源于人多能干細(xì)胞的胰腺細(xì)胞的包封的制作方法
【專利說(shuō)明】源于人多能干細(xì)胞的胰腺細(xì)胞的包封
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的奪叉引用
[0002] 本申請(qǐng)為非臨時(shí)申請(qǐng)，其依據(jù)35U.S.C. §119(e)要求2008年11月14日提交的 題為"源于HES細(xì)胞的胰腺祖細(xì)胞的包封"的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)No. 61/114, 857和2008年 12月9日提交的題為"胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞的包封"的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)No. 61/121，084的優(yōu) 先權(quán)。上文列出的各優(yōu)先權(quán)申請(qǐng)的公開內(nèi)容通過(guò)引用將其全文并入本文。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及源于人胚胎干細(xì)胞和其 它人多能細(xì)胞的細(xì)胞的包封。
[0004] 發(fā)曰月背景
[0005] 人胚胎干（hES)細(xì)胞和從成人分化的細(xì)胞誘導(dǎo)的多能干（iPS)細(xì)胞特別適合于細(xì) 胞治療應(yīng)用，這是因?yàn)樗鼈兪嵌嗄艿那铱勺晕腋??；谠诜只嗄芨杉?xì)胞培養(yǎng)物中能夠 出現(xiàn)極為多樣的細(xì)胞類型，成功實(shí)現(xiàn)有效的、定向分化對(duì)于人多能干細(xì)胞的治療應(yīng)用是有 用的。使用不同生長(zhǎng)和信號(hào)傳導(dǎo)因子以及小分子對(duì)于使人多能干細(xì)胞有效的定向分化成各 種中間細(xì)胞類型，包括胰腺細(xì)胞系是必要的。
[0006] 發(fā)明概沐
[0007] 本文所述的實(shí)施方案涉及在哺乳動(dòng)物中生成胰島素的方法，所述方法通過(guò)下述步 驟進(jìn)行：向宿主哺乳動(dòng)物中提供可植入的腔室（chamber)，向所述腔室提供源于人多能干 細(xì)胞（例如hES或iPS細(xì)胞）的胰腺祖細(xì)胞，使所述胰腺祖細(xì)胞成熟成為成熟的胰腺激素 分泌細(xì)胞，其中所述胰腺激素分泌細(xì)胞為響應(yīng)體內(nèi)葡萄糖刺激生成胰島素的胰島素分泌細(xì) 胞，從而在所述哺乳動(dòng)物中體內(nèi)生成胰島素。在一些實(shí)施方案中，所述腔室在引入胰腺祖細(xì) 胞之前植入到哺乳動(dòng)物中。在其它實(shí)施方案中，在引入胰腺祖細(xì)胞之前使所述腔室血管化。 還在其它實(shí)施方案中，在植入之前將細(xì)胞引入所述腔室。
[0008] -個(gè)實(shí)施方案涉及在哺乳動(dòng)物中生成胰島素的方法，所述方法包括：(a)向可植 入的可半滲透裝置中提供人rox-i陽(yáng)性的胰腺祖細(xì)胞群；(b)使該細(xì)胞群在所述裝置中成 熟為胰島，其中所述胰島包含內(nèi)分泌細(xì)胞和腺泡細(xì)胞，并且其中所述內(nèi)分泌細(xì)胞至少為響 應(yīng)體內(nèi)葡萄糖刺激生成胰島素的胰島素分泌細(xì)胞，從而體內(nèi)為所述哺乳動(dòng)物生成胰島素。
[0009] 另一個(gè)實(shí)施方案涉及用于將細(xì)胞群植入到哺乳動(dòng)物宿主中的細(xì)胞包封組件。一方 面，該組件包含限定用于包封活細(xì)胞的至少一個(gè)腔室的密封外緣。另一方面，該組件包含具 有外周邊緣的壁機(jī)構(gòu)，其中該組件包含在所述壁機(jī)構(gòu)的外周邊緣的第一密封件（seal)，從 而形成該包封組件。在一些方面，該組件包含有效降低腔室容積的第二密封件。
[0010] 另一個(gè)實(shí)施方案涉及冷凍保存的人胰腺祖細(xì)胞群。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所 述細(xì)胞群適合移植到哺乳動(dòng)物中。
