肽沉淀。該粗肽的部分再以HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120 (5 μ m)，€)2〇x250mnx;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1 % TFA 水，B :0. 09% TFA/10%水/90%乙腈，梯度A :B = 90 :10 - 75 :25%，11分鐘線性濃度梯度 洗脫〕純化，即可獲得如下述式（72)所示的多肽（序列編號39)。
[0460] Ac-Cys-Cys-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-As P -Ala-NH2
[0461] 式（72)
[0462] (合成例35-2)硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)
[0463] 先將合成例35-1中合成的多肽（序列編號39) (9. 8mg，5. 11 μ mol)、及合成例2中 合成的麥芽糖-BrAc (I I. 8mg，54. 6 μ mol，相對于肽1為5. 0當(dāng)量）溶于含33 μ M的TCEP及 8Μ胍鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3,1. 7mL)中，并于室溫反應(yīng)1. 5小時。
[0464] 該反應(yīng)溶液再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120(5 μπι)， 02()x25()mm;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1% TFA 水，B :0· 09% TFA/10%水 /90% 乙 腈，梯度A :B = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕梯度A :B = 90 :10 - 75 :25， 15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（73)所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列 編號 40) (9. 2mg，3. 43 μ mol，產(chǎn)率 67 % )。
[0465]
[0466] 式（73) (Maltose :麥芽糖，下同）
[0467] ESI-MS : (m/z)計算值 C100H169N33O49S2:〔M+2H〕 2+1341· 9，〔M+3H〕3+894· 9，〔M+4H〕 4+671· 4,實測值 1341. 6, 894. 7, 671. 3。
[0468] (合成例36) 2C (麥芽三糖）-(RADA) 4的合成
[0469] 先將合成例35-1中合成的多肽（序列編號39) (17. 5mg，9. 12 μ mol)、及合成例3 中合成的麥芽三糖-BrAc (34. lmg，54.6 μπιο?，相對于肽1為6.0當(dāng)量）溶于含33 μΜ的 TCEP及8Μ胍鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3, 3. ImL)中，并于室溫反應(yīng)1. 5小時。
[0470] 該反應(yīng)溶液再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120(5 μπι)， :0調(diào)><25〇匪11;流速：7.〇11117分鐘，展開劑厶：〇.1%丁?4水，8 :〇.〇9%丁?4/1〇%水/9〇%乙 腈，梯度A :Β = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（74) 所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列編號41) (19. 6mg，3.61 μ mol，產(chǎn)率72% )。
[0472] 式（74) (Maltotriose :麥芽三糖，下同）
[0473] ESI-MS : (m/z)計算值 C112H189N33O59S2:〔Μ+2Η〕 2+1504· 0，〔Μ+3Η〕3+1003· 0，〔Μ+4Η〕 4+752· 5,實測值 1503. 7, 1002. 7, 752. 3。
[0474] (合成例37) 2C (麥芽四糖）-(RADA) 4的合成
[0475] 先將合成例35-1中合成的多肽（序列編號39)(9. 8mg，5. 11 μ mol)、合成例4中 合成的麥芽四糖-BrAc (20. lmg，25. 5 μ mol，相對于肽1為5. 0當(dāng)量）溶于含33 μ M的TCEP 及8Μ胍鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3,1. 7mL)中，并于室溫反應(yīng)2小時。
[0476] 該反應(yīng)溶液再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120(5 μπι)， 02〇x25〇mm;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1% TFA 水，B :0· 09% TFA/10%水 /90% 乙 腈，梯度A :B = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（75) 所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列編號42) (10. 6mg，3. 18 μ mol，產(chǎn)率62% )。
[0478] 式（75) (Maltotetraose :麥芽四糖，下同）
