu)通式(A)部分目標(biāo)化合物的體外抗真菌活性MIC80(μg/ml)

表4 結(jié)構(gòu)通式(B)部分目標(biāo)化合物的體外抗真菌活性MIC80(μg/ml)
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明叔丁基取代的三氮唑類(lèi)有較好的抗真菌活性，大多數(shù)化合物對(duì)所選真菌的體外抑制活性均強(qiáng)于氟康唑，與伊曲康唑相當(dāng)或更優(yōu)，說(shuō)明本發(fā)明化合物及其鹽類(lèi)可用于制備治療真菌感染的藥物。
權(quán)利要求
1.一種具有如下通式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1和R3各自獨(dú)立地代表氫原子、甲基或乙基；
R2和R4位于苯環(huán)的鄰、間或?qū)ξ?，為單取代或雙取代，R2和R4選自(1)鹵素；(2)C1-8烴基；(3)C1-8烴氧基；(4)羥基；(5)硝基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中，所述的鹵素是氟原子、氯原子、溴原子或碘原子；所述的C1-8烴基是甲基、乙基、異丙基或叔丁基；所述的C1-8烴氧基是甲氧基或3，4-二氧亞甲基，特別優(yōu)選的是2，3-二甲氧，3，4-二甲氧；所述的藥學(xué)上可接受的鹽為所述化合物的鹽酸鹽、磷酸鹽、甲烷磺酸鹽、草酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽或丁二酸鹽等常見(jiàn)藥用鹽類(lèi)。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中，R2和R4是對(duì)位取代的鹵素；或者R2和R4是對(duì)位取代的硝基。
4.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述的化合物選自下列化合物所組成
5.一種制備通式(A)化合物的方法，
其中R1代表氫原子、甲基或乙基；
R2位于苯環(huán)的鄰、間或?qū)ξ?，為單取代或雙取代，所述的R2選自(1)鹵素；(2)C1-8烴基；(3)C1-8烴氧基；(4)羥基；(5)硝基，
所述的方法包括使下式(VI)和(VI)化合物在無(wú)水碳酸鹽其中包括但并不限于諸如K2CO3、Na2CO3等和無(wú)水烷基醇包括但并不限于諸如無(wú)水甲醇、無(wú)水乙醇、無(wú)水丙醇等存在下反應(yīng)
式(VI)和式(VI)中，R1和R2的定義同上，得到通式(A)化合物。
6.一種制備通式(B)化合物的方法，
其中R1代表氫原子、甲基或乙基；
R2位于苯環(huán)的鄰、間或?qū)ξ唬瑸閱稳〈螂p取代，所述的R2選自(1)鹵素；(2)C1-8烴基；(3)C1-8烴氧基；(4)羥基；(5)硝基，
所述的方法包括使通式(X)化合物
與下式化合物反應(yīng)
式中的R3和R4的定義同上，得到通式(B)的化合物。
7.如權(quán)利要求1—4任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接合的鹽在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。
8.一種體外非醫(yī)藥用的抗真菌方法，包括對(duì)需要的場(chǎng)所施加權(quán)利要求1—4任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
9.一種抗真菌組合物，它包含權(quán)利要求1—4任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有右式A和B結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的加成鹽；式A或式B中，R1和R3各自獨(dú)立地代表氫原子、甲基或乙基；R2和R4各自獨(dú)立地代表位于苯環(huán)的鄰、間、對(duì)位的各種取代基，它們可以是單取代或雙取代，所述的取代基選自鹵素、烴氧基、羥基和硝基。本發(fā)明化合物顯示出很強(qiáng)的抗真菌活性，且具有毒性低和抗菌譜廣等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明也涉及所述化合物在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還公開(kāi)了所述化合物的合成方法。
文檔編號(hào)C07D249/08GK101450931SQ20071017171
公開(kāi)日2009年6月10日 申請(qǐng)日期2007年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月4日
發(fā)明者劉超美, 科 李, 何秋琴, 姜遠(yuǎn)英 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)