[0011] 另一個(gè)實(shí)施方案涉及獲得適于移植的細(xì)胞群的方法。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面， 通過(guò)包括下述步驟的方法獲得適于移植的細(xì)胞：a)人胰腺祖細(xì)胞群接觸冷凍保存溶液，從 而獲得用于冷凍保存的細(xì)胞群；b)降低用于冷凍保存的祖細(xì)胞的溫度至大約-196°C，以獲 得冷凍保存的細(xì)胞；和C)提高所述冷凍保存的細(xì)胞的溫度，從而獲得適于移植的胰腺祖細(xì) 胞群。在一些實(shí)施方案中，用于冷凍保存的祖細(xì)胞的溫度降低至低于0°C、-10°C、-20°C、-3 (rc、-4(rc、-5(rc、-6(rc、-7(rc、-8(rc、-9(rc、-i〇(rc、-ii(rc、-i2(rc、-i3(rc、-i4(rc、-i5(rc、-i6(rc、-i7(rc、-i8(rc、-i9(rc、-2〇(rc、-2i(rc、-22(rc、-23(rc、-24(rc、-25(rcs-26(rc。
[0012] 附圖簡(jiǎn)沐
[0013] 圖1為雙開口包封裝置的透視圖，該包封裝置具有內(nèi)部超聲焊接部分（weld)以分 隔主腔。
[0014] 圖2為圖1所示的包封裝置的頂截面視圖。
[0015] 圖3為圖1所示的包封裝置的側(cè)視圖，其具有沿著內(nèi)部超聲焊接區(qū)通過(guò)該裝置中 心獲取的橫截面。
[0016] 圖4為圖1所示的包封裝置的側(cè)視圖，其具有沿著開口的軸并通過(guò)被分隔的腔的 中心獲取的橫截面。
[0017]圖5為圖1所示的包封裝置的端視圖，其具有通過(guò)被分隔的腔獲取的橫截面。
[0018] 圖6為包封裝置的透視圖，其沒(méi)有裝載口且包含定期超聲點(diǎn)焊部分以分隔內(nèi)腔。
[0019] 圖7為圖6所示的包封裝置的頂部橫截面視圖。
[0020] 圖8為圖6所示的包封裝置的側(cè)視圖，其具有通過(guò)被分隔的腔中心獲取的橫截面。
[0021] 圖9為圖6所示的包封裝置的端視圖，其具有通過(guò)被分隔的腔的橫截面。
[0022] 圖10為包封裝置的透視圖，其沒(méi)有裝載口且包含定期超聲點(diǎn)焊部分以分隔內(nèi)腔。 每個(gè)點(diǎn)焊部分都去除了中心以促進(jìn)血管化。
[0023] 圖11為圖10所示的包封裝置的放大視圖。
[0024] 優(yōu)詵實(shí)施方案的詳沐
[0025] 本文所述的實(shí)施方案涉及通過(guò)在哺乳動(dòng)物中植入處在包封裝置中的源于人胚胎 干細(xì)胞的人胰腺祖細(xì)胞，從而體內(nèi)生成胰島素的方法，所述包封裝置包括生物可相容的基 于聚乙二醇的裝置和機(jī)械/醫(yī)學(xué)裝置。
[0026] 除非另有說(shuō)明，本文使用的術(shù)語(yǔ)為相關(guān)領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)常規(guī)用法 所理解的。除了下文提供的術(shù)語(yǔ)定義以外，分子生物學(xué)中的常用術(shù)語(yǔ)的定義還可 見(jiàn)于Rieger等人，1991Glossaryofgenetics:classicalandmolecular, 5th Ed.，Berlin:Springer-Verlag;和見(jiàn)于CurrentProtocolsinMolecularBiology,F. M.Ausubel等人，Eds.，CurrentProtocol,ajointventurebetweenGreenePublishing Associates，Inc，andJohnWiley&Sons，Inc·，（1998 增刊）。應(yīng)該理解，在本說(shuō)明書和權(quán)利 要求書中使用的"a"或"an"可以表示一個(gè)或多個(gè)，取決于其使用的上下文。因此，例如，述 及"細(xì)胞"可以表示可以使用至少一個(gè)細(xì)胞。