[0479] ESI-MS : (m/z)計算值 C124H2。具3069S2:〔Μ+2Η〕 2+1666· 2，〔Μ+3Η〕3+1111· 1，(Μ+4Η) 4+833· 6,實測值 1666. 2, 1110. 8, 833. 3。
[0480] (合成例38) 3C (麥芽糖）-(RADA) 4的合成
[0481] (合成例 38-1) Ac-3C_ (RADA) 4-NH2的合成
[0482] 先于固相合成用管柱中填充Rink amide PEGA樹脂（100μ mol)，以DMF及二 氯甲烷清洗后，再加入 Fmoc-Ala-OH (124. 5mg，400 ymol)、HCTU (157. 2mg，380 μπιο?)及 DIPEA(104. 5yL，600 ymol)的DMF(2. 5mL)溶液，并振蕩15分鐘。在以二氯甲烷及DMF 清洗后，其Fmoc保護(hù)基，再經(jīng)20 %的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF清洗后，再使用 Prelude(商標(biāo)）肽合成機，通過Fmoc法以肽固相合成法合成受保護(hù)的下述式（76)所示，為 結(jié)合在樹脂狀態(tài)的多肽（序列編號43)?？s合反應(yīng)，使用縮合劑HCTU并于DMF中進(jìn)行。
[0484] 式（76)
[0485] Fmoc保護(hù)基，經(jīng)20 %的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF及二氯甲烷清洗之后， 再加入乙酸酐及吡啶并振蕩1小時。在以DMF及二氯甲烷清洗之后，加入TFA :水：三異丙 基硅烷：乙二硫醇（=90 :2. 5 :5 :2. 5)，并于室溫振蕩4小時。之后過濾去除樹脂，再于濾 液中加入冷卻的二乙基醚，即可得到粗肽沉淀。該粗肽的部分再以HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120 (5 μ m)，02〇x25〇mm;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1 % TFA 水，B :0. 09% TFA/10%水/90%乙腈，梯度A :B = 90 :10 - 75 :25%，11分鐘線性濃度梯度 洗脫〕純化，即可獲得如下述式（77)所示的多肽（序列編號44)。
[0486] Ac-Cys-Cys-Cys-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Al a _Asp_Ala_NH2
[0487] 式（77)
[0488] (合成例38-2)硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)
[0489] 先將合成例38-1中合成的多肽（序列編號44) (15. Omg，7. 42 μ mol)、及合成例2 中合成的麥芽糖-BrAc (20. 6mg，44. 6 μ mol，相對于肽1為6. 0當(dāng)量）溶于含33 μ M的TCEP 及8Μ胍鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3, 2. 4mL)中，并于室溫反應(yīng)3小時。
[0490] 該反應(yīng)溶液再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120(5 μπι)， 02〇x25〇mm;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1% TFA 水，B :0· 09% TFA/10%水 /90% 乙 腈，梯度A :B = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（78) 所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列編號45) (16. lmg，5.09 μ mol，產(chǎn)率69% )。
[0492] 式（78)
[0493] ESI-MS : (m/z)計算值 C117H197N35O61S3:〔Μ+2Η〕 2+1584· 1，〔Μ+3Η〕3+1056· 4，〔Μ+4Η〕 4+792· 6,實測值 1583. 7, 1056. 1，792. 4。
[0494] (合成例 39) (RADA) 2-C (麥芽糖）-(ARDA) 2 的合成
[0495] (合成例 39_1) Ac- (RADA) 2_C_ (ARDA) 2_NH2的合成
[0496] 先于固相合成用管柱中填充Rink amide PEGA樹脂（100 μ mol)，以DMF及二氯 甲烷清洗后，再加入 Fmoc-Asp(0tBu)-OH(164. 6mg，400 μπιο?)、HCTU(157. 2mg，380 μπιο?) 及DIPEA(104.5yL，600 ymol)的DMF(2.5mL)溶液，并振蕩15分鐘。在以二氯甲烷及DMF 清洗后，其Fmoc保護(hù)基，再經(jīng)20 %的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF清洗后，再使用 Prelude(商標(biāo)）肽合成機，通過Fmoc法以肽固相合成法合成受保護(hù)的下述式（79)所示，為 結(jié)合在樹脂狀態(tài)的多肽（序列編號46)?？s合反應(yīng)，使用縮合劑HCTU并于DMF中進(jìn)行。
[0498] 式（79)
[0499] Fmoc保護(hù)基，經(jīng)20 %的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF及二氯甲烷清洗之后， 再加入乙酸酐及吡啶并振蕩1小時。在以DMF及二氯甲烷清洗之后，加入TFA :水：三異丙 基硅烷：乙二硫醇（=90 :2. 5 :5 :2. 5)，并于室溫振蕩4小時。之后過濾去除樹脂，再于濾 液中加入冷卻的二乙基醚，即可得到粗肽沉淀。該粗肽的部分再以HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120 (5 μ m)，02()x25〇mm;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1 % TFA 水，8:0.09%了?六/10%水/90%乙腈，梯度八出=90:10 - 75:25%，15分鐘線性濃度梯度 洗脫〕純化，即可獲得如下述式（80)所示的多肽（序列編號47)。