[0027] 此外，出于本說(shuō)明書和所附權(quán)利要求書的目的，除非另有說(shuō)明，所有表示成分的數(shù) 量的數(shù)字、材料的百分比或比例、反應(yīng)條件和在本說(shuō)明書和權(quán)利要求書中使用的其它數(shù)值 在所有情況下都將被理解為通過(guò)術(shù)語(yǔ)"約"修飾。相應(yīng)地，除非相反指出，在以下說(shuō)明書和所 附權(quán)利要求書中提出的數(shù)值參數(shù)為可以依據(jù)本發(fā)明想要獲得的期望性質(zhì)而改變的近似值。 6每個(gè)數(shù)值參數(shù)都應(yīng)該至少根據(jù)報(bào)道的有效數(shù)字和通過(guò)應(yīng)用常規(guī)舍入技術(shù)來(lái)理解，絲毫不 想將等同原則的應(yīng)用限制于權(quán)利要求書的范圍。
[0028]在一個(gè)實(shí)施方案中，使用生物可相容的聚乙二醇（PEG)包封源于hES的細(xì)胞?；?于PEG的包封更詳細(xì)地描述于題為"用于治療疾病的包封生物材料的植入"的美國(guó)專利No. 7, 427, 415 ;題為"用于包封生物材料的凝膠"的美國(guó)專利No. 6, 911，227 ;以及題為"用 于包封生物材料的凝膠"的美國(guó)專利No. 6, 911，227、5, 529, 914、5, 801，033、6, 258, 870中， 它們通過(guò)引用以其全文并入本文。
[0029] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，包封裝置為TheraCyte裝置（Irvine,California)。 TheraCyte細(xì)胞包封裝置進(jìn)一步描述于美國(guó)專利No. 6, 773, 458 ;6, 156, 305 ;6, 060, 640 ; 5, 964, 804 ；5, 964, 261 ；5, 882, 354 ；5, 807, 406 ；5, 800, 529 ；5, 782, 912 ；5, 741, 330 ； 5, 733, 336 ；5, 713, 888 ；5, 653, 756 ；5, 593, 440 ；5, 569, 462 ；5, 549, 675 ；5, 545, 223 ； 5, 453, 278 ;5, 421，923 ;5, 344, 454 ;5, 314, 471 ;5, 324, 518 ;5, 219, 361 ;5, 100, 392 ;和 5, 011，494中，上述所有專利通過(guò)全文引用以其全文并入本文。
[0030] 在一個(gè)實(shí)施方案中，描述了用于從多能干細(xì)胞培養(yǎng)物或源于hES的細(xì)胞培養(yǎng)物的 單細(xì)胞懸液制備hES細(xì)胞團(tuán)塊懸液的方法。所述多能干細(xì)胞培養(yǎng)物可以最初在成纖維細(xì) 胞飼養(yǎng)層（feeder)上培養(yǎng)，或者它們可以不使用飼養(yǎng)層。分離hESC和在人飼養(yǎng)層細(xì)胞上 培養(yǎng)hESC的方法描述于題為"用于在人飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞的方法"的美國(guó)專 利No. 7, 432, 104中，其通過(guò)引用以其全文并入本文。用于制備hES細(xì)胞團(tuán)塊懸液培養(yǎng)物和 /或源于hES的細(xì)胞團(tuán)塊懸液培養(yǎng)物的多種方法詳細(xì)描述于2008年10月4日提交的題為 "干細(xì)胞團(tuán)塊懸液組合物及其分化方法"的美國(guó)申請(qǐng)No. 12/264, 760中，其通過(guò)引用以其全 文并入本文。
[0031] 本文所述的分化培養(yǎng)條件和源于hES的細(xì)胞類型基本上類似于上文的D'Amour等 人2006年所述的，或描述于美國(guó)專利No. 7, 534,608 ;2007年3月2日提交的美國(guó)專利申 請(qǐng)No. 11/681,687 ;和2007年7月5日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)No. 11/773,944中的那些，它 們的公開內(nèi)容通過(guò)引用以其全文并入本文。D'Amour等人描述了 5步分化方案：階段1 (主 要結(jié)果為定形內(nèi)胚層產(chǎn)生），階段2(主要使roxi陰性的前腸內(nèi)胚層產(chǎn)生），階段3 (主要使 roxi陽(yáng)性的前腸內(nèi)胚層產(chǎn)生），階段4(主要使胰腺內(nèi)胚層或胰腺內(nèi)分泌祖細(xì)胞產(chǎn)生）和階 段5 (主要使表達(dá)激素的內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生）。