[0500] Ac-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Cys-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-As P-NH2
[0501] 式（80)
[0502] (合成例39-2)硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)
[0503] 先將合成例39-1中合成的多肽（序列編號47) (15. 4mg，8. 48 μπιο?)、及合成例2 中合成的麥芽糖-BrAc (9. 8mg，21. 2 μπιο?，相對于肽1為2. 5當(dāng)量）溶于含33 μΜ的TCEP 及8Μ胍鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3, 2. 9mL)中，并于室溫反應(yīng)3小時。
[0504] 該反應(yīng)溶液再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120(5 μπι)， 02()x25()mm;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1% TFA 水，B :0· 09% TFA/10%水 /90% 乙 腈，梯度A :B = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（81) 所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列編號48) (17. 8mg，8. 10 μmol，產(chǎn)率96% )。
[0506] 式（81)
[0507] ESI-MS : (m/z)計算值 C83H141N31O37S:〔M+2H〕 2+1099· 6，〔M+3H〕3+733· 4，〔M+4H〕 4+550· 3,實測值 1099. 5, 733. 0, 550. 2。
[0508](合成例40) (RADA) 2-C (麥芽三糖）-(ARAD) 2的合成
[0509] 先將合成例39-1中合成的多肽（序列編號47) (14. 8mg，8. 15 μπιο?)、及合成例3 中合成的麥芽三糖-BrAc (12. 7mg，20.3 μπιο?，相對于肽1為2. 5當(dāng)量）溶于含33 μΜ的 TCEP及8Μ胍鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3, 2. 8mL)中，并于室溫反應(yīng)3小時。
[0510]該反應(yīng)溶液再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120(5 μπι)， 02〇5<25〇Ι???η^3? ：7. OmL/ ：0. 1% TFA τΚ，B ：0. 09% TFA/10 % τΚ/90% Z1 腈，梯度A :Β = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（82) 所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列編號49) (13. 8mg，5.85 μ mol，產(chǎn)率72% )。
[0512] 式（82)
[0513] ESI-MS : (m/z)計算值 C89H151N31O42S:〔M+2H〕 2+1180. 2，〔M+3H〕3+787. 1，〔M+4H〕 4+590· 6,實測值 1180. 5, 787. 0, 590. 8。
[0514] (合成例41) (RADA) 2-C (麥芽四糖）-(ARAD) 2的合成
[0515] 先將合成例39-1中合成的多肽（序列編號47)(14. Omg，7. 71 μ mol)、合成例4中 合成的麥芽四糖-BrAc (15. 2mg，20. 3 μ mol，相對于肽1為2. 5當(dāng)量）溶于含33 μ M的TCEP 及8Μ胍鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3, 2. 6mL)中，并于室溫反應(yīng)2. 5小時。
[0516] 該反應(yīng)溶液再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120(5 μπι)， 02〇x25〇mm;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1% TFA 水，B :0· 09% TFA/10%水 /90% 乙 腈，梯度A :B = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（83) 所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列編號50) (14. 9mg，5.91 μ mol，產(chǎn)率77% )。
[0518] 式（83)
[0519] ESI-MS : (m/z)計算值 C95H161N31O47S:〔M+2H〕 2+1261· 8，〔M+3H〕3+841· 5，〔M+4H〕 4+631· 4,實測值 1261. 6, 841. 4, 631. 3。
[0520] (合成例42) C (麥芽糖）-(RADA) 4-C (麥芽糖）的合成
[0521] (合成例 42-1) Ac-C- (RADA) 4-C_NH2的合成