[0032] 本文所用的"定形內(nèi)胚層（DE) "是指能夠分化成為腸管細(xì)胞或源于腸管的器官的 多能內(nèi)胚層細(xì)胞系。根據(jù)某些實(shí)施方案，定形內(nèi)胚層細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞，且在優(yōu)選實(shí)施方 案中，定形內(nèi)胚層細(xì)胞為人細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，定形內(nèi)胚層細(xì)胞表達(dá)或未能顯著表 達(dá)某些標(biāo)志物。在一些實(shí)施方案中，在定形內(nèi)胚層細(xì)胞中表達(dá)一種或多種選自CER、F0ZA2、 SOX17、CXCR4、MIXLl、GATA4、HNF3-0、GSC、FGF17、VWF、CALCR、F0XQ1、CMK0R1 和CRIP1 的標(biāo) 志物。在其它實(shí)施方案中，選自0CT4、α-胎蛋白（AFP)、血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM)、SPARC、S0X7 和HNF4_a中的一種或多種標(biāo)志物不在定形內(nèi)胚層細(xì)胞中顯著表達(dá)。為了清楚起見(jiàn)，將定 形內(nèi)胚層細(xì)胞區(qū)別于其它內(nèi)胚層譜系的細(xì)胞，例如前腸內(nèi)胚層或腸內(nèi)胚層或roxi陰性的 前腸內(nèi)胚層細(xì)胞，這些細(xì)胞相比定形內(nèi)胚層都可識(shí)別地表達(dá)HNF4-a。定形內(nèi)胚層細(xì)胞群及 其制備方法還描述于題為"定形內(nèi)胚層"的美國(guó)專利No. 7, 510, 876,其以其全文并入本文。 [0033] 其它實(shí)施方案還涉及名為"roxi陰性的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞"或"前腸內(nèi)胚層細(xì)胞"或 "腸內(nèi)胚層"或其等同物的細(xì)胞培養(yǎng)物。在一些實(shí)施方案中，前腸內(nèi)胚層細(xì)胞表達(dá)S0X17、HNFl-0、HNF4-a和F0XA1標(biāo)志物，但不實(shí)質(zhì)上表達(dá)？0)(1、4??、5(?7、5(?1。？0)(1陰性的前 腸內(nèi)胚層細(xì)胞群及其制備方法還描述于2006年10月27日提交的題為"表達(dá)Η)Χ1的背部 和腹部前腸內(nèi)胚層"的美國(guó)申請(qǐng)No. 11/588, 693,其通過(guò)引用以其全文并入本文。并且，與 定形內(nèi)胚層細(xì)胞或階段1的細(xì)胞相比，腸內(nèi)胚層可識(shí)別地表達(dá)HNF4-a;參見(jiàn)下文實(shí)施例。
[0034] 本文所述的其它實(shí)施方案涉及"roxi陽(yáng)性的偏向背部的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞"、"roxi 陽(yáng)性的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞"或"PDX1陽(yáng)性的內(nèi)胚層"或其等同物的細(xì)胞培養(yǎng)物。在一些實(shí)施 方案中，PDX1陽(yáng)性的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞表達(dá)roxi、HNF6、S0X9和PR0X1標(biāo)志物，但不實(shí)質(zhì)上 表達(dá)^?6.1、？了？認(rèn)、0?六、〇]^(：、5(?17、!1即18或!1即431口3。？0乂1陽(yáng)性的前腸內(nèi)胚層細(xì)胞群 及其制備方法還描述于2006年10月27日提交的題為"表達(dá)Η)Χ1的背部和腹部前腸內(nèi)胚 層"的美國(guó)申請(qǐng)No. 11/588, 693,其通過(guò)引用以其全文并入本文。
[0035] 本文所述的其它實(shí)施方案涉及"胰腺祖細(xì)胞"、"PDX1陽(yáng)性的胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞"、 "roxi陽(yáng)性的胰腺祖細(xì)胞"、"胰腺上皮"、"PE"或其等同物的細(xì)胞培養(yǎng)物。roxi陽(yáng)性的胰腺 祖細(xì)胞是多能的，且可以在胰腺中產(chǎn)生多種細(xì)胞，包括但不限于腺泡細(xì)胞、導(dǎo)管細(xì)胞和內(nèi)分 泌細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，與不會(huì)可識(shí)別地表達(dá)roxi和NKX6. 1的非前胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞 相比，該roxi陽(yáng)性的胰腺祖細(xì)胞表達(dá)高水平的這些標(biāo)志物。roxi陽(yáng)性的胰腺祖細(xì)胞還表達(dá) 低水平的PTF1A、CPA、cMYC、NGN3、PAX4、ARX和NKX2. 2、INS、GCG、GHRL、SST和PP，甚至不 表達(dá)。
[0036] 可選擇地，其它實(shí)施方案涉及"roxi陽(yáng)性的胰腺內(nèi)胚層端細(xì)胞"或其等同物的細(xì)胞 培養(yǎng)物。在一些實(shí)施方案中，類似于roxi陽(yáng)性的胰腺祖細(xì)胞，PDX1陽(yáng)性的胰腺內(nèi)胚層端細(xì) 胞表達(dá)高水平的roxi和NKX6.1，但是不同于roxi陽(yáng)性的胰腺祖細(xì)胞，roxi陽(yáng)性的胰腺內(nèi) 胚層端細(xì)胞額外地表達(dá)高水平的PTF1A、CPA和cMYC。roxi陽(yáng)性的胰腺內(nèi)胚層端細(xì)胞還表 達(dá)低水平的NGN3、PAX4、ARX和NKX2. 2、INS、GCG、GHRL、SST和PP，甚至不表達(dá)。
[0037] 其它實(shí)施方案涉及"胰腺內(nèi)分泌前體細(xì)胞"、"胰腺內(nèi)分泌祖細(xì)胞"或其等同物的細(xì) 胞培養(yǎng)物。胰腺內(nèi)分泌祖細(xì)胞是多能的，且產(chǎn)生成熟的內(nèi)分泌細(xì)胞，包括α、β、δ和PP 細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，相比其它非內(nèi)分泌祖細(xì)胞類型，胰腺內(nèi)分泌祖細(xì)胞表達(dá)高水平的 NGN3、ΡΑΧ4、ARX和ΝΚΧ2. 2。胰腺祖細(xì)胞還表達(dá)低水平的INS、GCG、GHRL、SST和ΡΡ，甚至不 表達(dá)。
[0038] 其它實(shí)施方案還涉及"胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞"、"胰腺激素分泌細(xì)胞"、"胰腺胰島激素表 達(dá)細(xì)胞"或其等同物的細(xì)胞培養(yǎng)物，所述等同物是指體外源于例如α、β、δ和/或PP細(xì) 胞或其組合的多能細(xì)胞的細(xì)胞。該內(nèi)分泌細(xì)胞可以是多激素的或單激素的，例如表達(dá)胰島 素、胰高血糖素、胃饑餓素、生長(zhǎng)激素抑制素和胰腺多肽或其組合。因此，該內(nèi)分泌細(xì)胞可以 表達(dá)一種或多種胰腺激素，其具有人胰島細(xì)胞的至少部分功能。胰島激素表達(dá)細(xì)胞可以是 成熟的或不成熟的?；谀承?biāo)志物的差別表達(dá)，或者基于它們的功能，例如體外或體內(nèi)葡 萄糖響應(yīng)，可以將不成熟的胰島激素表達(dá)細(xì)胞與成熟的胰島激素表達(dá)細(xì)胞相區(qū)分。胰腺內(nèi) 分泌細(xì)胞還可以表達(dá)低水平的NGN3、PAX4、ARX和ΝΚΧ2. 2,甚至不表達(dá)。
[0039] 相比間質(zhì)的定形內(nèi)胚層細(xì)胞，上文細(xì)胞類型中的絕大多數(shù)為上皮化的。在一些實(shí) 施方案中，胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞表達(dá)選自表3的一種或多種標(biāo)志物和/或相關(guān)的下述美國(guó)申請(qǐng) 的表4中的一種或多種標(biāo)志物：2006年10月27日提交的題為"表達(dá)Η)Χ1的背部和腹部前 腸內(nèi)胚層"的美國(guó)申請(qǐng)11/588,693,以及2005年4月26日提交的題為"表達(dá)Η)Χ1的內(nèi)胚 層"的美國(guó)申請(qǐng)No. 11/115, 868,這些申請(qǐng)通過(guò)引用以其全文并入本文。