[0522] 先于固相合成用管柱中填充Rink amide PEGA樹脂（100 μπιο?)，以DMF及二氯 甲烷清洗后，再加入 Fmoc-Cys (Trt)-OH (124. 5mg，400 μ mol)、HCTU (157. 2mg，380 μ mol)及 2, 4, 6-三甲基吡啶（79. 3 μ L，600 μ mol)的DMF (2. 5mL)溶液，并振蕩I小時。在以二氯甲 烷及DMF清洗后，其Fmoc保護(hù)基，再經(jīng)20 %的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF清洗后， 再使用Prelude (商標(biāo)）肽合成機，通過Fmoc法以肽固相合成法合成受保護(hù)的下述式（84) 所示，為結(jié)合在樹脂狀態(tài)的多肽（序列編號51)。縮合反應(yīng)，使用縮合劑HCTU并于DMF中進(jìn) 行。
[0524] 式（84)
[0525] Fmoc保護(hù)基，經(jīng)20 %的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF及二氯甲烷清洗之后， 再加入乙酸酐及吡啶并振蕩1小時。在以DMF及二氯甲烷清洗之后，加入TFA :水：三異丙 基硅烷：乙二硫醇（=90 :2. 5 :5 :2. 5)，并于室溫振蕩4小時。之后過濾去除樹脂，再于濾 液中加入冷卻的二乙基醚，即可得到粗肽沉淀。該粗肽的部分再以HPLC〔管柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG-120 (5 μ m)，02〇^25()mm;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1 % TFA 水，8:0.09%了?六/10%水/90%乙腈，梯度八出=90:10 - 75:25%，15分鐘線性濃度梯度 洗脫〕純化，即可獲得如下述式（85)所示的多肽（序列編號52)。
[0526] Ac-Cys-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Al a_Cys_NH 2
[0527] 式（85)
[0528] (合成例42-2)硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)
[0529] 先將以合成例42-1中合成的多肽（序列編號52) (14. 7mg，7. 66 μ mol)、及合成例 2中合成的麥芽糖-BrAc (17. 7mg，38. 3 μ mol，相對于肽1為5當(dāng)量）溶于含33 μ M的TCEP 及含8Μ胍鹽酸鹽的鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3, 2. 6mL)中，并于室溫反應(yīng)2小時。
[0530] 該反應(yīng)溶液，再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120 (5 μ m)， 02〇x25()mm:;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1% TFA 水，B :0· 09% TFA/10%水 /90% 乙 腈，梯度A :B = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（86) 所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列編號53) (6. 5mg，2.42 μ mol，產(chǎn)率32% )。
[0532] 式（86)
[0533] ESI-MS : (m/z)計算值 C100H169N33O49S2:〔M+2H〕 2+1341· 9，〔M+3H〕3+894· 9，〔M+4H〕 4+671· 4,實測值 1341. 5, 894. 7, 671. 3。
[0534] (合成例43) C (麥芽三糖）-(RADA) 4-C (麥芽三糖）的合成
[0535] 先將合成例42-1中合成的多肽（序列編號52) (13. 9mg，7. 24 μ mol)、及合成例3 中合成的麥芽三糖-BrAc (22. 6mg，36. 2 μ mol，相對于肽1為5當(dāng)量）溶于含33 μ M的TCEP 及含8Μ胍鹽酸鹽的鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3, 2. 5mL)中，并于室溫反應(yīng)2小時。
[0536] 該反應(yīng)溶液，再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120 (5 μ m)， 02〇25()腿1;巰速：7.〇11117分鐘，展開劑厶：〇.1%丁?4水，8 :〇.〇9%丁?4/1〇%水/9〇%乙 腈，梯度A :B = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（87) 所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列編號54) (9. 6mg，3. 19 μ mol，產(chǎn)率44% )。
[0538] 式（87)
[0539] ESI-MS : (m/z)計算值 C112H189N33O59S2:〔Μ+2Η〕 2+1504· 1，〔Μ+3Η〕3+1003· 0，〔Μ+4Η〕 4+752· 5,實測值 1503. 8, 1002. 8, 752. 4。
[0540] (合成例 44) Ac- (RADA) 4-C (DiGlcNAc)的合成
[0541] (合成例 44-1) Ac- (RADA) 4-C_NH2的合成