[0040] 在某些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"富集的"、"分離的"、"分開的"、"分選的"、"純化的"或 通過(guò)耗盡而純化或其等同方式是指這樣的細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞群或細(xì)胞樣品：其含有至少 15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、 90 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %或100 %的目的細(xì)胞系或具有某種細(xì)胞表型，例如表達(dá)該 細(xì)胞表型的某細(xì)胞標(biāo)志物或不表達(dá)該細(xì)胞表型的某細(xì)胞標(biāo)志物基因特征的目標(biāo)細(xì)胞。用于 純化、富集、分離、分開、分選和/或耗盡源于hES細(xì)胞的內(nèi)胚層譜系細(xì)胞的方法還描述于 2008年4月21日提交的題為"用于純化內(nèi)胚層和源于人胚胎干細(xì)胞的胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞的 方法"的美國(guó)申請(qǐng)NO. 12/107, 020,其通過(guò)引用以其全文并入本文。
[0041] 本文使用的術(shù)語(yǔ)"接觸"（即，例如可分化細(xì)胞的細(xì)胞接觸化合物）意在包括將化 合物和細(xì)胞一起體外孵育（例如將化合物添加到培養(yǎng)的細(xì)胞中）。術(shù)語(yǔ)"接觸"不意在包括 細(xì)胞體外暴露于包含ErbB3配體和任選地可能天然存在于受試者中的TGF-β家族成員的 限定的細(xì)胞培養(yǎng)基（即可能作為自然生理過(guò)程的結(jié)果而發(fā)生的暴露）。細(xì)胞和包含ErbB3 配體和任選的TGF-β家族成員的限定的細(xì)胞培養(yǎng)基接觸的步驟可以以任何適合的方式進(jìn) 行。例如，可以在貼壁培養(yǎng)中或在懸浮培養(yǎng)中處理細(xì)胞。應(yīng)該理解，與限定的培養(yǎng)基接觸的 細(xì)胞可以進(jìn)一步用細(xì)胞分化環(huán)境處理，以穩(wěn)定細(xì)胞或分化細(xì)胞。
[0042] 本文使用的術(shù)語(yǔ)"分化"是指比其來(lái)源的細(xì)胞類型更為分化的細(xì)胞類型的產(chǎn)生。在 一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)"分化"表示產(chǎn)生比其來(lái)源的細(xì)胞具有更少命運(yùn)選擇的細(xì)胞。因此該 術(shù)語(yǔ)包括部分和終末分化的細(xì)胞類型。源于hES細(xì)胞的分化細(xì)胞通常被稱為源于hES的細(xì) 胞或源于hES的細(xì)胞團(tuán)塊培養(yǎng)物，或源于hES的單細(xì)胞懸液，或源于hES的細(xì)胞貼壁培養(yǎng)物 等。
[0043] 本文使用的術(shù)語(yǔ)"可分化的細(xì)胞"用于描述可以分化成至少部分成熟的細(xì)胞，或 者可以參與細(xì)胞分化，例如與可以分化成至少部分成熟的細(xì)胞的其它細(xì)胞融合的細(xì)胞或 細(xì)胞群。本文使用的"部分成熟的細(xì)胞"、"祖細(xì)胞"、"不成熟細(xì)胞"、"前體細(xì)胞"、"多能細(xì) 胞"或其等同物包括不是終末分化的那些細(xì)胞，例如定形內(nèi)胚層細(xì)胞、roxi陰性的前腸內(nèi) 胚層細(xì)胞、PDX1陽(yáng)性的胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞，roxi陽(yáng)性的胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞進(jìn)一步包括roxi陽(yáng) 性的前胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞和roxi陽(yáng)性的胰腺內(nèi)胚層端細(xì)胞。所有細(xì)胞都是表現(xiàn)出來(lái)自相同 器官或組織的成熟細(xì)胞的至少一個(gè)表型特征，例如形態(tài)或蛋白表達(dá)，但是可以進(jìn)一步分化 成至少一種其它細(xì)胞類型。例如，正常的成熟肝細(xì)胞典型地表達(dá)例如白蛋白、纖維蛋白原、 α-1-抗胰蛋白酶、凝血素凝集因子（prothrombinclottingfactor)、轉(zhuǎn)鐵蛋白和解毒酶 (detoxificationenzyme)，如細(xì)胞色素P-450等及其它的蛋白。因此，本文使用的"部分成 熟的肝細(xì)胞"可以表達(dá)白蛋白或另外的一種或多種蛋白，或者開始具有正常的成熟肝細(xì)胞 的外觀或功能。
[0044] 本文使用的術(shù)語(yǔ)"基本上"是指大的限度或程度，例如，上下文中的"基本上類似 的"可以用于描述一種方法以大范圍或程度類似于另一種方法。然而，本文使用的術(shù)語(yǔ)"基 本上不含"，例如，"基本上不含"或"基本上不含污染物"，或"基本上不含血清"或"基本上 不含胰島素或胰島素樣生長(zhǎng)因子"或其等同物表示，溶液、培養(yǎng)基、補(bǔ)充物、賦形劑等為至 少98%或至少98. 5%、或至少99%、或至少99. 5%、或至少100%不含血清、污染物或其等 同物。在一個(gè)實(shí)施方案中，限定的培養(yǎng)基不含血清，或?yàn)?00%不含血清，或基本上不含血 清。相反地，本文使用的術(shù)語(yǔ)"基本上類似的"或其等同方式表示，組合物、過(guò)程、方法、溶液、 培養(yǎng)基、補(bǔ)充物、賦形劑等為至少50 %、55 %、60 %、65 %、70 %、75 %、80 %、至少85 %、至少 90%、至少95%、或至少99%類似于在本文說(shuō)明書中之前描述的、或在以其全文并入本文 的之前描述的過(guò)程或方法中的過(guò)程、方法、溶液等。
[0045] 并且，本文與細(xì)胞群的組合物一起使用的術(shù)語(yǔ)"實(shí)質(zhì)上"或"基本上"表示占主導(dǎo) 地位地或主要地。在一些實(shí)施方案中，這些術(shù)語(yǔ)表示細(xì)胞群中的至少85%的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少86 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少87 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少88 %的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少89%的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少90%的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少91%的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少92 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少93 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少94 %的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少95 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少96 %的細(xì)胞、細(xì)胞群中的至少97 %的細(xì)胞、細(xì)胞群 中的至少98 %的細(xì)胞、或細(xì)胞群中的至少99 %的細(xì)胞。在其它實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)或短語(yǔ) "實(shí)質(zhì)上不含"或"基本上不含"是指在任何細(xì)胞培養(yǎng)物中存在最低量或少量的組