[0542] 先于固相合成用管柱中填充Rink amide PEGA樹脂（100 μ mol)，以DMF及二氯 甲烷清洗后，再加入 Fmoc-Cys (Trt)-OH (124. 5mg，400 μ mol)、HCTU (157. 2mg，380 μ mol)及 2, 4, 6-三甲基吡啶（79. 3 μ L，600 μ mol)的DMF (2. 5mL)溶液，并振蕩I小時。在以二氯甲 烷及DMF清洗后，其Fmoc保護(hù)基，再經(jīng)20 %的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF清洗后， 再使用Prelude (商標(biāo)）肽合成機，通過Fmoc法以肽固相合成法合成受保護(hù)的下述式（88) 所示，為結(jié)合在樹脂狀態(tài)的多肽（序列編號55)?？s合反應(yīng)，使用縮合劑HCTU并于DMF中進(jìn) 行。
[0544] 式（88)
[0545] Fmoc保護(hù)基，經(jīng)20 %的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF及二氯甲烷清洗之后， 再加入乙酸酐及吡啶并振蕩1小時。在以DMF及二氯甲烷清洗之后，加入TFA :水：三異丙 基硅烷：乙二硫醇（=90 :2. 5 :5 :2. 5)，并于室溫振蕩4小時。之后過濾去除樹脂，再于濾 液中加入冷卻的二乙基醚，即可得到粗肽沉淀。該粗肽的部分再以HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120 (5 μ m)，02()x25〇mm;流速：7. OmL/ 分鐘，展開劑 A :0· 1 % TFA 水，8:0.09%了?六/10%水/90%乙腈，梯度八出=90:10 - 75:25%，15分鐘線性濃度梯度 洗脫〕純化，即可獲得如下述式（89)所示的多肽（序列編號56)。
[0546] Ac-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Arg-Ala-Asp-Ala-Cy S-NH2
[0547] 式（89)
[0548] (合成例44-2)硫醇的糖鏈修飾反應(yīng)
[0549] 先將合成例44-1中合成的多肽（序列編號56) (15. lmg，8. 31 μ mol)、及合成例9 中合成的DiGlcNAc-BrAc (29. 8mg，20. 8 μπιο?，相對于肽1為2. 5當(dāng)量）溶于含33 μΜ的 TCEP及8Μ胍鹽酸鹽的0. 2Μ磷酸緩沖液（ρΗ7. 3, 2. 8mL)中，并于室溫反應(yīng)3小時。
[0550] 該反應(yīng)溶液再以 HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120(5 μπι)， 02〇；<25()丨11111;流速：7.〇11117分鐘，展開劑厶：〇.1%丁卩八水，8 :〇.〇9%丁卩八/1〇%水/9〇%乙 腈，梯度A :Β = 90 :10 - 75 :25,15分鐘線性濃度梯度洗脫〕純化，即可獲得如下述式（90) 所示的糖鏈-多肽復(fù)合物（序列編號57) (15. 8mg，5.01 μ mol，產(chǎn)率60% )。
[0552] 式（90)
[0553] ESI-MS : (m/z)計算值 C121H203N35O62S:〔M+2H〕 2+1587· 1，〔Μ+3Η〕3+1058· 4，(Μ+4Η) 4+794· 0,實測值 1586. 7, 1058. 1，793. 8。
[0554] (合成例45) Ac-N (無唾液酸）-(RADA) 4的合成
[0555] (合成例 45-1) Fmoc- (RADA) 4-樹脂的合成
[0556] 先于固相合成用管柱中填充Rink amide PEGA樹脂（100 μ mol)，以DMF及二 氯甲烷清洗后，再加入 Fmoc-Ala-OH (124. 5mg，400 ymol)、HCTU (157. 2mg，380 μπιο?)及 DIPEA(104. 5yL，600 ymol)的DMF(2. 5mL)溶液，并振蕩15分鐘。在以二氯甲烷及DMF 清洗后，其Fmoc保護(hù)基，再經(jīng)20 %的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF清洗后，再使用 Prelude(商標(biāo)）肽合成機，通過Fmoc法以肽固相合成法合成受保護(hù)的下述式（91)所示，為 結(jié)合在樹脂狀態(tài)的多肽（序列編號58)。縮合反應(yīng)，使用縮合劑HCTU并于DMF中進(jìn)行。
[0558] 式（91)
[0559] (合成例45-2)樹脂上的糖鏈縮合反應(yīng)
[0560] 將合成例45-1中所合成的為結(jié)合在樹脂狀態(tài)的多肽（10 μ mol)的Fmoc保護(hù)基， 以20%的哌啶的DMF溶液處理去除。在以DMF及二氯甲烷清洗之后，再依序加入下述式 (92) 所示的 Fmoc-Asn (無唾液酸）-OH(29. 8mg，15 μ mol)、DMF-DMSO (1/1，v/v，433 μ L)、 〇-(苯并三唑-I-基）-N，N，Ν'，Ν' -四甲基脲鑰四氟硼酸鹽（TBTU) (6. 4mg，30 μ mol)、及 DIPEA (5. 2 μ L，30 μ mol)，并振蕩一夜。在以DMF及二氯甲烷清洗之后，其Fmoc保護(hù)基，再 經(jīng)20%的哌啶的DMF溶液處理去除。以DMF及二氯甲烷清洗后，再加入乙酸（2.86 μ L， 50 μ mol)、1-羥基苯并三唑（HOBt) (6. 8mg，50 μ mol)、及 Ν，Ν' -二異丙基碳二亞胺（DIC) (7· 3 μ L，50 μ mol)的 DMF (500 μ L)溶液，并振蕩 1 小時。
[0562] 式（92)
[0563] 在以DMF及二氯甲烷清洗之后，加入TFA :水：三異丙基硅烷（=95 :2. 5 :2. 5)， 并于室溫振蕩4小時。之后過濾去除樹脂，再于濾液中加入冷卻的二乙基醚，即可得到 粗肽沉淀。該粗肽的部分再以HPLC〔管柱：SHISEID0 CAPCELL PAK C18 UG-120(5ym)， 020250mm;:流速：7. OmL/ 分鐘